Biomédica

Diagnóstico de proliferación bacteriana intestinal en niños: evidencia experimental para sustentar el empleo de lactulosa en la prueba de hidrógeno y su validación como prueba tamiz

Introducción. Un recuento superior a 10(5) unidades formadoras de colonias por ml de aspirado duodenal se considera la "prueba de referencia" para el diagnóstico de proliferación bacteriana intestinal, a pesar de su caracter invasivo. La prueba de hidrógeno en el aliento, con lactulosa, se aplica como alternativa diagnóstica no invasiva, pero el fundamento para el empleo de lactulosa carece de solidez. Objetivos. Aportar evidencia experimental para sustentar el uso de lactulosa en la prueba de hidrógeno y validarla frente al cultivo de aspirado duodenal. Materiales y métodos. Para fundamentar el uso de lactulosa se comparó la cinética de la lactasa intestinal frente a lactulosa con su cinética frente a la lactosa. Con el fin de validar la prueba de hidrógeno, ésta se aplicó a 47 niños afectados por trastornos gastrointestinales y los resultados se compararon con los de la prueba de referencia. Mediante una tabla de contingencia se estimó la validez y con el índice kappa, la concordancia. Resultados. La cinética mostró que la lactasa es 240 veces menos eficiente que la lactulosa. La sensibilidad de la prueba de hidrógeno fue de 85,7% (82,0%-89,4%), la especificidad de 90,9% (89,3%-92,5%), el valor diagnóstico positivo de 80% (76,5%-83,5%) y el valor diagnóstico negativo de 93,8% (92,1%-95,4%). El índice kappa de 0,785 (0,54-0,95) indicó una importante concordancia entre las pruebas diagnósticas. Conclusiones. Se aporta evidencia experimental para sustentar el uso de la lactulosa en la prueba de hidrógeno y se valida ésta frente al patrón de referencia como prueba tamiz para diagnosticar la proliferación bacteriana intestinal.

Introduction.The standard method for diagnosis of small intestinal bacterial overgrowth is a duodenal aspirate that produces a coliform count greater than 105 colonic forming units/ml. Because this is an invasive procedure, the lactulose breath hydrogen test is considered as a non-invasive alternative. Better experimental support is required, however, for the routine use of lactulose in diagnosis. Objective. Experimental evidence is provided to support the use of lactulose in the breath hydrogen test. Validation of the test is accomplished by comparison to the duodenal aspirate culture. Materials and methods. A rational basis for the use of lactulose was established by a comparison of the kinetics of lactulose and lactose on intestinal lactase. For validation, the hydrogen test was applied to 47 children suffering from gastrointestinal disorders, and the results compared with aspirate culture counts. The validity of the hydrogen test was assessed by a contingency table and the degree of agreement established by the kappa index. Results. The kinetics data showed that lactase is 240 times less efficient in presence of lactulose than it is in presence of lactose. The sensitivity of the breath hydrogen test was 85.7% (82.0-89.4%), its specificity 90.9% (89.3-92.5%), the predictive positive value 80.0% (76.5-83.5%) and the predictive negative value 93.8% (92.1-95.4%); the kappa index=0.785 (0.54-0.95) showed excellent agreement between the two diagnostic tests. Conclusion. The results provided experimental support for the use of lactulose in the breath hydrogen test, and it was validated as screening test in the diagnosis of small intestinal bacterial overgrowth.

