Revista Colombiana de Entomología

Effect of entomopathogenic fungi on the cattle tick Boophilus microplus (Acari: Ixodida): use of pathogenicity activators

Resumen. En sistemas artrópodo-patógeno se ha demostrado la bondad del uso de activadores de patogenicidad para favorecer el crecimiento, esporulación y adherencia de hongos entomopatógenos sobre artrópodos. El objetivo del trabajo fue estudiar la actividad biocontroladora de dos aislamientos de Metarhizium anisopliae (Mt019 y Mt020) sobre la garrapata Boophilus microplus, examinado el uso de activadores de patogenicidad empleados durante la fase de cultivo del hongo. Se utilizó un diseño completamente al azar que evaluó tres tratamientos aplicados por aspersión: cultivo en agar tradicional (EM), medio más activador de patogenicidad inespecífico (S) y este mismo medio adicionado de un activador específico para la garrapata (SA). La unidad experimental fue un grupo de diez teleoginas (cinco réplicas) y la concentración del hongo fue constante a 10(8) conidios ml-1. El análisis de resultados se basó en los parámetros IEC (índice de Eficiencia de la Conversión ) y ER (Eficacia Reproductiva), que indican la capacidad reproductiva de la garrapata y del PCIEC (Porcentaje de Control de IEC) y del PCONER (Porcentaje Control del ER), asociados con la eficacia del hongo. Se demostró efecto de los activadores de patogenicidad en los dos hongos evaluados; siendo el valor del IEC inferior (p<0,01) en los grupos con activador. En el caso de ER los valores en grupos con activador fueron inferiores, pero no significativos estadísticamente. El grado de control (PCIEC y PCONER) fue significativamente superior (p< 0,01) en los dos tratamientos con activador en ambos parámetros para los dos aislamientos de hongo. Se concluye que el uso de activadores de patogenicidad durante la fase de cultivo es un proceso que asegura un mejor efecto biocontrolador de los hongos sobre la garrapata.

In arthropod-pathogen systems, the valué of using pathogenicity activators to improve growth, sporulation capacity and adherence of entomopathogenic fungi to arthropods has been demonstrated. The objective of the work was to study the biocontrol activity of two isolates of Metarhizium anisopliae (Mt019 and Mt020) on the tick Boophilus microplus, by examining the use of pathogenicity activators used during the fungal culture phase. A completely randomized design was used, testing three treatments applied by aspersión: culture on traditional agar (EM), media plus unspecific pathogenicity activator (S) and the same media with a tick-specific activator (SA). The experimental unit was a group of ten engorged ticks (five replícales) and fungal concentratlon was constant at 10(8) conidia ml-1. Analysis of the results was based on the parameters IEC (Conversión Efficiency Index) and ER (Reproductive Efficacy), indicators of reproductive capacity of the tick and PCIEC (Percentage Control of IEC), and PCONER (Percentage Control ER), associated with fungal efficacy. There was an effect of pathogenicity activators on the two fungi evaluated; the IEC valué was lower (p< 0,01) ¡n groups with activator. In the case of ER, valúes were lower for groups with activator but not statistically significant. Control levéis (PCIEC and PCONER) were significantly higher (p< 0.01) in the two treatments with activator for both parameters in the two fungal isolates. It was concluded that the use of pathogenicity activators during the culture phase is a process that ensures a better biocontrol effect of fungi on ticks.

Fungí assocíated with termites and their nests in eucalyptus plantations

La región de San Sebastián de Buenavista, Magdalena (Colombia), se caracteriza por ser una de las más importantes en la producción de madera derivada de cultivos de eucalipto. Actualmente se han registrado pérdidas económicas grandes en las empresas madereras que operan en San Sebastián por el daño causado por termitas. Estas pérdidas alcanzan aproximadamente el 83,6% de la producción en el área de estudio. Las medidas de control realizadas son pocas empleándose fundamentalmente insecticidas químicos. En la región no se han realizado estudios de reconocimiento de las termitas que atacan los eucaliptos ni de los microorganismos asociados a ellas. Estos estudios son importantes ya que algunos microorganismos entomopatógenos pueden estar regulando las poblaciones de termitas en condiciones naturales, o tener utilidad potencial como agentes de control microbiológico. En este trabajo se registran los géneros de termitas presentes en la reforestadora y los hongos asociados a los termiteros y sustratos cercanos. Las termitas encontradas corresponden a los géneros Microcerotermes, Amitermes y Coptotermes, En total se obtuvieron 252 aislamientos de hongos correspondientes a 31 géneros y 29 especies. Los aislamientos füngicos se agruparon en categorías de acuerdo con su origen. Se resaltan aquellos reconocidos como entomopatógenos o registrados previamente en asocio con termitas. Entre los hongos más importantes se encuentran: Aspergillus spp. (33,3%), Fusarium spp. (21%), Penicillium spp. (7,9%), TYichoderma spp. (6,8%), Paecilomyces spp. (4,8%) y Entomophthora spp. (2,4%).

The región of San Sebastián of Buenavista, Magdalena (Colombia), is characterized for being one of the most important producers of lumber derived from eucalyptus plantations. At present, large economic losses have been registered for lumber companies operating in San Sebastián due to the damage caused by termites. These losses reach approximately 83,6% of the production in the study. The control measures carried out are few, mainly using Chemical insecticides. In this región, studies have not been conducted on recognizing the termites that attack eucalyptus nor on the microorganisms associated with them. These studies are important because some microorganisms may be regulating termite populations under natural conditions, or have potential as microbiological control agents. In this paper we report the genera of termites present in eucalyptus and the fungi associated with their nests and nearby substratos. The termites found belong to the genera Microcerotermes, Amitermes and Coptotermes. A total of 252 fungal isolates corresponding to 31 genera and 29 species were obtained. The fungal isolates were grouped into categories according to their origin. We identify those isolates recognized as entomopathogenics or previously reported in association with termites. Among the most important fungí were Aspergillus spp. (33,3%), fltsarium spp. (21%), Penicillium spp. (7,9%), Trichoderma spp. (6,8%), Paecilomyces spp. (4,8%) and Entomophthora spp. (2,4%).

