Vitae

**FREEZE-DRYING IN YELLOW PITAHAYA (Selenicereus megalanthus)**

La liofilización es una alternativa de interés como método de conservación de alimentos, la cual permite prolongar el tiempo de vida útil manteniendo significativamente las propiedades físicas y fisicoquímicas relacionadas con su calidad. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la liofilización y la osmoliofilización sobre las cinéticas de congelación y de secado, la actividad de agua, el volumen, la porosidad y la capacidad de rehidratación en rodajas de pitahaya amarilla (Selenicereus megalanthus). Como pretratamiento osmótico a la liofilización (osmoliofilización), las rodajas se sumergieron en una solución de sacarosa con 55 ºBrix a 25ºC; se congelaron a -35°C, la sublimación se llevó a presión de vacío de 8 Pa y el secado se realizó desde -35 hasta 35°C. Los resultados de los tratamientos evidenciaron, al final del proceso, diferencias significativas en la porosidad, volumen y capacidad de rehidratación (que fueron mayores para el tratamiento liofilizado), mientras que la cinética de secado y la actividad de agua no presentaron diferencias significativas. El tratamiento de liofilización fue adecuado para la conservación de rodajas de pitahaya amarilla, ya que permitió reducir la actividad de agua por debajo de 0,4; conservó significativamente el volumen y presentó alta capacidad de rehidratación.

Freeze-drying is an interesting alternative as a food preservation method allowing to extend the shelf life and significantly preserving physical and physicochemical properties related to quality. The objective of this study was to evaluate the effect of freeze-drying and osmo-freeze-drying on the kinetics of freezing and drying, water activity, volume, porosity and rehydration capacity of sliced yellow pitahaya (Selenicereus megalanthus). As osmotic pretreatment to freeze-drying (osmo-freeze-drying), slices were immersed in a sucrose solution at 55 °Brix. The slices were frozen at -35°C. The sublimation was carried at vacuum pressure of 8 Pa and drying was carried out from -35 to 35°C. The results of these treatments at the end of the process showed significant differences in porosity, volume and rehydration capacity (being higher for freeze-drying treatment), while the kinetics of drying and water activity were not significant. The freeze drying treatment was suitable for the preservation of sliced yellow pitahaya, because it helped to decrease water activity below 0.4, preserved and showed significant volumes of high rehydration capacity.

PRODUCTION OF MONOGLYCERIDES FROM CASTOR OIL USING CRUDE AND REFINED GLYCERIN: STUDY OF THE MAIN VARIABLES OF THE PROCESS

Los monoglicéridos son ampliamente usados como emulsionantes en las industrias alimentaria, farmacéutica y cosmética. En este estudio se reportó la producción de monoglicéridos de aceite de ricino por reacciones de glicerólisis usando glicerina USP y la glicerina cruda, subproducto del proceso de producción del biodiesel de palma. Se emplearon catalizadores básicos como hidróxidos metálicos y óxido de plomo, y ácidos como acetato de plomo. Los resultados señalan que los catalizadores basados en plomo proporcionaron mayores conversiones hacia los monoglicéridos que los basados en sodio, potasio y calcio. Se encontró que una alta relación molar de aceite/glicerina fue una variable determinante que favorece altas concentraciones de monoglicéridos. Finalmente, se demostró que el uso de glicerina cruda para la producción de monoglicéridos es factible, aunque en este caso la concentración de monoglicéridos obtenidos se disminuye aproximadamente en un 20% debido, probablemente, al envenenamiento de los catalizadores.

Monoglycerides are widely used as emulsifiers in food, pharmaceutical and cosmetic industries. In this article was reported the production of monoglycerides from castor oil, by glicerolysis reactions, using USP glycerine and crude glycerol derived from a palm-biodiesel production process. Metalic hydroxides and lead oxide were used as basic catalysts, while lead acetate was used as acid catalyst. Results showed that the lead-based catalysts exhibited higher conversions to monoglycerides respect to those based on sodium, potassium and calcium. We found that a high molar ratio oil/glycerol was a determinant variable that favors high concentrations of monoglycerides. Ultimatelly, it was shown that it is feasible to use crude glycerol for the production of monoglycerides, although in this case the concentration of monoglycerides is reduced 20% due to the poisoning of the catalysts.