Una visión global a la salud de la población en Colombia: rol de los macrodeterminantes sociales

Introducción. El ambiente social es un factor determinante importante de la salud individual y de la población. Sin embargo, con frecuencia, su impacto no se considera en las políticas sanitarias de los países dado que, generalmente, son características constantes. El resultado es que las políticas de salud actuales enfatizan más los factores de riesgo individuales. Objetivo. Describir la posición actual de Colombia en el mundo en relación con algunos macrodeterminantes de la salud reconocidos que han sido descritos como parte del modelo de régimen de clase/bienestar. Materiales y métodos. Se trata de un análisis ecológico exploratorio, con todos los países de los que se obtuvo información comparable, sobre desarrollo económico (producto interno bruto ajustado por la paridad de poder de compra), desigualdad en el ingreso (coeficiente de Gini), capital social (confianza generalizada y corrupción percibida) y régimen político (puntaje sobre derechos políticos y libertades civiles). Las correlaciones entre estos macrodeterminantes fueron estimadas y, luego, se exploró la relación entre éstos y la esperanza de vida al nacer. Finalmente, se determinó la posición de Colombia en el contexto global. Resultados. Existen correlaciones importantes entre los macrodeterminantes. Colombia tiende a tener posiciones intermedias o inferiores en el contexto global en todos los macrodeterminantes, excepto para el producto interno bruto ajustado por la paridad de poder de compra. Conclusión. El macrodeterminante de la salud de la población con prioridad para ser modificado para mejorar las condiciones actuales, es la desigualdad en el ingreso.

Introduction. The social environment is an important determinant of population and individual health. However, its impact is often not considered in national health policies and generally its attributes are considered as constants. For this reason, contemporary health policies place greater emphasis on individual risk factors. Objective. Colombias position in the world ranking is described with respect to several social macro-determinants of health, previously characterized as components of class/welfare regime model. Materials and methods. The exploratory study included all countries with comparable data including the following: (1) economic development [gross domestic product per capita adjusted for purchasing power parity], (2) income inequality [Gini coefficient], (3) social capital corruption perceptions index and generalized trust, and (4) political regime index of freedom. First, correlations between these macro-determinants were estimated, and second, the relationship between them and life expectancy at birth was explored. Finally, the position of Colombia in global context was determined. Results. Important correlations occurred among the macro-determinants. Colombia tended to have intermediate to low positions in the global context in all macro-determinants, with the exception of gross domestic product per capita adjusted for purchasing power parity. Conclusion. The macro-determinant of population health with the highest potential of effecting improvement in health conditions is to modify income inequality.

**Tendencia de la prevalencia y factores asociados a la infección por Giardia duodenalis en escolares y preescolares de una zona rural de Cundinamarca**

Introducción. La giardiasis continúa siendo un problema de salud pública en amplias regiones del mundo y en Colombia. Esta infección se encuentra asociada con la pobreza, el saneamiento ambiental inadecuado y la deficiencia de servicios públicos. Objetivo. Describir la tendencia de la prevalencia de la infección por Giardia duodenalis en la población escolar y preescolar de La Virgen, Quipile, Cundinamarca, y su posible asociación con las variables socioeconómicas. Materiales y métodos. Se tomaron tres puntos de corte realizados en los años 1995, 2001 y 2005; en cada uno se realizó muestreo no aleatorio de niños entre 0 y 15 años de edad, a quienes se les hizo examen coprológico para determinar la infección por G. duodenalis y otros parásitos intestinales. En el 2005 se realizó, además, una encuesta a los cuidadores de los sujetos de estudio sobre las condiciones sociodemográficas, económicas y las prácticas sanitarias del núcleo familiar. Resultados. La prevalencia de la infección por G. duodenalis no ha cambiado significativamente en el periodo de estudio: se encontró 13,60% en el corte de 1995, 12,84% en el 2001 y 15,16% en el 2005. Los resultados sugieren que el pertenecer al régimen subsidiado se asocia con la infección por G. duodenalis (razón de prevalencias, RP=4,47; intervalo de confianza, IC95%: 0,63-32,02), al igual que el no tener acueducto (RP=2,59; IC95%: 1,13-5,97) y el dedicarse a la agricultura (RP=2,53; IC95%:1,00-6,41). Conclusión. La giardiasis continúa siendo un problema de salud pública en esta población; mientras persistan los factores ambientales y socioeconómicos asociados con la infección, esta protozoosis intestinal no podrá ser controlada.