Transformation oiBeauuería bassiana strain Bb9112 with the genes from the green fluorescent protein and the proteasa pr1A of Metarhizium anisopliae

Con el propósito, en un futuro, de producir cepas mejoradas del hongo entomopatógeno Beauveria bassiana, se desarrolló un sistema de transformación del hongo basado en la resistencia al herbicida glufosinato de amonio, conferida por el gen bar. Se transformó la cepa B. bassiana Bb9112, caracterizada por su resistencia a luz UV, con el plásmido pBarGPEl, en el cual se clonó previamente el gen marcador que codifica la proteína verde fluorescente (QFF). La selección de las colonias transformantes se hizo en medio mínimo conteniendo 25 µgml del herbicida glufosinato de amonio. La expresión de la proteína OFP se confirmó por observaciones al microscopio de luz UV en los protoplastos transformados y el micelio regenerado de estos protoplastos luego de la transformación. Pruebas de patogenicidad indicaron que no existen diferencias significativas con respecto al porcentaje de patogenicidad de la cepa no transformada y las cepas transformadas con estos genes. Con el fin de aumentar la patogenicidad de la cepa Bb9112 contra la broca del café, se realizó la transformación de ésta con el plásmido pBarGPE1-pr1A, que contiene un gen de proteasa tipo subtilisina (pr1A) aislado de Metarhizium anisopliae. En la cepa transgénica la presencia del gen pr1A se identificó por PCR. La expresión de la proteína se confirmó por isoelectroenfoque y actividad enzimática.

In order to produce an improved strain of the entomopathogen Beauveria bassiana, fungus transformation system was developed based on resistance to the herbicide glufosinate ammonium, conferred by the bar gene. B. bassiana strain Bb 9112, characterized by its resistance to UV light, was transformed with the plasmid pBarGPE1, previously cloned with the marker gene coding for green fluorescent protein (GFP). Transformed colonies were selected in a mínimal médium containing 25 µgml of the herbicide glucosinate ammonium. The expression of the protein GFF in the transformed protoplasts and the mycelium regenerated from trióse protoplasts was confirmed by UV light microscopy. Pathogenicity tests indicated no significant differences in percent pathogenicity between the transformed and nontransformed strains. In order to increase the pathogenicity of Bb9112 against the coffee berry borer, it was transformed with the plasmid pBarGPEl-pr1A containing a subtilisin - protease gene (pr1A) isolated from Metarhizium anisopliae. In the transgenic strain the presence of the pr1A gene was identified by PCR. The expression of the protein was confirmed by isoelectrofocus and enzymatic activity.

Compatibility of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana with triflumuron

El uso combinado de insecticidas químicos y biológicos presenta una alternativa prometedora y racional para el control de insectos plaga de importancia agrícola y médica. Se evaluó la compatibilidad del hongo Beauveria basssiana (Bals.) Vuill, cepas Inra 297, Cenicafé Bb 9205, y UdeA13, con el insecticida Starycide S.C. 480 BayerR (triflumuron), inhibidor de la síntesis de quitina en insectos. Se probaron combinaciones de las tres concentraciones de cada cepa de B, bassiana (3x10(5), Ix10(7), Sx10(8) conidios/ml) y triflumuron (0,05; 0,025 y 0,0125 µg/µl). Gomo control se tomó la suspensión fúngica solamente. Para la evaluación de la compatibilidad de los dos agentes, se realizó una prueba de germinación conidial en medio de cultivo sólido (Sabouraud dextrosa agar) y la de crecimiento micelial en medio de cultivo líquido. La germinación conidial se observó a las 24 y 48 h y el crecimiento micelial a los siete días. En el análisis estadístico se utilizaron como variables el número de conidios germinados y no geminados y el peso del micelio seco. La presencia de triflumuron no inhibió ni la germinación conidial ni el crecimiento micelial de B. bassiana, demostrando la compatibilidad. Sin embargo, la germinación conidial y el crecimiento micelial en presencia de triflumuron varió en las tres cepas evaluadas.

The combined use of chemical and biological insecticides presents a promising and rational alternative to control insect pests of agricultural and medical importance. The compatibillties of the Inra297, CenicaféiBb9205 and UdeA15 strains of the fungus B. bassiana with the insecticide Starycide S.C. 480 BayerR (triflumuron), a chitin synthesis inhibitor in insects, were evaluated. Combinations of three concentrations of each strain of B. bassiana (3X10(5), 1x10(7) and 3x10(8) conidios/ml) and triflumuron (0,05; 0,025 and 0,0125 µg/µl) were tested. The fungus suspensión was used as a control. The compatibility of the two agents was evaluated based on conidial germination in a solid médium (Sabouraud dextrose agar) and mycelial growth in a liquid médium. Conidial germination was observed at 24 and 48 h and mycelial growth at 7 days. The germinated and non-germinated conidia and dry mycelium weight were the variables used in statistical analysis. The presence of triflumuron inhibited neither conidial germination ñor mycelial growth of B. ¿assiana, demonstrating the compatibility. However, both conidial germination and mycelial growth in the presence of triflumuron varied among the three fungal strains that were evaluated.

Pathogenicíty of different fungal entomopathogens for the control oíAleurotrachelus socialis (Homoptera: Aleyrodidae) under greenhouse conditions

En Colombia existe un complejo de ocho especies de moscas blancas asociadas al cultivo de yuca. La especie predominante es Aleurotrachelus socialis Bondar la cual constituye el 92% de la población total y ocasiona pérdidas en rendimiento hasta del 79% en campos experimentales. Con el propósito de ofrecerle a los cultivadores de yuca una opción diferente al control químico con el cual se reduzcan los costos y el impacto ambiental, se evaluó la patogenicidad de varios aislamientos de los hongos entomopatógenos Beauveria bassiana (Bálsamo) Vuillemin, Verticillium lecanii (Zímm.) Viegas y Paecilomyces fumosoroseus (Wize) Brown y Smith, sobre los diferentes estados ninfales y huevos de A. socialis, para determinar el estado de desarrollo más susceptible, seleccionar el aislamiento más promisorio y con éste la concentración letal media (CL50,). Así mismo, se evaluaron diferentes formulaciones comerciales de hongos entomopatógenos sobre el estado de desarrollo más susceptible de A. socialis. Con respecto a la mortalidad se encontraron diferencias significativas entre las especies de hongos utilizadas y el testigo. Se seleccionó el aislamiento CIAT 215 de V. lecanii como el más promisorio por presentar la mortalidad más alta sobre los estados de desarrollo de A. socialis (67,3%). Como estado más susceptible se determinó el de huevo próximo a eclosionar. Sobre este estadio se evaluó el aislamiento CIAT 215 en siete concentraciones y se determinó que la CL50fue de 1,4x10(7) conldlos/ml con límites de confianza de 3,6x10(5)-1,5x10(9) conidios/ml. Los productos formulados evaluados presentaron porcentajes de mortalidad inferiores al 50%; sin embargo, mostraron diferencias estadísticas significativas con respecto al testigo.

