Biomédica

Natural history of cutaneous and mucocutaneous leishmaniasis

Las manifestaciones clínicas de la leishmaniasis cutánea y mucocutánea siguen siendo el primer paso para la sospecha de la infección y, por consiguiente, para su diagnóstico y obtención de muestras para su confirmación parasitológica. A pesar de ser una de las patologías parasitarias de mayor incremento en los últimos años en Colombia, no es fácil encontrar en la literatura imágenes de las lesiones clínicas y de su evolución. Por esta razón, y con el ánimo de brindarle imágenes de referencia al personal de salud que se enfrenta al diagnóstico de esta parasitosis, se presenta una serie de fotos que resumen la evolución del cuadro clínico desde los lesiones iniciales en el momento de la picadura de la hembra de Lutzomyia hasta las manifestaciones graves por destrucción de la mucosa nasal y oral.

The clinical picture of cutaneous and mucocutaneous leishmaniasis is still the first step in infection suspicion and, consequently, for its accurate diagnosis and sample obtention for parasitological confirmation. Even though leishmaniasis is the parasitic infection with the greatest increase in the last years in Colombia, it is difficult to find in the literature photographs of its clinical manifestations and evolution. For this reason, and hoping to offer a reference article for health personnel dealing frequently with this pathology, a series of pictures is presented that summarize the clinical picture and its evolution from the incipient lesion after the bite of a Lutzomyia female until the severe nasal and oral cartilaginous destruction.

Miltefosine for disseminated cutaneous leishmaniasis

La leishmaniosis cutánea diseminada es una forma escasa de leishmaniosis, que se caracteriza por la diseminación sanguínea del parasito que lleva a la aparición de múltiples nódulos y placas en la piel de todo el cuerpo y aun de la mucosa nasal. Se diferencia de la leishmaniosis cutánea difusa en que la alteración de la inmunidad celular es menor y las lesiones pueden tener una descamación epidérmica, en cambio en la leishmaniosis difusa las lesiones son nodulares y hay una anergia celular específica contra el parásito. En este artículo se describe el caso de un paciente colombiano con Leishmaniosis cutánea diseminada causada por L(V) panamensis que inicialmente tuvo falla terapéutica al ser tratado con Glucantime y Anfotericina B y quien curó de sus lesiones al recibir tratamiento con Miltefosine.

**Phagocytosis of promastigotes and amastigotes of Leishmania mexicana by the FSDC dendritic cell line: Ultrastructural study**

Introducción. Las células dendríticas están presentes en la mayoría de los tejidos, ellas capturan y presentan antígenos para activar a los linfocitos T. Objetivo. Se describe ultraestructuralmente la fagocitosis de Leishmania mexicana por la línea de células dendríticas FSDC, una línea de células de Langerhans obtenida de la epidermis fetal de ratón, e inmortalizada por la transducción retroviral del oncogen v-myc. Materiales y métodos. Se obtuvieron amastigotes de la lesión de ratones Balb/c y promastigotes a partir del cultivo ( 24°C) de la lesión. Las FSDC se cultivaron con los parásitos en una proporción de 5 parásitos por célula, en medio IMDM, durante 24 horas. Los cultivos infectados y los controles se procesaron para microscopía electrónica de transmisión. Se hicieron cortes semifinos contrastados con azul de toluidina para evaluar porcentaje de fagocitosis y finos, contrastados con acetato de uranilo y citrato de plomo. Resultados. El 13,42% de las FSDC fagocitaron promastigotes; de ellas el 8% contenían un parásito y el restante 5,2% fagocitó dos o más. El 20% de las FSDC fagocitaron amastigotes; 10% contenían un parásito y 10% dos o más. Ultraestructuralmente se observaron promastigotes en contacto con las células por el flagelo o por el polo posterior. Los fagosomas que contenían promastigotes eran organelos estrechos con uno ó dos parásitos. Los que contenían amastigotes eran de gran tamaño (8 µm) con uno o varios parásitos, libres o adosados a la membrana del fagosoma por su polo posterior. Conclusión. La infección de las FSDC se caracterizó por una baja tasa de células infectadas al ser expuestas a promastigotes o amastigotes. La vacuola parasitofora presentó características similares a las de los macrófagos. En su mayoría las FSDC presentaban 1 a 3 parásitos por célula. Las observaciones plantean la necesidad de estudiar la relación entre capacidad de fagocitosis y función.

Introduction. Dendritic cells, which capture and present antigen to activate unprimed T cell, are found in most tissues. Objective. This work describes the ultrastructure of Leishmania mexicana phagocytosis by the fetal skin dendritic cell (FSDC) line, a Langerhans cell line isolated from mouse fetal epidermis immortalized by retroviral transduction of the v-myc oncogene. Materials and methods. Leishmania amastigotes were obtained from mouse (BALB/c) lesion and promastigotes from culture ( 24°C) of the lesion. FSDC cells were cultured with parasites (5 parasites per cell) using IMDM medium, during 24 hours. Control and infected cultures were processed for transmission electron microscopy. Semi-thin sections counterstained with toluidine blue to evaluate phagocytosis and thin sections counterstained with uranyl acetate and lead citrate were made. Results. 13.42% of the FSDC phagocytosed promastigotes; 8% contained a single parasite and 5.2% phagocytosed 2 or more. 20% of the FSDC phagocytosed amastigotes; 10% contained a single parasite and 10% phagocytosed 2 or more. Ultrastructurally, promastigotes in contact with FSDC by the flagellum or the posterior pole were observed. The parasitophorous vacuoles harbouring promastigotes were small organelles containing one or two parasites each. Parasitophorous vacuoles containing amastigotes were larger (8µm diameter) with one or several parasites free or attached to the vacuole at the posterior pole. Conclusion. The low rate of infected FSDC cells was characteristic and the parasitophorous vacuole showed similar characteristics to those observed in macrophages. The parasite density in the infected cells was 1 to 3 parasites per cell. These observations highlight the need to study the relationship between phagocytic capacity and function.

**Role of the parasitophorous vacuole of murine macrophages infected with Leishmania amazonensis in molecule acquisition**

Introducción. Leishmania son parásitos intracelulares de macrófagos, confinados en compartimentos denominados vacuolas parasitóforas. La permeabilidad de este compartimento depende de su interacción con el tráfico vesicular y transportadores presentes en su membrana. Objetivo. En este trabajo se estudió la permeabilidad de la membrana de la vacuola parasitófora en la línea celular J774.A1 infectada con Leishmania amazonensis, in situ y en compartimentos aislados. Materiales y métodos. El aislamiento de vacuolas parasitóforas se hizo por gradiente de densidad. La permeabilidad de la membrana de estas se valoró por distribución de sondas fluorescentes y electrofisiología. Para establecer indirectamente el transporte de protones se usó naranja de acridina. La presencia de transportadores ABC sensibles a probenecid se estableció con amarillo lucifer y calceína. Por primera vez con la técnica de patch-clamp se registraron corrientes en la membrana de este compartimento aislado. Resultados. La vacuola parasitófora colorea de rojo con naranja de acridina indicando un pH ácido. Concentra amarillo lucifer a través de un transportador sensible a probenecid, pero excluye la sonda calceína. Vacuolas aisladas se marcan de rojo con naranja de acridina y concentran amarillo lucifer a través de un transportador sensible a probenecid. Estas vacuolas excluyeron calceína y presentaron en su membrana una corriente iónica que se activa a diferencias de potencial cercanas a 60 mV, con una conductancia de 46 ± 3 pS. Conclusiones. Se pueden aislar vacuolas parasitóforas con propiedades de permeabilidad que preservan mecanismos de transporte similares a los encontrados in situ. Se registra por primera vez la presencia de una corriente iónica poco selectiva en la membrana de este compartimiento.

Introduction. Leishmania are intracellular parasites of macrophages, confined into compartments known as parasitophorous vacuoles. The permeability of this compartment depends on its interaction with the endocytic pathway and transport proteins present on its membrane. Objective. The membrane permeability of the parasitophorous vacuole was studied in J774.A1- macrophage like cells infected with Leishmania amazonensis, in situ and on isolated compartments. Materials and methods. The parasitophorous vacuoles were isolated by density gradients. Fluorescent probe distribution and electrophysiological recordings were used to determine parasitophorous vacuole membrane permeability. Proton transport was evaluated indirectly by acridine orange staining. Probenecid sensitive ABC transporters were detected using the fluorescent probes lucifer yellow and calcein. For the first time ion currents were recorded on the membrane of isolated parasitophorous vacuoles using the patch clamp technique. Results. The parasitophorous vacuole stains red with acridine orange indicating an acidic compartment. It concentrates lucifer yellow by means of a probenecid sensitive transporter but excludes calcein. Isolated vacuoles stained red with acridine orange and concentrated lucifer yellow by means of a probenecid sensitive transporter. These vacuoles excluded calcein and showed an ion current in their membrane which is activated at potentials close to 60 mV with a mean conductance of 46 ± 3 pS. Conclusions. Isolated parasitophorous vacuoles with permeability properties preserving transport mechanisms similar to those found in situ can be purified. A poorly selective ion current on the parasitophorous vacuole membrane is reported for the first time.

Comparative immunohistological analysis of the Montenegro skin test reaction in asymptomatic infection and in acute and chronic cutaneous leishmaniasis

Introduction. The Montenegro skin test reaction and leishmaniasis lesions share fundamental characteristics of a delayed type hypersensitivity reaction. Objectives. To determine whether the Montenegro skin test reaction (response to leishmanin) might approximate and thereby provide insight into the early inflammatory and immune response to Leishmania infection. Materials and methods. We compared the inflammatory response in biopsies of acute (evolution time £one month), and chronic lesions (evolution time ³6 months) with the Montenegro skin test reaction in the corresponding patients, and with the Montenegro skin test of asymptomatically infected volunteers. Results. The proportion of CD4+ and CD8+ T lymphocytes, mononuclear phagocytes and granulocytes were similar in acute lesions and in their corresponding Montenegro skin test reactions. In contrast, CD4+ lymphocytes (32.6%) represented a significantly lower, and B cells (20%) and macrophages (27%) a significantly higher proportion of the cellular infiltrate in chronic lesions as compared to reactions in the corresponding skin test site (CD4+: 43.7%, B cells: 0.9%; macrophages: 17.5%). CD8+ T lymphocytes and macrophages were positively associated ( P=0.038) in the Montenegro skin test of asymptomatically infected individuals whereas CD8+ and CD4+ T cells were positively associated in the Montenegro skin test of chronic patients ( P=0.002). Notably, B cells were markedly more frequent in chronic lesions (20%) than in acute lesions (5.3%) ( P=0.002). Conclusion. The Montenegro skin test distinguished the cellular immune response to Leishmania in asymptomatic infection and chronic disease and may provide a surrogate of the early response to infection.