Introduction. Giardia doudenalis infection remains an important public health problem worldwide, as well as in Colombia. This infection is associated with poverty and lack of public services. Objective. The study was designed to describe prevalence trends of Giardia duodenalis infections in preschool and school-age children from the village of La Virgen, Quipile, Cundinamarca, and its possible association with socioeconomic variables. Materials and methods. Three cross-sectional studies were undertaken in 1995, 2001 and 2005. In each, a non-random sample was selected among children aged <1 to 15 years. Fecal samples were collected for direct examination in order to determine G. duodenalis infection and other intestinal parasites. During the 2005 survey information was collected concerning the sociodemographic and economic conditions in each family group from which a child was sampled. Results. The prevalence of G. duodenalis infection did not change significantly during the study period-13.6% in 1995, 12.8% in 2001 and 15.2% in 2005. These results suggested that belonging to the subsidized health care regime was associated with G. duodenalis infection (prevalence rate [PR]: 4.47; 95% confidence interval [95% CI] 0.6-32.0), not having water supply (PR 2.6; 95% CI 1.1-6.0) and involvement in agricultural activities (PR 2.5; 95% CI 1.0-6.4). Conclusion. Giardiasis is a continuing public health problem at La Virgen. As long as the environmental and socioeconomic factors associated with infection persist, this intestinal protozoan infection will not be controlled.

Tendencias de mortalidad en población adulta, Medellín, 1994-2003

Introducción. La muerte de un adulto afecta tanto su familia como a su entorno laboral y social; en los países en desarrollo la carga de enfermedades y traumatismos sufridos por los adultos va en aumento y exige la intervención inmediata de las autoridades de salud pública. Objetivo. Determinar la tendencia de la mortalidad según el sexo, de los adultos de 20 a 64 años de la ciudad de Medellín, en la década 1994-2003. Materiales y métodos. Es un estudio descriptivo longitudinal retrospectivo con análisis de tendencia de las tasas brutas de mortalidad; la fuente de información secundaria fueron los certificados de defunción registrados por el Departamento Administrativo Nacional de Estadísticas en la década 1994-2003. Resultados. La tasa promedio de mortalidad de la década fue de 497 fallecimientos por cien mil habitantes; los hombres presentaron un riesgo de morir 3,5 veces el riesgo de las mujeres (IC95%: 2,05-5,96) y 58,7% de las muertes tuvieron origen en una causa externa; 28,9% de las defunciones femeninas se originaron por tumores o neoplasias y su tendencia es positiva a lo largo de los años. Las cinco primeras causas de muerte, son: agresiones, enfermedad isquémica del corazón, accidentes de transporte, tumores malignos y enfermedad pulmonar. Conclusiones. La mortalidad de la población adulta presenta diferencias según sexo y edad, estando en condiciones más desventajosas la población masculina frente a la femenina, de fallecer por causas externas en edades más tempranas de la vida, y los de mayor edad principalmente las mujeres, por el incremento de las enfermedades cardiovasculares y los tumores malignos, que representan un problema de salud pública por el alto costo humano y económico que generan.

