Revista Colombiana de Química

ELECTROPHORESIS APLICAÇÃO DE TÉCNICAS SIMPLES DE REMOÇÃO DE PROTEÍNAS MAJORITÁRIAS DO PLASMA SANGUÍNEO PARA SUA POSTERIOR ANÁLISE POR ELETROFORESE BIDIMENSIONAL (2D)

El plasma sanguíneo representa una de las muestras de mayor interés en el diagnóstico- pronóstico de diversas enfermedades. Sin embargo, constituye la muestra de mayor dificultad para establecer su proteoma, debido a la presencia de interferencias y proteínas abundantes que dificultan la detección de proteínas minoritarias. Con el objetivo de mejorar la resolución de las proteínas separadas por técnicas electroforéticas, se realizó una comparación de diferentes métodos de remoción de proteínas mayoritarias del plasma de pacientes con síndrome coronario agudo, usando técnicas de precipitación con sales y solventes orgánicos a diferentes concentraciones. La remoción de proteínas del plasma tratado mediante estas metodologías se verificó por análisis proteómicos usando electroforesis de proteínas (1D-y 2D-SDS-PAGE), análisis de imágenes y técnicas de bioinformática. El análisis mostró que metodologías sencillas como el tratamiento con acetona 75% (v/v) disminuyó la concentración de albúmina, retiró las interferencias que dificultan la detección de proteínas minoritarias, aumentando la intensidad de las manchas proteicas separadas mediante electroforesis 2D, y por consiguiente, mejorando la resolución y la detección de las proteínas separadas del plasma sanguíneo.

The blood plasma samples are one of the most interesting in the diagnosis, prognosis of various diseases. However, the sample is more difficult when setting its proteome, due to the presence of interference and abundant proteins that hinder the detection of minor proteins. To improve the resolution of proteins separated by electrophoretic techniques, we compare different methods of removal of major proteins in plasma of patients with acute coronary syndrome, by using techniques of precipitation with salts and organic solvents at different concentrations. Subsequently, the removal of plasma proteins treated by these methods was verified by proteomic analysis by using protein electrophoresis (1D-and 2D-SDS-PAGE), image analysis and bioinformatics techniques. The analysis showed that simple methods such as treatment with acetone 75% (v/v) decreased the concentration of albumin, removed the interferences that hinder the detection of minor proteins, increasing the intensity of protein spots separated by 2D electrophoresis, and improving the resolution and detection of separated proteins of blood plasma.

O plasma sanguíneo representa uma das amostras de maior interesse no diagnóstico- prognóstico de diversas doenças. No entanto, constitui a amostra de maior dificuldade no momento de estabelecer o seu proteôma devido ã s interferências e ã s proteínas abundantes que dificultam a detecção de proteínas minoritárias. A fim de melhorar a resolução de proteínas separadas por técnicas eletroforéticas, comparamse diferentes métodos de remoção de proteínas majoritárias do plasma de pacientes com síndrome coronária agudo, usando técnicas de precipitação com sais e solventes orgânicos em diferentes concentrações. Posteriormente, a remoção de proteínas do plasma tratado por meio destas metodologias foi verificada a través da análise proteômica usando eletroforese de proteínas (1D e 2D SDS-PAGE), análise de imagens e técnicas de bioinformática. A análise mostrou que metodologias simples como o tratamento com acetona 75% (v/v) diminuiu a concentração de albumina, retirou as interferências que dificultavam a detecção de proteínas minoritárias, aumentando a intensidade dos spots de proteínas separados por eletroforese 2D, e melhorando a resolução e detecção das proteínas separadas do plasma sanguíneo.