A complex of eight whitefly species associated with cassava exists in Colombia. The predominant species Aleurotrachelus socialis Bondar, which constitutes 92% of the total population and causes yield losses of up to 79% in field experiments. In order to offer cassava growers an alternative to chemical control to reduce costs and environmental degradation we assessed the pathogenicity of various strains of the entomopathogenic fungí Beauveria bassiana (Bálsamo) Vulllemin, Verticillium lecanii (Zímm.) Viegas and Paecilomyces fíonosoroseus (Wize) Brown fie Smith on different nymphal stages and eggs of A. socialis in order to determine the most susceptible developmental stage, select the most promising isolate and identify the lethal concentration (CL50). We also evaluated different commercial formulations of entomopathogenic fungí on the most susceptible developmental stage of A. socialis. We observed differences in mortality between the fungal species used and the control treatment. The V.lecanii strain CIAT 215 was selected as the most promising because it presented the highest mortality to A. socialis developmental stages (67,3%). The most susceptible stage were eggs cióse to hatching. We tested the strain CIAT 215 in seven concentrations on this stage and determinated that the CL50 was 1,4x10(7) conidia/ml with a confidence interval of 3,6x10(5)-1,5x10(9) conidia/ml. The evaluated commercial formulations caused mortality of less than 50%, however, they were still statistically different than the control treatment.

Effect of chemical insecticide application for control of the whitefly Aleurotrachelus socialis (Homoptera: Aleyrodidae) in cassava Manihot esculenta Crantz

En los últimos años la mosca blanca Aleurotrachelus socialis Bondar es la plaga más importante en el cultivo de yuca en Colombia. Con el fin de buscar diferentes alternativas de control dentro de un manejo integrado, se realizaron 3 experimentos en condiciones de campo en Jamundí (Valle del Cauca) en bloques completos al azar con la variedad de yuca Reina. En el primero se evaluó la aplicación foliar de diferentes insecticidas. Los tratamientos correspondieron a imidacloprid 1, buprofezin, carbosulfan, tiametoxan, diafentiuron, piriproxifen e imidacloprid 2. En los otros dos experimentos se buscó retrasar la aparición de la plaga evaluando diferentes dosis, formas y épocas de aplicación de imidacloprid: Remojo de la semilla en la siembra y emergencia de la primera hoja e inmersión de la semilla antes de la siembra, reforzando con aplicaciones foliares. En todos los experimentos se evaluó la población de huevos, ninfas y adultos con base en una escala de población de 1 a 6. La aplicación foliar con tiametoxan, imidacloprid 1 y 2 presentaron los valores de población más bajos para adultos, huevos y ninfas, respecto al testigo. Cuando se utilizó imidacloprid a la siembra en inmersión o remojo de la semilla protegió el cultivo entre 45 y 60 días. A nivel económico para agricultores con áreas grandes de siembra, las ganancias son mayores al utilizar las aplicaciones foliares únicamente. Para agricultores pequeños sólo con un producto es rentable el control químico en forma foliar. Cuando se utilizó desde la siembra el agricultor pequeño no obtuvo ganancias en ninguno de los tratamientos.

In recent years the whitefly Aleurotrachelus socialis Bondar has been the most important pest affecting the cassava crop in Colombia. In order to search for different alternativos in an integrated management program, three experiments were conducted under field conditions in Jamundi (Valle del Cauca) in a complete randomized block design, with the cassava variety Reina. In the first trial the foliar application of different insecticides was evaluated. The treatments corresponded to imidacloprid 1, buprofezin, carbosulfan, tiametoxan, diafentiuron, piriproxifen and imidacloprid 2. In the other two experiments we sought to delay appearance of the pest by evaluating different doses, forms an application periods of imidacloprid: drench of the seed at planting and emergence of the first leaf, and stake immersion, reinforced with foliar applications. In all experiments egg, nymph and adult populations were evaluated based on a population scale ofl to 6. The foliar application with tiametoxan, imidacloprid 1 and 2 presented the lowest population valúes for adults, eggs and nymphs compared to the control. When imidacloprid was used at planting and immersion or seed drenching, the crop was protected between 45 and 60 days. At the economic level, for farmers with large planting áreas the benefits are greatest by using only foliar applications. For small-scale farmers chemical control is only beneficial with one product in foliar form. When used from planting on, the small-scale farmer gained no benefits from any of the treatments.

Characterization of granular biopesticide prototypes based on Metarhizium anisopliae for the control of Ancognatha scarabaeoides (Coleóptera: Melolonthidae)