Introduction. The death of an adult affects the family as well as the adults role in its labor and social environment. In developing countries, the load of diseases and associated trauma continues to increase and place increasing demands for the intervention by public health authorities. Objective. Trends of mortality were determined for adults of 20 to 64 years in Medellín, Colombia, between 1994 and 2003 according to sex. Materials and methods. A retrospective, longitudinal study was undertaken that analyzed trends in mortality rates. A secondary data source consisted of death certificates recorded at the Departamento Administrativo Nacional de Estadísticas (National Department of Statistics) during the decade 1994-2003. Results. The rate average of mortality for the decade was 497 deaths per 1000 habitants. Men displayed a risk of dying of 3.5 (95%CI: 2.0-6.0) times that of women. Approximately 59% of the deaths had external causes (i.e., not related to illness or old age). Twenty-nine percent of the female deaths were due to tumors; this trend was positive throughout the decade. The 5 most important causes of mortality were as follows: aggressive behaviors, heart disease, traffic accidents, malignant tumors and pulmonary disease.The trend in deaths due to by external causes was negative, but positive for the deaths due to acute myocardial infarctions (mainly in the 45 to 64 year population) and HIV in young adults. An increasing trend in malignant breast cancer was observed in young adult women, but remained constant in the 45 to 64 year-old female population. Conclusion.Mortality in the adult population differs by sex and age. The younger male population is more at risk than women as a consequence of environmental factors in early life. In later life, women are more strongly affected by increasing incidence of cardiovascular disease and malignant tumors. The increased levels of mortality at all age levels represent a problem that generates a high human and economic cost.

Infección por rickettsia en capibaras (Hydrochoerus hydrochaeris) de São Paulo, Brasil: evidencia serológica de infección por Rickettsia bellii y Rickettsia parkeri

Introduction. In Brazil, capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris) are important hosts for Amblyomma ticks, which in turn can transmit rickettsiae to humans and animals. Therefore, capybaras are potential sentinels for rickettsial infection. Objective. The present study evaluated rickettsial infection in capybaras in different areas of the state of São Paulo, where rickettsiosis has never been reported. Materials and methods. Blood sera from 73 capybaras from six localities in São Paulo were tested by indirect immunofluorescence assay using Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, and Rickettsia bellii antigens. Capybara spleens were tested by PCR, targeting a fragment of the rickettsial gltA gene. Ticks were collected from each capybara sample and taxonomically identified to species. Results. A total of 94 positively reacting capybara samples, 19 (26.0%), 25 (34.2%), and 50 (68.5%) capybara sera reacted to R. rickettsii, R. parkeri, and R. bellii, respectively. Twenty-five capybara sera showed titers to R. bellii at least four-fold higher than to any of the other two antigens. These sera were considered homologous to R. bellii. Using the same criteria, 3 capybara sera were considered homologous to R. parkeri. No sera were be considered homologous to R. rickettsii. No rickettsial DNA was detected in capybara spleen samples. Ticks collected on capybaras were Amblyomma dubitatum and Amblyomma cajennense. Conclusions. The first evidence is reported of R. bellii natural infection in vertebrate hosts, and the first evidence of R. parkeri infection in capybaras. While R. parkeri is known to infect and cause disease in humans, no similar evidence for human infection has been indicated by R. bellii.

Introducción. En Brasil, los capibaras (Hydrochoerus hydrochaeris) son importantes huéspedes para garrapatas del género Amblyomma, las cuales transmiten rickettsiosis a humanos y animales. Por lo tanto, estos roedores pueden ser potenciales centinelas para detectar infección por rickettsia. Objetivos. Este trabajo evaluó la infección por rickettsia en capibaras de diferentes regiones del estado de São Paulo, donde las rickettsiosis nunca han sido reportadas. Materiales y métodos. Se examinarion los sueros de 73 capibaras de seis localidades en São Paulo con la prueba de immunofluorescencia indirecta con antígenos de Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri y Rickettsia bellii. Los bazos de los capibaras se extrajeron y se analizaron por reacción en cadena de la polimerasa para un fragmento del gene gltA de rickettsia. Las garrapatas se recolectaron de los capibaras y se identificaron hasta especie. Resultados. Diecinueve (26,0%), 25 (34,2%) y 50 (68,5%) sueros de los capibaras reaccionaron con R. rickettsii, R. parkeri y R. bellii, respectivamente. De los 50 sueros que reaccionaron con antígenos de R. bellii, 25 presentaron títulos, por lo menos, cuatro veces mayores que los otros dos antígenos. Estos sueros fueron considerados homólogos de R. bellii. Usando el mismo criterio, tres sueros de los capibaras se consideraron homólogos de R. parkeri. Ningún suero se consideró homólogo de R. rickettsii. No se detectó ADN de rickettsia en bazo. Las garrapatas recolectadas de los capibaras fueron identificadas como Amblyomma dubitatum y Amblyomma cajennense. Conclusiones. Este trabajo reporta la primera evidencia de infección natural por R. bellii en vertebrados y, también, la primera evidencia de infección por R. parkeri en capibaras. Se sabe que R. parkeri infecta y produce enfermedad en humanos; sin embargo, no hay evidencia de infección humana por R. bellii.