IMOBILIZAÇÃO DA LIPASE DE Candida antarctica EM SUPORTES DE QUITOSANA-GELATINA

Se preparó una serie de películas de quitosano-gelatina variando la relación de los constituyentes, quitosano-gelatina entre 1:2, 1:5 y 1:10, con concentración total de biopolímeros entre 3,0%, 3,5%, 4,0% y pH de 5,5. Se deshidrataron los soportes por crioconcentración (congelaciones descongelaciones sucesivas) y secado convectivo con aire. La inmovilización de lipasa de Candida antarctica se realizó sobre un hidrogel entrecruzado iónicamente con quitosano por atrapamiento y por adsorción; los mejores resultados en cuanto a actividad enzimática y reutilización del soporte se obtuvieron con el método por atrapamiento. Se llevaron a cabo pruebas de caracterización fisicoquímica de los soportes, actividad del sistema biocatalítico y estabilidad.

A set of chitosan-gelatin films were prepared by varying the chitosan-gelatin ratio between 1:2, 1:5 and 1:10, with total concentration of biopolymers from 3,0% 3,5%, 4,0 and pH of 5,5. We carried out the dehydration of the supports through cryoconcentration (successive freeze thawing) and convective drying with air. Immobilization of lipase from Candida antarctica was performed on an ionically crosslinked hydrogel with chitosan by entrapment and adsorption, getting the best results in terms of enzymatic activity and reuse of the support with the entrapment method. Tests of physicochemical characterization of the supports, biocatalytic system activity and stability were carried out.

Uma serie de filmes de gelatina quitosana foi preparada variando a proporção dos componentes, a quitosana-gelatina entre 01:02, 01:05 e 01:10, com concentração total de biopolímeros de 3,0%, 3,5% 4,0% e pH de 5,5. Realizou-se a desidratação dos suportes por crioconcentração (ciclos sucessivos de descongelamento-congelamento) e secagem por convecção com o ar. A imobilização de lipase de Candida antarctica foi realizada em um hidrogel ionicamente entrecruzado com quitosana por adsorção e atrapamento, obtendo os melhores resultados em termos de atividade enzimática e reutilização do suporte com o método de atrapamento. Foram realizados testes de caracterização físico-química dos suportes, da atividade do sistema biocatalítico e da estabilidade.

Estudo Eletroquímico de alguns 1-(toluenil sulfonila)-3-amina-4-(4'- hidrazina fenil substituídas)-2-pirazolina-5-onas

The electrochemical behavior of certain 1-(Toluenyl sulfonyl)-3-amino-4-(4'-substituted aryl hydrazono)-2-pyrazolin-5-ones were studied at the dropping mercury electrode by employing DC polarography. The variables that influence the electrode process were extensively studied. All compounds under investigation gave two well-defined polarographic waves. The mechanism for the electrode process was proposed in acid as well as in basic media.

El comportamiento electroquímico de ciertos 1-(Toluenil sulfonil)3-amino-4-(aril hidrazonio)-2-pirazolin-5-onas sustituidas fueron estudiados con un electrodo de gota de mercurio empleando polarografía de corriente directa. Las variables que influyen sobre el proceso en el electrodo fueron estudiadas ampliamente. Todos los compuestos estudiados presentaron dos ondas polarográficas bien definidas. Se propone un mecanismo para las reacciones electroquímicas estudiadas tanto en medio ácido como básico.

O comportamento eletroquímico de certos 1-(Toluenil sulfonil)3-amino-4-(aril hidrazonio)-2-pirazolin-5-onas substituídas foram estudados com um eletrodo de gota de mercúrio empregando polarografia de corrente direta. As variáveis que influem sobre o processo no eletrodo foram estudadas amplamente. Todos os compostos estudados apresentaram duas ondas polarograficas bem definidas. Propõe-se um mecanismo para as reações eletroquímicas estudadas tanto em meio ácido quanto em meio básico.