La especie Ancognatha scarabaeoides es un coleóptero cuyas larvas rizófagas pueden causar daños en cultivos de fríjol, maíz, cebolla, arracacha y papa, entre otros. Ocasiona pérdidas entre el 10 y el 80% del total del cultivo. Para su control se utilizan métodos culturales y principalmente métodos químicos, mediante productos altamente tóxicos. Ante los altos costos económicos y ambientales que ocasiona el uso de estos productos, se tiene como alternativa promisoria el uso de insecticidas biológicos a base de hongos entomopatógenos tales como Metarhizium anisopliae. Dado que mediante investigaciones previas en Corpoica se seleccionó una cepa de este hongo (Mt 020) con una actividad biocontroladora del 76,6% contra A. scarabaeoides, con ésta se desarrollaron tres preformulados de presentación granular para aplicación al suelo. Por esto se tuvo como objetivo determinar sus características físicas, microbiológicas y su actividad biocontroladora. Para tal fin, la cepa se produjo masivamente y se formularon tres granulados (GR1, GR2, y GR3) diferentes entre sí en los que se variaron sus componentes y sus concentraciones. A cada granulado se le determinó el tamaño de partícula, voluminosidad, porosidad, fluidez, humedad y pH; así como la concentración en conidios.g-1 y la viabilidad expresada como UFC.g-1. Los prototipos y el principio activo se almacenaron a tres temperaturas (8, 18 y 28°C) y mensualmente se evaluó la viabilidad del hongo. La actividad biocontroladora se determinó mediante bioensayos realizados en casa de malla. De acuerdo con los resultados obtenidos, se seleccionó el granulado GR1 por tener características físicas adecuadas, con valores iguales o inferiores a los límites óptimos para cada una de ellas. Presentó 0,31% de polvos finos, es decir que el granulo no es de consistencia frágil; 3,44 ml.g-1 de voluminosidad, lo que establece que no presentará problemas de manipulación; 18% de porosidad, este porcentaje indicaría que el granulo podría resistir la manipulación sin fracturarse; también se pudo establecer que el producto fluye fácilmente (ángulo de reposo 27,2°), en consecuencia no presentaría problema en el llenado y empaque de cantidades grandes. Posee una humedad de 9,7%, lo que garantiza la reducción de procesos metabólicos, y pH de 5,5. Además, la pérdida máxima de viabilidad a las tres temperaturas presentada durante los seis meses de almacenamiento fue de 20,7% y produjo niveles de mortalidad de la plaga promisorios y estables llegando hasta el 43%.

The species Ancognatha scarabaeoides is a coleopteran whose rhizophagous larvae can cause damage in bean, maize, onion, and potato crops, among others. It causes losses between 10 and 80% of the total crop. Cultural methods and especially chemical methods with highly toxic insecticides are used for its control. Considering the high economic and environmental costs caused by the use of these products, a promising altemative is the use of biological insecticides based on entomopathogenic fungi like Metarhizium anisopliae. Qiving that in previous research at Corpoica, a strain of this fungus (Mt 020) was selected, due to its biocontrol activiry of 76,6% against A. scarabaeoides three granular biopesticide prototypes were developed for soil application. Therefore the objective of this work was to determine their physical and microbiological characteristics, and biocontrol activiry. For this purpose, the strain was mass produced and three different granulars (GR1, GR2, and GR3) that varied in components and concentrations were produced. For each granular the particle size, voluminosity, porosiry, fluidity, humidity and pH were determined; as well as the concentration in conidia.g-1 and the viability expressed as UFC.g-1. The prototypes and the active source were stored at three temperatures (8, 18 and 28°C) and the viability of the fungus was evaluated monthly. The biocontrol activity was measured in bioassays carried out in the screen house. According to the results obtained, the granular GR1 was selected because of its appropriate physical characteristics, which were equal or inferior to the optimal limits established for each of them. It had 0,31% fine powder, which means that the granule is not fragüe; 3,44 ml.g-1 of voluminosity establishing that it will not have manipulation problems; 18% porosity, this small percentage indicates that the granule can resist manipulation without fracturing; it was also established that the product flows easily (angle of repose 27,2°), and so it will not present problems in the filling and packing of large quantities. It had 9,7% humidity, which guáranteos the reduction of metabolic processes, and pH of 5,5. In addition, the máximum loss of viabiliry at the three temperatures presented over the six months of storage was 20,7%, and it produced promising and stable levels of pest mortality of up to 43%.

Binding of Bacillus thuringiensis proteíns with brush border membranes vesicles of the digestive tract of the Andean potato weevil Premnotrypes vorax (Coleóptera: Curculiontdae)

La exploración del uso potencial de Bacillus thuringiensis como agente de control biológico de plagas requiere estudios básicos acerca de su mecanismo de acción en el insecto blanco seleccionado; de acuerdo con esto, técnicas como el empleo de vesículas obtenidas a partir de las microvellosidades epiteliales del tracto digestivo de los insectos (BBMV) se han constituido en herramientas valiosas a nivel mundial para estudiar dicho mecanismo en proteínas de B. thuringiensis. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la unión de las proteínas Cry 3Aa, 3Ba, 3Bb, 3Ca y 7Aa de B. thuringiensis a BBMV's obtenidas a partir del tracto digestivo del gusano blanco de la papa Premnotrypes vorax Hustache, con el fin de determinar la potencialidad de su uso en el control biológico de este insecto plaga de gran importancia económica en los cultivos de papa en Colombia. El trabajo se realizó en el Instituto de Biotecnología de la Universidad nacional de Colombia. La purificación de las BBMV y el mareaje de las proteínas Cry con biotina se realizó de acuerdo con metodologías estandarizadas por los autores. En los ensayos de unión se determinó que mientras que las proteínas Cry3Aa, 3Bb y 3Ca se unieron a las BBMV de P. vorax, las proteínas Cry3Ba y Cry7Aa no lo hicieron; sin embargo, en ningún caso la unión de las proteínas Cry a las BBMV del insecto se relacionó con actividad tóxica hacia larvas de primer instar del insecto blanco. Así mismo, el análisis por blotting de las proteínas que presentaron unión determinó la presencia de dos posibles proteínas receptoras de 70 y 97 KDa, respectivamente, siendo este el primer registro que se hace para este insecto endémico de la zona andina colombiana.

The use of Bacillus thuringiensis as a biológica! pest control agent requires basic studies related to its mode of action in the selected target insect. Tfechniques such as the use of brush border membrane vesicles (BBMV) obtained from epithelial gut tissues of insects have become a valuable tools around the world for studying this mechanism in Bacillus thuringiensis proteins. The objective of this work was to analyze the binding of Cry3Aa, 3Ba, 3Bb, 3Ca and 7Aa B. thuringiensis proteins to BBMV obtained from the digestive tract of Premnotrypes vorax Hustache, in order to explore their potential as biológical control agente for this economically important pest in Colombian potato crops. This work was carried out in the Instituto de Biotecnología at the Universidad nacional de Colombia. Purification of BBMV and protein labeling with biotin were carried our according to methods previously standard ized by the authors. Binding assays showed that while Cry3Aa, CrySBb and Cry3Ca bind to P. vorax BBMV, Cry3Ba and Cry7Aa did not; however, binding was never correlated with toxicity to first instars of the target insect. Protein blot analysis showed the presence of two possible binding proteins of 70 and 97 KDa, respectively, being the First report made for this endemic pest of the Colombian Andean zone.