ENHANCEMENT OF THE ANTIOXIDANT CAPACITY OF STRAWBERRIES (Fragaria ananassa Duch.) BY INCORPORATION OF VITAMIN E USING THE VACUUM IMPREGNATION TECHNIQUE

El presente estudio evaluó la capacidad antioxidante y el contenido de vitamina E en fresas fortificadas con vitamina E sintética (dl-α-tocoferol acetato) por la técnica de impregnación al vacío. La vitamina fue cuantificada por HPLC y sus niveles registrados por cada 100 g fruta fresca. La capacidad antioxidante se determinó durante el almacenamiento, en muestras envasadas con y sin vacío, por los métodos DPPH●, FRAP y Folin-Ciocalteau. El proceso de impregnación en la fresa permitió alcanzar niveles de 19,12 ± 3,01 mg de dl-α-tocoferol acetato/100 g de fruta fresca, sin que el tiempo de almacenamiento ni el tipo de envasado ocasionaran efectos significativos en ella. Estos resultados fueron coherentes con el incremento de la capacidad antioxidante expresados como valores DPPH●, FRAP y Folin-Ciocalteau de 14,7%, 82,2% y 56,8%, respectivamente. Los resultados reflejaron la potenciación de la capacidad antioxidante de la fresa por el efecto de la incorporación de la vitamina E mediante el proceso de impregnación al vacío.

This study evaluated the antioxidant capacity and vitamin E content in strawberries fortified with synthetic vitamin E (dl-α-tocopherol acetate) by vacuum impregnation technique. The vitamin is quantified by HPLC and their levels are recorded per 100 g fresh fruit. The antioxidant capacity was determined during storage in samples packaged with and without vacuum, by the methods DPPH, FRAP and Folin-Cicalteau. The impregnation process can achieve levels in strawberry of 19.12 ± 3.01 mg of vitamin E dl-α-tocopherol acetate/100 g in fresh fruit, with no significant effect over time of storage or the type of packaging. These results were consistent to increased antioxidant capacity as values DPPH, FRAP and Folin-Cicalteau in the order of 14.7%, 82.2% and 56.8% respectively. In general, the results reflect a strengthening of the antioxidant capacity of strawberries, by the effect of vitamin E incorporated by the vacuum impregnation process.

**VIABILITY OF THE PROBIOTIC MICROORGANISMS Lactobacillus casei 01, Lactobacillus acidophilus La-5, Bifidobacterium BB12 DURING COTTAGE CHEESE SHELF LIFE**

El objetivo del presente trabajo fue evaluar la viabilidad de tres microorganismos considerados probióticos: Lactobacillus casei 01, Bifidobacterium BB12, y Lactobacillus acidophilus La-5, durante la vida útil del queso Cottage (0, 7 y 14, y 7 días adicionales, para un total de 21 días, y su influencia sobre las características sensoriales. El estudio se llevó a cabo en cuatro tratamientos y tres repeticiones: el tratamiento control T1, sin agregado de probiótico; el tratamiento 2, con agregado de Lb. casei 01; el tratamiento 3, con agregado de Lb. acidophilus La - 5; y el tratamiento 4, con agregado de Bifidobacterium BB12. Los probióticos fueron adicionados a la crema que se agrega al queso, el cual es almacenado a 4ºC. La viabilidad de los microorganismos se midió en análisis microbiológicos; y las características de calidad de los productos mediante análisis físicos, microbiológicos, químicos y sensoriales. Bifidobacterium presentó recuentos superiores a 1 x 10(6) ufc/g hasta el final de la vida útil del producto (14 días); además, los tratamientos con Lb. acidophilus y Lb. casei registran recuentos superiores a 1 x 10 6 ufc/g hasta los 21 días de almacenamiento; no obstante Lb. casei tuvo la mayor pérdida de viabilidad en el tiempo. Los parámetros de calidad físicoquímica y microbiológica de los quesos presentaron valores normales y sin diferencias significativas entre tratamientos (P<0,05). La calidad sensorial se vió afectada por el agregado de los microorganismos en algunos atributos sensoriales: el sabor y la firmeza de grano no registraron diferencias significativas entre tratamientos, al contrario del aroma y la sensación de humedad, parámetros que sí mostraron diferencias significativas entre tratamientos (P>0,05).