**DETERMINAÇÃO DE ALGUNS METABOLITOS SECUNDÁRIOS EM TRES MORFOTIPOS DE CUBIU (Solanum sessiliflorum Dunal)**

Se determinó la presencia y la estructura (mediante el uso de técnicas espectroscópicas y cromatográficas) de algunos metabolitos secundarios en tres morfotipos del fruto de cocona (Solanum sessiliflorum Dunal; Solanaceae) cultivados en el departamento del Guaviare. Se destacó la presencia de ácido p-cumárico, ácido p-hidroxidihidrocumárico, naringenina, salicilato de metilo, hidrocarburos de cadena larga, ácidos grasos y sus ésteres metílicos y etílicos. Algunos de estos compuestos se acumulan únicamente en el epicarpio de la fruta. La comparación de metabolitos volátiles permitió establecer diferencias químicas entre los tres morfotipos de la fruta.

Presence and structure (by using spectroscopic and chromatographic) of some secondary metabolites in three cocona morphotypes (Solanum sessiliflorum Dunal, Solanaceae) grown in the Guaviare department were established. They contain p-coumaric acid, p-hydroxidihidrocumaric acid, naringenin, methyl salicylate, fatty acids and their methyl and ethyl esters. Some of these compounds are accumulated only in the fruit exocarp. Comparison of volatile metabolites allowed to establish chemical differences between the three fruit morphotypes.

Determinou-se a presença e a estrutura (usando espectroscópicos e cromatográficos) de alguns metabolitos secundários em três morfotipos de cocona (Solanum sessiliflorum Dunal, Solanaceae) cultivados no departamento de Guaviare. Eles contém ácido p-cumárico, ácido p-hidroxidihidrocumárico, naringenina, salicilato de metila, ácidos graxos e seus ésteres metílicos e etílicos. Alguns desses compostos são acumulados apenas no exocarpo do fruto. Comparação de metabolitos voláteis nos permitiu estabelecer diferenças químicas entre os três morfotipos da fruta.

OTIMIZAÇÃO DO MÉTODO DE MICROEXTRAÇÃO EM FASE SÓLIDA ACOPLADA Á CROMATOGRAFIA GASOSA PARA ANÁLISE DE METANOL EM ÁGUA

Se optimizó la técnica de microextracción en fase sólida acoplada a cromatografía gaseosa con detector de ionización de flama (HS-SPME/GC-FID por su nombre en inglés) para análisis de metanol en agua utilizando diferentes microfibras, una fibra de poliacrilato y una fibra de polidimetilsiloxano y una columna RTX-5. Las variables evaluadas fueron tiempo de absorción del contaminante en la fibra, volumen libre en el vial, tiempo y temperatura de desorción y efecto de la agitación y presencia de sal en el sistema. De acuerdo con los resultados, el tiempo óptimo de absorción es 15 minutos, el volumen de muestra es 5 mL. Se encontró que existe una íntima relación entre la temperatura de desorción y el área del pico cromatográfico, y una correlación R² = 0,99965 para la curva de calibración elaborada en un rango entre 0 y 50%, considerando el origen, con un límite de detección de 0,01% y un límite de cuantificación del 0,04%.

The technique head space-solid phase micro extraction with gaseous chromatography by using flame ionization detector (HS-SPME/GC-FID) for analysis of methanol in water was optimized using different microfibers, a polyacrylate fiber and a polydimethylsiloxane fiber and a RTX-5 column. The evaluated variables were time of absorption of the pollutant on the fiber, free volume in the vial (free space), time and temperature of desorption as well as effect of agitation and presence of salt in the system. According to the results, the optimal absorption time is 15 minutes, the optimal volume of sample is 5 mL. A close relationship between the temperature of desorption and the chromatographic peak area was found, and a correlation R² = 0.99965 was obtained for the calibration curve in a range between 0 and 50%, considering the origin, with a detection limit of 0.01% and a quantification limit of 0.04%.