Capture dynamic of Premnotrypes vorax (Coleóptera: Curculionidae) and the Guatemalan potato tuber moth Tecia solanivora (Lepidoptera: Gelechiidae) in traps with different types of attractants in a potato crop (Solanumphureja)

En el Centró Experimental de Corpoica Tibaitatá se realizó el seguimiento de todo el ciclo de desarrollo de un cultivo de papa criolla para evaluar la dinámica de captura del gusano blanco y la polilla guatemalteca considerando dos períodos: antes y después del aporque. Se utilizaron trampas que se seleccionaron de trabajos anteriores por las capturas altas y su utilidad para evaluar el comportamiento de los insectos de interés. Para el gusano blanco se seleccionaron las trampas de caída tipo malla con partes de la planta de papa como atrayente y las trampas con insectos en grupos de machos y hembras de la misma especie utilizados como atrayentes. Como testigo se incluyeron trampas de costal recomendadas por el Centro Internacional de la Papa (CIP), para esta misma especie. Cada tipo de trampa reflejó de manera diferente la actividad del insecto y en su conjunto permitieron determinar dos épocas del cultivo, en las cuales los adultos de gusano blanco presentaron una mayor actividad, que fueron la emergencia y la floración del cultivo. Para el caso de polilla guatemalteca se seleccionaron las trampas adherentes de color blanco y las trampas de insectos con hembras de la misma especie como atrayentes. También se llevaron registros de captura de adultos con el empleo de trampas de feromona. Los diferentes tipos de trampas permitieron determinar dos épocas del cultivo, en donde los adultos de polilla guatemalteca presentaron una actividad mayor, que fueron la tuberización y la madurez fisiológica del cultivo.

In the Experimental Center of Corpoica Tibaitatá, a crop of Solanum phureja was followed during the entire developmental cycle to evalúate capture dynamics of the potato weevil and the Quatemalan potato tuber moth, considering two periods: before and after hilling. The traps used were selected from previous work that showed high capture and usefulness for evaluating behavior of the insect of interest. for the potato weevil, net pitfall traps that contained parts of the potato plant as attractant, and traps that contained the same insect in group of males and females as attractants, were used. Traps recommended by the Centro Internacional de la Papa (CIP) were used as controls. Each kind of trap reflected insect activity in different ways and together showed two stages of the crop in which adult potato weevils had a greater activity, which were emergence and flowering of the crop. In the case of the Quatemalan potato tuber moth, white sticky traps and traps that contained females of the same insect as an attractant, were used. Adult capture data were also taken from the pheromone traps. The different traps showed two different crop stages in which adult Quatemalan potato tuber moths showed greatest activity, which were tuber initlalization and physiological maturity of the crop.

Electrophoretic analysis of the evolutionary relations in Drosophila species (Diptera: Drosophilidae) of the cluster martensis: D. martensis, D.starmeri and D. uniseta

En geles de almidón fue inferida electroforéticamente la variación genética de doce loci isoenzimáticos, entre seis poblaciones alopátricas colombianas del enjambre martensis (D.martensis, D. starmeri y D. uniseta). provenientes de Santa Marta (departamento del Magdalena), Camarones (departamento de la Guajira) y del desierto de la Tatacoa (departamento del Huiia). Esta estimación fue confrontada con una especie filogenéticamente relacionada (D. buzzatii) y una distante (D. melanogaster). Las divergencias enzimáticas se infirieron a partir de distancias genéticas y los resultados permitieron identificar seis niveles de divergencia taxonómica: Población local (D = 0,1031), subrazas (D = 0,1412), subespecies o razas (D = 0,1870), especies de un mismo enjambre o cluster (D = 0,7907), especies de enjambres diferentes (D = 1,0055) y especies de grupos diferentes (D = 1,4327). A través de este estudio preliminar, se confirmó la utilidad de los datos electroforéticos como estimadores de divergencia evolutiva y se sugiere un posible ejemplo de especiación alopátrica.

Starch gel electrophoresis was used to elucídate genetic variation at 12 isoenzyme loci among six allopatric Colombian populations of the cluster martensis (D. martensis, D. starmeri and D. uniseta), from Santa Marta (Magdalena Department), Camarones (Guajira Department) and from the Tatacoa desert (Huila Department). This estimation was compared to a phylogenetically related (D. buzzatii) and distant (D. melanogaster) species. The enzymatic divergences were inferred from genetic distantes and the results allowed the identification of six levéis of taxonomic divergence: Local population (D = 0,1031), subraces (D = 0,1412), subspecies or races (D = 0,1870), species of a same cluster (D = 0,7907), species of different clusters (D = 1,0055) and species from different groups (D = 1,4327). Through this preliminary study, the utility of electrophoretic data as estimators of evolutionary divergence was confirmed and a possible example of allopatric speciation is suggested.

**Capture of Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechiidae) in traps baited with its sex pheromone**

El minador pequeño de la hoja del tomate Tuta (=Scrobipalpula) absoluta (Mycrick), es un insecto plaga de importancia primaria, dentro del complejo insectil que ataca el cultivo del tomate en Venezuela. Las estrategias para su control dentro de un programa MIP han sido: medidas culturales como la destrucción de residuos de cosecha (socas) y la rotación con cultivos no solanáceos, control biológico a través del parasltoide de huevos Wchogramma sp. y uso de insecticidas biológicos e insecticidas organosintéticos. Su feromona sexual sintética [(E,Z,Z) - 3,8,11-tetradecatrienil acetato (95%) + (E,Z)3,8-tetradecadienil acetato (5%)], dispensada en dedales de goma, fue evaluada en siembras experimentales de tomate durante 1997 y en siembras comerciales en 1999, usando trampas de agua (TA) y trampas Delta adhesivas (TDA) como dispositivo de captura. Los resultados indican que las capturas en las TA variaron entre 1,25 y 4,33 adultos por trampa por noche (a/t/n), y en las TDA entre 0,52 y 2,75 al t/n durante las primeras 5 semanas, lo cual pudiera indicar que las poblaciones fueron bajas. Al colocar dedales nuevos con feromona (19-09-97), las capturas aumentaron sustancialmente, variando entre 4,11 y 17,58 a/t/n y 2,11 y 15,42 a/t/n, respectivamente. En 1999, la captura en ambas trampas fue baja, oscilando entre 0,46 y 8,18 a/t/n y 0,59 y 2,48 a/t/n, respectivamente. La TA registró un mayor número de capturas con diferencias (p<0,05) respecto a la TDA. Estos resultados sugieren que dicha feromona puede detectar dicho insecto-plaga aún en poblaciones bajas y representa una nueva alternativa para el monitoreo y/o control de sus poblaciones dentro de un programa MIR.

