Vitae

**ISOLATION AND IDENTIFICATION OF TWO STEROLS AND A TRITERPENE FROM DRY FRUITING BODIES OF Ganoderma lucidum CULTIVATED IN COLOMBIA**

Ganoderma lucidum es un hongo medicinal que pertenece a la familia Ganodermataceae, conocido hace mucho tiempo en Japón como ''reishi'', y usado ampliamente en la medicina tradicional china. Los metabolitos que se han reportado en él son principalmente polisacáridos y triterpenoides con diferentes actividades biológicas. En el presente artículo se describe el aislamiento y la identificación efectuados de los compuestos ergosterol, 5,6-dihidroergosterol y lucidumol-B, a partir del extracto metanólico del cuerpo fructífero seco del Ganoderma lucidum cultivado en Colombia.

Ganoderma lucidum is a medicinal mushroom belonging to Ganodermataceae family. It is known as ''reishi'' in Japan and is widely used in traditional Chinese medicine. Reported metabolites include polysaccharides and triterpenoids with different biological activities. In this paper isolation and identification of ergosterol, 5,6-dihydroergosterol and lucidumol-B, are described. These compounds were isolated from methanolic extract of fruiting bodies of Ganoderma lucidum cultivated in Colombia.

**PHENOLIC POTENTIAL DETERMINATION AND YEASTS IDENTIFICATION WITH SIGNIFICANT LEAVENS IN ISABELLA GRAPE (Vitis labrusca) FROM VILLA DEL ROSARIO (Norte de Santander) FOR WINE MAKING**

La uva Isabella (Vitis labrusca) es una variedad tinta que se ha adaptado óptimamente a las condiciones edafoclimáticas de la región de Villa del Rosario (Norte de Santander), y ha tenido buena aceptación en los mercados locales. Actualmente la uva se consume en fresco y se desconoce su contenido fenólico para la elaboración de vinos. El objetivo de este trabajo fue establecer el contenido fenólico e identificar las levaduras de importancia vínica de esta variedad. Para ello, se tomaron bayas de dos vendimias consecutivas. Se analizaron parámetros como densidad, sólidos solubles, pH, acidez y el contenido fenólico total y extraíble. Asimismo, se identificaron las levaduras morfológica y bioquímicamente. Los resultados de los parámetros fisicoquímicos de las dos vendimias se promediaron y compararon con las uvas procedentes del Valle del Cauca. Se concluyó que las bayas de las dos regiones fueron similares en sus características físicas, y diferentes significativamente en cuanto a su composición química. El contenido fenólico total fue mayor en las uvas del Valle del Cauca, mientras que el extraíble fue similar en las dos regiones. El examen microbiológico identificó cinco especies de levaduras: Kloeckera apiculata, Criptococcus laurentii, Candida guillermondii, Candida novergensis y Rhodotorula glutinis.

The Isabella grape (Vitis labrusca) is a red variety that has been optimally adapted to the edafoclimatic conditions in the region of Villa del Rosario (Norte de Santander) and has been accepted also in local markets. Currently, the grape is eaten fresh and its potential for winemaking is unknown. Therefore, the purpose of this study was to establish the phenolic potential and identify important yeasts of this kind of grape for winemaking. To this end, berries taken from two consecutive vintages were analyzed. Parameters analyzed were density, soluble solids, pH, acidity and total and removable phenolic potential. The yeasts were identified morphologically and biochemically. The results of the physicochemical parameters of the two vintages were averaged and compared with results for grapes from Valle del Cauca. The results indicated that the berries of the two regions were similar in physical characteristics but significantly different in terms of chemical composition. The total phenolic potential was higher in grapes from Valle del Cauca, while removable was similar in the two regions. Five yeast species: Kloeckera apiculata, Criptococcus laurentii, Candida guillermondii, Candida novergensis and Rhodotorula glutinis were microbiologically isolated and identified.