The objective of this research was to evaluate the viability of three microorganisms considered as probiotics: Lactobacillus casei 01, Bifidobacterium BB12 and Lactobacillus acidophilus La-5, during cottage cheese shelflife (0, 7, 14, and 7 days thereafter equivalent to 21 days), and the influence on sensory characteristics of the products. The study was carried in four treatments and three replications. Control treatment (T1) without probiotics; treatment T2 containing Lb. casei 01; treatment T3 containing Lb. acidophilus La-5; and treatment 4, with the addition of Bifidobacterium BB12. The cream with the addition of probiotics was added to the cheese which is stored at 4ºC. The viability evaluation of microorganisms was carried through microbiology analysis and its quality characteristics obtained through physical, chemical and sensory analyses of the products at 0, 7 and 14 days. Bifidobacterium had higher counts than 1 x 10(6) ufc/g up to the end to the shelflife (14 days) and treatments with Lb. acidophilus and Lb. casei presented higher counts than 1 x 10(6) ufc/g up to 21 storage days. However, Lb. casei presented a greater viability loss through the time. Physicochemical and microbiology quality were normal and there were no significant differences between treatments (P<0.05). The sensory quality is in a way affected by the addition of microorganisms, while sensory attributes like flavour and grain firmness does not present significant differences, but aroma and humidity sensation does present significant differences between treatments (P>0.05).

**BACTERICIDAL ACTIVITY OF ETHANOLIC LEAF EXTRACT AND LEAF ESSENTIAL OIL OF Rosmarinus officinalis L. ON SOME FOODBORNE BACTERIA**

En este trabajo se evaluó la actividad bactericida y se determinó la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) del extracto etanólico y del aceite esencial de hojas de Rosmarinus officinalis L. sobre microorganismos de interés alimentario: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Shigella sonnei, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus y Lactobacillus plantarum. El aceite esencial exhibió un amplio espectro de acción antimicrobiana tanto para bacterias Gram positivas como Gram negativas con CIM entre 512 - 4096 ppm. El extracto etanólico mostró actividad antimicrobiana contra las bacterias S. sonnei, S. typhimurium y L. monocytogenes con CIM de 1024 ppm. La nisina, utilizada como control positivo, ocasionó una inhibición del crecimiento de todas las bacterias evaluadas con CIMs entre 2 y 1024 ppm, mientras que los conservantes usados comúnmente en la industria de alimentos presentaron una actividad antimicrobiana menor que la encontrada con el aceite esencial de R. officinalis.

This work evaluated the bactericidal activity and determinated the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of ethanolic extract and essential oil from Rosmarinus officinalis L. leaves on microorganisms of interest in food industry: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Shigella sonnei, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus and Lactobacillus plantarum. The essential oil showed a broad spectrum of antimicrobial action for both Gram positive and Gram negative bacteria with MICs between 512 - 4096 ppm. The ethanolic extract showed antimicrobial activity against S. sonnei, S. typhimurium and L. monocytogenes with a MIC of 1024 ppm. Nisin was used as positive control and showed a strong growth inhibition of all bacteria tested with MICs between 2 and 1024 ppm. Our result shows that preservatives commonly used in the food industry have lower antimicrobial activity than those found in essential oil from R. officinalis L. leaves.

**SEEDLINGS OF CARDAMOM (Elettaria cardamomum (L.) Maton) EVALUATION BY RESISTANCE in vitro AT CULTURE FILTRATES OF Fusarium oxysporum Link**

El Fusarium oxysporum Link es el causante de la pudrición basal en el cardamomo. En el presente trabajo se evalúa el efecto fitotóxico del filtrado crudo del hongo, para seleccionar variantes somaclonales de cardamomo resistentes al mismo en pruebas de patogenicidad en invernadero. Mediante los resultados de mortalidad se seleccionaron el clon 5 y el aislado 4 como los de mayor interacción de susceptibilidad - virulencia. De plántulas madres mantenidas en medio de crecimiento acelerado, se inocularon mensualmente 25 plántulas con diferentes concentraciones del filtrado, causando mortalidad en las primeras semanas. A partir de la semana 6, sólo un 32% resistieron el incremento de concentración. Para el décimo ciclo de inoculación, el 100% de plántulas permanecían en el filtrado crudo sin diluir, demostrando que a más tiempo en medio de crecimiento acelerado y mayor presión de selección, incrementando la concentración del filtrado, mayor probabilidad habrá de obtener variantes somaclonales con resistencia in vitro a Fusarium oxysporum.