The lesser tómalo leaf mlner Tula (=Scrobipalpula) absoluta (Myerick), is a pest insect of primary importance in the insect complex that attacks tomato in Venezuela. Several control The strategies for its control with an IPM program nave been: cultural strategies, such as the destruction of post-harvest residues and rotation with non-solanaceous crops, biological control with the egg parasitoid Trichogramma sp. and the use of biological and organosynthetic insecticides. Its synthetic sex pheromone [(3E, 8Z, HZ)-3,8,ll-tetradecatrienyl acétate (95%) + (3E, 8Z)-3,8-tetradecadienyl acétate (5%)], dispensed in rubber septa, was evaluated in experimental tomato plots in 1997 and in commercials plantings in 1999, using water traps (TA) and Delta sticky traps (TDA) as capture devices. Resulte showed that TA captures ranged from 1,25 and 4,33 adults per trap per night (a/t/n), and TDA between 0,52 and 2,75 a/t/n during the flrst five weeks which could indícate that populations were low. After placing out new lures (19-0997), captures increase substantially, ranging from 4,11 and 17,58 a/t/n and 2,11 and 15,42 a/t/n, respectively. In 1999 capture in both traps was low, ranging from 0,46 and 8,18 a/t/n and 0,59 and 2,48 a/t/n, respectively. TA had a greater number of captures with differences (p<0,05) compared to TDA. These resulte suggest that this pheromone can detect this insect pest even in low populations and represente a new alternative to monitor and/or control ite populations in an IFM program.

**Effect of culture conditions on the enzymatic activity of Serratia marcescens against Tecia solanivora (Lepidoptera: Gelechiidae)**

Se evaluó la actividad enzimática de extractos de Serratia marcescens, previamente sometida o no a pases sucesivos en larvas de Teda solanivora Povolny y a crecimientos continuos sobre medios suplementados o no, con los sustratos potenciales inductores de virulencia (salvado de trigo y homogeneizado de larvas del insecto). Con la biomasa de la bacteria producida en estos medios, se prepararon extractos enzimáticos a los cuales se les determinó la actividad de las enzimas N-acetilglucosaminidasa, quimoelastasa proteasa PR-1 y (β-esterasa. Para ello, la bacteria fue sometida a cinco cultivos sucesivos en estos medios y en cada cultivo se evaluaron las actividades mencionadas. Se determinó que los crecimientos sucesivos de la bacteria sobre los medios suplementados con estos potenciales sustratos, afectaron las actividades enzimáticas de los extractos, incrementándose éstas con el tercer crecimiento sucesivo de S. marcescens en los medios suplementados con los sustratos inductores y siendo estas actividades ligeramente mayores cuando la bacteria creció en los medios suplementados con el homogeneizado de larvas del insecto.

The enzymatic activity of Serratia marcescens extracts was evaluated, previously inoculated or not on Ttecia solanivora Povolny larvae, and successively grown in culture media supplemented or not with potential virulence inductors (wheat bran and homogenised T. solanivora larvae). The bacteria biomass obtained from these media were used to prepar enzymatic extracts for which the activiry of the enzymes N-acetilglucosaminidase, quimoelastase protease PR-1 and ^-esterase were determined. The bacteria were grown up in five successive cultures on these media, and in each culture these activities were also evaluated. We determined that successive growth of the bacteria on culture media supplemented with these potential substratos affected the extract enzymatic activities, increasing with the third successive growing of S. marcescens in the supplemented culture media, these activities being slighty higher when the bacteria grew on media supplemented with homogenised insect larvae.

Effect of culture conditions on the entomopathogenic activity of Serratia marcescens against Tecla solanivora (Lepidoptera: Gelechiidae)

Se estableció un modelo para evaluar el efecto que sobre la actividad enzimática y biocontroladora de Serratia marcescens, producen sus inoculaciones sucesivas en larvas del insecto y sus crecimientos continuos sobre medios suplementados o no, con los sustratos potenciales inductores de virulencia (salvado de trigo y homogeneizado de larvas de Tecla solanivora Fovolny). A la biomasa de la bacteria producida en estos medios, le fue evaluada la actividad biocontroladora contra larvas del insecto y se prepararon extractos enzimáticos, con los cuales se determinó la actividad de las enzimas N-acetilglucosaminidasa, quimoelastasa proteasa y β-esterasa. Se realizaron cinco cultivos sucesivos de la bacteria y en cada uno se evaluaron las actividades mencionadas. En general, tanto el tipo de sustrato adicionado al medio como los crecimientos sucesivos de la bacteria, afectaron las actividades enzimática y biocontroladora, Incrementándose éstas durante el tercer crecimiento de la bacteria. Las mayores actividades biocontroladoras de S. marcescens sometida o no a la activación en larvas, correspondientes al 65 y 64% de mortalidad respectivamente, se obtuvieron cuando creció en el medio con salvado, seguidas por el 58 y 59% de mortalidad respectivamente, cuando creció en el medio con larvas, actividades que fueron significativamente diferentes de la obtenida cuando S. marcescens creció en el medio sin suplementar (48,5%). A su vez, se determinó una correlación positiva, entre las actividades N-acetilglucosaminidasa y quimoelastasa proteasa con la actividad biocontroladora de S. marcescens, sugiriendo que la actividad de estas enzimas, puede estar relacionada con el mecanismo de acción de las bacterias entomopatógenas del género Serratia.

