Revista de la Facultad de Medicina

PRODUCTION OF RECOMBINANT HEAT SHOCK PROTEIN HSC70 IN Escherinchia coli BL21(DE3) TO OBTAIN POLYCLONAL ANTIBODIES

Antecedentes. Los organismos vivos responden al estrés aumentando la síntesis de proteínas. El estrés por choque térmico ha sido el más estudiado y las proteínas que se inducen, se han denominado genéricamente como proteínas de choque térmico. Objetivo.En este trabajo se establecieron las condiciones óptimas de producción de la proteína HSC70, expresada en E.coli BL21 (DE3) y de los anticuerpos policlonales que permitan identificarla. Material y métodos. Mediante varios ensayos se establecieron las concentraciones óptimas del agente inductor isopropil- -D-thiogalactopiranosido (PTG), del inóculo bacteriano, de empleo de los plásmidos de expresión pET-3a y pET-28a (+); y el método más eficiente para la recuperación de las formas soluble o insoluble de la proteína y de anticuerpos policlonales que la identifiquen. Resultados. Encontramos que el inóculo de cinco colonias con IPTG (2mM) en tubos con cinco mililitros de medio modificado e incubadas por 24 horas a 37°C con agitación constante (200 r.p.m) y tratamiento de sonicación, produce el mejor rendimiento de HSC70. La calidad de la proteína inducida se estableció mediante "Western blotting". Conclusión. La proteína recombinante así obtenida permitió, generar anticuerpos policlonales que a su vez permiten detectar la proteína HSC70 natural en la membrana citoplasmática de diferentes células por inmunofluorescencia, en ELISA, en Western Blot y en pruebas de bloqueo de infección de rotavirus.

Background. Live organisms respond against stressing conditions raising the production of stress proteins. The heat shock stress is a very well kwon condition that produces heat shock proteins. Objective. In this work we determined the optimum conditions to produce HSC70 protein in E. coli BL12 (DE3) under stress conditions, and the best way to obtain its polyclonal antibodies. Materials and methods. The best concentrations for isopropyl- β -D-thiogalactopyranoside (IPTG), bacterial inoculum, type of vector plasmid used pET-3a and pET28a (+) and recovery method of soluble and insoluble forms of HSC70 protein and its polyclonal antibodies were established. Results .Five-colony bacteria inoculum, 2 mM IPTG and sonication treatment were found as best conditions with either expression plasmid. We also produced polyclonal antibodies against the HSC70 protein by inoculating rabbits with this purified protein. Conclusions.Specificity and titer of antiserum was determined by ELISA, Western blotting and immunofluorescence assays. Antiserum was also tested by its inhibition ability of rotavirus infection.

OVEREXPRESESSION HEAT SHOCK COGNATE (HSC70) PROTEIN IN OSTEOBLASTS SUBMITED TO CENTRIFUGAL FORCES

Antecedentes. El osteoblasto tiene la capacidad de estimular la neoformación del tejido óseo, mediante la síntesis de proteínas tales como las proteínas morfogenéticas, factores de crecimiento y proteínas colágenas y no colágenas. A su vez, indirectamente controla los procesos de reabsorción sintetizando otra serie de proteínas estimuladoras de la actividad osteoclastogénica. Objetivo. El propósito de este trabajo de investigación fue analizar la expresión de la proteína de choque térmico HSC70 en un cultivo primario de osteoblastos, después de someterlo a una fuerza tensil mediante centrifugación, determinando el patrón de proteínas mediante análisis electroforético. Material y métodos. A partir de cráneos de ratones lactantes ICR se obtuvieron cultivos de células con características morfológicas tipo fibroblastoide, con prolongaciones alargadas y citoplasmas ligeramente cuboidales que sugiere un cultivo enriquecido de osteoblastos; los cuales fueron sometidos a centrifugación y se analizó por inmunocitoquímica, electroforesis y Western blot la expresión diferencial de la proteína HSC70. Resultados.La técnica de electroforesis SDS-PAGE unidimensional no permitió determinar diferencias en el patrón de corrido entre osteoblastos tratados respecto a los no tratados con la fuerza tensil. Sin embargo, la proteína HSC70 se sobre-expresa en osteoblastos sometidos a centrifugación analizada mediante la técnica de Western blot e inmunohistoquímica. Conclusión.Aunque la electroforesis no determinó diferencias en el patrón de corrido, la proteína de estrés HSC70 se sobre-expresó en osteoblastos sometidos a centrifugación analizada mediante la técnica de Western blot e inmunocitoquímica, sugiriendo que es importante en este tipo de estrés.