Fusarium oxysporum Link is the cause of basal rotting in cardamom. The present article evaluates the phytotoxical effect of of the fungus crude filtrate,for selecting somaclonal variations of cardamom that showed resistance in greenhouse pathogenicity tests. According to mortality test results clone 5 and the isolated 4 were pointed with the most susceptibility-virulence interaction. From accelerated growth media seedlings there were selected 25 and inoculated with different concentrations of filtrate, causing mortality on the initial weeks. By the sixth week only a 32% resisted the concentration increment. By the tenth cycle of inoculation 100% of seedlings remained in the crude filtrate without dilutions. The more time the seedlings remain in accelerated growth media and the more selection pressure increasing filtrate concentration show increased probability of getting somaclonal variants with in vitro resistance of Fusarium oxysporum.

STUDY OF GLUCOSE SYRUP PRODUCTION FROM MALTODEXTRINES USING TWO COMERCIAL ENZYMES

El almidón hidrolizado con alto equivalente de dextrosa tiene amplio uso en la industria de alimentos y como fuente de azúcares fermentables. Para mejorar el rendimiento de este proceso se desarrollan continuamente enzimas más eficientes. La enzima Dextrozyme GA® (DGA) ha salido recientemente al mercado pretendiendo substituir a la enzima AMG 300L® (AMG). En este trabajo se evaluaron los rendimientos y velocidades de conversión en función de concentraciones de enzima entre 0,188-0,75 AGU/mL y maltodextrinas entre 60-180 g/L. La enzima DGA permitió desarrollar velocidades de reacción 26 veces superiores a las observadas con AMG 300L®. Así mismo generó conversiones de hasta el 95% en tiempos de tratamientos menores a 60 minutos, en comparación con conversiones del 50% en 8 h para AMG. En el rango de valores de sustrato y enzima evaluados, se encontró que una concentración de sustrato de 130,2 g/L y de enzima de 0,55 AGU/mL fueron los valores óptimos. DGA presentó inhibición por producto del tipo anticompetitivo, mayor a bajos niveles de enzima. Un modelo matemático tipo Michaelis-Menten con inhibición permitió simular los datos experimentales. Estos resultados podrían ser usados para el diseño de reactores donde se lleven a cabo procesos de obtención enzimática de jarabes glucosados.

Hydrolyzed starch with a high-dextrose equivalent is extensively used in the food industry and as a source of fermentable sugars. In order to obtain a better yield in this process more efficient enzymes had been continuously developed. Dextrozyme GA® (DGA) has been released recently in the market to replace AMG 300L® (AMG) enzyme. In this paper yields and hydrolysis rates were evaluated as a function of maltodextrin concentration between 60 and 180 g/L and enzymes concentration between 0.188 and 0.75 AGU/mL. DGA allows enhancing hydrolysis rates up to 26 times more than those using AMG. Also DGA generates conversion of maltodextrin up to 95% in less than 60 minutes, in comparison with AMG which produces conversions up to 50% in 8 h. Among the values of substrate and enzyme concentration studied it was found that a substrate concentration of 130.2 g/L and enzyme concentration of 0.55 AGU/mL were optimal values. DGA is inhibited by uncompetitively product and is highly affected at a low enzyme concentration. We developed a mathematical model that successfully reproduces the experimental data. These results could be used in reactors design for syrup glucose enzymatic production.