A model was established to evalúate the effect of successive inoculations and successive growths in culture media suppiemented or not with potential virulence inductors (wheat bran and homogenised Tecla solanivora Povolny larvae) on the enzymatic and biocontrol actlvity of Serratia marcescens. The bacteria biomass obtained from these media was evaluated for biocontrol activity against insect larvae, and enzymatic extracts were prepared to determined the activity of the enzymes Macetilglucosaminidase, quimoelastase protease PR-1 and jJ-esterase. These activities were evaluated in each of five successive bacteria cultures. In general, both the type of substrate added to the media as well as successive growth affected the biocontrol and enzymatic activities, increasing in the third growth of the bacteria. The greatest biocontrol activities of S. marcescens, with or without activation in larvae, corresponding to 65 and 64% mortality, respectively, were obtained when were the bacteria were grown . in wheat bran médium, followed by 58 and 59% mortality, respectively, when grown in the larval médium, activities that were significantly different than that obtained when S. marcescens grew in médium without supplement (48,5%). In addition, a positive correlation was found between M-acetilglucosaminidase and quimoelastase protease activities and S. marcescens biocontrol activity, suggesting that the activity of these enzymes could be related with the mode of action of entomopathogenis bacteria of he genus Serratia.

Evaluation of natíve isolates of Nomuraea rileyi for the control of Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae)

El gusano cogollero del maíz, Spodoptera frugiperda, es la principal plaga de este cultivo. Debido a que en el país no se cuenta con un producto registrado a base de hongos entomopatógenos para el control de S. frugiperda y dado que Nomuraea rileyi es un microorganismo que se encuentra con más frecuencia causando epizootias en campo, se planteó como objetivo aislar y seleccionar cepas de este hongo con alta actividad biocontroladora contra S. frugiperda. Para ello, a partir de 10 aislamientos provenientes de los llanos orientales, se evaluó en laboratorio su actividad biocontroladora a una concentración de 1x10(7) conidios.ml-1, mediante la aspersión sobre hojas de higuerilla (Kicinus comunnis) infestadas con larvas de segundo instar del insecto. Con tres aislamientos se obtuvo una mortalidad de 94,7, 95 y 100%, seleccionándose el aislamiento Nm07 procedente de Villavicencio (Meta), ya que ocasionó el 100% de mortalidad y los tiempos letales menores (TL50 y TL90,) que fueron de 6,2 y 7,9 días, respectivamente. Posteriormente, se determinó la concentración y dosis letal de este aislamiento obteniéndose una CL50 de 9,8 x 10³ conidios.ml-1 a los 11 días y una CL90 de 2,2 x 10(5) conidios.ml-1 a los ocho días, respectivamente. Para la determinación de las dosis letales se aplicaron 5 µl de cada dosis sobre el dorso torácico de cada larva, determinándose una DL50 de 44 conidios/larva a los 12 días y una DL90 de 3,380 conidios/larva a los 10 días, respectivamente. Estos resultados permiten obtener parámetros de referencia para realizar estudios de producción masiva y formulación, dirigidos al control integrado de Spodoptera spp.

The fall armyworm, Spodoptera frugiperda, is the major insect pest of the maize crop. Considering that the country does not nave a registered product based on fungal entomopathogens for the control of S. frugiperda, and given that Nomuraea rileyi is a microorganism that is most frequently found to cause epizootics in the field, our objective was to isolate and select strains of this fungus with high biocontrol activity against S. frugiperda. To do this, the biocontrol activity of 10 isolates of N. rileyi, isolated under laboratory conditions from the Llanos Orientales, at 1x10(7) conidia.ml-1 was evaluated by spraying onto "higuerilla" leaves (Kicinus communis) infested with second instar larvaef A mortality of 94,7, 95 and 100% were obtained with three isolates, the isolate Nm-07 from Villavicencio being selected because it caused 100% mortality and the lowest lethal times (LT50 and LT90) of 6, 2 and 7,9 days, respectively. Afterwards, both the lethal concentrations and doses of this isolate were determined, with LC50, of 9,8 x 10³ conidia.ml-1 at 11 days and LC90 of 2,2 x10(5) conidia.ml-1 at eight days, respectively. To determine the lethal doses 5 ul of N. rileyi suspensions were applied to the thoracic tergum of each larvae, with a LD50 of 44 conidia/larvae after 12 days and a LD90 of 3,380 conidia/larvae after 10 days, respectively. These results offer reference parameters to conduct studies on mass production and formulation directed towards the integrated control of Spodoptera spp.

Development of preformulated producís based on iiomuraea rileyi for control of Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Moctuidae)

Homuraea rileyi es el microorganismo que más frecuentemente se encuentra causando epizootias naturales en campo en larvas de Spodoptera frugiperda en diferentes zonas productoras de maíz en Colombia; sin embargo, en el mercado nacional no existe ningún producto registrado a base de este hongo. Por lo tanto, los objetivos del presente trabajo fueron los de desarrollar un método de producción masiva y desarrollar prototipos de bioplaguicida con una cepa del hongo N. rileyi seleccionada por su actividad para el control del gusano cogollero del maíz. Inicialmente se estandarizó un sistema de producción masiva de conidios, para lo cual se evaluaron matrices sólidas como arroz, salvado de trigo y granos de millo, contenidas tanto en bolsas de polietileno de alta densidad, como en bandejas de aluminio y suplementadas con fuentes de nitrógeno orgánico e inoculadas con diferentes tipos de inoculo. Una vez seleccionado el medio en el que se obtuvo el mayor rendimiento de conidios por gramo de sustrato, los conidios fueron separados y utilizados como principio activo para la elaboración de prototipos de bioplaguicida. En el sistema de producción masiva en bolsas, la mayor esporulación se produjo cuando se utilizaron granos de millo, inoculados con fragmentos de medio de cultivo crecido y esporulado de ocho días de edad, siendo ésta de 30 x 10(8) conidios.g-1. Se desarrollaron dos sistemas de entrega para el bioplaguicida, un concentrado emulsionable con una concentración de 1x10 11 conidios.g-1 y un polvo mojable con una concentración de 1x10(9) conidios.g-1, con germinaciones del 92 y 87%, respectivamente. Los sistemas de producción masiva resultaron eficientes y económicos para la obtención de conidios y los preformulados representan una alternativa promisoria para el control del gusano cogollero del maíz.

riomuraea rileyi is the microorganism that is most frequently found causing natural field epizootics of Spodoptera frugiperda larvae in different maize production zones of Colombia; however, in the national market there are no registered producís based on this fungus. Therefore, the objectives of the present work were to develop a method of mass production and develop biopesticide prototypes with a strain of the fungus n. rileyi selected for its control activity on the fall armyworm. A system for mass production of conidia was initially standardized after evaluating different solid matrices such as rice, wheat bran and mijo grains, contained in both, high density polyethylene bags and aluminum trays, supplemented with different organic nitrogen sources and inoculated with different inoculum types. Once the médium was selected where the greatest conidia production per gram of substrate was obtained, the conidia were separated and used as active starter for elaborating the biopesticide prototypes. In the system of mass production in bags, the highest sporulation took place when mijo grains were used, inoculated with eight day oíd fragments of agar grown with the sporulated fungus, this being at 30 x 10(8) conidia.g-1. Two delivery systems were developed for the biopesticide, an emulsifying concéntrate with a concentration of 1x10(11) conidia.g-1 and a wettable powder with a concentration of 1x10(9)conidios.g-1, with germinations of 92 and 87%, respectively. The systems of mass production were efficient and economical for conidia production and the preformulations represent a promising alternative for the control of the fall armyworm in maize.