A técnica microextração em fase sólida acoplada a cromatografia gasosa com detector de ionização de chama (HS-SPME/GC-FID por seu nome em Inglês) foi otimizada para análise de metanol em água através de diferente micro fibra, uma fibra de poliacrilato e uma fibra de polidimetilsiloxano e uma coluna de RTX-5. As variáveis avaliadas foram tempo para absorver o poluente no volume de fibra livre no frasco, tempo e temperatura de dessorção e efeito da agitação e da presença de sal no sistema. De acordo com os resultados, o tempo de absorção ideal é 15 minutos, o volume da amostra é 5 mL. Descobrimos uma íntima relação entre a temperatura de dessorção e área do pico cromatográfico, e uma correlação R2 = 0,99965 para a curva de calibração desenvolvida em uma escala entre 0 e 50%, considerando a origem, com um limite de detecção de 0,01% e um limite de quantificação de 0,04%.

PADRONIZAÇÃO DE MÉTODO ANALÍTICO PARA EXTRAÇÃO E QUANTIFICAÇÃO DE CIPERMETRINA EM PASTAGENS

En el presente trabajo se estandarizó un método analítico para la extracción y determinación de cipermetrina en muestras de pastos utilizando microextracción en fase sólida (MEFS) en modo de inmersión con posterior desorción y determinación por cromatografía de gases con detector de ionización de llama (CG-DILL). Las condiciones óptimas para la extracción de cipermetrina en pastos por ID-MEFS fueron: 5 g de muestra se calentaron con 10 mL de solución acuosa de acetona al 1% v/v durante 10 minutos; de esta solución se tomaron 4 mL para llevar a cabo el proceso de extracción por MEFS utilizando una fibra de PDMS con exposición de 30 min a 500 rpm y 60 °C. La desorción del analito se llevó a cabo a 270 °C durante 6 minutos. El procedimiento propuesto mostró comportamiento lineal en el rango probado (5-300 µg/L) con R² de 0,999. Los límites de detección y cuantificación fueron 1,53 y 4,97 ng/mL, respectivamente, con una desviación estándar relativa de 8,57% (n = 6). El método propuesto en este trabajo permite determinar cipermetrina en muestras de pastos hasta niveles de trazas con una recuperación de 99,08%.

In this study, an analytical method has been developed to determine cypermethrin in grass matrices using direct immersion solid-phase microextraction (DI-SPME), coupled to gas chromatography with flame ionization detector (GC-FID). The optimized DI-MEFS experimental procedures to extract cypermethrin in grass matrix were: 5 g of the sample were heated with 10 mL of acetone 1% v/v in water during 10 min. 4 mL of this solution were used for extracting with a polydimethylsiloxane (PDMS)-coated fiber at 60 °C and 500 rpm during 30 min. The analyte desorption was performed at 270 °C for 6 min. The proposed procedure showed linear behavior in the range tested (5-300 mg/L) with R² of 0.999. The detection and quantification limits were 1.53 and 4.97 ng/ mL respectively with a standard deviation of 8.57% (n = 6). The method proposed in this paper allows determining cypermethrin in samples of grass to trace levels with a recovery of 99.08%.

No presente estudo, se padronizou um método analítico para a extração e determinação de cipermetrina em amostras de grama usando microextração em fase sólida (MEFS) no modo de imersão com dessorção subseqüentes e determinação por cromatografia gasosa com detector de ionização de chama (CG-DIC). As condições ótimas para a extração de cipermetrina em pastagens por ID-MEFS foram: 5 g de amostra foram aquecidos com 10 mL de solução aquosa de acetona a 1% v/v por 10 minutos. Desta solução, 4 mL foram tomadas para executar o processo de extração MEFS utilizando uma fibra PDMS submetida por 30 min a 500 rpm e 60 °C. A dessorção do analito foi realizada a 270 °C por 6 minutos. O procedimento proposto apresentou um comportamento linear no intervalo testado (500-300 mg/L) com R² de 0,999. Os limites de detecção e quantificação foram 1,53 e 4,97 ng / mL, respectivamente, com um desvio padrão relativo de 8,57% (n = 6). O método proposto neste trabalho possibilita determinar cipermetrina em amostras de pastagens com uma recuperação de 99,08% nos traços