FLUOROMETRIC ASSAY FOR CELL PROLIFERATION IN HUMAN TUMOR CELL LINES APPLICATION

La valoración de citotoxicidad in vitro sobre líneas celulares derivadas de tumores humanos permite explorar la actividad biológica de productos aislados de diferentes fuentes como primer tamizaje en búsqueda de moléculas con potencial actividad anticancerígena. En este trabajo se implementó el método de reducción de resazurina como indicador indirecto de supervivencia celular. Para ello fue necesario seleccionar la concentración de resazurina y el tiempo de incubación ideal para obtener unidades relativas de fluorescencia (URF) óptimas sobre las líneas celulares MCF-7, MKN-45, SiHa, HEp-2, HT-29 y HeLa. Seguidamente, se compararon los resultados de supervivencia obtenidos al emplear el método de reducción MTT y el método de tinción SRB, definidos como ensayos de tipo terminal, con el uso de resazurina, descrita como poco tóxica para las células. La comparación de los métodos se hizo en términos de porcentaje de supervivencia, donde se evaluó la sensibilidad de las líneas a doxorrubicina HCl, un medicamento empleando en el tratamiento del cáncer. Los resultados obtenidos demuestran que el método de reducción de resazurina empleado en una concentración 4,4 µM es útil en ensayos de rutina para detectar cambios significativos de la población celular cuando su crecimiento varía como consecuencia de la exposición a moléculas con actividad citotóxica.

Assessment of in vitro cytotoxicity as a model to explore biological activity of compounds isolated from different sources is the first approached to search molecules with potential anticancer activity. This paper is about how to implement resazurin reduction method as an indirect indicator of cell survival. Indeed both optimal resazurin concentration and incubation time were selected on MCF-7, MKN-45, SiHa, HEp-2, HT-29 and HeLa. Next, we compared survival results by using reduction method MTT and staining method SRB defined as end-point tests, and resazurin method described as slightly toxic to cells. The comparison of the methods was done in terms of survival rate to evaluate the sensitivity of the lines to doxorubicin HCl, a medicine used in cancer. The methods were compared in terms of percentage survival by evaluating cell line sensitivity to doxorubicin HCl (a drug used in cancer treatment). The results show that resazurin reduction method used in 4.4 μM is applicable to detect significant changes in cell population exposed to cytotoxic molecules in routine testing.

PEPTIDES WITH ANTIMICROBIAL ACTIVITY PRODUCED BY ISOLATED NATIVE MICROORGANISMS

Al igual que las proteínas, los péptidos antimicrobianos (PAM) son moléculas versátiles sintetizadas por microorganismos siguiendo rutas enzimáticas, y con interesantes propiedades alimentarias y farmacéuticas, entre ellas la capacidad antibiótica sobre patógenos. La búsqueda convencional de biomoléculas provenientes de microorganismos consiste en analizar químicamente su extracto crudo, lo cual es engorroso y prolongado. El método de aislamiento usado en esta investigación permitió localizar microorganismos con capacidad para producir PAM por interacción de cargas entre moléculas generadas en el metabolismo microbiano y un colorante cargado presente en el medio de cultivo. Se aislaron 20 muestras de suelos de varios pisos térmicos en medios selectivos. Se purificaron 35 cepas con base en la interacción con un colorante básico y se identificaron microorganismos del género Streptomyces sp. y Bacillus sp. Se obtuvieron proteínas de los extractos crudos de fermentaciones, identificando péptidos y aminoácidos por cromatografía de capa fina y electroforesis. Aquellos extractos con alto contenido proteico se evaluaron por bioautografía, y se encontraron 2 extractos de 35 con actividad inhibitoria sobre E. coli ATCC 8739 (halos de 8 mm). Se demuestra la efectividad del método para aislar y purificar microorganismos productores de péptidos cargados y que poseen actividad biológica e industrial de gran interés.

Like proteins, antimicrobial peptides (AMP) are versatile molecules synthesized by microorganisms using enzymatic pathways with no genetic code instruction. AMP have interesting properties in the food and pharmaceutical industries, like their antimicrobial ability against pathogens. Looking for biomolecules from microorganisms requires hard and time consuming chemical analysis of each microorganism extract. The microorganism isolation method proposed in this research allowed us to find antimicrobial peptides produced by bacteria, through interaction between a charged dye mixed with selective agar and metabolites produced by microorganisms. Twenty soil samples from different zones were isolated in selective media; thirty five strains were purified based on interaction between basic dye and charged molecules from bacteria. Streptomyces sp. y Bacillus sp. both genera were identified. Protein extracts were obtained from the isolated microorganisms cultivated in liquid media; peptides and amino acids were identified by thin layer chromatography and electrophoresis. Those extracts with high protein level were used to evaluate bioautography. Two extracts from 35 showed inhibitory activity against E. coli ATCC 8739 (8 mm halo). Method effectiveness for the isolation and the purifying of microorganisms able to produce charged molecules, of industrial interest is demonstrated.