Evaluación de la producción de b -amiloide por la mutación E280A en el gen de la presenilina 1

Introducción. La mutación E280A en el gen de presenilina 1 se encuentra asociada al grupo familiar más grande del mundo con enfermedad de Alzheimer. La presenilina 1 es un componente esencial del complejo g-secretasa, responsable de la producción del péptido beta -amiloide, considerado clave en la fisiopatogenia de la enfermedad. Objetivo. Determinar si la mutación E280A en presenilina 1 incrementa la producción de b-amiloide, como reflejo de la ganancia de función gamma -secretasa. Materiales y métodos. Se evaluaron, por la tinción con rojo congo e inmunohistoquímica, depósitos sistémicos de b-amiloide en tejidos de cadáveres afectados, portadores de la mutación E280A en la presenilina 1 y cadáveres de no afectados. Se cuantificó por la técnica de ELISA el beta -amiloide de 40 y 42 aminoácidos en cultivos de células CHO que expresan la proteína precursora de amiloide, transfectadas con los cADN de presenilina 1 portando las mutaciones M146L, E280A, D E9 y L392V. Resultados. Se encontraron depósitos proteicos en todos los tejidos estudiados y escasos depósitos de beta -amiloide. No se encontró diferencia en la cantidad de depósitos, ni en su localización. No se observó incremento en la producción de beta -amiloide en las células transfectadas con los cADN de presenilina 1 con las mutaciones comparadas con los controles. Conclusiones. La mutación E280A en presenilina 1 no aumentó la producción de beta -amiloide en tejidos periféricos no neuronales o en el modelo in vitro, contrario a lo que sucede en una ganancia de función de gamma -secretasa.

Introduction. The E280A mutation of the presenilin 1 gene has been found to be the most common associate in Alzheimers patients with a family history of this disease. Presenilin 1 is a critical component of the g-secretase complex and plays an essential role in the production of amyloid-beta peptide. This peptide has been strongly associated with the physiopathology of the disease. Objective. The E280A mutation in the presenilin 1 was investigated for increased production of amyloid-beta , as a response to gain in gamma-secretase function. Materials and methods. Levels of systemic amyloid-beta were measured with congo red staining and immuno-histochemistry of the tissues of affected cadavers, compared with non-affected cadavers. The 40 and 42 amino acid amyloid-beta levels were quantified by ELISA assay in CHO cell cultures. The amyloid precursor protein expressed by the cultures was detected by transfection with the cDNAs of presenilin 1 carrying the M146L, E280A, DE9 y L392V mutations. Results. Protein deposits were found in all tissues investigatged, but only a few with beta -amyloid deposition. No differences were observed in the amount or location of amyloid-beta between affected and unaffected cadavers. Not increase was noted in the production of amyloid-beta from the CHO cells transfected with cDNA from any of the mutations of presenilin 1. Conclusions. The E280A mutation in the presenilin 1 gene was not associated with the increased production of amyloid-beta in non-neuronal peripheral tissues, or in the in vitro model. This is in contrast to the expectation in a gamma-secretase gain of function.