Introducción. La reacción a la prueba cutánea de Montenegro (a leishmanina) y la lesión de leishmaniasis comparten características fundamentales de la reacción de hipersensibilidad de tipo retardado. Objetivos. Determinar si la respuesta cutánea a leishmanina se aproxima y podría modelar la respuesta inflamatoria e inmune temprana a la infección por Leishmania. Materiales y métodos. Este estudio comparó la respuesta inflamatoria de biopsias de lesiones agudas (tiempo de evolución £1 mes) y lesiones crónicas (tiempo de evolución ³6 meses) con su respectiva reacción a la prueba cutánea de Montenegro, y con la reacción a la prueba de Montenegro de individuos infectados asintomáticos. Resultados. La proporción de linfocitos T CD4+ y CD8+, células fagocíticas mononucleares y granulocitos fue similar entre lesiones agudas y sus reacciones a la prueba cutánea a leishmanina. En contraste, los linfocitos CD4+ (32,6%) representaron una proporción significativamente mas baja, y los linfocitos B (20%) y macrófagos (27%) una proporción significativamente más alta del infiltrado celular en lesiones crónicas que en sus correspondientes reacciones a la prueba cutánea de Montenegro (CD4+: 43,7%, linfocitos B: 0.9%; macrófagos: 17,5%). Se encontró una asociación positiva entre linfocitos T CD8+ y macrófagos ( P=0,038) en la reacción a la prueba cutánea de Montenegro de los individuos con infección asintomática, mientras que los linfocitos T CD8+ y CD4+ estuvieron asociados positivamente en las reacciones a la prueba cutánea de Montenegro de pacientes crónicos ( P=0,002). Adicionalmente, la proporción de linfocitos B en lesiones crónicas (20%) fue más alta que en lesiones agudas (5,3%) ( P=0,002). Conclusión. La reacción cutánea de Montenegro permitió diferenciar la respuesta celular inmune entre infección asintomática y enfermedad crónica, y simula la respuesta temprana a la infección.

**Photodynamic activity of aluminium (III) and zinc (II) phthalocyanines in Leishmania promastigotes**

Introduction. Photodynamic therapy is a two-step procedure, involving the use of photosensitizing agents followed by selective illumination of the target lesion with visible light. It produces highly reactive oxygen species and subsequent cellular damage. Objective. This study was designed to determine whether Leishmania chagasi and L. panamensis promastigotes were sensitive to photodynamic therapy in vitro. Material and methods. Leishmania promastigotes were treated with aluminium phthalocyanine chloride and zinc phthalocyanine photosensitizers before illumination with visible light at 670 nm. The parasite photoactivity was calculated by sigmoidal regression analysis. Results. Leishmania chagasi promastigotes were highly photosensitive to aluminium phthalocyanine chloride treatment with effective inhibitory dose50 (ED50) concentration values of 0.0033, 0.0083 and 0.0093 µM upon exposure to 10.0, 5.0, and 2.5 J/cm2 light intensities respectively. By contrast, the activity of aluminium phthalocyanine chloride on L. panamensis was significantly lower ( P<0.01) with ED50 values of 0.17, 0.25, 0.34 µM at the same light intensities. Zinc phthalocyanine activity was significantly ( P<0.01) less active than aluminium phthalocyanine chloride on both strains of these two species and no differences in zinc phthalocyanine activity were found between them. A dose-response phototoxic effect with both phthalocyanines was observed. Parasite inhibition was not observed after aluminium phthalocyanine chloride or zinc phthalocyanine treatment in the dark. The reference drugs hexadecylphosphocholine and amphotericin B were not photoactive. Conclusion. Treatment of Leishmania promastigotes with aluminium phthalocyanine chloride and zinc phthalocyanine followed by illumination with visible light at 670 nm inhibited in vitro growth of promastigotes of L. chagasi and L. panamensis. Photodynamic therapy against Leishmania could be a promising strategy for leishmaniasis treatment.

Introducción. La terapia fotodinámica es un procedimiento en dos pasos que usa un agente fotosensibilizador y luz visible produciendo radicales de oxígeno altamente reactivos originando daño celular. Objetivo. En este estudio se determinó la fotosusceptibilidad de promastigotes de dos cepas de las especies Leishmania chagasi y L. panamensis a la terapia fotodinámica in vitro. Materiales y métodos. Promastigotes de Leishmania fueron tratados con ftalocianina de aluminio clorada o ftalocianina de zinc antes de la irradiación con luz visible a 670 nm. La fotoactividad fue calculada por regresión sigmoidea. Resultados. Los promastigotes de L. chagasi fueron altamente fotosensibles al tratamiento con ftalocianina de aluminio clorada con valores de concentraciones inhibitorias50 de 0,0033, 0,0083 y 0,0093 µM utilizando una intensidad de luz de 10,0, 5,0 y 2,5 J/cm2 respectivamente. La actividad de la ftalocianina de aluminio clorada en promastigotes de la cepa de L. panamensis fue significativamente menor ( P<0,01) que en la cepa L. chagasi con valores de 50 ED50 de 0,17, 0,25, 0,34 µM respectivamente. El tratamiento con ftalocianina de zinc fue significativamente menos fotoactivo ( P<0,01) en ambas especies sin diferencia significativa en la actividad entre ellas. El efecto fototóxico inducido por las ftalocianinas fue dependiente de la dosis utilizada. No se presentó fototoxicidad en condiciones de oscuridad. Los medicamentos de referencia hexadecilfosfocolina y anfotericina B no fueron fotoactivos. Conclusión. El tratamiento de promastigotes de Leishmania con ftalocianinas seguido de la irradiación con luz visible a 670 nm inhibió el crecimiento in vitro de promastigotes de L. chagasi y L. panamensis. La terapia fotodinámica contra la Leishmania podría ser una estrategia promisoria en el tratamiento de leishmaniasis.

Effect of blood source on the survival and fecundity of the sandfly Lutzomyia ovallesi Ortiz (Diptera: Psychodidae), vector of Leishmania

Introduction. The reproductive potential of sandflies depends on various factors, one of which is the type of host available as blood source, which is important in determining their capacity to serve as vectors. Objective. The present study evaluated the effect of the animal blood source on various biological parameters of Lutzomyia ovallesi (Ortiz) under laboratory conditions. Materials and methods. Two-day-old females from a L. ovallesi colony were artificially fed to repletion using a chicken skin membrane with blood from seven different species of vertebrate hosts, horse, dog, cow, chicken, goat, pig and human. Life-span, time of oviposition, time for blood digestion, number of eggs laid, number of eggs retained and the total number of eggs were recorded. Results. The results show the influence of blood source on different biological parameters of L. ovallesi. The results showed that in L. ovallesi, chicken blood is the most quickly digested (3.34 days) and gives the longest time of oviposition (5.88 days), the greatest number of eggs retained (10.20 eggs per female) and the greatest fecundity (30.80 eggs per female) compared with the other sources of blood studied. The most satisfactory animal blood source was chicken followed, in descending order, by goat, cow, pig, human, dog and horse. Conclusions. The data showed that, in bio-ecological terms, the best blood source for L. ovallesi was chicken and the least satisfactory one was horse. These results contribute to the understanding of the factors that influence the rearing of the sand fly L. ovallesi under laboratory conditions, and of how dietary factors for adult sand flies affect their biological potential and could have important consequences on the transmission of Leishmania.

Introducción. El potencial reproductivo de los flebotominos depende de varios factores, uno de los cuales es el tipo de hospedador disponible como fuente sanguinea, este es importante en determinar su capacidad de servir como vectores. Objetivo. Se estudia el efecto de la fuente de alimentación sanguínea sobre varios parámetros biológicos de L. ovallesi en condiciones de laboratorio. Materiales y métodos. Se utilizaron hembras de dos días de edad de L. ovallesi de colonia, alimentadas artificialmente a repleción usando membrana de pollo, con sangre de siete hospedadores vertebrados, caballo, perro, vaca, gallina, chivo, cochino y humano. Se determinó el tiempo de vida, tiempo de oviposición, tiempo de digestión sanguínea, número de huevos puestos, número de huevos retenidos y número de huevos totales. Resultados. Los resultados muestran la influencia de la fuente sanguínea sobre diferentes parámetros biológicos de L. ovallesi estudiados. Los resultados demuestran que con la sangre de gallina se obtienen mayor tiempo de oviposición (5,88 días), digestión más rápida (3,34 días), mayor número de huevos retenidos (10,20 huevos por hembra) y mayor fecundidad (30,80 huevos por hembra) en comparación con los otros tipos de sangre. La sangre más satisfactoria fue la de gallina seguida, en orden descendente, por las de chivo, vaca, cochino, humano, perro y caballo. Conclusión. Los datos muestran que la sangre de gallina es la mejor fuente sanguínea en términos bio-ecológicos para L. ovallesi, y la sangre de caballo la menos adecuada. Los resultados contribuyen al entendimiento de los mecanismos que influyen en las condiciones de cría en el laboratorio del flebotomino L. ovallesi y también de cómo ciertos factores de la dieta en los adultos afectan el potencial biológico y que podrían tener importante consecuencias en la transmisión de Leishmania.

**Distribution of Leishmania infantum vector species in Colombia.**

Introducción. Debido a la importancia que tiene la vigilancia entomológica como principal medida de control en el manejo de la leishmaniasis visceral, es necesario contar con información actualizada acerca de la distribución y ecología de los insectos involucrados en la transmisión para optimizar las estrategias de prevención. Objetivo. Presentar la distribución actualizada geo-referenciada de L. longipalpis y L. evansi, vectores de los parásitos que causan leishmaniasis visceral en Colombia, teniendo en cuenta la asociación de los insectos con su hábitat. Materiales y métodos. Los registros de distribución se obtuvieron a partir de los ejemplares recolectados en Colombia desde 1967. La información obtenida se organizó en una base de datos a partir de la cual se tomaron las localidades que, posteriormente, fueron sometidas a análisis geográficos por medio de Arc View que se utilizaron para realizar los mapas de distribución. Resultados. Para L. longipalpis se obtuvieron 40 localidades todas distribuidas a lo largo del valle del río Magdalena: Alto (24), Medio (11) y Bajo (5) Magdalena. L. evansi fue registrado en 19 localidades también ubicadas en el mismo valle: cinco en el Magdalena Medio y 14 el Magdalena Bajo. Conclusiones. Ambas especies demostraron una consistente asociación con regiones clasificadas principalmente como bosque seco tropical según las zonas de vida de Holdridge lo que confirma el riesgo epidemiológico de leishmaniasis visceral en estas áreas.