THERMODYNAMIC STUDY OF THE SOLUBILITY OF SODIUM SULFADIAZINE IN SOME ETHANOL + WATER COSOLVENT MIXTURES

Sodium sulfadiazine (SD-Na) is a drug extensively used for the treatment of certain infections caused by several kinds of microorganisms. Although SD-Na is widely used nowadays in therapeutics, the physicochemical information about their aqueous solutions is not complete at present. In this context, by using the vant Hoff and Gibbs equations the thermodynamic functions Gibbs energy, enthalpy, and entropy of solution for SD-Na in ethanol + water cosolvent mixtures, are evaluated from solubility data determined at temperatures from 278.15 to 308.15 K. The drug solubility is greatest in neat water and lowest in neat ethanol at all the temperatures studied. This behavior shows the negative cosolvent effect for this electrolyte drug in this solvent system. By means of enthalpy-entropy compensation analysis, non-linear ΔHsoln0-app vs. ΔGsoln0-app plot with positive slope from neat ethanol up to 0.60 in mass fraction of water and negative from this composition to neat water is obtained; accordingly to this result, it follows that the dissolution process of this drug in ethanol-rich is entropy-driven, whereas, in water-rich mixtures the process is enthalpy-driven. Nevertheless, the molecular and ionic events involved in the dissolution of this drug in this cosolvent system are unclear.

La sulfadiazina sódica (SD-Na) es un fármaco ampliamente utilizado en el tratamiento de ciertas infecciones causadas por diferentes microorganismos. Si bien la Na-SD es ampliamente usada en la terapéutica actual, la información fisicoquímica de sus soluciones acuosas aún no es completa. En este contexto, se estudian las funciones termodinámicas aparentes de solución, energía de Gibbs, entalpía y entropía, a partir de valores de solubilidad de este fármaco en mezclas cosolventes etanol + agua en el intervalo de temperatura desde 278,15 hasta 308,15 K. La solubilidad del fármaco es mayor en agua pura y menor en etanol puro a todas las temperaturas estudiadas. Este resultado demuestra el efecto cosolvente negativo del etanol sobre este fármaco del tipo electrolito. Mediante análisis de compensación entálpica- entrópica se obtiene un gráfico no lineal ΔHsoln0-app vs. ΔGsoln0-app exhibiendo pendiente positiva desde el etanol puro hasta la mezcla cosolvente de 0,60 en fracción másica de agua y pendiente negativa desde esta mezcla hasta el agua pura; de acuerdo a este resultado, se tiene que el proceso de disolución de este fármaco en mezclas ricas en etanol es conducido entrópicamente, mientras que en mezclas ricas en agua el proceso es conducido entálpicamente. Sin embargo, los eventos moleculares e iónicos involucrados en el proceso de disolución de este fármaco en este sistema cosolventes no son claros.

EXPERIMENTAL AND THEORETICAL STUDY OF SHYNTESIS OF N-ALKYL-NITROIMIDAZOLES.

En este trabajo se realizó un estudio experimental y teórico sobre la N-alquilación de nitroimidazoles. Los N-alquil-2-metil-nitroimidazoles corresponden a moléculas con actividad biológica, que se obtienen por la reacción del 2-metil-5-nitroimidazol y diferentes halogenuros de alquilo. En esta reacción se observó la formación de una mezcla de productos isoméricos en diferente proporción, denominados como N-alquil-2-metil-4-nitroimidazol y N-alquil-2-metil-5-nitroimidazol, respectivamente. La reacción sugiere la formación de un equilibrio tautomérico, que genera dos sitios nucleofílicos susceptibles a un ataque electrofílico por parte del halogenuro de alquilo. La reactividad local nucleofílica del anillo nitroimidazólico se determinó utilizando índices de reactividad local, como la función de Fukui y el potencial electrostático, además de la función de localización electrónica (ELF). La función de Fukui se integra en los átomos utilizando los esquemas de partición basados en el análisis de cargas de Mulliken y orbitales naturales de enlace (NBO). Por último, se evaluaron los perfiles de reacción. Los resultados mostraron una leve diferencia en la reactividad local, sin embargo, se observan diferencias significativas en las barreras energéticas, que explican la formación de un producto isomérico sobre el otro, encontrándo así, concordancia entre los resultados experimentales y los teóricos.