**QUALITY OF FRUITS IN MEXICAN TOMATO (Lycopersicon esculentum Mill.) LANDRACES**

Mexico is a center of domestication and diversification of tomatoes, with various landrace cultivated populations and wild varieties, but the documentation is poor in terms of their physical, chemical and nutritional characteristics. Thirteen accessions were collected and then sown and transplanted in greenhouse conditions under a randomized complete block design with four replications. This process was performed in order to evaluate the lycopene content, ascorbic acid and other physicochemical characteristics, as well as the effect of storage conditions on lycopene loss of a sample of tomato fruits native from different regions of Mexico. The analysis of variance shows significant differences (P < 0.05) among accessions for titratable acidity, pH, lycopene on wet and dry basis, in the CIE chromaticity coordinates L* , a * b*, and in the maturity index. GTO-11, OAX-115, PH-102 and PH-96 accessions stood out for their lycopene content on wet and dry basis with values above 20 and 300 mg 100 g-1, respectively. Lycopene content in samples of ground tomato fruits decreased after storing them at -20ºC; it also decreased in the scalded samples immersed in boiling water.

México es un centro de domesticación y diversificación del tomate con diversas poblaciones nativas cultivadas y variantes silvestres, pero poco documentadas en términos de sus características físicas, químicas y nutricionales. Con el objetivo de evaluar el contenido de licopeno, ácido ascórbico y otras características fisicoquímicas de los frutos de una muestra de tomate originaria de diferentes regiones de México, y evaluar el efecto de almacenamiento sobre la pérdida de licopeno, se hizo una colecta y posteriormente la siembra y trasplante en invernadero de trece accesiones bajo un diseño de bloques completos al azar con cuatro repeticiones. El análisis de varianza detecta diferencias significativas (P < 0.05) entre accesiones para acidez titulable, pH, licopeno en base húmeda y seca, en las coordenadas cromáticas CIE L* , a * y b*, y en el índice de madurez. Las accesiones GTO-11, OAX-115, PH-102 y PH-96 sobresalen en contenido de licopeno en base húmeda y seca con valores mayores a 20 y 300 mg 100 g-1, respectivamente. El contenido de licopeno en muestras molidas de frutos de tomate y almacenadas a -20ºC, decreció a medida que se incrementó el tiempo de almacenamiento, aún en las muestras escaldadas, inmersión en agua en ebullición.

**KINETIC RESOLUTION OF (R,S)-METHYL MANDELATE BY IMMOBILIZED LIPASE PREPARATIONS FROM Candida antarctica B**

El desarrollo de métodos para la obtención de compuestos quirales constituye uno de los grandes desafíos de la química actual. En este contexto, la resolución cinética catalizada por lipasas representa una excelente alternativa. En medios homogéneos, estas enzimas presentan equilibrio entre dos conformaciones (abierta y cerrada), el cual es posible desplazar hacia la conformación abierta (forma activa) en presencia de soportes hidrofóbicos. En este trabajo, la lipasa de Candida antarctica B (CAL-B) se purificó e inmovilizó covalentemente en soportes epóxido Eupergit C (EC), Eupergit C activados con otros grupos funcionales y soportes de octil-agarosa. Estas preparaciones de enzima inmovilizada se utilizaron bajo diferentes condiciones de pH en la resolución cinética del (R,S)-mandelato de metilo. Se destacó el derivado inmovilizado EC-amino-CAL-B, por ser altamente enantioselectivo a pH 8 (razón enantiomérica (E) de 52), permitiendo obtener el enantiómero R del ácido mandélico con un exceso enantiomérico (ee) del 96%.

The development of methodologies for obtaining chiral compounds constitutes a major challenge on current chemistry. In this context, kinetic resolution catalyzed by lipases represents an excellent alternative. In homogeneous media, these enzymes display an equilibrium between two conformations (open and closed form), that can be displaced towards an open conformation (active form) in presence of hydrophobic supports. In this article lipase from Candida antarctica B (CAL-B) was purified and covalently immobilized onto Eupergit C epoxy supports (EC), Eupergit C activated with other functional groups and octyl-agarose supports. These preparations of immobilized enzymes were used under different pH conditions in the kinetic resolution of (R,S)-methyl mandelate. In this study, EC-amino-CAL-B immobilized derivative was highlighted because it is highly enantioselective at pH 8 (enantiomeric ratio (E) of 52), allowing to obtain an R-enantiomer from mandelic acid with an enantiomeric excess (ee) of 96%.