Introduction. Since entomological surveillance is the main control strategy for visceral leishmaniasis, updated information on the distribution and ecology of involved vector species is necessary for planning preventive measures. Objective. To present the updated and geo-referenced distribution of L. longipalpis and L. evansi, vectors of visceral leishmaniasis in Colombia, considering their relationship with their habitat. Materials and methods. Distribution was estimated from records of the sand fly specimens collected since 1967.The information was organized in a database from which the localities were selected and geographically analyzed with Arc view in order to develop the distribution maps. Results. 40 localities were established for L. longipalpis along the upper (24), middle (11) and lower (5) Magdalena river valley . L. evansi was recorded in 19 localities of the middle (5) and lower (14) Magdalena valley. Conclusions. Both species showed consistent association with dry tropical forest ( sensu Holdridge 1967), confirming the epidemiological risk for visceral leishmaniasis in these areas.

Phlebotomine sandflies in the southeast of Lara state, Venezuela

Introducción. El reporte de 522 casos de leishmaniasis cutánea americana entre los años 1988 al 2002 en el estado Lara (específicamente al sureste donde hubo un repunte), motivó el estudio de los vectores implicados en la transmisión. Objetivos. Determinar la abundancia, diversidad y distribución de flebótomos durante un año en 11 poblaciones situadas entre los 600 y 1600 metros sobre el nivel del mar, relacionando su abundancia con elementos climáticos. Materiales y métodos. Para las capturas se utilizaron trampas CDC (18:00 a 06:00 horas) colocadas en zonas domésticas, peridomésticas y selváticas de casas donde hubo casos de leishmaniasis cutánea y se utilizó trampa Shannon en los alrededores de éstas, entre las 19:30 y las 22:50 horas. Resultados. Se identificaron 10.326 ejemplares (8.867 hembras y 1.459 machos) con una diversidad de 11 especies, siendo Lutzomyia youngi (Feliciangeli & Murillo 1987), la más abundante con un 96,54%, seguida de Lutzomyia ovallesi (Ortiz, 1952) con 2,9%, caracterizándose L. youngi por tener predilección por los ambientes peridomésticos y se apreció mayor actividad desde las 19:30 a las 20:30 horas (Shannon). La población de Las Maticas (1360 msnm) presentó la mayor abundancia, con un pico anual que coincidió con el final del verano, las primeras lluvias del invierno (régimen unimodal), la mayor temperatura media mensual del año (24°C) y la menor humedad mensual del año (70%). Conclusión. Esta información permite conocer la población, ambiente y época del año donde se incremente la probabilidad de transmisión de la enfermedad, por la abundancia de las especies vectoras.

Introduction. The report of 522 cases of American cutaneous leishmaniasis between the years 1988 to 2002 in Lara State (specifically in the southeast where there was an increase of cases) prompted the study of the vectors species involved in transmission. Objective. To determine the abundance, diversity and distribution of sandflies during one year in 11 populations located between 600 and 1600 meters above sea level and the relationship of their abundance to climatic elements. Materials and methods. CDC traps placed in domestic, peridomestic and woodland areas around houses where cases of cutaneous leishmaniasis had been reported were used for the captures (18:00 to 06:00 hours) and Shannon traps were used in the environs of these houses between 19:30 to 22:50 hours. Results: 10.326 specimens were identified (8.867 females and 1.459 males) with a diversity of 11 species, where Lutzomyia youngi (Feliciangeli & Murillo 1987), was the most abundant species (96.54%), followed by Lutzomyia ovallesi (Ortiz, 1952) with 2.9%. L. youngi showed predilection for peridomestic areas and presented greater activity from 19:30 to 20:30 hours (Shannon). The population of Las Maticas (1360 meters above sea level) presented the highest abundance with an annual peak which coincided with the end of the dry period and the first rains of the rainy period (unimodal regime), the highest monthly average temperature (24°C) and the lowest monthly humidity of the year (70%). Conclusion. This information allows us to know the population, climatic variables and time of the year when the probability of transmission of the disease increases due to the abundance of the vector species.

Presence of infected vectors of Leishmania (V.) panamensis within dwellings in two endemic foci in the foothill of the middle Magdalena valley, western Boyacá, Colombia

Introducción. En el departamento de Boyacá, los casos de leishmaniasis registrados de 1997 a 2003 muestran un aumento en la incidencia a partir del año 2000 que puede corresponder a una epidemia en el occidente del departamento. Además, la distribución de casos por sexo y edad sugiere transmisión domiciliar. Objetivo. Definir los vectores de leishmaniasis cutánea en los municipios de Otanche y Pauna , por su asociación con el domicilio y por su infección natural con la misma especie de Leishmania aislada de pacientes. Materiales y métodos. Se recolectaron ejemplares de Lutzomyia con trampas CDC en el intra y peridomicilio. La identificación del parásito se hizo, mediante PCR, a partir de muestras de pacientes y en grupos de hembras de las especies de Lutzomyia más abundantes. Además se confirmó la especie de parásito en muestras de pacientes por anticuerpos monoclonales. Resultados. En los dos municipios, L. trapidoi fue la especie antropofílica mas abundante en y alrededor de las viviendas. L. hartmanni y L. yuilli fueron también abundantes en Otanche; y, L. gomezi y L. panamensis en Pauna . Leishmania (V.) panamensis se identificó tanto en pacientes como en los flebótomos: L. yuilli, L. gomezi y L. panamensis. Conclusión. Nuestros resultados confirman la presencia de vectores de Leishmania panamensis infectados naturalmente, en las viviendas de los municipios de Otanche y Pauna del Occidente de Boyacá. L. trapidoi por ser la especie más abundante puede ser considerada como el vector principal. La evidencia de transmisión doméstica permite planear la aplicación de medidas de control vectorial a este nivel.

Introduction. Case records of leishmaniasis of the years 1997 to 2003 of the department of Boyaca showed that since the year 2000 the department experienced an unusual rise in the incidence of cutaneous leishmaniasis that might correspond to an epidemic outbreak in the western region of the department. Age and gender distribution of cases supported a domestic transmission. Objective. This research was designed to identify the vectors of cutaneous leishmaniasis in the municipalities of Otanche and Pauna through their presence in dwellings and their natural infection with the same species of Leishmania isolated from patients. Material and methods. Sampling of sand flies was done with CDC traps in and around dwellings. Samples from patients and pooled females of the most abundant species of Lutzomyia were used to identify the parasite by PCR. Monoclonal antibody typing was also used to confirm the identification of the parasite in samples from patients. Results. In both municipalities L. trapidoi was the most abundant anthropophilic species of Lutzomyia indoors and around dwellings. L. hartmanni and L. yuilli were also abundant in Otanche, and L. gomezi and L. panamensis in Pauna . Leishmania (V) panamensis was identified both in patients and in the sand flies: L.yuilli, L. gomezi and L. panamensis.. Conclusion. Our findings prove the presence of infected vectors of Leishmania panamensis within dwellings in the towns of Otanche and Pauna in Western Boyacá. Since L. trapidoi was the most abundant species, it may be considered as the principal vector of Leishmania (V.) panamensis. The evidence of transmission within human dwellings warrants vector control at least in this environment.

Lutzomyia longiflocosa as suspected vector of cutaneous leishmaniasis in a focus of cutaneous leishmaniasis on the sub-andean region of Tolima department, Colombia, and the knowledge on sandflies by the inhabitants

Introducción. Durante los años 2003 y 2004 se presentó en el área rural de los municipios de Chaparral y San Antonio, sobre la región subandina del departamento del Tolima, lo que parece ser la epidemia más grande (2.810 casos) de leishmaniasis cutánea en Colombia, con una incidencia máxima de 6.202 x 100.000 en el año 2004. Objetivo. El presente estudio se realizó con el objeto de aportar evidencias para incriminar al vector y establecer el conocimiento que los habitantes tienen de los flebótomos para aplicar esta información en el control vectorial. Materiales y métodos. Se muestrearon 46 viviendas con trampas de luz tipo CDC para identificar las especies de flebótomos, su abundancia y porcentajes de infestación intradomiciliar. Durante el día se revisaron las viviendas para determinar el comportamiento endofílico. Se aplicó una encuesta para determinar el conocimiento que la población tenía sobre el vector, su papel en la transmisión y los sitios y épocas de abundancia. Resultados. Tres especies antropofílicas con posible importancia epidemiológica fueron encontradas. L. longiflocosa fue la especie dominante en el 81,7% (192 / 235) de las capturas e infestó el mayor número de viviendas, 41,7%. Le siguieron L. columbiana y L. nuneztovari con abundancias relativas de 3,4% y 2,1%, respectivamente, e infestaciones de 13,0% y 6,5%, respectivamente. No se encontró comportamiento endofílico. Los habitantes entrevistados conocían al vector y su papel en la transmisión, señalando a la vivienda y al verano como el sitio y la época de mayor abundancia. Conclusiones. Por su notable dominancia y aparente endofagia, L. longiflocosa es el vector más probable de leishmaniasis en el intradomicilio. L. columbiana y L. nuneztovari podrían ser vectores secundarios en el extradomicilio. Las implicaciones de los resultados en el control vectorial son discutidas.