Evaluación de las concentraciones de lípidos y apoproteínas A-I y B-100 en un grupo de escolares de cinco departamentos del centro-oriente de Colombia

Introducción. Existe evidencia sobre variaciones en las concentraciones de lípidos y apoproteínas en los niños asociados a cambios fisiológicos o al medio ambiente, este último puede inducir alteraciones futuras en los lípidos. Objetivo. Evaluar las concentraciones de colesterol total, colesterol LDL, colesterol HDL y apoproteínas A-1 y B-100 en escolares de cinco departamentos del centro-oriente colombiano, y comparar por edad, sexo, índice de masa corporal, práctica de actividad física y preferencias hacia algunos alimentos. Materiales y métodos Se recolectaron 741 muestras de sangre que se analizaron por métodos enzimáticos, colorimétricos e inmunoturbidimétricos. Todos los valores se presentaron como media y desviación estándar y para la comparación entre grupos se utilizó prueba t, ANOVA y Scheffe. Resultados. Se observaron variaciones en los lípidos y valores constantes en las apolipoproteínas, las concentraciones de los lípidos se relacionaron con los cambios de edad y sexo. Se observaron cambios que pueden asociarse al grado de maduración sexual, dieta y nivel de actividad física. Los valores de colesterol total, colesterol LDL y colesterol HDL fueron más bajos a los reportados en otros grupos de población mientras que en los triglicéridos hay mayor variación con tendencia a ser superiores. Conclusión. Existen otras variables diferentes a la edad y el género que influyen en las variaciones de los lípidos; se requieren otros estudios para determinar la contribución de cada factor. La promoción de estilos de vida saludable puede ayudar a disminuir el riesgo futuro de enfermedad cardiovascular asociada a bajas concentraciones de colesterol HDL y mayores de triglicéridos en esta población.

Introduction. Lipid and apolipoprotein are known to vary in children.These variations can be associated to physiologic changes or the environment; this last one probably induces future alterations in the lipids. Objetive. The levels of total cholesterol, LDL-cholesterol, HDL-cholesterol, and apoproteins A-I and B-100 were compared in school children from five provinces of middle-eastern Colombia. Associations were made with age, gender, body mass index, fitness activity, and food preference. Materials and methods. 741 blood samples were collected and biochemical determinations were undertaken with standard enzymatic, colorimetric, and inmunoturbidimetric methods. All values are presented as mean ± SE, comparisons among groups were made using Student´s t test, ANOVA and Scheffe. Results. Lipid variation was observed in the school children, however in contrast, the concentrations of Apoproteins ApoB-100 and ApoA-I tended to be constant. The lipid fluctuations showed some relationship with changes in age and gender, however, changes were also observed that indicate a possible relationship with sexual maturation, diet and fitness activity. An important finding was that the HDL cholesterol value was lower that reported from other countries, while the triglycerides was higher and this may indicate a future increased risk for cardiovascular diseases. Conclusion. Fluctuations occur in the lipid levels and vary with age and gender. Associations with other factors may be present; however, more research is necessary to determinate the contribution of each factor. A promotion campaign among school-age children for a healthier life style may contribute to a decrease in future risk for cardiovascular diseases associated with low HDL-cholesterol levels and higher triglycerides.

Factores de exposición a plaguicidas organofosforados y carbamatos en el departamento del Putumayo, 2006

Introducción. En 2005 el Sistema de Vigilancia en Salud Pública encontró que el departamento del Putumayo es la región con mayor incidencia de intoxicaciones por plaguicidas en Colombia. Objetivo. Establecer la exposición a plaguicidas organofosforados y carbamatos en la población agrícola mediante la determinación de los niveles de acetilcolinesterasa en el departamento de Putumayo, utilizando el método de Michel. Materiales y métodos. Se realizó un estudio transversal en 204 trabajadores ocupacionalmente expuestos, en cuatro municipios del departamento de Putumayo. Se aplicó una encuesta para recolectar información y se tomó una muestra de sangre para la determinación de la acetilcolinesterasa. Se llevó a cabo el análisis simple de las variables y se exploraron posibles asociaciones. Un grupo de trabajadores fueron capacitados con la metodología SARAR (una estrategia educacional participativa que significa: S: seguridad, A: asociación, R: reacción, A: actualización y R: responsabilidad) sobre el uso y el manejo de plaguicidas. Resultados. Se estableció que el tiempo promedio de exposición fue de nueve años. El 75,2% manifestó emplear plaguicidas extremadamente tóxicos y el 13,0% altamente tóxicos. En promedio refirieron aplicar plaguicidas 7,3 horas al día. El 9,8% usaban plaguicidas organoclorados. En cuanto a la actividad de la enzima acetilcolinesterasa, 17,6% presentaban inhibición. Conclusión. Este trabajo permitió tener una dimensión real del problema de los plaguicidas en el Putumayo y utilizarla para hacer una intervención educativa sobre los trabajadores y sus familias, con la metodología SARAR.

