Revista Colombiana de Química

Proteinas do muco intestinal humano isolado por irrigação transanal e retossigmoidoscopia

Human intestinal mucus essentially consists of a network of Mucin2 glycoproteins embedded in many lower molecular weight proteins. This paper contributes to the proteomic study of human intestinal mucus by comparing two sample collection methods (transanal irrigation and brush cytology during proctosigmoidoscopy) and analysis techniques (electrophoresis and digestion in solution). The entire sample collection and treatment process is explained, including protein extraction, digestion and desalination and peptide characterisation using a nanoAcquity UPLC chromatograph coupled to an HDMS spectrometer equipped with a nanoESI source. Collecting mucus via transanal irrigation provided a larger sample volume and protein concentration from a single patient. The proctosigmoidoscopy sample could be analysed via digestion in solution after depleting albumin. The analysis indicates that a simple mucus lysis method can evaluate the electrophoresis and digestion in solution techniques. Studying human intestinal mucus complexes is important because they perform two essential survival functions for humans as the first biochemical and physical defences for the gastrointestinal tract and a habitat for intestinal microbiota, which are primarily hosted in the colon and exceeds the human genetic information and cell number 100- and 10-fold (1).

El moco intestinal humano está formado, esencialmente, por una red de la glicoproteína Mucina2, en la cual se encuentran inmersas muchas otras proteínas de menor peso molecular. El objetivo principal del presente trabajo es realizar una contribución al estudio proteómico del moco intestinal humano, mediante la comparación de dos métodos de recolección de muestra (irrigación transanal y cepillos de citología durante rectosigmoidoscopia) y de dos técnicas de análisis (electroforesis y digestión en solución). Se explica todo el proceso de recolección y tratamiento de la muestra para extraer las proteínas, la digestión y desalinización de las mismas, hasta llegar a la caracterización de los péptidos en un cromatógrafo nanoAcquity UPLC acoplado a un espectrómetro HDMS, equipado con una fuente nanoESI. La recolección del moco por irrigación transanal aportó mayor volumen de muestra de un solo paciente y mayor concentración de proteínas. La muestra obtenida por rectosigmoidoscopia se pudo analizar por digestión en solución, previa depleción de albúmina. El análisis indica que una metodología sencilla de lisis del moco puede ser utilizada para evaluación por las técnicas de electroforesis y de digestión en solución. El estudio del complejo moco intestinal humano es importante por las dos funciones primordiales que cumple para la supervivencia del ser humano: como la primera línea de defensa bioquímica y física del tracto gastrointestinal, y como el hábitat de la microbiota intestinal, la cual se hospeda principalmente en el colon, y supera en información genética hasta 100x la del humano y en 10x su número de células (1).

O muco intestinal humano está formado essencialmente por uma rede da glicoproteína Mucin2, constituída por outras proteínas de menor massa molecular. O objetivo principal deste trabalho é contribuir ao estudo proteômico do muco mediante a comparação de dois métodos de amostragem (irrigação transanal e escovas de citologia durante retossigmoidoscopia) e dois técnicas de análise (e digestão em solução). São descritos os processos de amostragem, extração, digestão e dessalinização de proteínas até chegar na caracterização dos peptídeos digeridos em um cromatógrafo nanoAcquity UPLC acoplado a um espectrómetro HDMS, equipado com uma fonte nanoESI. A coleta do muco por irrigação transanal forneceu um volume maior de amostra por pessoa e maior concentração de proteínas. As amostras obtidas por retossigmoidoscopia foram analisadas por digestão em solução, após a depleção de albumina. As análises mostraram que uma metodologia simples de lise do muco pode ser utilizada para avaliação mediante as técnicas eletroforese e digestão em solução. O estudo do complexo MIH é importante pelas suas duas funções fundamentais na sobrevivência humana, sendo a primeira linha de defesa bioquimica e física do trato gastrointestinal, e o habitat da microbiota intestinal, hospedada principalmente no cólon e que contem informação genética até 100 X superior à do humano e 10 X seu número de células (1).