Introduction. Between 2003 and 2004 the largest epidemic of cutaneous leishmaniasis in Colombia (2,810 cases, with the highest incidence of 6,202 x 100,000 in 2004) occurred in the sub-Andean rural area of the municipalities of Chaparral and San Antonio in the department of Tolima. Objective. The present study was carried out to identify suspected vectors and to establish the knowledge that the inhabitants have about sand flies in order to use this information for vector control. Materials and methods. 46 houses were sampled with CDC light traps set up indoors to establish the sand fly species composition, abundance and the percentage of infestation. Houses were examined during daylight to identify endophily. A questionnaire was applied in order to estimate the knowledge about sand flies, their role in transmission and the sites and seasons of highest abundance. Results. Three anthropophilic sand fly species of possible epidemiological importance were found. L. longiflocosa was the dominant sand fly species accounting for 81.7% (192 / 235) of all catches and infested the highest number of houses (41.7%). The other two species were L. columbiana and L. nuneztovari, with relative abundances of 3.4% and 2.1%, respectively, and house infestations of 13.0% and 6.5%, respectively. There was no evidence of endophilic behavior. Inhabitants recognized sand flies and their role in transmission. They identified the houses and the dry season as the site and time period of highest sand fly abundance. Conclusions. Based on its high anthropophily, predominance and apparent endophagic behavior, L. longiflocosa is the most probable vector of leishmaniasis indoors. L. columbiana and L. nuneztovari could be involved as secondary vectors outdoors. The importance of these findings on sand fly control is discussed.

Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae) at a suburban focus of visceral leishmaniasis in the Chicamocha Canyon, Santander, Colombia.

Introducción. Entre los años 1998-2000 la aparición de 8 casos de leishmaniosis visceral americana en niños de un asentamiento humano de reciente establecimiento en la localidad de Guatiguará del municipio de Piedecuesta (Santander Colombia), señaló la posible presencia de un ciclo de transmisión de Leishmania en dicho lugar que motivó el presente estudio entomológico. Objetivos. Determinar frecuencia relativa en el intra y peridomicilio de Lutzomyia longipalpis y la infección natural de este vector con Leishmania spp. Materiales y métodos. Se utilizaron para el muestreo trampas CDC intra y peridomiciliares, capturas sobre cebo humano, cebo animal y en sitios de reposo, en el periodo de mayo de 1999 a septiembre del 2000. La infección natural se determinó mediante la técnica de PCR, en pooles de hembras de Lutzomyia longipalpis. Resultados. Se capturaron 7.391 flebótomos. La especie predominante fue Lutzomyia longipalpis (Lutz & Neiva), con un 99,5% de las capturas. En las recolecciones con trampas de luz CDC, L. longipalpis tuvo una mayor frecuencia en el intradomicilio que en el peridomicilio (p=0,0001). La tasa total de infección natural fue del 1,93% y se observó una correlación positiva entre los meses de mayor abundancia y el número de hembras infectadas que ingresan al domicilio. Conclusiones. Los resultados indican que en la localidad de Guatiguará Lutzomyia longipalpis, presenta tendencias marcadas hacia el intradomicilio, lo cual tiene serias implicaciones en la transmisión por cuanto el riesgo de transmisión se ve aumentado durante los meses de mayor abundancia por el ingreso de un mayor número de hembras infectadas. Desde el punto de vista de control este comportamiento permite diseñar estrategias que disminuyan la transmisión del parásito en el interior del domicilio.

Introduction. Between 1998 and 2000, the occurrence of 8 cases of American visceral leishmaniasis in children from a recently established human settlement in Guatiguará, in the municipality of Piedecuesta (Santander, Colombia) indicated the possible presence of Leishmania transmission in this locality. This observation motivated the current entomological investigation. Objectives. To determine the relative frequency of Lutzomyia longipalpis inside houses and outdoors, and the natural infection of this vector with Leishmania spp. Materials and methods. CDC light traps were used for sampling inside houses and outdoors, and sand flies were collected on human volunteers and domestic animals, and in resting places, during the period from May 1999 through September 2000. Natural infection was determined by PCR, in pools of female Lutzomyia longipalpis. Results: A total of 7,391 phlebotomine sand flies were collected. The predominant species was Lutzomyia longipalpis (Lutz & Neiva), representing 99.5% of captures. In the sand flies collected with CDC light traps, L. longipalpis was more frequently collected indoors than outdoors ( p=0.0001). The total rate of natural infection was 1.93% and a positive correlation was observed between months with higher abundance and the number of infected females entering human dwellings. Conclusions: The results indicate that in Guatiguará Lutzomyia longipalpis, shows marked tendency for the indoors, which has important implications for leishmaniasis transmission. Furthermore, transmission risk is increased during the months of higher abundance due to the entry of a higher number of infected females. From the standpoint of control, this behaviour permits the design of strategies to reduce indoor transmission.

Seroprevalence of canine visceral leishmaniasis in sector 8 of Neiva and in four municipalities of Huila, Colombia

Introducción. La leishmaniosis visceral canina en áreas endémicas de Colombia se constituye en un factor de riesgo para la salud pública, dado el carácter zoonótico de la enfermedad. Durante el año 2004 se registraron 96 casos de leishmaniosis visceral humana en el país, de los cuales cinco correspondieron al departamento del Huila, zona de influencia del vector Lutzomyia longipalpis. Objetivo. Determinar la prevalencia de anticuerpos IgG contra Leishmania chagasi en sueros de caninos recolectados en los municipios de Rivera, Palermo, Villavieja, Algeciras y la comuna 8 de la ciudad de Neiva, Huila, Colombia. Materiales y métodos. Se realizó una encuesta epidemiológica a los propietarios de 610 caninos y previo consentimiento se llevó a cabo examen clínico general y recolección de muestra de sangre de cada una de las mascotas. Los sueros fueron analizados mediante el test de ELISA empleando como antígeno promastigotes de Leishmania chagasi, de la cepa MHOM/CO/84/CL044B. El análisis de datos empleó estadística descriptiva. Resultados. En la población canina 85% fueron mestizos, la edad promedio fue 2,5 años y 67,3% de los animales fueron machos. Al examen clínico las manifestaciones más frecuentes fueron: onicogrifosis 24,3%, linfadenitis 10% y lesiones cutáneas 5%. La frecuencia de anticuerpos IgG contra Leishmania chagasi en la comuna 8 de la ciudad de Neiva fue 28,1%, en Villavieja 28%, en Rivera 14,9%, en Palermo 10% y en Algeciras 5,1%. Adicionalmente, se observó un promedio de cinco personas convivientes por canino seropositivo. Conclusiones. Estos datos demuestran la exposición de los caninos que habitan los ambientes rurales y urbanos de las zonas en estudio a Leishmania chagasi y deben tenerse en cuenta para el fortalecimiento de los programas de control y prevención de esta zoonosis en el Sistema General de Seguridad Social en Salud.

Introduction. Canine visceral leishmaniasis in endemic areas of Colombia could be a public health risk factor given the zoonotic nature of the disease. Ninety-six human cases of visceral leishmaniasis were reported in Colombia in 2004, 5 of them in Huila, where Lutzomyia longipalpis has been incriminated as the main vector species. Objective. To determine the prevalence of IgG antibodies against Leishmania chagasi in dogs from the sector 8 of the city of Neiva and the from the towns of Villavieja, Algeciras, Palermo and Rivera located in Huila, Colombia. Materials and methods. An epidemiological survey was carried out in 610 dogs, which included clinical examination and venopuncture for obtaining blood samples. Authorization was obtained from the dog owners. The sera were analyzed by the ELISA test with promastigotes of the L. chagasi strain MHOM/CO84/CL044B as antigen. Results. The canine population had an average age of 2.5 years; 67.3% of the dogs were males and the cross-bred animals were the most prevalent constituting 85% of those samples. On clinical examination the main signs were onicogriphosis 24.3%, lymphadenitis 10% and skin lesions 5%. The presence of antibodies was observed in 28.1% of the dogs from sector 8 of Neiva, 28% in Villavieja, 14.9% in Rivera, 10% in Palermo and 5.1% in Algeciras. An average ratio of five people cohabitating per seropositive dog was observed. Conclusions. The results reflect the exposure to Leishmania chagasi infection of dogs living in both urban and rural environments in the studied zones, and should encourage health authorities to carry out control measures to prevent the spread of this zoonotic disease.

Leishmania panamensis transmission in the domestic environment: the results of a prospective epidemiological survey in Santander, Colombia

Introduction. Domestic transmission now appears to be the principal route of Leishmania panamensis infection in deforested regions characterized by the replacement of primary forest by permanent plantations, i,e coffee or cacao crops. This paper presents the results of the disease patterns in a representative population of the Opón focus, in Santander, Colombia. Objective. The principal aims were: 1) to measure the incidence rate in a representative population of the Opón focus; 2) to identify demographic risk factors for infection; 3) to estimate the proportion of infections which cause disease; 4) to estimate the protection against disease from acquired immunity; 5) to estimate the frequency of reactivations, and 6) to estimate the risk of mucosal leishmaniasis. Material and methods. A 19 month prospective survey of leishmaniasis caused by Leishmania panamensis was carried out amongst 1380 people in a cacao growing region of Santander Department, Colombia. The population was diagnosed clinically and by the Montenegro skin test (at two time points). Results: The incidence rate was 0.19 infections/person-year, with 31% of infections apparently subclinical. The risk of acquiring cutaneous leishmaniasis decreased with age even in the absence of apparent previous infections. Protective immunity followed both clinical and subclinical infections, persisting for at least 10 years after a primary lesion. Mucocutaneous leishmaniasis was detected in 12% of the population with cutaneous lesions, of which 77% had mild symptoms, and 23% perforated nasal septa. The risk of mucosal leishmaniasis was greatest for males, and for people whose primary cutaneous lesion was on the head. Conclusion. The average age of infection in Opón, 7.7 years (1/lambda), and the absence of gender as a risk factor is highly indicative of intradomiciliary or peridomiciliary transmission.