ANÁLISE DE RESÍDUOS DE PESTICIDAS EM TOMATE USANDO QuEChERS E CROMATOGRAFIA LÍQUIDA ULTRA RÁPIDA ASSOCIADA Á ESPECTROMETRIA DE MASSAS

Se desarrolló un método multirresiduo para la determinación de 24 plaguicidas de diferentes características fisicoquímicas en tomate. El proceso de extracción se basó en el método QuEChERS y la determinación de los compuestos se realizó mediante cromatografía líquida ultrarrápida acoplada a espectrometría de masas. Los resultados de la validación indicaron que el método presenta porcentajes de recuperación de entre el 71,3 y el 114%, coeficientes de variación inferiores al 20%, límites de detección entre 0,002 y 0,225 mg/kg, límites de cuantificación entre 0,009 y 0,750 mg/kg. En los estudios de linealidad, para todos los parámetros evaluados, se obtuvieron resultados adecuados en los rangos de trabajo. Para probar la metodología desarrollada, se evaluaron muestras de frutos de tomate provenientes del departamento de Boyacá y se halló indoxacarb en cantidades inferiores al límite máximo de residuos.

We developed a multiresidue method for determining 24 pesticides of different physicochemical characteristics presents on tomato. The extraction process is based on the QuEChERS method, and the determination of the compounds was performed using ultra performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry. The validation results indicated that the method presents recoveries between 71.3 and 114%, coefficients of variation below 20%, detection limits from 0.002 to 0.225 mg/kg, quantification limits between 0.009 and 0.750 mg/kg. In linearity studies, the results were adequate in the ranges evaluated for all the parameters in this study. Finally, to test methodology, some samples from the Department of Boyacá were analyzed. Indoxacarb was present in amounts below the maximum residues limit.

Desenvolvemos um método multiresíduo para determinar 24 pesticidas de diferentes características físico-químicas em tomate. O processo de extração é baseado no método QuEChERS. Na determinação dos compostos utilizou-se cromatografia líquida de ultra-desempenho acoplada a espectrometria de massa. Os resultados da validação indicaram que o método apresentou recuperações entre 71,3 e 114%, os coeficientes de variação estiveram abaixo de 20%, os limites de detecção entre 0,002 e 0,225 mg/kg, os limites de quantificação entre 0,009 e 0,750 mg/kg. Em estudos de linearidade, se descobriu que, para todos os parâmetros, os resultados foram adequados. Para testar a metodologia desenvolvida, testaram amostras do departamento de Boyacá e constatou a presença de indoxacarbe em quantidades inferiores ao limite máximo de resíduos.

ÍNDICES DE REFRAÇÃO, DENSIDADE E SUAS PROPRIEDADES DERIVADAS DE MISTURAS BINÁRIAS DE SOLVENTES HIDROXÍLICOS COM LÍQUIDO IÔNICO (ETILSULFATO 1-ETIL-3-METILIMIDAZÓLIO E METILSULFATO 1-METIL-3-METILIMIDAZÓLIO) DE 298,15 K AO 318,15 K

Se midieron densidades e índices de refracción de mezclas binarias de agua, metanol y etanol con 1-Etil-3-metilimidazolio Etilsulfato (EMIM-EtSO4) y de etanol con 1-Metil-3-metilimidazolio Metilsulfato (MMIM-MeSO4) en el rango de temperatura de (298,15, 308,15 y 318,15) K. Se calcularon los volúmenes de exceso molar (V M E) y la desviación del índice de refracción (d n ), que se ajustaron a una ecuación polinomial de Redlich-Kister de orden cuatro.

Densities and refractive indices of binary mixtures of water, methanol and ethanol with 1-Ethyl-3-methylimidazolium Ethylsulfate (EMIM-EtSO4) and ethanol with 1-Methyl-3-methylimidazolium Methylsulfate (MMIM-MeSO4) in the temperature range (298.15, 308.15 and 318.15) K were measured. The excess of molar volumes (V M E) and the deviation of the refractive index (d n ), were fitted to an order fourth polynomial equation of Redlich-Kister.