Determinação de resíduos de pesticidas organoclorados Em soro da trabalhadores das culturas em café e banana No departamento de quindío por gc-µecd

La falta de conocimiento del potencial nocivo de los plaguicidas por parte de los trabajadores agrícolas puede ocasionar graves problemas en su salud y en la de los consumidores. Se determinó la residualidad de plaguicidas organoclorados (OCP, por sus siglas en inglés) en muestras de suero sanguíneo de trabajadores agrícolas de cultivos de café y plátano en el departamento del Quindío. Para la extracción de los analitos se implementó un método rápido, seguro, económico y eficiente de microextracción dispersiva en fase líquida (DLLME, por sus siglas en inglés) asistida por sonicación, logrando la extracción de 20 OCP de 200 µL de suero sanguíneo en un tiempo de 35 min con porcentajes de recuperación mayores al 87 %. Se empleó cromatografía de gases con detector de micro captura de electrones (GC-µECD) para el análisis de los OCP. Para cada analito, los coeficientes de correlación obtenidos a partir de las curvas de calibración interna fueron superiores a 0,9996, los límites de detección (LOD) se establecieron entre 0,02 a 0,04 ng/mL y los límites de cuantificación (LOQ) por debajo de 0,14 ng/mL. En el 55 % de las muestras analizadas (166) se evidenció la presencia de: 4,4-DDE, alfa y gamma BHC, endrin aldehído, endosulfan II, endosulfan sulfato, heptacloro y metoxicloro, compuestos que están prohibidos por la regulación nacional e internacional.

Lack of knowledge of the harmful potential of pesticides by agricultural workers can cause serious health problems for them and the consumer. The residual organochlorine pesticides (OCP) was determined in serum samples of coffee and banana crops farmworkers in the department of Quindio, Colombia. To extract analytes a fast, efficient, safe, and economic assisted dispersive liquid liquid microextraction (DLLME) method was implemented by sonication, achieving extraction of 20 OCP in 200 µL of blood serum in a time of 35 min with percentage recoveries higher than 87 %. OCP were analysed by gas chromatography with electron capture detector (GC-µECD). For each analyte, the correlation coefficients obtained from internal calibration curves were higher than 0.9996, the limits of detection (LOD) were established between 0.02 to 0.04 ng/mL and the limits of quantification (LOQ) below 0.14 ng/mL. A total of 55 % of the samples analyzed (166) showed the presence of 4,4-DDE, alpha and gamma BHC, endrin aldehyde, endosulfan II, endosulfan sulfate, heptachlor, and methoxychlor, compounds that are prohibited by both national and international regulation.

A falta de conhecimento do potencial nocivo dos pesticidas por trabalhadores agrícolas, pode causar sérios problemas de saúde e do consumidor. Os pesticidas organoclorados residuais (OCP) foi determinada em amostras de soro de trabalhadores rurais de café e plantações de banana, no departamento de Quindío. Para analitos extração método eficiente rápida e segura, econômica e assistida por dispersão de fase líquida microextração (DLLME) aplicado por ultra-som, a realização de extração OCP 20 200 uL de soro sanguíneo em um tempo de 35 min com porcentagens recuperação > 87%. Detector Foi realizada cromatografia gasosa com captura de elétrons micro (GC-AECD) para a análise da OCP. Para cada analito, os coeficientes de correlação obtidas a partir de curvas de calibração interna foram maiores do que 0,9996, foram estabelecidos os limites de detecção (LOD) entre 0,02-0,04 ng / mL e os limites de quantificação (LOQ) abaixo de 0,14 ng / mL. 55% das amostras analisadas (166) mostrou a presença de 4, 4-DDE, alfa e gama-BHC, aldeído endrina, endossulfão II, sulfato de endosulfan, heptacloro e metoxicloro, compostos que são proibidos pelo regulamento nacional e internacional.