Introducción. La transmisión doméstica de Leishmania panamensis parece ser la fuente de infección mas frecuente en regiones deforestadas, caracterizadas por el reemplazo del bosque primario por plantaciones permanentes como cacao y café. Este papel presenta los resultados de los patrones de enfermedad en una población representativa del foco del Opón, en Santander, Colombia. Objetivo. Los objetivos principales fueron: 1) cuantificar la tasa de incidencia en una población representativa de la población del foco del Opón; 2) identificar los factores de riesgo demográficos para la infección; 3) estimar la proporción de infecciones que causan enfermedad; 4) estimar la protección contra la enfermedad según la inmunidad adquirida; 5) estimar la frecuencia de reactivaciones, y 6) estimar el riesgo de leishmaniasis mucosa. Materiales y métodos: Se llevó a cabo un estudio prospectivo de leishmaniasis causada por Leishmania panamensis durante 19 meses, entre 1.380 personas habitantes de una región cacaotera del departamento de Santander, Colombia. La población fue diagnosticada por clínica y por la prueba de Montenegro (en dos tiempos). Resultados: La tasa de incidencia fue de 0,19 infecciones/persona-año, 31% de los cuales tuvieron una infección aparentemente subclínica. El riesgo de adquirir leishmaniasis cutánea decrece con la edad aún en ausencia de infecciones previas aparentes. Una inmunidad protectiva subsiguió a las infecciones clínicas y subclínicas, persistiendo por lo menos durante 10 años posterior a una infección primaria. La leishmaniasis mucocutánea se detectó en 12% de la población con lesiones cutáneas, de las cuales 77% tuvieron síntomas no severos, y 23% perforación del tabique nasal. El riesgo de leishmaniasis mucosa fue más grande para hombres y para personas cuyas lesiones primarias se localizaron en la cabeza. Conclusión. El promedio de edad de infección en el Opón, 7,7 años (1/lambda), y la ausencia de factores de riesgo relacionados con el género indican que la transmisión es intra o peri domiciliaria.

**Geographic distribution of Leishmania species isolated from patients at the National Institute of Dermatology Federico Lleras Acosta E.S.E., 1995-2005**

Introducción. El mapa de la distribución de especies de Leishmania en Colombia no se ha actualizado desde hace siete años. Objetivo. Describir la distribución de las especies de Leishmania a partir de los aislamientos de pacientes consultantes al Instituto Nacional de Dermatología durante el período 1995 a 2005 Materiales y métodos. Se realizó un estudio descriptivo de distribución geográfica de las especies de Leishmania, a partir de los aislamientos obtenidos de 137 pacientes consultantes al Instituto Nacional de Dermatología Federico Lleras Acosta E. S. E, con diagnóstico confirmado de leishmaniasis. Se revisó la historia clínica obteniendo la información de forma clínica, sitio probable de infección, edad y género. Se tomaron y cultivaron muestras de las lesiones y los aislamientos se tipificaron por anticuerpos monoclonales, comparando el 10% de los resultados con los obtenidos por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y patrones isoenzimáticos. Resultados. La frecuencia encontrada de los 137 aislamientos fue: Leishmania panamensis 74,45%; Leishmania braziliensis 15,33%; Leishmania guyanensis 0,73%; Complejo Leishmania mexicana 3,65%, Leishmania mexicana 5,11% y el 0,73% restante correspondió a un aislamiento que no se pudo caracterizar por anticuerpos monoclonales. La distribución de L. braziliensis, L. panamensis y L. guyanensis fue concordante con lo reportado en estudios anteriores pero para las especies del complejo L. mexicana se encontraron procedencias no reportadas previamente: Caldas, Santander, Cundinamarca, Caquetá, Casanare, Cauca y Valle del Cauca. Conclusión. El complejo L. mexicana presenta una distribución más amplia de la reportada previamente. La utilidad de los monoclonales especie-específicos, los patrones isoenzimáticos y la PCR para L. mexicana y L. amazonensis fue limitada.

Introduction. The Colombian distribution map of Leishmania species has not been updated since seven years ago. Objective. To describe the distribution of Leishmania species isolated from patients attended at the National Institute of Dermatology during the period 1995 to 2005. Materials and methods. A descriptive study of the geographic distribution of Leishmania species was made from 137 isolates obtained from patients consulting the National Institute of Dermatology "Federico Lleras Acosta E.S.E", with confirmed diagnosis of leishmaniasis. The clinical history was reviewed to obtain information on the clinical presentation, most probable place of infection, age and gender. Samples were taken and cultured and the isolates were typed by monoclonal antibodies, comparing 10% of the results with those obtained by PCR and isoenzymatic patterns. Results. L. panamensis accounted for 74.45% of the 137 isolates studied, L. braziliensis for 15.33%, L. guyanensis for 0.73%; L. mexicana complex for 3.65%, L. mexicana 5.11% and the remaining 0.73% corresponded to an isolate which could not be characterized by monoclonal antibodies. The distribution of L. braziliensis, L. panamensis and L. guyanensis was similar to that reported in previous studies but species of the L. mexicana complex, were found in patients from the departments of Caldas, Santander, Cundinamarca, Caquetá, Casanare, Cauca and Valle del Cauca, where they had not been previously reported. Conclusion. Species of the L. mexicana complex display a wider distribution than previously reported. The usefulness of species-specific monoclonal antibodies, isoenzymatic patterns, and PCR for identification of L. mexicana and L. amazonensis was limited.

A multifaceted intervention to prevent American cutaneous leishmaniasis in Colombia: results of a group-randomized trial

Introduction. American cutaneous leishmaniasis is endemic in Colombia, where approximately 6.000 new cases are reported every year. Current prevention and control measures are restricted to the diagnosis and treatment of cases. Objective. To evaluate the efficacy of a multifaceted intervention to prevent the transmission of Leishmania in the endemic focus of Tumaco, on the Pacific Coast of Colombia. Materials and methods. A group-randomized trial was conducted. Twenty villages were matched according to prevalence of Leishmania infection, number of inhabitants and level of community participation, and then randomly assigned to intervention or control. The intervention included deltamethrin-impregnated bednets, repellent (20% diethyltoluamide and 0.5% permethrin), modification of sand fly resting sites, and health education. Villages were under surveillance for one year and the use of the intervention measures monitored. The incidence of American cutaneous leishmaniasis and Leishmania infection in the two groups were compared, adherence to the intervention and adverse events were monitored, and the results were adjusted for village intraclass correlation. Results. Ten cases of American cutaneous leishmaniasis were confirmed in the intervention and 23 in the control group, OR = 0.42, 95% CI 0.14-1.26. The intervention had a greater effect in children < 10 years old, in people living on the periphery of the village and in villages with a prevalence of infection in small children > 1%. Adverse events associated with the use of the bednets and the repellent were reported in 2% of the participants and were always mild. Conclusion. Incident cases of American cutaneous leishmaniasis were reduced by 58% in the intervention group. However, the small number of cases renders the effect estimate imprecise and precludes us to claim a protective effect for the intervention. Specific populations could be the targets of simpler and more cost-effective interventions in the future.

Introducción. La leishmaniasis cutánea americana es endémica en Colombia, donde cada año son notificados aproximadamente 6000 casos nuevos. En la actualidad las medidas de prevención y control están limitadas al diagnóstico y tratamiento de los casos. Objetivo. Evaluar la eficacia de una intervención múltiple para prevenir la transmisión de Leishmania en el foco endémico de Tumaco, costa Pacífica de Colombia. Materiales y métodos. Se realizó un ensayo de grupos aleatorizados. Veinte veredas fueron pareadas según prevalencia de Leishmania, habitantes y participación comunitaria y luego asignadas aleatoriamente a intervención o control. La intervención incluyó toldillos impregnados con deltametrina, repelente (N, N-dietil-m-toluamida 20% y Permetrina 0,5%), modificación de lugares de reposo para los vectores y educación. Al cabo de un año se comparó la incidencia de infección y enfermedad producida por Leishmania en los dos grupos, se monitorearon la adherencia a la intervención y la aparición de efectos adversos. Los resultados finales fueron ajustados por el efecto de correlación intra-grupo. Resultados. Se presentaron 10 casos de leishmaniasis cutánea americana en el grupo que recibió la intervención y 23 en el grupo control, OR=0,42, IC95% 0,14-1,26. La intervención tuvo un mayor efecto en los niños menores de 10 años, en aquellos que residían en la periferia de la vereda y en veredas con una prevalencia de infección en niños pequeños mayor del 1%. Se reportaron eventos adversos leves asociados con el uso de los toldillos impregnados y el repelente en 2% de los participantes. Conclusión. Los casos nuevos de Leishmaniasis cutánea americana se redujeron en un 58% en el grupo que recibió la intervención. Sin embargo, el número pequeño de casos hace que la estimación de la medida de efecto sea imprecisa y no nos permite afirmar que la intervención tiene un efecto protector. Poblaciones específicas podrían ser el blanco de futuras intervenciones más simples y costo-efectivas.

Effect of knowledge and economic status on sandfly control activities by householders at risk of cutaneous leishmaniasis in the subandean region of Huila department, Colombia

Introduction. Householder vector control measures can be encouraged by health promotion campaigns which take into account peoples attitudes and focus on key gaps in knowledge. Objectives. To describe household sandfly control practices in an endemic area of cutaneous leishmaniasis in the department of Huila, Colombia, and determine how these are influenced by attitudes, knowledge and socioeconomic status. Materials and methods. A household questionnaire was applied to collect information on: demography, socioeconomic status, knowledge of cutaneous leishmaniasis and of sandflies and their role in transmission, and the control activities practiced. Indoor sandfly abundance was estimated by light trap collections. Results. Amongst 249 interviewees, 86% knew about cutaneous leishmaniasis and 98% sand flies. 35% of interviewees who knew about cutaneous leishmaniasis practiced measures with the purpose of its control. This practice was higher amongst the 32% who knew that sand flies transmit cutaneous leishmaniasis. However, 82% of interviewees practiced sand fly control measures, and these were significantly associated with high sand fly abundance. Measures included smoke, bednets, and house spraying with insecticide or non-insecticidal substances. Householders using the high cost measures (bednets and insecticide) had the highest economic status. Conclusions. Health education programmes should note that sand fly nuisance can initiate control measures, but that knowledge of the role of sand flies in transmission could enhance activities. The socioeconomic findings indicate that targeted bednet subsidies could reduce inequities in health status amongst cutaneous leishmaniasis endemic communities.