Evaluation of the efficiency of Tftchogramma lopezandinensis (Hymenoptera: Trichogrammatidae) to controlTecla solanivora (Lepidoptera: Gelechiidae) in storage potato

Se evaluó la eficiencia del parasitoide Trichogramma iopezandinensis Sarmiento en el control de la polilla guatemalteca Teda solanivora (Povolny) en papa almacenada. Se llevaron a cabo cuatro experimentos para determinar aspectos biológicos de la interacción en tres niveles tróficos constituidos por la papa almacenada, la plaga y el parasitoide. Estos experimentos comprendieron el diseño de un dispositivo de liberación del parasitoide, la determinación de las densidades y frecuencias de liberación para prevenir el daño de la plaga y el efecto de la luz en la actividad parasítica de la avispa. El estudio se llevó a cabo en el Centro de Investigación Tibaitatá, en el programa MIP de Corpoica y se desarrolló bajo condiciones controladas de temperatura, humedad y luminosidad. La unidad experimental consistió en una jaula de madera con paredes de muselina, dentro de la cual se introdujo una bandeja con 100 tubérculos con un peso promedio de 100 g cada uno. Se diseñó e implemento un dispositivo eficiente de liberación del parasitoide en condiciones de almacenamiento al que se denominó "tipo túnel". Se determinó que la luz es un factor importante en la actividad parasítica de la avispa presentándose los mayores porcentajes de parasitismo con luminosidad normal en laboratorio comparada con completa oscuridad. En los experimentos de densidades y frecuencias de liberación del parasitoide se concluyó que la frecuencia es un factor significativo en la prevención del daño causado por la plaga. La frecuencia de liberación cada tres días presentó los mejores resultados, indicando que la presencia continua de hembras jóvenes es determinante para lograr un parasitismo mayor.

The efficiency of the parasitoid Trichogramma lopezandinensis Sarmiento to control the Quatemalan potato tuber moth Teda solanivora (Fovolny) in stored potato was evaluated. Four experiments were carried out to determine biológica! aspects of their interaction at three trophic levéis constituting the stored potato, the pest and the parasitoid. These experiments included the design of a device to reléase the parasitoid, determination of the densities and frequencies of parasitoid reléase required to prevent damage of the pest and effect of light on the parasitic activity of the wasp. The study was conducted at the Research Center Tibaitatá, in the IPM program of Corpoica, and was conducted under controlled conditions of temperature, humidity and light. The experimental unit consisted of a wooden cage with muslln walls, in which a tray was introduced with 100 tubers, of an average 100 g each. An efflcient device to reléase the parasitoid in storage conditions was designed and implemented which was denominated the "tunnel type". It was found that light conditions are an important factor in the parasitic activity of the wasp, presenting the highest percentages of parasitism under normal light conditions in the laboratory compared to complete darkness. In the experiments of densities and frequencies of parasitoid reléase, it was found that frequency is a significant factor in preventing of damage caused by the pest. Frequency of reléase every three days showed the best results, indicating that the continuous presence of young females is critical for achieving better parasitism.

Importance of agricultural management for biodiversity: case of ants in sugar cañe

Teniendo en cuenta que las hormigas responden a diferentes prácticas generadas por la agricultura, este artículo analiza y compara la información de dos estudios realizados en cañaduzales del Valle del Cauca. En ambos estudios se ubicaron dos transectos lineales, en los que se colocaron diez estaciones equidistantes (10 m) para un total de 20 estaciones; cada estación contó con un cebo de atún y una trampa de caída que se dejaron actuar 83,3 y 441,6 días continuos, respectivamente. Para predecir y comparar la riqueza de los cañaduzales y sus sitios vecinos se utilizaron diferentes estimadores de riqueza que trabajan con la abundancia de especies; se realizaron pruebas de comparación múltipley análisis de aglomeración. Se capturaron 97 especies distribuidas en 22 géneros y 6 subfamilias. Los cañaduzales más ricos fueron los que tuvieron en su manejo un menor impacto sobre el suelo y mejor cuidado de los sitios adyacentes. Se encontró que los cañaduzales de El Hatico y Roma fueron más similares debido probablemente al efecto regional que tiene el mosaico de habitáis de la Reserva sobre sus alrededores, mientras que El Medio y San Julián, que presentan condiciones degradas, se ubicaron en otro grupo. Este análisis resalta la importancia del manejo de la caña de azúcar como matriz dominante del Valle del Cauca y la diversificación del paisaje con el fin de preservar la biodiversidad de las comunidades de hormigas.

Given that ants respond to different practices, generated by agriculture, this paper analyses and compares information from two studies conducted in sugar cañe fields of the Cauca Valley. In both studies, two lineal transects were situated in which ten equidistan! (10 m) stations were placed for a total of 20 stations; each station had one tuna bait and one pitfall trap, that were operated for 83,3 and 441,6 continuous days, respectively. Ib predict and compare richness in sugar cañe fields and their neighbouring sites, different richness estimators were used that work with species abundance; múltiple comparisons analyses and cluster analyses were conducted. We captured 97 species distributed in 22 genera and 6 subfamilies. The richest sugar cañe fields were those whose management had less impact on the soil and better care of adjacent sites. The sugar cañe fields of El Hatico and Roma were more similar probably due to the regional effect that the habitat mosaic of the Reserve had on its surroundings, while El Medio and San Julián, which represent degraded conditions, were placed in another group. Thls analyses highlights the importance of sugar cañe management as the dominant matrix in the Cauca Valley and the diversification of the landscape in order to preserve the biodiversity pf ant communities.