Vitae

Health Litigation and the Paradox of Branded versus Generic Drugs in Colombia

**STUDY OF THE ANTIOXIDANT ACTIVITY CHANGES OF COFFEE BEVERAGES DURING ITS SHELF LIFE USING IN-VITRO AND EX-VIVO METHODS**

Antecedentes: Los antioxidantes se han convertido en uno de los conceptos comerciales de mayor impacto en el mercado de los alimentos funcionales; sin embargo, su declaración resulta ser un tema controvertido entre los entes regulatorios a nivel global debido a la complejidad que comprende demostrar la presencia y bioactividad de éstos en un alimento. En este contexto, investigaciones recientes en el café han atribuido propiedades antioxidantes a su bebida. Objetivo: El objetivo de este estudio fue determinar por métodos in-vitro que las bebidas de café contienen sustancias fenólicas, las cuales pueden actuar como antioxidantes, y evaluar cómo su bioactividad puede variar en el tiempo. Métodos: Se evaluaron 48 productos de café en dos tiempos de almacenamiento, a saber, al inicio y al final de la vida útil del producto, determinando su contenido de fenoles totales y la actividad antioxidante por captura de los radicales ABTS (2,2' -azino- bis-(3-etil benzotiazolin -6- sulfonato de amonio) y DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidracilo); además, se determinó por FRAP la actividad reductora del hierro férrico con el fin de establecer el contenido de fenoles antioxidantes a declarar en la etiqueta. Resultados: El contenido de polifenoles antioxidantes fue diferente según el tipo de café, los cafés tostados presentaron 328,61 ± 31.35 mg Equivalentes de Ácido Gálico por cada 100 mL de bebida y los cafés solubles 297,17 ± 68.48. Los resultados obtenidos por los métodos de ABTS, DPPH y FRAP mostraron, por medio de un análisis de componentes principales, que éstos se correlacionan entre sí y que el tiempo de almacenamiento tiene efecto sobre la actividad antioxidante de los productos. Se evaluó la actividad antioxidante ex-vivo en una bebida de café tostado y en otra de café soluble mediante el ensayo de peroxidación lipídica de la Lipoproteína de Baja Densidad (LDL), lográndose evidenciar que estas evitaron la oxidación de la LDL, conforme los contenidos anteriores. Conclusiones: Con los resultados obtenidos se determinó la especificación para la declaración del contenido de sustancias antioxidantes en los productos de café. Con este estudio se mostró que estos métodos de análisis podrían ser considerados para demostrar la bioactividad de los productos de café y su estabilidad en el tiempo.

Background: Antioxidants have been one of the commercial concepts with highest impact in functional food market; however, their statement turns out a controversial topic among regulatory agencies worldwide, due to the complexity involved in demonstrating the presence and bioactivity of these antioxidants in the food. In this context, recent researches have attributed antioxidant properties to coffee beverages. Objectives: The aim of this work was to determine by in-vitro methods that coffee beverages contain phenolic substances, which may act as antioxidants, as well as evaluate how this activity can vary over time. Methods: 48 Coffee products were evaluated at two storage time conditions, namely, at the beginning and the end of their shelf life, determining the total phenolic content and their antioxidant activity by ABTS (radical capture of 2, 2 '-azino-bis-(3-ethyl benzotiazolin -6 - ammonium sulfonate) and DPPH (Capture the radical 2,2-diphenyl-1-picrilhidracilo); FRAP was also determined to know the ferric iron reducing activity. The objective of the above was to establish the content of phenolic antioxidant to be declared on the label. Results: The content of antioxidant polyphenols was different depending on the coffee type; the content was 328.61 ± 31.35 and 297.17 ± 68.48 mg gallic acid equivalents per 100 mL of beverage in roasted and soluble coffees respectively. The results obtained by the methods of ABTS, DPPH and FRAP showed through a principal components analysis that they are correlated with each other and that the storage time has an effect on the antioxidant activity of the products. Additionally, the ex-vivo antioxidant capacity was evaluated on two samples, roasted and soluble coffee beverages by the lipid peroxidation assay of the Low Density Lipoprotein (LDL); it was found that coffee beverages prevent the LDL oxidation, according to the results of polyphenols contents. Conclusions: The results allowed establishing the specifications of the content of antioxidants in coffee products to be declared on the label. This study shows that with these analysis methods the bioactivity of coffee products and its stability over time can be demonstrated.