Introducción. Las medidas de control vectorial en el ámbito familiar pueden ser estimuladas por campañas de promoción en salud que tengan en cuenta los conocimientos y actitudes de la población con énfasis en vacíos claves en el conocimiento. Objetivos. Describir las prácticas de control para flebótomos realizadas por las familias en un área endémica de leishmaniasis cutánea en el departamento del Huila, Colombia, y determinar cómo estas prácticas son influenciadas por las actitudes, conocimientos y el estatus socioeconómico. Materiales y métodos. Se aplicó un cuestionario a nivel familiar para recolectar información sobre: demografía, estatus socioeconómico, conocimientos sobre leishmaniasis cutánea y sobre los flebótomos y su papel en la transmisión, y la práctica de actividades de control. La abundancia intradomiciliar de flebótomos fue estimada con trampas de luz. Resultados. De 249 entrevistados, 86% conocían la leishmaniasis cutánea y 98% los flebótomos. 35% de los entrevistados que conocían la leishmaniasis cutánea practicaron medidas para su control. Estas prácticas fueron mayores, 32%, en las familias que conocían que los flebótomos transmiten la LC. Sin embargo, 82% de los entrevistados practicaron medidas de control para los flebótomos, y estas prácticas estuvieron significativamente asociadas con altas abundancias de flebótomos. Las medidas de control practicadas incluyeron humazo, toldillos, fumigación intradomiciliar con insecticidas o con sustancias no insecticidas. Las familias que usaron medidas de costo alto (toldillos e insecticidas) tenían el estatus económico más alto. Conclusiones. Los programas de educación en salud deben considerar que la molestia sanitaria causada por los flebótomos puede iniciar la práctica de medidas de control y que el conocimiento del papel de los flebótomos en la transmisión puede aumentar estas actividades. Los resultados con relación al estatus socioeconómico indican que subsidios para adquirir toldillos pueden reducir desigualdades en salud en comunidades en donde la leishmaniasis cutánea es endémica.

Efficacy of a kaurenic acid extracted from the Venezuelan plant Wedelia trilobata (Asteracea) against Leishmania (Viannia) braziliensis

Introducción. La leishmaniasis es un grave problema de salud pública y aun no existe un tratamiento eficaz para la enfermedad. Por esta razón, es necesario investigar nuevas alternativas terapéuticas. Objetivo. En este trabajo nos propusimos evaluar el efecto parasiticida de un ácido kaurénico (ent-kaur-16-in-19-oico) aislado de la planta superior venezolana denominada Wedelia trilobata (Asteracea) sobre Leishmania (V.) braziliensis in vivo e in vitro. Materiales y métodos. Los estudios in vitro fueron realizados en amastigotes axénicos, promastigotes así como en macrófagos infectados y no infectados, los cuales fueron tratados con dosis entre 25-100 µg/ml del ácido kaurénico. El efecto del compuesto sobre la viabilidad celular fue evaluado utilizando el método de conteo directo en una cámara de Neubauer o hemocitómetro y por el método indirecto utilizando el método de MTT (Metil Tiazol Tetrazolium). Para el ensayo in vivo, se utilizaron ratones Balb/c infectados subcutáneamente en la almohadilla plantar con 1x106 promastigotes de Leishmania (V.) braziliensis; posteriormente los ratones fueron tratados intraperitonealmente durante una semana con 30 mg del ácido kaurénico por kg de peso, en un volumen de 100 µl de etanol al 10%. Resultados. Este compuesto mostró un potente efecto parasiticida tanto sobre los amastigotes axénicos como sobre promastigotes con dosis letales 50 (DL50) de 0,25 y 0,78 µg/ml respectivamente, en 24 horas. Se observó una baja toxicidad del compuesto sobre macrófagos de la línea J774G8, con una DL50 de 25µg/ml, manteniéndose una alta viabilidad (70-92%) de los mismos, y una moderada viabilidad para los macrófagos infectados (37-81%) con concentraciones menores de 25µg/ml. Adicionalmente, se observó una clara reducción (70%) en el tamaño de las lesiones de los ratones tratados sin efectos tóxicos aparentes. Conclusión. Los resultados obtenidos indican que este compuesto posee un potente efecto leishmanicida sobre Leishmania (Viannia) braziliensis.

Introduction. Leishmaniasis is a global public health problem without adequate treatment options, hence requiring research on new drug development. Objective. Our main objective was the evaluation of a kaurenic acid (ent-kaur-16-in-19-oico), isolated from the Venezuelan plant Wedelia trilobata (Asteracea), on Leishmania (V) braziliensis both in vivo and in vitro. Materials and methods. The in vitro assay was performed using axenic amastigotes and promastigotes as well as infected and uninfected macrophages. Parasites and macrophages were treated with concentrations of the compound varying between 10 and 250 µg/ml. The effect of the compound on cellular viability was evaluated by counting dead and living cells in a hemocytometer and by the colorimetric method using MTT (Methylthiazoletetrazolium). For the in vivo assay, Balb/c mice were infected subcutaneously with 1x106 promastigotes of L.(V.) braziliensis and afterwards treated with a daily dose of 30 mg/kg in 100 µl of kaurenic acid administered by intraperitoneal injection for one week. Results. The compound had a lethal effect on axenic amastigotes and promastigotes with DL50 of 0.25 and 0.78 µg/ml, respectively, in 24 hours. Low toxicity was observed for J774-G8 macrophages with a DL50 of 25 µg/ml and high viability (70-92%), while a moderate viability was observed for infected macrophages (37-81%), with concentrations of 25 µg/ml or less. Additionally, a 70% reduction was observed in the size of the skin lesions in Balb/c mice with no evident toxic effect. Conclusion. The results indicate that this compound has a potent leishmanicidal effect on L.(V.) braziliensis.

**Efficacy and tolerance of pentamidine for treatment of cutaneous leishmaniasis caused by por L. (V) panamensis in Colombia**

Introducción. El tratamiento de elección de la leishmaniasis cutánea es el antimonio pentavalente con una eficacia cercana al 85%; sin embargo, debido a los serios efectos adversos y a la aparición cada vez más frecuente de resistencia al tratamiento, se hace necesaria la búsqueda de alternativas terapéuticas. Objetivo. Evaluar la eficacia terapéutica y la tolerancia del isotianato de pentamidina con un ensayo clínico piloto con pacientes con leishmaniasis cutánea producida por L. (V) panamensis en Colombia. Materiales y métodos. Se incluyeron en el estudio 63 pacientes los cuales fueron tratados por vía intramuscular con 4 mg de isotianato de pentamidina/kg de peso/ interdiario por cuatro dosis, con seguimiento clínico por seis meses. Resultados. De los 63 paciente incluidos, 43 fueron evaluados durante los seis meses del estudio y de estos 37 (86%) presentaron curación de todas sus lesiones mes y medio después de terminar el tratamiento. Cinco pacientes (11,6%) fallaron al tratamiento por no cicatrización de las lesiones y uno presentó recaída. En general el tratamiento fue bien tolerado; los efectos adversos principales fueron dolor y edema en el sitio de aplicación, mareo y fiebre, de intensidad leve a moderada. No se presentaron hipoglucemia, hipotensión ni diabetes. Discusión. Los resultados del presente estudio validan los hallazgos de eficacia de la pentamidina para el tratamiento de la leishmaniasis cutánea en Colombia y en Brasil. Se destaca una baja frecuencia e intensidad de los efectos colaterales en la población civil donde no se encontró ningún paciente con efectos secundarios serios.

Introduction. Current treatment for human cutaneous leishmaniasis (CL) relies on pentavalent antimonials. Although efficacy of these drugs is high (around 85%), their widely documented toxicity and increasing resistance makes the search for therapeutic alternatives a priority for endemic countries. Objective. To evaluate the efficacy and tolerability of the pentamidine isethionate for the treatment of cutaneous leishmaniasis caused by L. (V) panamensis in a pilot clinical trial. Materials and methods. Sixty three individuals suffering CL were enrolled. Patients received four intramuscular injections of pentamidine (4 mg/Kg/injection) administered every other day, and both clinical efficacy and side effects were documented during the following 6 months. Results. Of the 63 patients enrolled, 43 could be followed for 6 months. 86% (37/43) of treated patients healed all their lesions by 1.5 months after therapy. Treatment failure was observed in only five patients (11.6%; 5/43). One patient showed relapse. Overall tolerance of treatment was good, with adverse events such as local pain and swelling at the site of injection, dizziness and fever, varying from mild to moderate. Hypoglycemia, hypotension or diabetes were not observed. Discussion. These results confirm the previously reported efficacy of pentamidine for the treatment of CL in Colombia and Brazil, and, additionally, highlight the low intensity and frequency of side effects in a civilian population. No serious adverse events were recorded.

Current situation and future of antileihmanial therapy in Colombia

Los antimoniales pentavalentes son la primera elección para el tratamiento de la leishmaniasis en Colombia pero la dosis ha tenido que incrementarse en mas de 600% para mantener su eficacia que en distintos reportes varía entre 93 y 25%, lo cual puede reflejar diferencias en la sensibilidad de los parásitos pero más probablemente incumplimiento de los esquemas recomendados. Los resultados de su empleo, así como la situación actual de pentamidina, anfotericina B y miltefosina son revisados y se hace una proyección sobre el desarrollo de la terapia en los próximos años. Para definir el real estado de la respuesta a los medicamentos anti-leishmaniásicos y prolongarles su vida útil, es indispensable establecer mecanismos de vigilancia de los factores implicados en el manejo de la enfermedad por lo que se plantea una estrategia de sitios centinela que permitan observaciones puntuales en el tiempo, en áreas específicas y sobre situaciones particulares.

Pentavalent antimonials are the first choice to treat leishmaniasis in Colombia. However, a 600% increase in the total dose has been necessary in order to maintain their efficacy. Cure rates varying between 93 and 25% can reflect differences in parasite susceptibility, but are more likely secondary to deficiencies in compliance with treatment guidelines. We review the current situation of efficacy and use of pentavalent antimony compounds, amphotericin B, pentamidine and miltefosine and attempt a projection for the next following years. To determine the real situation of response to antileishmanial drugs and to extend their useful life, the establishment of surveillance mechanisms to cover all factors involved is necessary. A sentinel site surveillance strategy to allow punctual observations in time, in specific geographical areas and in particular local situations, is proposed.