Cristalização e predição da estrutura tridimensional da proteína homologa do receptor ativado para a quinasa c (lack) de leishmania

Los parásitos del género Leishmania son los causantes de la enfermedad conocida como Leishmaniasis. Esta enfermedad es endémica en 98 países. Veinte especies de Leishmania sp han sido descritas como patógenos en humanos y varias de ellas presentan manifestaciones clínicas diferentes. No se dispone de vacuna, a pesar del considerable esfuerzo de muchos grupos de investigación. Las alternativas para descubrir nuevos medicamentos están basadas en el diseño de compuestos que interaccionen con blancos específicos, principalmente, proteínas encargadas de procesos metabólicos o celulares del patógeno, e.g. la parasitación de las células del huésped vertebrado. La eficiente parasitación del huésped vertebrado por Leishmania depende de la expresión de diferentes proteínas, incluyendo la proteína Lack. Parásitos deficientes de Lack no sobreviven internalizados en las células de los vertebrados. Este artículo presenta las condiciones de renaturalización, purificación y cristalización de la proteína Lack del patógeno humano Leishmania (Viannia) panamensis. Además, los resultados de modelación estructural de esta proteína muestran una conformación proteica similar a un ventilador organizado en 7 aspas, cada una compuesta de 4 hojas β. La estructura de la proteína Lack resultó similar a la proteína asociada a ribosoma RACK1 de Trypanosoma brucei y Saccharomyces cerevisiae, y a la de otros eucariotas. Las características estructurales de la proteína Lack podrían ser usadas para la exploración de nuevos.

Leishamnia parasites are the causative agents of the leishmaniasis disease. Due to its broad distribution, parasites are endemic in approximately 98 countries. Twenty species of Leishmaniasp has been described as human pathogens and several of them present different clinical manifestations. This feature poses a significant challenge to the general goals of parasite control and erradication. There is no a protective vaccine for humans, despite substantial efforts by many research teams. Alternatives to discover new drugs are based on the design of new compounds that bind selected targets. Mainly, the targets are proteins involved in key metabolic or cellular processes of the pathogen, e.g. parasitization of vertebrate host cells. The efficient parasitization of the vertebrate host by Leishmania parasites depends on the expression of different molecules including Lack protein. The knockout parasites fail to survive inside the vertebrate host cells. In this article we highlight the conditions to perform the refold, purification, and crystallizing of the Lack protein of the human pathogen Leishmania (Viannia) panamensis. Moreover, we present structure modelling analysis which shows a protein conformation like a fan organized in 7 blades, each one composed of 4 b sheets. Furthermore, the structure of Lack protein was found to be similar to RACK1-ribosome associated protein from Trypanosoma brucei and Saccharomyces cerevisiae and other eukaryotes. The structural characteristics of Lack protein could be used for exploration of new drugs.

Os parasitas do gênero Leishmania são os agentes causadores da doença conhecida como Leishmaniasis. Esta doença é endêmica em 98 países. Vinte espécies de Leishmania sp têm sido descritas como patógenos em humanos e várias delas apresentam manifestações clínicas diferentes. Não se dispõe de vacina, apesar do considerável esforço de muitos grupos de pesquisa. As alternativas para descobrir novos medicamentos estão baseadas no desenho de compostos que interajam com alvos específicos, principalmente, proteínas encarregadas de processos metabólicos ou celulares do patógeno, e.g. a parasitação das células do hóspede vertebrado. A eficiente infestação do hóspede vertebrado por Leishmania depende da expressão de diferentes proteínas, incluindo a proteína Lack. Parasitas deficientes de Lack não sobrevivem internalizados nas células dos vertebrados. Este artigo apresenta as condições de regeneração, purificação e cristalização da proteína Lack do patogénico humano Leishmania (Viannia) panamensis. Além disso, resultados de modelação estrutural desta proteína mostram uma conformação protéica similar a um ventilador, organizado em 7 pás, cada uma composta de 4 folhas β. A estrutura da proteína Lack resultou similar a proteína associada ao ribossomo RACK1 de Trypanosoma brucei y Saccharomyces cerevisiae, e à de outros eucariotas. As características estruturais da proteína Lack poderiam ser usadas para a pesquisa de novos fármacos.