THE USE OF NATURAL ANTIOXIDANTS (OREGANO AND SAGE) TO REDUCE HEXANAL PRODUCTION IN PRECOOKED CHICKEN DURING CHILL STORAGE

Background: The properties of plants with food preservation potential are well known since the antiquity. In recent years, the use of herbs and spices to improve the sensory characteristics and to extend the shelf-life of foods has been growing. Objectives: To compare oregano (Origanum vulgare L.) and sage (Salvia officinalis L.) as a natural antioxidant in balls of chicken breast and added 0.50% salt. Methods: Samples of chicken meatballs were pre-cooked for 8 minutes in a water bath at 80° C, and packaged in polyethylene bags with three layers, specific for vacuum cooking and high temperatures. The samples were separated into three groups: control (just salt), 0.10% oregano (dry plant) and sage 0.10% (dry plant), stored at -20° C for 144 hours. The tests to verify the formation of hexanal in samples were performed in the period of 0, 48, 96 and 144 hours of refrigerated storage. The determination of hexanal, extracted by micro-extraction (headspace solid phase micro-extraction - HS-SPME), was used as an indicator of the lipid oxidation of the samples. The analysis was conducted by a gas chromatograph coupled with a mass detector (GC-MS). The method was evaluated according to the validation parameters such as linearity, repeatability and detection limit. The extraction was conducted at 70° C using a fiber (DVD / CAR / PDMS) exposed for 20 minutes in the headspace after 5 minutes of equilibrium between the sample and the headspace. Results: Samples added 0.10% oregano or sage had effective protection in the development of hexanal, compared to control samples. The development of hexanal was significantly higher in the control samples, 34 μg of hexanal/100 g of sample at the beginning and 280 µg/100 g sample at the end of refrigerated storage. Conclusion: Herbs were effective in controlling the development of hexanal. However, the oregano was more effective than sage in preventing the formation of hexanal in chicken meatballs pre-cooked. The level of hexanal in herbs at the end of the storage period was 5 μg hexanal/100 g sample for oregano and 23 µg hexanal/100 g sample for sage.

Antecedentes: Las propiedades de las plantas con potencial de conservación de los alimentos se conocen desde la antigüedad. El uso de hierbas y especias para mejorar las características sensoriales y prolongar la vida de los alimentos ha tenido un incremento considerable en años recientes. Objetivos: Comparar las propiedades antioxidantes del orégano (Origanum vulgare L.) y de la salvia (Salvia officinalis L.) en carne de pollo precocinada con 0,50% de sal. Métodos: Las muestras fueron separadas en tres grupos: control (sólo sal), 0,10% de orégano (planta seca) y 0,10% salvia (planta seca), almacenadas a -20°C durante 144 horas. Las muestras de pollo fueron envasadas en bolsas de polietileno con tres capas, específicas para la cocción al vacío y a altas temperaturas. Las muestras fueron pre-cocidas durante 8 minutos a 80°C. Se utilizó el hexanal como indicador de la oxidación lipídica. Los análisis para evaluar la formación de hexanal se realizaron en los tiempos de 0, 48, 96 y 144 horas de almacenamiento refrigerado. El hexanal se determinó por cromatografía de gases con detector de espectrometría de masas (GC-MS), después de una micro-extracción en fase sólida en espacio de cabeza (HS-SPME) a 70°C, utilizando una fibra (DVD/CAR/PDMS) expuesta durante 20 minutos, y después de 5 minutos de equilibrio entre la muestra y el espacio de cabeza. El método ha sido validado de acuerdo a los parámetros más comunes, tales como límite de detección, linealidad, y repetibilidad. Resultados: Ambas plantas secas (orégano y salvia) son eficaces en la prevención de la oxidación lipídica de la carne de pollo durante 114 horas. El desarrollo de hexanal fue significativamente mayor en las muestras control, 34 μg/100g al inicio y 280 μg/100g de muestra al final del almacenamiento refrigerado. Conclusiones: La adición de 0,10% de orégano o salvia a las muestras en estudio resultó eficaz en la protección contra el desarrollo de hexanal. Además, el orégano demostró, en el largo plazo, ser más eficiente que la salvia. El nivel de hexanal para las 144 horas de almacenamiento fue de 5 μg/100g para el orégano y de 23 μg/100g para la salvia.