Background. Osteoblasts can stimulate new bone formation by protein synthesis, such as, bone morphogenetic proteins, growth factors and collagen and non-collagenous proteins. As well, they controls reabsortion processes, because they can synthesize proteins to promote osteoclastogenic activity, when necessary. Objetive. The objetive of this work was analyze the expression of the heat shock cognate protein HSC70 in a primary culture of murine osteoblasts, after putting under a tensil force by centrifugation and determining the protein pattern by electrophoretic analysis. Materials and methods. From skulls of newborn mice ICR, cultures of cells were obtained with morphologic characteristics fibroblasts-like type, extended prolongations and cytoplasms slightly cuboidal and plump, it suggests an enriched culture of osteoblasts. Results. The technique of unidimensional electroforesis SDS-PAGE did not allow determine differences in the run pattern between osteoblasts treated with tensil force and control cells. Nevertheless, protein HSC70 overexpresion in osteoblasts was confirmed by Western blot and inmunocytochemistry on-are expressed. Conclusions. Electroforesis did not determine differences between control cell and cell submited to centrifugation. Stress protein HSC70 was expressed in osteoblasts submitted to centrifugación analyzed by Western's blot technology suggesting a important roll of this stres type.

PANCREATIC BETA CELLS APOPTOSIS IN TYPE 1 DIABETES

La diabetes de tipo 1 se produce como resultado de la destrucción de las células β del páncreas. Durante la progresión de la enfermedad las células se ven crónicamente atacadas por un infiltrado inflamatorio de tipo autoinmune con gran cantidad de productos entre los cuales se encuentran citocinas y derivados de la oxidación. Estos compuestos son dañinos para la célula β, y la obligan a montar mecanismos de defensa para contrarrestar el ataque inmunológico inespecífico. Sin embargo, y debido a la cronicidad de la inflamación, las células β terminan expresando moléculas que al ser activadas inducen apoptosis de manera específica, de la cual no pueden escapar y terminan por destruirse. En este artículo hacemos una revisión de los mecanismos que conllevan a la apoptosis de las células β enfatizando en la repuesta de éstas al ambiente adverso. El estudio de la biología de la célula β es indispensable para comprender la fisiopatología de la diabetes de tipo 1 y así acercarse al desarrollo de terapias para prevenir o tratar la enfermedad.

Type 1 diabetes is the result of the immune destruction of the β cells islet. During the progression of the disease, β cells are chronically attacked by an autoimmune infiltrate with inflammatory products including cytokines and oxidation derivates. In response to this adverse inflammatory environment, β cells are able to produces a protective response to avoid non-specific apoptosis signals; however it renders them susceptible to specific cell death. In this paper, we review the mechanisms of β cell death in type 1 diabetes, focusing on their ability to adapt to inflammation. These studies add to the understanding of the pathophysiology of type 1 diabetes and contribute to the development of therapies to prevent or treat the disease.