Comparação de duas metodologias para o analise de residuos múltiplos de agrotóxicos em pólen

Se realizó un estudio comparativo entre el método QuEChERS convencional para la determinación de residuos de plaguicidas en polen y un método modificado, con el propósito de seleccionar el método que funciona adecuadamente. Para ello, se analizaron 58 plaguicidas mediante el uso de cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas; la comparación de los métodos se realizó utilizando diferentes parámetros de validación como: recuperación, precisión (como repetibilidad) y límites de detección, los cuales fueron estimados mediante diferentes aproximaciones. Sumado a esto, se realizó un diseño experimental factorial que permitió evaluar la eficiencia de ambos métodos en diferentes tipos de polen. Los resultados indicaron, que el método desarrollado es apto para el análisis de residuos de plaguicidas en polen. Asimismo, se encontró que el método desarrollado presenta mejores límites de detección, mejor exactitud y mejor selectividad que el método QuEChERS convencional para el análisis de los plaguicidas en estudio en la matriz de polen apícola. Finalmente, se encontró que el método modificado no es apto para el análisis de tres de los 58 plaguicidas estudiados.

A comparative study between the conventional and the modified QuEChERS method was performed in order to select the methodology that works better for the determination of pesticide residues in pollen. For this study, 58 pesticides were analyzed by liquid chromatography coupled to mass spectrometry. Comparison was made using different validation parameters for each method as recovery, precision (as repeatability), limits of detection, which were estimate using different approaches. In addition, a factorial design was used to evaluate the efficiency of both methods in different types of pollen. The results showed that the modified method is appropriate for the analysis of pesticide residues in pollen. It was also found that this method has better detection limits, better accuracy and better selectivity than the conventional QuEChERS method for pesticide analysis in bee pollen. Finally, it was found that the modified method is not suitable for the analysis of three of the 58 pesticides studied.

Com o objetivo de validar o bom funcionamento de uma análise modificada de resíduos de pesticidas no pólen foi realizado um estudo comparativo com o método QuEChERS. Por isso, 58 pesticidas foram analisados usando espectrometria de massa por cromatograf ia líquida; comparação dos métodos foi realizada utilizando diferentes parâmetros de validação, como a recuperação de precisão (como repetibilidade) e limites de detecção que foram estimadas por diferentes abordagens. Somado a isso, um planejamento fatorial permitiu avaliar a eficiência de ambos métodos em diferentes tipos de pólen. Os resultados indicaram que o método desenvolvido é adequado para a análise de resíduos de pesticidas no pólen. Constatou-se também que o método desenvolvido tem melhores limites de detecção, melhor precisão e maior seletividade do que o método QuEChERS para análise de pesticidas no estudo da matriz de pólen de abelha. Finalmente, verificou-se que o método modificado não é adequado para a análise de 3 dos 58 pesticidas, os quais apresentaram recuperações inferiores ao 70%.

Influência da concentração na decomposição radiolítica de tiamina, riboflavina e piridoxina em solução aquosa

Vitamin loss during irradiation has been claimed as a critical area in food irradiation technology, especially that of thiamine (B1), which has been considered as the most sensitive to radiation. Although it has been suggested that no vitamin deficiency could result from consuming irradiated food, a long debate on the loss of vitamins and other nutrients during food irradiation has been maintained by the lack of experimental studies monitoring decomposition rates at different concentrations and doses. Since thiamine, riboflavin, and pyridoxine are labile vitamins, this study has focused on their radiolytic decomposition in dilute aqueous solutions in the presence of air. The decomposition process was followed by HPLC and UV-spectroscopy. The results obtained in aqueous solutions showed a dependence of the decomposition as a nonlinear function of the dose. Of these three compounds, the decomposition was higher for thiamine than for riboflavin and even less in pyridoxine.