IN VITRO INHIBITION OF Bothrops asper VENOM BY ETHANOL EXTRACTS FROM Brownea ariza B. (CAESALPINIACEAE)

En Colombia, cerca del 90% de los accidentes ofídicos son ocasionados por serpientes del género Bothrops, cuyos venenos provocan alteraciones locales y sistémicas, como edema, anticoagulación, hemorragia y mionecrosis. El suero antiofídico es el único tratamiento efectivo, pero su limitada acción local y escasa disponibilidad en zonas geográficas aisladas hace necesaria la búsqueda y validación de alternativas terapéuticas que actúen como recurso y disminuyan el porcentaje de secuelas de estos accidentes. Recientes estudios han reportado acción inhibitoria del extracto etanólico de Brownea rosademonte (Caesalpiniaceae) sobre algunos efectos locales de estos venenos. Así, en el presente estudio in vitro se evaluó la capacidad inhibitoria de extractos etanólicos de hojas y corteza de Brownea ariza sobre las actividades proteolítica, fosfolipasa A2 y coagulante del veneno de B. asper; esta última según el efecto de coagulación in vitro, se relaciona con anticoagulación observada in vivo. Los resultados mostraron que los extractos de corteza inhiben la acción de fosfolipasas A2 (93,2 ± 0,4%), prolongan el tiempo de coagulación (más de 10 min), e inhiben la actividad proteolítica, aunque ésta última con menores efectos que el extracto foliar (77 ± 0,6% y 93,8 ± 0,6% respectivamente).

In Colombia, about 90% of snakebites are caused by Bothrops snakes, whose venoms cause in vivo, local and systemic disturbances, such as edema, myonecrosis, blood-clotting disorders and hemorrhage. Antivenom is the only effective treatment to manage these poisonings, but its limited action at local level and little availability in geographically isolated areas makes necessary the validation and search for therapeutic alternatives acting as an immediate resource to reduce the percent of sequels caused in these snakebites. Recent studies have reported the inhibitory action of the Brownea rosademonte (Caesalpiniaceae) extract against some local effects produced by these snakes. Therefore, in this in vitro research the inhibitory ability of the ethanol extract of leaves and bark from Brownea ariza was evaluated on proteolytic, phospholipase A2 and coagulant activities of B. asper venom, which is related with anticoagulation observed in vivo. The results showed that bark extracts inhibit phospholipase A2 activity (93,2 ± 0,4%), extend the clotting time of plasma (more than 10 minutes) and inhibit the proteolytic activity, although the latter showed lesser effects than those observed with leaves extract (77 ± 0,6% and 93,8 ± 0,6%, respectively).

**ANTI-INFLAMMATORY AND ANTIOXIDANT ACTIVITIES OF Phenax rugosus (POIR.) WEDD AND Tabebuia chrysanta G. NICHOLSON**

Inflammation is a multifactorial and highly regulated process associated to several chronic and degenerative diseases. Due to the fact that many inflammatory processes are sometimes characterized by oxidative stress, it has been demonstrated that antioxidants are useful as anti-inflammatory agents. Phenax rugosus (Poir.) Wedd and Tabebuia chrysanta G. Nicholson species are used in the Colombian region called ''Eje Cafetero'' due to their antiinfeccious and immunomodulatory properties. In vivo anti-inflammatory and in vitro antioxidant properties of methanolic and aqueous extracts of the previously mentioned plant species were evaluated in this research. Two acute inflammation models were used for such purpose: TPA-induced mouse ear oedema and carrageenan-induced rat paw oedema. In vitro hydroxyl, peroxyl and superoxide scavenging activity of the extracts was evaluated. The aqueous extract of Phenax rugosus was found to be promising due to its anti-inflammatory and antioxidant activities. Results obtained from this research are a support for the ethnopharmacological use of these plant species.