Oral miltefosine to treat leishmaniasis

La pérdida de la eficacia, las dificultades para su administración y el incremento en la frecuencia y la severidad de los efectos secundarios de las sales de antimonio pentavalente han forzado la búsqueda de un medicamento que pueda remplazarlas en el tratamiento de la leishmaniasis. Los estudios adelantados con medicamentos inyectables, orales y tópicos han arrojado resultados inconsistentes y de poca utilidad en el Nuevo Mundo. Desde 1998 la hexadecilfosfocolina (miltefosina) viene siendo utilizada con éxito en India en enfermos con leishmaniasis visceral y en 1999 se iniciaron los estudios clínicos en Colombia en pacientes con leishmaniasis cutánea. A la fecha se han tratado mas de 2.500 pacientes en India (leishmaniasis visceral por L. donovani ) y Colombia (leishmaniasis cutánea por L. panamensis) y se han logrado tasas de curación superiores a 91% a la dosis recomendada de 2,5 mg / kg peso / día durante 28 días continuos, sin que haya diferencia en la respuesta entre pacientes nuevos y los que presentan fallas o recaídas después de recibir antimoniales. En Guatemala la respuesta fue de 53% ( 33% para L. braziliensis, 60% para L. mexicana) mientras que la de L. tropica en Afganistán fue de 63%. Pacientes con leishmaniasis cutánea difusa, leishmaniasis mucosa y con co-infección por HIV+, han tenido una buena respuesta inicial pero debe recordarse la tendencia a recaer que tienen estos pacientes. Entre el 35% al 60% de los pacientes presentan reacciones adversas gastrointestinales leves y 10% al 20% hacen elevación leve de transaminasas y creatinina. Miltefosina, medicamento originalmente antineoplásico que posee una potente actividad leishmanicida al interferir con vías metabólicas e inducir apoptosis, ha demostrado su eficacia en casos de leishmaniasis cutánea por L. panamensis y de leishmaniasis visceral por L. donovani; miltefosina debe ahora demostrar su eficacia contra otras especies asociadas con las diversas formas clínicas de leishmaniasis.

Reduced efficacy, difficulties of administration and increasing frequency and severity of adverse events of pentavalent antimony have stimulated the quest for new anti-leishmanial drugs. Several clinical studies in Latin America testing injectable, oral and topical anti-leishmanial drugs have yielded inconsistent results. Since 1998 Indian researchers have conducted clinical trials evaluating hexadecylphosphocoline (miltefosine) in patients with visceral leishmaniasis and in 1999 clinical studies were initiated in Colombia in patients with cutaneous leishmaniasis. Up to date, more than 2.500 patients have been treated with miltefosine in India (visceral by L. donovani) and Colombia (cutaneous caused by L. panamensis) obtaining cure rates over 91% when a dose of 2.5 mg / kg / day during 28 days was used, with no difference between naïve and relapsing patients. In Guatemala the overall cure rate for patients with cutaneous leishmaniasis was 53% (33% for L. braziliensis; 60% for L. mexicana) while in Afghanistan the cure rate of patients with L. tropica was 63%. Patients with diffuse cutaneous leishmaniasis, mucosal disease and co-infected with HIV have been treated with initial success; however these diseases have frequent relapses. Mild gastrointestinal events (i.e. nausea, vomiting and diarrhoea) were present in 35 to 60% of patients included in clinical trials and 10 to 20% had a mild increase in transaminases and creatinine levels. Miltefosine, originally an antineoplastic drug, has a potent leishmanicidal activity as consequence of its interference in parasite metabolic pathways and the induction of apoptosis, has demonstrated efficacy against L. donovani visceral disease and L. panamensis cutaneous disease. Now, miltefosine must demonstrate its efficacy against other species associated with diverse clinical presentations.

Especies de género Lutzomyia (Psychodidae, Phlebotominae) en áreas de transmisión de leishmaniasis tegumentaria y visceral en el departamento de Santander, en la cordillera oriental de los Andes colombianos

Introducción. Los flebótomos desde el punto de vista de salud pública son especialmente conocidos como los únicos insectos vectores de las leishmaniasis y demuestran una interesante biodiversidad en algunas zonas como la cordillera de los Andes en Suramérica. Este estudio presenta las especies de flebótomos organizadas por municipios y zonas endémicas que pueden encontrarse en el departamento de Santander, ubicado sobre la cordillera oriental andina en Colombia. Objetivo. Presentar una actualización del inventario de las especies del género Lutzomyia en el departamento de Santander, señalar la distribución y discutir algunos aspectos de la ecología de las especies de mayor importancia en salud pública. Materiales y métodos. Durante 1998 a 2001 en 12 municipios se realizaron capturas de flebótomos utilizando trampas de luz tipo CDC miniatura, entre las 19:00-6:00 horas, también capturas con cebo humano protegido utilizando aspiradores manuales entre las 18:00-20:00 horas, ocasionalmente aspiración directa sobre troncos de árboles entre las 8:00-11:00 horas y capturas de flebótomos en reposo sobre las paredes en horario diurno. Resultados. Se capturaron un total de 3.972 flebótomos distribuidos en 41 especies; de éstas, 16 especies son nuevos registros para esta región del país. En las zonas consideradas endémicas para leishmaniasis tegumentaria americana se destacaron por su abundancia, presencia en el intradomicilio e importancia epidemiológica L. gomezi, L. trapidoi, L. panamensis, L. ovallesi y L. yuilli yuilli. En las zonas de leishmaniasis visceral americana predominó L. longipalpis. Conclusión. La presencia significativa de vectores en el intradomicilio y la prevalencia de infección humana continúan demostrando la importancia de la leishmaniasis como un problema de salud pública en este departamento.

Introduction. Phlebotomine sand flies are the only known vectors of leishmaniasis and show an interesting biodiversity in the Andean mountain range of South America. We update the registry of species prevalent in the municipalities and endemic areas of the department of Santander, in the eastern range of the Colombian Andes. Objective. To present an updated inventory and distribution of the Lutzomyia species in the department of Santander and to discuss some ecological aspects of the principal species of medical importance. Materials and methods. Phlebotomines were collected in 12 municipalities in the years 1998 to 2001 between 19:00-6:00 using CDC miniature light traps, manual aspirators on protected human baits between 18:00 and 20:00, and occasionally by direct aspiration on tree trunks between 8:00-11:00 and resting on walls at different times of the day. Results. 3.972 phlebotomines of 41 species were captured, of which 16 species were new records for this area of the country. In zones of endemic American cutaneous leishmaniasis, L. gomezi, L. trapidoi, L. panamensis, L. ovallesi and L.yuilli were remarkable for their abundance, their presence within dwellings and their epidemiological relevance. In areas of visceral leishmaniasis, the most relevant species was L. longipalpis. Conclusion. The significant presence of vectors within human dwellings and the prevalence of human infection are continuing evidence of household transmission of Leishmania as an important public health problem in this department of Colombia.

**First finding of Lutzomyia tihuiliensis (Diptera: Psychodidae) in the Valle de Aburrá, Colombia**

Introducción. La serie pia del grupo verrucarum está integrada por siete especies de Lutzomyia, incluyendo a L. pia, L. limafalcaoae y L. emberai que están presentes en Colombia. Objetivo. Este artículo tiene como objetivo registrar el hallazgo de una morfoespecie antropofílica de la serie pia en el país. Materiales y métodos. Los flebotomíneos fueron recolectados con un aspirador bucal sobre cebo humano protegido dentro de un bosque secundario del municipio de Envigado, departamento de Antioquia. El muestreo entomológico se desarrolló entre las 18:00 y 22:00 horas, en junio y diciembre de 2004. Resultados. Los especímenes recolectados fueron identificados como L. tihuiliensis, que se distingue por la pigmentación basal de la pleura toráxica, la longitud del labro-epifaringe ³350 µm y la longitud del segundo palpómero ³170 µm. Adicionalmente, el taxón muestra un ducto común claramente más largo que los ductos individuales, con una relación de la longitud del ducto común/ducto individual ³2. Conclusión. Con el hallazgo de L. tihuiliensis se eleva a 21 el número de especies del grupo verrucarum registradas en Colombia. La presencia de cuatro especies de la serie pia en el país es de interés para el estudio de la génesis del taxón, considerando además que dos de éstas son endémicas del territorio nacional.

Introduction. Three of the seven species that comprise the pia series of the Lutzomyia verrucarum group have been recorded in Colombia, including L. pia, L. limafalcaoae and L. emberai. Objective. The aim of this paper is to report the occurrence of an anthropophilic morphospecies of the pia series in the country. Materials and Methods. Sand flies were collected with a mouth aspirator on protected human bait in a secondary forest in the municipality of Envigado, department of Antioquia. The entomological survey was performed from 18:00 to 22:00 hours in June and December, 2004. Results. Captured specimens were identified as L. tihuiliensis, which can be distinguished easily from other species of the pia series by its basally pigmented pleura, the length of the labro-epipharynx, ³350 µm, and the length of the second palpomere, ³170 µm. In addition to the previous characters, the sand flies collected exhibit a longer common sperm duct than the individual ducts with the ratio of the lengths of the common/individual ducts ³2. Conclusion. The finding of L. tihuiliensis raises to 21 the number of species of the Lutzomyia verrucarum group recorded to date in Colombia, including two endemic species of the pia series. From a biogeographical point of view, the presence of four species of the pia series in Colombia is of great interest for the study of the origin of the taxon.

Leishmania (Leishmania) mexicana in the village of San Matias, municipality of Gomez Plata, North West of Antioquia, Colombia

Introducción. La leishmaniaisis es una enfermedad encontrada en focos naturales de infección donde están presentes insectos vectores y mamíferos reservorios de Leishmania. Objetivo. Registrar por primera vez la presencia de Leishmania (Leishmania) mexicana Biagi, 1953, en el corregimiento de San Matías, municipio de Gómez Plata, departamento de Antioquia. Materiales y métodos. La especie fue aislada de un paciente con leishmaniasis cutánea localizada e identificada por la técnica de Inmunofluorescencia utilizando anticuerpos monoclonales específicos de especie y electroforesis de enzimas . Resultados y conclusión. Su perfil isoenzimático similar al de las cepas de referencia L. (L.) mexicana (MNCY/BZ/62/M379) y L. (L.) mexicana (MHOM/BE/82/BEL21), permitió concluír que la especie aislada del paciente es L. (L.) mexicana.