La pérdida de vitaminas durante procesos de irradiación ha sido considerada como un área crítica en la tecnología de irradiación de alimentos, especialmente la tiamina (B1), que ha sido considerada como la más sensible a la radiación ionizante. La deficiencia de vitaminas en humanos no es producida por el consumo de alimentos irradiados, sin embargo, existen debates sobre la pérdida de vitaminas y otros nutrientes provocada por la irradiación de alimentos, esta discusión sigue latente debido a que hay pocos estudios experimentales de la descomposición de vitaminas a diferentes dosis y concentraciones. Esta investigación se centró en el estudio de la descomposición radiolítica de tiamina, riboflavina y piridoxina en soluciones acuosas y en presencia de aire. El proceso de descomposición fue seguido por cromatografía líquida con detección UV. Los resultados obtenidos en soluciones acuosas mostraron una dependencia no lineal entre la descomposición en función de la dosis. De estos tres compuestos, la descomposición fue mayor en tiamina que en riboflavina y menor en la piridoxina.

A perda de vitaminas durante processos de irradiação tem sido considerada uma área crítica na tecnologia de irradiação de alimentos, especialmente no caso da tiamina (B1), que tem sido considerada como a mais sensível à radiação ionizante. Embora a deficiência de vitaminas em seres humanos não seja produzida pelo consumo de alimentos irradiados, longos debates sobre as perdas de vitaminas e outros nutrientes causadas pela irradiação de alimentos tem sido mantidos devido aos estudos experimentais limitados monitorando a proporção da decomposição em diferentes concentrações de vitaminas e doses de radiação aplicadas. Considerando que a tiamina, riboflavina e piridoxina são vitaminas instáveis, o presente estudo focalizou a decomposição radiolítica dessas vitaminas em soluções aquosas diluídas e na presença de ar. O processo de decomposição foi analizado por cromatografia líquida com detecção UV. Os resultados obtidos em soluções aquosas mostraram uma dependência da decomposição como função não linear da dose. Destes três compostos, a descomposição foi mais alta para tiamina que na riboflavina e menor para piridoxina.

Conteúdo total de fenóis e atividade antioxidante em alguns trechos da polpa de frutas tropicais

Seis pulpas de frutas tropicales de origen colombiano: curuba (Passiflora tripartida var. Mollissima), gulupa (Passiflora edulis Sims), aguacate variedad Hass (Persea America Mill), lulo (Solanum quitoense Lam.), tomate de árbol (Cyphomandra betacea Sendt) y uchuva (Physalis peruvianaL) fueron empleadas para realizar el estudio del contenido total de fenoles, por el método de Folin Ciocalteu y la actividad antioxidante por los métodos químicos: DPPH (2,2-difenil-2-picrilhidrazilo) y FRAP (poder antioxidante para reducir iones férricos), y por los métodos biológicos: oxidación de lipoproteínas de baja densidad (LDL) e inhibición del estrés oxidativo sobre el crecimiento de Saccharomyces cerevisiae. Se encontró que el extracto de curuba presentó el mayor contenido total de fenoles con un valor de 683,48 ± 18,48 mg equivalentes de ácido gálico/100 g muestra B.H. (Base Húmeda). En cuanto a los ensayos de actividad antioxidante el extracto de aguacate presentó mayor actividad por el método DPPH con un valor de 165,10 ± 4,36 µmol Trolox/100 g muestra B.H., mientras que el extracto de curuba presentó la mayor actividad antioxidante por el método FRAP con un valor de 148,07 ± 12,07 µmol Trolox/g muestra B.H. En el ensayo de oxidación de LDL los extractos de curuba y uchuva presentaron la mayor capacidad de inhibición en la oxidación de dichas lipoproteínas con un valor de 1,61 ± 0,01 y 1,46 ± 0,06 nmol TMP (Tetrametoxipropano)/g muestra B.H., respectivamente. En el ensayo de inhibición del estrés oxidativo sobre el crecimiento de S. cerevisiae los extractos de aguacate, curuba y gulupa tuvieron el mayor efecto protector obteniéndose una concentración celular de.