La inflamación es un proceso multifactorial y altamente regulado que acompaña a una gran variedad de patologías crónicas y degenerativas. Dado que muchos procesos inflamatorios crónicos se acompañan de estrés oxidativo, se ha demostrado que extractos y/o compuestos captadores de radicales libres son eficaces como antiinflamatorios. Las especies Phenax rugosus (Poir.) Wedd y Tabebuia chrysanta G. Nicholson son empleadas en la región cafetera colombiana y se les atribuyen propiedades antiinfecciosas e inmunomoduladoras. En el presente estudio se evaluaron las propiedades antiinflamatorias in vivo y antioxidantes in vitro de los extractos acuosos y metanólicos de estas dos especies vegetales. Se emplearon dos modelos de inflamación aguda: edema auricular inducido por TPA en ratón y edema plantar inducido por carragenina en ratas. La actividad antioxidante in vitro se evaluó frente a los radicales hidroxilo, peroxilo y superóxido. El extracto acuoso de Phenax rugosus resultó promisorio por sus actividades antiinflamatoria y antioxidante. Estos resultados contribuyen a dar un soporte científico al uso etnofarmacológico de las dos especies vegetales estudiadas.

INTRALABORATORY VALIDATION OF AN ANALYTICAL METHODOLOGY BY UV/VIS SPECTROMETRY IN ORDER TO EVALUATE THE OCULAR IRRITANT POTENTIAL OF TENSOACTIVES IN RED BLOOD CELLS

Se presentan los resultados de la validación intralaboratorio para los parámetros de linealidad, repetibilidad y precisión intermedia del ensayo en glóbulos rojos, metodología in vitro empleada para evaluar la irritación ocular. Este ensayo evaluó los efectos nocivos de los tensoactivos sobre membranas y proteínas celulares, y constituye así una alternativa al test de Draize. A través de espectrofotometría UV/VIS a 577 nm se midió la hemoglobina liberada tras la lisis de los glóbulos rojos, estimando la concentración hemolítica 50 (CH50), que constituye un indicador del daño celular ocasionado por el tensoactivo. El ensayo también consideró la desnaturalización de hemoglobina, causada por altas concentraciones del tensoactivo, por la relación de absorbancias a 542 y 577 nm, estimando el índice de desnaturalización (ID). La relación CH50/ID es un indicador cuantitativo del potencial irritante del dodecilsulfato de sodio (SDS), surfactante con el que se validó este ensayo. Se logró la validación de los parámetros señalados y se ofrece una metodología confiable y de fácil ejecución, alternativa al uso de animales, para evaluar la irritación ocular de tensoactivos.

Red blood cell assay (RBC) intralaboratory validation was presented, specifically for linearity, repeatability and intermediate precision. RBC is an in vitro methodology employed for ocular irritation evaluation measuring surfactants adverse effects on cell membranes and proteins and is an alternative for Draize ocular test. Free hemoglobin after red blood cell lysis was determined through spectrometry at 577 nm in order to estimate medium hemolytic concentration (HC50) indicating cell damage by surfactant. Also hemoglobin denaturation induced by high concentrations of surfactants was considered measuring denaturation index (DI) through absorbance ratio at 542 and 577 determinations. HC50 / DI is an indicator of the dodecylsulphate (SDS) irritant potential, surfactant used in order to validate this assay. Parameters previously mentioned were validated and we present an easy and reliable alternative methodology for animal experimentation to assess surfactants ocular irritation for SDS.

EVALUATION OF THE AVOBENZONE PHOTOSTABILITY IN SOLVENTS USED IN COSMETIC FORMULATIONS

The use of sunscreen products is very important nowadays. The photostability of UV filters incorporated in these products must be preserved during its storing and application processes in order to achieve the claims about photoprotection of the commercial products. The photostability of avobenzone, one of the most common UVA filters in commercial sunscreens, is assessed in solvents intended for cosmetic formulations. The study is carried out by following the spectral behavior of avobenzone solutions under irradiation and after storing them in the dark. Different photobehaviors of the avobenzona are found in the selected solvents, some of which can be explained in the same way than in analytical solvents; but for others, the structural and physical properties of the solvents must be taken into account. The most appropriate solvents for ensuring the photostability of avobenzona are mineral oil and isopropyl myristate.