Determinam-se densidades e índices de refração de misturas binárias de água, metanol e etanol com 1-Etil-3-metilimidazólio Etilsulfato (EMIM-EtSO4) e de etanol com 1-Metil-3-metilimidazólio Metilsulfato (MMIM-MeSO4) no intervalo de temperatura (298,15, 308,15 e 318,15) K. Se calcularam os volumes de excesso molar (V M E) eo desvio do índice de refração (d n ), ajustados áuma equação polinomial de Redlich-Kisterde ordem quatro.

PREPARAÇÃO DE CARVÕES ATIVADOS A PARTIR DE RESÍDUOS DE PNEUS. ACTIVAÇÃO FÍSICA E QUÍMICA

Se preparan carbones activados por activación química de residuos de llantas con soluciones acuosas de diferente concentración de dos activantes químicos (H3PO4 y KOH) y por activación física con CO2. Los carbones activados caracterizados por determinación de isotermas de adsorción de N2 a 77 K, que muestran la forma típica de estructuras mesoporosas, que permiten calcular el área superficial específica para los carbones activados obtenidos que presentaron valores entre 25,4 y 157,3 m²g-1. Las entalpías de inmersión de los carbones activados en benceno y agua se encuentran entre 3,12 y 27,6 Jg-1 y 9,81 y 30,6 Jg-1, respectivamente, y muestran el tipo de interacciones superficiales que pueden tener los sólidos porosos obtenidos con diferentes adsorbatos. Se encontró un comportamiento lineal directamente proporcional para la relación entre el volumen de microporo y el área superficial, y una relación de segundo orden entre el área superficial y la entalpía de inmersión en benceno. De acuerdo con las condiciones de preparación se obtienen sólidos porosos adecuados para la adsorción de compuestos en fase líquida dado su mayor volumen de mesoporos.

Activated carbons are prepared by chemical activation from waste tire with aqueous solutions at different concentrations of two activating agents-H3PO4 and KOH--and by physical activation with CO2. The activated carbons are characterized by the determination of adsorption isotherms N2 at 77 K, which show the form typical of structures mesoporous and allow calculating the surface specific area, for the activated carbons obtained that presented values between 25,4 and 157,3 m²g-1. The immersion enthalpies of the activated carbons in benzene and water present values that are between 3,12 and 27,6 Jg-1 and 9,81 and 30,6 Jg-1, respectively, and show the surface interactions type that can have the porous solids obtained with different adsorbates. A directly linear proportional behavior for the relation between the micropore volume and the surface area, and a relation of the second order between the surface area and the immersion enthalpy in benzene were found. In agreement with the conditions of preparation, the solid porous obtained are adapted for the adsorption of compounds in liquid phase because of its major mesoporous volume.

Se preparam carvões ativados por activação química de resíduos de llantas com soluções acuosas de diferente concentração de duas activantes químicos (H3PO4 e KOH), e por activação física com CO2. Os carvões ativados se caracterizam por determinação de isotermas de adsorção de N2 a 77 K, que mostram a forma característica de estruturas mesoporosas, permitem calcular o área superficial específica para os carvões ativados obtidos que apresentaram valores entre 25,4 e 157,3 m²g-1. As entalpías de imersão dos carvões ativados em benzeno e água, encontram-se entre 3,12 e 27,6 Jg-1 e 9,81 e 30,6 Jg-1, respectivamente e mostram o tipo de interações superficiais que podem ter os sólidos porosos obtidos com diferentes adsorbatos. Encontrou-se um comportamento linear diretamente proporcional para a relação entre o volume de microporo e o área superficial e uma relação de segundo ordem entre o área superficial e a entalpía imersão em benzeno; de acordo ás condições de preparação se obtêm sólidos porosos adequados para a adsorção de compostos em fase líquida dado seu maior volume de mesoporos.