Six pulp extracts of tropical fruits from Colombia: banana passion fruit (Passiflora tripartida var. Mollissima), gulupa (Passiflora edulis Sims), avocado (Persea americana Mill.), lulo (Solanum quitoense Lam.), tomate de árbol (Cyphomandra betacea Sendt.), and gooseberry (Physalis peruviana L.) were used for studying the total phenolic content by the Folin Ciocalteu method and the antioxidant activity by the chemical methods: DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) and FRAP (ferric ion reducing antioxidant power), and by the biological methods: oxidation of low density lipoproteins (LDL) and inhibition of oxidative stress on Saccharomyces cerevissiae growth. It was found that banana passion fruit extract showed the highest content of total phenolics, with a value of 683.48 ± 18.48 mg equivalents to gallic acid/100 g fresh weight (F.W.). Regarding the antioxidant activity the avocado extract exhibited the highest activity in the DPPH assay, with a value of 165.10 ± 4.36 µmol Trolox/100g F.W. whereas the banana passion fruit extract showed the highest antioxidant activity by the FRAP method, with a value of 148.07 ± 12.07 µmol Trolox/g F.W. In the LDL oxidation assay the extracts from banana passion fruit and gooseberry presented the greater ability to inhibit the oxidation of those lipoproteins, with a value of 1.61 ± 0.01 and 1.46 ± 0.06 nmol TMP (Tetrametoxipropane)/g F.W., respectively. In the assay of inhibition of oxidative stress on S. cerevissiae the avocado, banana passion fruit, and gulupa extracts exhibited the main protective effect and the obtained values for cellular concentration were 1.96 ×10(7) cells/mL, 1.86 × 10(7) cells/mL, and 1.54 × 10(7) cells/mL, respectively, as compared to 0.99 × 10(7) cells/mL found.

Seis polpa de frutas tropicais da Colômbia: maracujá (Passiflora tripartite Mollissima var.), Gulupa (Passiflora edulis Sims), Hass abacate (Persea América Mill), lulo (Solanum quitoense Lam.), tomate de árvore (Cyphomandra betacea Sendt) e uchuva (Physalis Peruviana L) foram utilizados para o estudo do teor total de fenol pelo método de Folin-Ciocalteu e actividade antioxidante por métodos químicos: DPPH (2,2-difenil-2-picrilhidrazilo) e FRAP (poder antioxidante de reduzir iões férricos), e métodos biológicos: a oxidação de lipoproteínas de baixa densidade (LDL) e inibição de estresse oxidativo no crescimento de Saccharomyces cerevisiae. Os resultados são encontrados no extrato tiveram o maior teor total maracujá de fenóis com um valor de 683,48 ± 18,48 mg equivalentes o ácvido gálico/100 g amostra de ácido BH (Base úmida). Quanto à atividade antioxidante testes abacate extrato apresentou maior atividade com o método DPPH vale 165,10 ± 4,36 µmol Trolox / 100g de amostra BH, enquanto o extrato de maracujá apresentou a maior atividade antioxidante, método FRAP com um valor de 148,07 ± 12,07 µmol Trolox/g amostra BH. No ensaio de oxidação de LDL e extrai maracujá e uchuva teve a maior capacidade para inibir a oxidação de lipoproteínas estes com um valor de 1,61 ± 0,01 e 1,46 ± 0,06 nmol TMP (tetrametoxipropano)/g BH amostra, respectivamente. No ensaio de inibição de estresse oxidativo no crescimento de S. cerevisiae de extratos de abacate, maracujá e gulupa tinha o maior efeito protector sendo obtido uma concentração de células de 1,96 ×10(7) células/mL, 1,86 × 10(7) células/ml e 1,54 × 10(7) células/mL, respectivamente, em comparação com aqueles encontrados.