CIGARETTE SMOKE HEALTH IMPLICATIONS

Antecedentes. El consumo de cigarrillo, según cálculos de la Organización Mundial de la Salud (OMS), es la causa de por lo menos cuatro millones de muertes al año. Las consecuencias de fumar cigarrillo van desde cambios fisiopatológicos en los sistemas respiratorio, cardiovascular y digestivo, hasta trastornos mentales asociados a la dependencia a la nicotina. Objetivo. Realizar una revisión narrativa de la literatura médica mostrando los efectos del consumo de cigarrillo sobre la salud física y mental en los fumadores activos y pasivos. Material y métodos. El artículo se basa en la revisión de artículos a través de la base de datos del MEDLINE y de la biblioteca Virtual de la OMS. Se emplearon en la búsqueda las palabras clave "Cigarette Smoke", "Cancer AND smoke", "COPD AND smoke", "Nicotine Dependence". Se escogieron artículos y libros publicados en idioma inglés entre los años 1994 y 2006, realizando una lectura crítica (análisis de posibles conflictos de interés y errores de diseño). Conclusión. El humo del cigarrillo contiene partículas potencialmente peligrosas para la salud de quien está expuesto a ellas. De este modo, fumar cigarrillo se convierte en un factor etiológico común a muchos tipos de cáncer. Además los componentes del cigarrillo están relacionados con el desarrollo de otros estados patológicos (enfermedad cardiovascular y enfermedad pulmonar obstructiva crónica). La nicotina, uno de sus componentes, es un potente agente adictivo. Todo esto en su conjunto hace del cigarrillo un importante problema de salud pública.

Background. According to World Health Organization (WHO), cigarette smoke causes four million deaths each year. The consequences of cigarette smoke are phatophysiological changes in pulmonary cardiovascular and digestive systems, and mental dysfunctions associated to nicotine dependence. Objective. To show the effects of cigarette smoke in active and passive smokers. Materials and methods. This article is based on search of MEDLINE and WHO library for the terms "Cigarette Smoke", "Cancer AND smoke", "COPD AND smoke", "Nicotine Dependence". All relevant English-language papers published between 1994 and 2006 were retrieved in full. Conclusions. Cigarette smoke contains particles potentially dangerous for health of active and passive smokers. Cigarette smoke becomes a common etiologic factor to many cancer types. The cigarette's components are also related with the development of other pathological states (Cardiovascular illness and Chronic Obstructive Pulmonary disease). The nicotine, a smoke's component, is a potent addictive agent. All facts make the cigarette an important problem of public health.

CONGENITAL PSEUDARTHROSIS OF CLAVICLE, DIFFERENTIAL DIAGNOSIS PATHOLOGY

La seudoartrosis congénita de clavícula es una entidad rara, casi siempre aparece sin asociación a otras patologías y generalmente no ocasiona limitaciones importantes en los niños. Puede confundirse con otras entidades como la fractura de clavícula de origen traumático. La mayoría de los pacientes consultan por defecto estético y pocas veces por dolor. Generalmente el tratamiento es quirúrgico; pero existe controversia sobre la necesidad de realizar cirugía. Presentamos dos casos clínicos con seudoar según los últimos parámetros o leyes y trosis de la clavícula derecha que recibieron tratamiento quirúrgico con resultados satisfactorios.

The congenital pseudarthrosis of clavicle is a rare entity, frequently appearing without association to other pathologies and does not cause important limitations in the children. It can confuse with other traumatic pathologies like clavicle fracture. Most of the patients complain about the aesthetics and few times for pain. The treatment is generally surgical there is controversy about of carrying out surgery. We reported two clinical cases with seudoartrosis of the right clavicle that they received surgical treatment with satisfactory results.

INJURIES PREVENTION A SALVATION STRATEGY FOR MODERN SOCIETY

Los programas de prevención en salud pública han disminuido la incidencia de las lesiones y eventos fatales que ocurren en la población joven, involucrada en las colisiones de tráfico en Bogotá - Colombia. Estos programas se basan en la aplicación de la matriz de Haddon. En este artículo se revisan los aspectos y resultados sobre prevención de lesiones que ha venido realizando la Secretaría de Tránsito y Transporte de Bogotá con la colaboración de la Secretaría Distrital de Salud y El Fondo de Previsión Vial Nacional.

Public health prevention programs have diminished the incidence of injuries and fatal events among young population involved in traffic accidents in Bogotá-Colombia. These programs are based in the application of the Haddon´s matrix. The results and theoretical aspects of the prevention of injuries based in government policies of Secretaría Distrital de Salud , Secretaría de Tránsito y Transporte de Bogotá- Colombia and El Fondo de Previsión Vial Nacional, are reviewed.

PEASANT CHILDREN DISPLACED BY VIOLENCE: A NEW CULTURAL MINORITY IN COLOMBIAN URBAN SCHOOLS