Introduction. In 2005, the Sistema de Vigilancia en Salud Pública, the governmental agency responsible for monitoring public health, found that Putumayo Province has the highest incidence of poisoning by pesticides in Colombia. Objective. Exposure to organophosphorus and carbamate pesticides and carbamates was established in the agricultural population of Putumayo by determining acetylcholinesterase levels. Materials and methods. A cross-sectional survey was made in 204 occupationally exposed workers in four municipalities of Putumayo. A questionnaire was administered to collect subject information; a blood sample was taken for acetylcholinesterase determination by Michels method. A straightforward analysis of the variables and possible associations were explored. A group of workers was enabled with SARAR (a participative educational strategy that means: S: safety, A: association, R: reaction, A: actualization and R: responsability)methodology for use and handling of pesticides. Results. The average time of exposure was nine years. Seventy-five percent declared using extremely toxic pesticides and 13% highly toxic. On average, they applied pesticides 7.3 hours/day. Nearly 10% used organochloride pesticides. Furthermore, 17.6% demonstrated inhibition of the enzyme acetylcholinesterase. Conclusion. A realistic scale of the pesticide use problem in humans was obtained; and the data effectively recommend an educatiional intervention for the workers and their families with SARAR methodology.

La región intergénica del gen H2A apoya las subpoblaciones KP1(-) y KP1(+) de Trypanosoma rangeli

Introducción. Con base en la amplificación del ADN de los minicírculos del cinetoplasto y de los genes miniexón, Trypanosoma rangeli ha sido clasificado en las subpoblaciones KP1(-) y KP1(+). Objetivo. Comparar la región intergénica de los genes H2A entre cepas KP1(+) y KP1(-) de T. rangeli, con el fin de aportar evidencias a dicha división. Materiales y métodos. Se amplificó, clonó y determinó la secuencia de la región intergénica de los genes h2a de las cepas KP1(-) Tre y 5048 y de la cepa Choachí KP1(+). Dichas secuencias, junto con las reportadas para las cepas C23 KP1(-) y H14 KP1(+), fueron utilizadas para la reconstrucción de árboles filogenéticos basados en los métodos de neighbor-joining, máxima parsimonia y máxima verosimilitud, utilizando la cepa Y de Trypanosoma cruzi como grupo raíz externo. Resultados. Se evidenció heterogeneidad intraespecífica en el tamaño de la región estudiada, soportados por valores bootstrap de 85% (neighbor-joining), 66% (máxima parsimonia) y 57% (máxima verosimilitud), los resultados indican que las cepas KP1(-) se agrupan aparte, claramente diferenciadas de las cepas KP1(+), las cuales presentan una mayor heterogeneidad intraespecífica en tamaño y secuencia. Además, se encontró mayor proximidad filogenética entre T. rangeli y T. cruzi que entre T. rangeli y Trypanosoma brucei. Conclusiones. Los análisis filogenéticos basados en la región intergénica de los genes h2a de las cepas estudiadas apoyan la división de T. rangeli en las subpoblaciones KP1(-) y KP1(+). Sin embargo, se requiere estudiar un mayor número de cepas para confirmar estos hallazgos.