REFINEMENT OF AN ANALYTIC METHOD FOR DETERMINATION OF LIPID PROFILE IN MEAT BY GAS CHROMATOGRAPHY

Antecedentes: La caracterización y cuantificación de perfiles lipídicos, por medio de cromatografía de gases, permite establecer las características nutricionales y propiedades funcionales de los ácidos grasos presentes en los alimentos. Sin embargo, en la determinación de perfiles lipídicos existen varias condiciones que afectan su cuantificación; además, en los métodos analíticos utilizados para la determinación de perfiles lipídicos en matrices cárnicas no se dispone de un consenso sobre las etapas de extracción y derivatización. Objetivos: Evaluar las mejores condiciones para la cuantificación de ésteres metílicos, variando la cantidad de muestra cárnica y el volumen de metóxido de sodio o trifluoruro de boro, empleados en la etapa de derivatización de un método analítico utilizado para la determinación de un perfil lipídico en carnes bovinas. Métodos: Las condiciones evaluadas fueron: el tipo y la cantidad de reactivos de derivatización (metóxido de sodio 250 μL y 500 μL; trifluoruro de boro 700 μL), cantidad inicial de muestras cárnica (3,0 y 6,0 g) y extracción de grasa según método Folch et al., 1957 (9). La derivatización de triglicéridos y metilación de ácidos grasos tuvo una reacción de 45 minutos para metóxido de sodio y 15 minutos para trifluoruro de boro. Finalmente, la cuantificación de los ésteres metílicos de los ácidos grasos se hizo con un cromatógrafo de gases Agilent 7890ª (Agilent, USA), empleando un detector FID. Resultados: No se encontraron diferencias estadísticamente significativas (p > 0,05) al comparar las combinaciones entre cantidades de muestras, tipo y volumen de reactivos de derivatización empleados. Se encontraron valores de esteres metílicos de ácidos grasos (%P/P) saturados de 58,694% ± 2, monoinsaturados de 33,999% ± 2,4 y poliinsaturados de 7,304% ± 2,8. Conclusiones: La cuantificación de los ésteres metílicos de ácidos grasos en carne bovina por cromatografía de gases demostró ser eficiente y no se encontraron diferencias estadísticas al comparar la cantidad de muestra cárnica, el tipo de reactivo (metóxido de sodio o trifluoruro de boro) y volumen de reactivo empleados en la etapa de derivatización. La mayoría de los ácidos grasos cuantificados reportan valores similares para ese mismo tipo de posta cárnica.

Background: The Characterization and quantification of lipid profiles by gas chromatography allows establishing functional and nutritional properties of fatty acids in foods. However, there is no agreement about the extraction and derivatization stages reported in analytical methods used in determination of lipid profiles in meat matrices. Objectives: Determination of the best conditions for the quantification of methyl esters, varying some conditions like the amount of meat and the volume of sodium methoxide or boron trifluoride used in the derivatization step of an analytical method used for determination of lipid profile in beef meat. Methods: The evaluated conditions were the quantity and type of organic solvents (sodium methoxide 250 μL and 500 μL; boron triflouride 700 μL), quantity of sample (3.0 g and 6.0 g) and fat extraction method used according to Folch et al., 1957 (9). The derivatization of triglycerides and fatty acids had methylation reaction with sodium methoxide for 45 minutes, and for 15 minutes with boron trifluoride, ending with the quantification of methyl esters of fatty acids by gas chromatography. Results: There was no statistically significant differences (p > 0.05) when comparing combinations between the amounts of samples, type and number of derivatizing reagents employed. It was found values of fatty acid methyl esters (%w/w) saturated of 58.694% ± 2%, 33,999 ± 2.4 of monounsaturated and 7,304% ± 2.8 of polyunsaturated. Conclusions: Quantification of fatty acid methyl esters in beef by gas chromatography was shown to be effective and there was no statistical difference when comparing the amount of meat sample, type of reagent (sodium methoxide or boron trifluoride) and reagent volume employed in the derivatization step. The majority of fatty acids reported similar values for the same type of meat post.