In this work we realized and experimental and theoretical study of the N-alkylation of nitroimidazoles. The N-alkyl-2-methyl-nitroimidazoles correspond to biologically active molecules, obtained by reaction of 2-methyl-5-nitroimidazole and different alkyl halides. This reaction showed the formation of a mixture of isomeric products in different proportions, denominated like N-alkyl-2-methyl-4-nitroimidazole and N-alkyl-2-methyl-5-nitroimidazole, respectively. The reaction suggestes the formation of a tautomeric equilibrium, which generates two nucleophilic sites susceptible to electrophilic attack by the alkyl halide. The local nucleophilic reactivity of the nitroimidazole ring is determined using local reactivity indices such as the Fukui function and the electrostatic potential, besides the electronic localization function (ELF). The Fukui function was integrated for each atom using partition schemes based on analysis of Mulliken charges and natural bond orbital (NBO). Finally the reaction profiles were assessed. The results show a minor difference in the local reactivity. Nevertheless a significant difference in energy barriers is observed explaining the formation of an isomeric product over another. These results agree quite well with the experimental data.

**STUDY OF THE CHEMICAL COMPOSITION AND ANTIFOULING ACTIVITY OF THE MARINE SPONGE Cliona delitrix EXTRACT**

El extracto crudo y la fracción orgánica de la esponja marina Cliona delitrix, recolectada en San Andrés Islas (Caribe Colombiano), muestra actividad antifouling en ensayos de campo. La fracción orgánica es separada por cromatografía en columna logrando obtener fracciones enriquecidas en glicéridos, glicolípidos, fosfolípidos, ácidos grasos libres, ésteres metílicos y monohidroxiesteroles. Cada una de las fracciones es identificada de manera preliminar por TLC y técnicas de dereplicación (RMN). Los ácidos grasos obtenidos de la hidrólisis de cada una de las fracciones de glicéridos, glicolípidos y fosfolípidos son transformados en sus correspondientes ésteres metílicos, los cuales son analizados por CGAREM; luego se convierten en sus derivados pirrolidínicos y también se analizan por CG-EM. El estudio cuidadoso de los EM, tanto del éster metílico como de las pirrolidina, y los valores de ECL permiten identificar 89 ácidos grasos diferentes. Entre éstos se destacan: el ácido 7,10,12,14-icosatetraenoico, que se reporta por primera vez, y los ácidos 5,9-hexacosadienoico y hexadecanoico, por ser los más abundantes en todas las fracciones. Adicionalmente se identifican, mediante análisis de CG-EM y ¹H-RMN, 19 monohidroxiesteroles. Se destacan el colestanol y el clionasterol, por ser los más abundantes, y también es de notar la presencia de estanoles (cerca del 30%) que no se habían informado antes para este género.

In a field test for antifouling activity the raw extract and the organic fraction obtained from the marine sponge Cliona delitrix, collected at the San Andrés Islas (Colombia, Caribbean Sea), showed activity. The organic fraction was separated by column chromatography to obtain enriched fractions of glycerides, glycolipids, phospholipids, free fatty acids, fatty acids methyl esters (FAMEs) and monohydroxysterols identified by TLC and dereplication techniques (NMR). The glyceride, glycolipid, and phospholipid fractions were hydrolyzed, and the fatty acids methyl esters obtained, together with the initial fatty acids fraction were converted into their methyl esters and analyzed by HRGC-MS. In order to locate unsaturations and alkyl branches in fatty acids, their methyl esters derivates were transformed to the corresponding pyrrolidides and subsequently analyzed by HRGC-MS. The identification of the fatty acids was carried out using their ECL value as methyl esters, and particularly the study of their pyrrolidide spectra was used to locate unsaturations and alkyl branch positions. The analysis allowed the identification of 89 fatty acids. The main acids include the new 7,10,12,14-icosatetraenoic acid, as well as 5,9-hexacosadienoic acid and hexadecanoic acid. Additionally, 19 monohydroxysterols were identified by HRGC-MS and NMR ¹H. Cholestanol and clionasterol were the most abundant compounds and the stanols presence (near to 30%) was not previously reported for this genus.