Introduction. Leishmaniasis is found in natural foci of infection where both sand fly vectors and mammalian reservoirs of Leishmania are present. Objective. To report for the first time the presence of Leishmania (Leishmania) mexicana Biagi, 1953, in the village of San Matías, municipality of Gomez Plata, Department of Antioquia. Materials and methods. The parasite was isolated from a patient with localized cutaneous leishmaniasis and was identified by the immunofluorescence technique using specific monoclonal antibodies against L. mexicana species and isoenzyme electrophoresis. Results and conclusion. The isoenzymatic profiles of the reference strains L. (L.) mexicana (MNCY/BZ/62/M379) and L. (L.) mexicana (MHOM/BE/82/BEL21) were similar to that of the isolate recovered from the patient, allowing us to classify it as L. (L.) mexicana

Foco de leishmaniasis en El Hobo, municipio de El Carmen de Bolívar, Bolívar, Colombia

Introducción. Se describen las características epidemiológica e importancia de la especies de Lutzomyia presentes en un foco de leishmaniasis en la vereda El Hobo Carmen de Bolívar, departamento de Bolívar. Objetivos. Obtener un conocimiento preliminar de la transmisión de leishmaniasis en la vereda El Hobo Carmen de Bolívar. Materiales y métodos. Se analizaron datos epidemiológicos y se realizaron capturas de flebótomos con trampas CDC y cebo humano en la vereda El Hobo. Para establecer la sero prevalencia de leishmaniasis visceral canina se hizo un estudio en perros mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta. Resultados. Se capturaron nueve especies de Lutzomyia: L. trinidadensis, L. evansi, L .cayennensis, L. venezuelensis, L. gomezi, L. dubitans, L. ylephiletor, L. yuilli, y L. walkeri. Las especie de mayor importancia por sus implicaciones en la transmisión de leishmaniasis cutánea y visceral fueron L. gomezi, y L. evansi respectivamente. Se reporta por primera vez para Bolívar especimenes de L. venezuelensis, L. dubitans, L. ylephiletor, L. yuilli, y L. walkeri. Se determinó una prevalencia de leishmaniasis visceral del 36% en los caninos estudiados. Según los reportes epidemiológicos, en el 2002 en el municipio de Carmen de Bolívar la leishmaniasis cutánea mostró un aumento del 40% y la leishmaniasis visceral canina del 80% de los casos con respecto al 2001, debido al brote presentado en la vereda El Hobo Conclusiones. Los resultados determinan a la vereda El Hobo como una zona de riesgo potencial de transmisión de leishmaniasis cutánea y visceral.

Introduction. The epidemiological characteristics and the importance of the Lutzomyia species present in a leishmaniasis focus in the village El Hobo, Carmen de Bolívar, Department of Bolívar, Colombia, are described.. Objective. To obtain a preliminary assessment of leishmaniasis transmission in the village of El Hobo, Carmen de Bolívar. Materials and methods. Epidemiological data were analyzed and sandflies were collected with CDC traps and on protected human volunteers in the village of El Hobo. Sero prevalence of canine visceral leishmaniasis in dogs was evaluated using indirect inmunofluorescence (IFAT). Results. Nine Lutzomyia species were collected: L. trinidadensis, L. evansi, L. cayennensis, L. venezuelensis, L. gomezi, L. dubitans, L. ylephiletor, L. yuilli, and L. walkeri. The species of greater importance based on their implication in the transmission of cutaneous and visceral leishmaniasis were L. gomezi, and L. evansi respectively. Specimens of L. venezuelensis, L. dubitans, L. ylephiletor, L. yuilli, and L. walkeri are reported for the first time for the Department of Bolivar. The sero prevalence of visceral leishmaniasis in dogs was 36%. According to the epidemiological records, in 2002 the municipality of Carmen de Bolivar presented a 40% increase in cases of cutaneous leishmaniasis and an 80% increase in canine visceral leishmaniasis as compared to 2001, due to the outbreak in the village of El Hobo. Conclusions. The results indicate that the village of El Hobo is an area of potential risk for transmission of both cutaneous and visceral leishmaniasis.

**Dog (Canis familiaris) infectivity to Lutzomyia youngi in Trujillo, Venezuela**

Introducción. En Trujillo, Venezuela, la prevalencia de leishmaniasis tegumentaria americana (LTA) es de 38 por 100.000 habitantes. Objetivo. En una localidad periurbana, rural, de la ciudad capital, estudiamos a los perros caseros (Canis familiaris) para investigar mediante la técnica de xenodiagnóstico la eventual capacidad para infectar a Lutzomyia youngi, especie flebotomina con actividad vectorial intradomiciliaria comprobada y abundante en el área de estudio. Materiales y métodos. Los perros con lesiones sugestivas de LTA, parasitológicamente diagnosticados, fueron seleccionados para el xenodiagnóstico permitiendo a flebótomos silvestres de una zona libre de LTA alimentarse ad libitum sobre toda la superficie corporal de cada animal, y evidenciar, en disecciones efectuadas a los 5 días post-ingesta, la posible presencia de flagelados en sus tractos digestivos, en cuyo caso, fueron evaluados por la técnica PCR-Multiplex para determinar la identidad del parásito. Resultados. Un total de 455 flebótomos se ingurgitaron sobre dos perros en tres evaluaciones distintas; en una única ocasión, se observaron promastigotes en 4 (0,88%) insectos, cuya identificación molecular reveló pertenecían al subgénero Viannia. Conclusión. El perro casero constituye un potencial factor de riesgo intradomiciliario en el ciclo de la LTA.

Introduction. In Trujillo, Venezuela the prevalence for American tegumentary leishmaniasis (ATL) is 38 per 100.000 inhabitants. Objective. In a periurban, rural settlement of the capital city Trujillo, we studied the potential capability of the domestic dog (Canis familiaris) as a source of infection for Lutzomyia youngi, a phlebotomine sand fly species abundant in the study area and whose domestic vectorial activity has been proven. Materials and methods. Dogs with dermal lesions suggestive of ATL and parasitological confirmation of infection, were selected for xenodiagnosis by allowing sylvatic phlebotomines from a ATL free area, to feed ad libitum over each animal´s entire body surface. The insects´ intestinal tracts were dissected 5 days after the blood meal in order to look for flagellate forms. When these were found, parasitological identification was performed by the multiplex-PCR technique. Results. Four hundred and fifty five sand flies engorged over two dogs in three different assays; promastigotes were found in 4 (0.88%) of the specimens on only one occasion. PCR identified DNA of the Leishmania Viannia subgenus. Conclusion. The household dog has the potential of being a domestic risk factor in the ATL transmission cycle.

Leishmania (Viannia) braziliensis infection in two Colombian dogs: a note on infectivity for sand flies and response to treatment

Introduction. Although canine cutaneous leishmaniasis has been reported in several foci of South America, no published information from Colombia is available. Objective. We report on two cases found in the Pacific coast region of this country, which presented as a single scrotal ulcer in one dog, and two ulcers on the external surface of the ear in a second dog. Materials and methods. Parasites were isolated by culture in Senekjies culture medium and identified using monoclonal antibodies. The capacity of these dogs to transmit the parasites to sand fly vectors (Lutzomyia trapidoi, Lutzomyia gomezi, Lutzomyia longipalpis, Lutzomyia youngi) was tested by allowing the flies to feed on the lesion borders. Results. Both isolates were identified as Leishmania (Viannia) braziliensis. No infections were detected upon dissection of engorged flies. A single peri-and sub-lesional injection of 1-2 ml of pentavalent antimony in the dog with ear lesions resulted in clinical cure 6 weeks post-treatment. Conclusions. These observations suggest that although dogs are susceptible to L. braziliensis, their reservoir competence could be low. However, if further studies indicate that canines are capable reservoir hosts of L. Viannia spp., the local treatment of lesions could become a feasible approach to diminish the risk of human infection in the peridomestic setting, without sacrificing infected dogs.

Introducción. A pesar de que la leishmaniasis cutánea canina ha sido reportada en varios focos de Sudamérica, no existe información publicada de Colombia. Objetivo. Se reportan dos casos hallados en la región de la costa Pacífica de este país, que se presentaron como una úlcera escrotal única en un perro y como dos úlceras en la cara externa de la oreja en un segundo individuo. Materiales y métodos. Los parásitos fueron aislados por cultivo en medio de Senekjie e identificados empleando anticuerpos monoclonales. La capacidad de los perros para transmitir parásitos a los flebótomos vectores (Lutzomyia trapidoi, Lutzomyia gomezi, Lutzomyia longipalpis, Lutzomyia youngi) se ensayó permitiendo que los insectos se alimentaran sobre el borde de las lesiones. Resultados. Ambos aislamientos se identificaron como Leishmania (Viannia) braziliensis. No se detectaron infecciones durante la disección de los flebótomos alimentados. Una sola inyección peri- y sub-lesional de 1-2 ml de antimonio pentavalente en el perro con las lesiones auriculares resultó en la curación clínica a las 6 semanas post-tratamiento. Conclusiones. Estas observaciones sugieren que aunque los perros son susceptibles a L. braziliensis, su competencia como reservorio podría ser baja. Sin embargo, si estudios posteriores demuestran que los caninos tienen capacidad de reservorio para especies de L. Viannia, el tratamiento local de las lesiones podría ser una estrategia factible para disminuir el riesgo de infección humana en el peridomicilio, sin necesidad de sacrificar a los perros infectados.

Quantification of canine cytokines using real time reverse transcriptase polymerase chain reaction

Introduction.Canines are the principal domestic reservoirs of visceral leishmaniasis in both the Old and New World. The development of highly sensitive and quantitative methods, such as real time reverse transcriptase polymerase chain reaction for measurement of canine cytokines has not been exploited in studies of visceral leishmaniasis. Objective. To standardize the relative quantification of canine IFN-g, IL-4, IL-10, IL-12p40 and IL-12p35 using real time reverse transcriptase polymerase chain reaction. Materials and methods. RNA was isolated from PBMCs from 1 year-old foxhounds and cultured with or without Con A, LPS or Staphylococcus aureus extract. This RNA was used in one-step real time reverse transcriptase polymerase chain reaction to optimize the concentrations of the cytokine primers and probes, generate standard curves for each cytokine, confirm equivalent amplification efficiency of cytokine and normalizer (18S rRNA) RNA, and to quantify the expression of the cytokine RNA. The comparative Ct method was used to determine the relative levels of gene expression in the samples, expressed as the fold-increase relative to the control samples. Results. The regression coefficient for the standard curves and the amplification efficiencies of the cytokine and normalizer RNA indicated that the quantification was reliable over a broad concentration range of input RNA. Relative to control cells, activation of PBMCs led to increased expression of IFN-g (132-fold), IL-4 (8.8-fold), IL-10 (7.2-fold), and IL-12p40 (275-fold). Basal expression of IL-12p35 was also detected. Conclusion. This approach provides several advantages over conventional assays for cytokine measurement and can be exploited in the study of the immunopathogenesis and immunity in canine leishmaniasis.