El uso de antisolares es muy importante en la actualidad. La fotoestabilidad de los filtros UV usados en estos productos se debe conservar durante su almacenamiento y aplicación, con el fin de cumplir su papel fotoprotector. La fotoestabilidad de la avobenzona, uno de los filtros UVA más usados en la preparación de antisolares comerciales, es evaluada, por primera vez, en solventes cosméticos. Este estudio es llevado a cabo siguiendo el comportamiento espectral de soluciones de avobenzona cuando es sometida a irradiación, y luego de su almacenamiento en la oscuridad. La avobenzona presenta un comportamiento diferente en cada solvente, en algunos casos este comportamiento se puede explicar en la misma forma que en los solventes grado analítico, pero en otros se deben tener en cuenta las propiedades estructurales y fisicas del solvente. Los solventes donde la avobenzona es fotoestable son el aceite mineral y el miristato de isopropilo.

APPARENT MOLAR VOLUMES OF THE BETA-ADRENERGIC BLOCKER PROPRANOLOL-HCl IN AQUEOUS MEDIA AT SEVERAL TEMPERATURES

Propranolol-HCl is a non selective β-adrenergic blocker widely used in the treatment of several cardiovascular diseases; nevertheless, the physicochemical information about its volumetric behavior and other aqueous properties is not complete at present. In this context, densities of aqueous solutions of propanolol-HCl have been measured in this research as a function of concentration (from 0.0500 to 0.2500) mol kg-1 at several temperatures, i.e. (278.15, 283.15, 288.15, 293.15, 298.15, 303.15, 308.15 and 313.15) K. These values have not been reported earlier in the literature. The apparent molar volumes and partial molar volumes at infinite dilution for the electrolyte drug were calculated. Otherwise, the partial molar volumes at infinite dilution and the partial molar expansibilities for the drug as molecular form were also calculated. The dependence of these properties on temperature is presented. The results are interpreted in terms of several solute-solvent interactions. Ultimately, the reported information can be useful to understand the intermolecular events exhibited by this drug in pharmaceutical and biological systems.

El Propranolol-HCl es un agente bloqueador β-adrenérgico no selectivo ampliamente usado en el tratamiento de varias enfermedades cardiovasculares; sin embargo, la información fisicoquímica acerca de su comportamiento volumétrico, así como de otras propiedades fisicoquímicas, aún es incompleta en la actualidad. Por esta razón, en este artículo se presentan los valores de densidad de algunas soluciones acuosas de este fármaco en función de la concentración (desde 0,0500 hasta 0,2500) mol kg-1 a diferentes temperaturas (278,15, 283,15, 288,15, 293,15, 298,15, 303,15, 308,15 y 313,15) K. Estos valores no habían sido reportados previamente en la literatura. Asimismo, se presentan los volúmenes molares aparentes y volúmenes molares parciales a dilución infinita del fármaco como electrolito, y de otro lado, los volúmenes molares parciales a dilución infinita del fármaco molecular y las expansibilidades molares, los cuales fueron calculados a partir de los valores de densidad y composición de las mezclas. Los resultados obtenidos se interpretaron en términos de interacciones soluto-solvente. Finalmente, se tiene que la información presentada en este trabajo podría ser utilizada para el entendimiento de algunos eventos moleculares exhibidos por este fármaco en sistemas farmacéuticos y biológicos.