IDENTIFICATION OF ACTIVITIES RELATED TO THE PRACTICE AND TYPE OF COMPLEMENTARY AND ALTERNATIVE MEDICINE IN LIMA AND CALLAO (PERU)

Antecedentes: En las ciudades de Lima y Callao (Perú) se desconocen qué tipos de Medicina Alternativa y Complementaria (MAC) se aplican, así como el cómo, quiénes y dónde. Objetivo: Identificar las actividades relacionadas con la práctica y tipos de terapia de la MAC en las ciudades de Lima y Callao (Perú). Métodos: Se emplearon medios electrónicos de publicidad (Internet) y buscador comercial local, utilizando los siguientes términos: medicina alternativa y complementaria, quiropraxia, homeopatía, reiki, naturopatía, reflexología, shiatzu, fitoterapia, masoterapia, y acupuntura. Para la recolección de los datos se consideró el nombre del establecimiento, dirección, número de teléfono, distrito, terapias que aplican, procedencia (Ministerio de Salud, EsSalud, privados), documentos que respaldan su funcionamiento y el responsable del establecimiento. Resultados: Se identificaron 154 establecimientos que aplican MAC, de ellos 148 (98,6%) corresponden a Lima y 6 (1,4%) a Callao. Con respecto al tipo de terapia, se encontró que se aplica masoterapia [66], acupuntura [36], quiropraxia [35], reflexología [35], fitoterapia [23], terapia floral [23], shiatzu [23], reiki [18], homeopatía [17], mente-cuerpo [13], aromaterapia [11] y terapia neural [10]. Asimismo, de los 154 establecimientos que aplicaban MAC, 96 no señalan quién es el profesional responsable, sólo 60 lo mencionan, de los cuales el grupo mayoritario lo conforman médicos [31], seguido por los terapeutas [22]. También se encontró que de los 154 establecimientos, 107 son empresas de actividad privada y se encuentran distribuidas mayoritariamente en Miraflores, San Isidro y Surco. Conclusiones: En Lima y Callao (Perú) existen 154 establecimientos que aplican MAC, más del 90% de ellos son de naturaleza privada. En 94 (61%) de estos 154 establecimientos se desconoce quién es el responsable de aplicar la MAC; lo que podría indicar limitaciones en la eficacia, seguridad y calidad de esta práctica. Los tipos de MAC más utilizadas en los 154 establecimientos son la masoterapia, la acupuntura, la quiropraxia y la reflexoterapia.

Background: In the cities of Lima and Callao (Peru) it is unknown the type of complementary and alternative medicine (CAM) that are in use, as well as how, who and where are applied. Objectives: To identify the activities related to the practice and type of CAM in Lima and Callao (Peru). Methods: It was used electronic media advertising (Internet) and Local Business Search, using the keywords: complementary and alternative medicine, chiropractic, homeopathy, reiki, naturopathy, reflexology, shiatsu, herbal medicine, massage, and acupuncture. In the data collection it was considered the following information of every establishment: name, address, telephone number, district, therapies applied, origin (Ministry of health, EsSalud, private) documents that support its operation and the person in charge. Results: 154 establishments that apply CAM were identified, of which 148 (98.6%) correspond to Lima and 6 (1.4%) to Callao. The following are the most applied type of therapies: massage therapy [66], acupuncture [36], chiropractic [35], reflexology [35], phytotherapy [23], floral therapy [23], shiatsu [23], reiki [18], homeopathy [17], mind-body [13], aromatherapy [11] and neural therapy [10]. Additionally, from the 154 establishments that apply CAM, 96 of them did not report the person in charge, only 60 mentioned who is the responsible, of which doctors [31] constitute the largest group followed by the therapists [22]. It was also found that 107 of the 154 establishments were private sector companies and were distributed mostly in Miraflores, San Isidro and Surco. Conclusions: There are 154 establishments that apply CAM in Lima and Callao (Peru), more than 90% of them are private. In 94 (61%) of these 154 establishments it is unknown who is responsible for applying the CAM, which may indicate limitations on the efficacy, safety and quality of this practice. Massage therapy, acupuncture, chiropractic, and the reflexology are the type of CAM mostly used in the 154 establishments.

**HEPATOPROTECTIVE EFFECT OF CALYCES EXTRACT OF Physalis peruviana ON HEPATOTOXICITY INDUCED BY CCl₄ IN WISTAR RATS**

Background: Physalis peruviana (''uchuva'', Solanaceae) is a widespread species of the South American Andes and widely used in traditional medicine. Its fruits are consumed as food and for the treatment of diabetes. The juice of Physalis peruviana fruits is topically applied in the eyes for pterigyum treatment. Previous works reported that the fruit extracts has modulating activity of oxidative stress in experimental diabetes models induced by streptozotocin. It has been attributed antipyretic, antimicrobial, analgesic and anti-inflammatory properties to the calyces enveloping the fruit. Reported literature demonstrates in vivo and in vitro that different calyx's extracts have antioxidant and anti-inflammatory activities. Objectives: To evaluate the in vivo hepatoprotective effect of the extract of Physalis peruviana calyces, involving inflammation and oxidative stress models at hepatic level. Methods: Hepatotoxicity was induced by single oral administration of CCl4 (2 mL / Kg in olive oil) in Wistar rats. Physalis peruviana extract (250 mg/Kg) and silymarin (200 mg/Kg), used as control drug, were administrated twice a day for five days. At the end of the experiment, animals were euthanized and the liver enzymes alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, and alkaline phosphatase were measured as well as some parameters of hepatic antioxidant status like superoxide dismutase and catalase activities, protein oxidation and lipid peroxidation. Results: Extract of Physalis peruviana calyces inhibited significantly (p < 0.001) liver oxidative stress caused by CCl4, maintaining superoxide dismutase and catalase activities close to normal. Studied extract also reduced significantly liver enzymes levels increased by CCl4 administration. Conclusion: It was suggested that the extract of Physalis peruviana calyces presents a hepatoprotective effect related to its antioxidant activity, especially regarding to lipid peroxidation inhibition.

Antecedentes: Physalis peruviana (''uchuva'', Solanaceae) es una especie distribuida en los Andes suramericanos y de amplio uso a nivel etnofarmacológico. Sus frutos, además de ser usados como alimento, también son consumidos para el tratamiento de la diabetes. Por su parte, el zumo del fruto es aplicado localmente para el tratamiento de pterigios. En modelos de diabetes experimental inducidos por estreptozotocina, trabajos previos han reportado que los extractos de los frutos poseen actividad moduladora del estrés oxidativo. A los cálices que envuelven el fruto, se les atribuyen propiedades antipiréticas, antimicrobianas, analgésicas y antiinflamatorias, entre otras. Estudios previos han demostrado en modelos in vivo e in vitro que diferentes extractos de los cálices presentan actividad antioxidante y antiinflamatoria. Objetivo: Evaluar el posible efecto hepatoprotector de un extracto de cálices de Physalis peruviana en un modelo experimental in vivo que involucra procesos de inflamación y de estrés oxidativo a nivel hepático. Métodos: Se empleó un modelo de hepatotoxicidad inducida por CCl4 en ratas Wistar, mediante una única administración oral de CCl4. Tanto el extracto de Physalis peruviana (250 mg/Kg) como la silimarina (200 mg/Kg), empleada como patrón de referencia, fueron administradas dos veces al día durante cinco días. Al final del experimento, los animales fueron sacrificados y se evaluaron los niveles hepáticos de las enzimas alanina-aminotranferasa, aspartato-transaminasa y fosfatasa alcalina, al igual que algunos parámetros del estado antioxidante hepático como actividad de superóxido dismutasa y catalasa, oxidación proteica y peroxidación lipídica. Resultados: El extracto evaluado de Physalis peruviana inhibió significativamente (p < 0,001) el estrés oxidativo causado a nivel hepático por el CCl4, manteniendo las actividades de superóxido dismutasa y catalasa con valores cercanos a los normales. El extracto también redujo significativamente los niveles de las enzimas hepáticas que fueron incrementados después de la administración de CCl4. Conclusión: Estos resultados sugieren que el extracto de cálices de Physalis peruviana posee un efecto hepatoprotector relacionado con su actividad antioxidante, especialmente en lo referente a la inhibición de la peroxidación lipídica.