ANTIQUORUM SENSING ACTIVITY OF ESSENTIAL OILS ISOLATED FROM DIFFERENT SPECIES OF THE GENUS Piper

Quorum sensing is a bacterial communication mechanism that depends on population density, and occurs through molecules called autoinducers. These molecules activate receptors, enabling the transcription of genes that encode information needed to control several biochemical mechanisms associated with bacterial survival and pathogenicity. The aim of this study is to evaluate the inhibitory effect of essential oils of three species of Piper on the production of violacein, induced by N-hexanoyl homoserine lactone in Chromobacterium violaceum CV026. Results show that essential oils from Piper bredemeyeri, Piper brachypodom and Piper bogotence present 50% inhibitory concentration (IC50) for quorum sensing of 45.6 µg/mL, 93.1 µg/mL, and 513.8 µg/mL, respectively. However, in terms of cell growth, IC50 values for these oils are greater than 1000 µg/mL. These data suggest that essential oils isolated from Piper species found in Colombian flora are good candidates for the development of antiquorum sensing molecules, with possible applications in the control of bacterial diseases.

El quórum sensing es un mecanismo de comunicación bacteriana que depende de la población celular y que ocurre a través de moléculas llamadas autoinductores, las cuales activan receptores que permiten la transcripción de genes que codifican la información necesaria para controlar diversos mecanismos bioquímicos asociados con la supervivencia y la patogenicidad bacteriana. El objetivo de este trabajo consiste en evaluar el efecto inhibitorio de los aceites esenciales de tres especies del género Piper sobre la producción de violaceína inducible por N-hexanoil homoserina lactona en Chromobacterium violaceum CV026. Los resultados señalan que los aceites esenciales de Piper bredemeyeri, Piper brachypodom y Piper bogotence poseen una concentración inhibitoria 50% (CI50) para el quórum sensing de 45.6 µg/mL, 93.1 µg/mL y 513.8 µg/mL, respectivamente. Sin embargo, en términos de crecimiento celular, el valor de CI50 para estos aceites es mayor de 1000 µg/mL. Estos datos sugieren que los aceites esenciales aislados de especies de Piper encontrados en la flora Colombiana son buenos candidatos para el desarrollo de moléculas antiquórum sensing, con posibles aplicaciones en el control de enfermedades bacterianas.

PHARMACEUTICAL LEGISLATION OR PHARMACEUTICAL LAW? ANALYSIS

Desde la legislación aparecen en la profesión farmacéutica dos conceptos íntimamente relacionados, que debemos definir y analizar: el derecho farmacéutico y la legislación farmacéutica. El primero, es un conjunto heterogéneo de disposiciones que regulan directa o indirectamente la actividad farmacéutica. No puede considerarse una rama independiente del derecho, pero sí es posible, a efectos prácticos, ordenar sistemáticamente las disposiciones que lo regulan. Por ello, surge esta nueva rama dentro del derecho sanitario, en la que se ubica además, la legislación farmacéutica, legislación que todo farmacéutico debe conocer y aplicar en su actividad científico-profesional que, por otra parte, evoluciona vertiginosamente. En el presente trabajo estudiaremos dichos conceptos. Una tarea como ésta requiere, desde el inicio, las herramientas metodológicas más adecuadas. La principal a lo largo de toda la exploración es el afán de acotar al máximo los temas tratados, guiado por la necesidad de presentar este tipo de investigaciones documentadas legislativamente. La metodología utilizada es la seguida normalmente en los trabajos de legislación farmacéutica, en los que los diversos boletines oficiales, donde se publican las disposiciones legales, constituyen las fuentes primarias, así como literatura crítica del tema.

After legal enaltment in the pharmaceutical profession appear two intimately related concepts: the pharmaceutical law and the pharmaceutical legislation that we should define and analyze. On the one hand, the pharmaceutical law is a heterogeneous group of dispositions regulating directly or indirectly the pharmaceutical activity. It cannot be considered an independent branch of the law, but it is possible for practical effects to order systematically the legal regulations. Such is the source of a new branch inside the sanitary law, the pharmaceutical legislation, that every pharmacies most know in applied to his scientificprofessional activity which evolution is vertiginous. This paper will study this concept. From the beginning this study requires the most appropriate methodological tools. The most important one for investigation must be the desire to mark out the treated topics guided by the necessary documentation. The use methodology is the usually followed in the works of pharmaceutical legislation where the primary source is found in the diverse official bulletins publishing the legal disposition and the critical literature of the topics.