Introduction. Trypanosoma rangeli has been classified in the KP1(+) and KP1(-) subpopulations, based on the mini-exon gene and kinetoplast DNA minicircle amplification profiles. Objective. The intergenic region of the histone h2a gene was compared between KP1(+) and KP1(-) strains of T. rangeli to substantiate this classification. Materials and methods. The amplification, cloning and sequencing of the h2a gene intergenic region was undertaken for the Tre and 5048 KP1(-) strains for comparison with the Choachí KP1(+) strain. These sequences, along with those previously reported for the KP1 (+) and KP1 (-) H14 and C23 strains, were used to reconstruct phylogenetic trees based on the "neighbor-joining", maximum parsimony and maximum likelihood methods. The Y strain of Trypanosoma cruzi was chosen as the outgroup. Results. Intra-specific heterogeneity was observed in the size of the gene region under study, supported by bootstarp values of 85% (neighbor-joining), 66% (maximum parsimony) and 57% (maximum likelihood). The KP1(-) strains were grouped apart, clearly differentiated from the KP1(+) strains. The latter demonstrated a higher intra-specific heterogeneity, both in sequence length and composition. In addition, a closer phylogenetic relationship between T. rangeli and T. cruzi was found to be more closely related to one another than to T. rangeli and Trypanosoma brucei. Conclusion. Phylogenetic analyses of analyzed strains based on the intergenic region of the h2a genes supported the T. rangeli grouping in two major subpopulations known as KP1(+) and KP1(-) strains. However, a higher number of strains are needed to confirm this finding.

Evaluación de escalas diagnósticas en pacientes con dolor abdominal sugestivo de apendicitis

Introducción. El diagnóstico de apendicitis es difícil y existen algunas escalas que pretenden mejorar la exactitud diagnóstica. Objetivo. Determinar las características operativas de las escalas de Alvarado y Fenyö, comparándolas con la impresión diagnóstica del cirujano y la patología en el dolor abdominal sugestivo de apendicitis. Materiales y métodos. Se trata de un estudio prospectivo de evaluación de pruebas diagnósticas. Se registraron los signos, síntomas y resultados de exámenes de laboratorio incluidos en las escalas. Se registró de manera ciega el diagnóstico del cirujano y su conducta. Se determinó la sensibilidad, especificidad, valores diagnósticos positivos y negativos, y likelihood ratio (índice de verosimilitud) de cada escala y del cirujano, discriminado por sexo. Resultados. Se analizaron 374 sujetos, sin diferencias estadísticamente significativas de variables entre sexos. Se operaron 269 pacientes. El 16,9% de los hombres y el 31,4% de las mujeres no tuvieron apendicitis. Para los hombres, la sensibilidad del diagnóstico por el cirujano fue mayor que las escalas (86,2% Vs. 73% en Alvarado Vs. 67,2% en Fenyö) con una especificidad similar. Para las mujeres la sensibilidad del cirujano y la escala de Alvarado fueron similares y superiores a la de Fenyö (77,1% Vs. 79,5% en Alvarado y 47% en Fenyö) pero la especificidad fue superior para Fenyö (92,9% Vs. 71,4% en Alvarado y 75,9% en cirujano). La frecuencia de apendicitis crece de manera proporcional al puntaje de Alvarado. Conclusión. Para hombres con dolor en la fosa iliaca derecha, el diagnóstico hecho por el cirujano es mejor que las escalas diagnósticas. Para el caso de las mujeres, la escala de Fenyö ofrece una mejor sensibilidad. La escala de Alvarado puede facilitar la conducta en pacientes con dolor en fosa iliaca derecha.

Introduction. Diagnosis of apendicitis is difficult; however several clinical scales have been developed that attempt to improve diagnostic accuracy. Objective. The operational characteristics of Alvarado and Fenyö scales were defined in patients with abdominal pain suggestive of appendicitis and were compare with clinical and pathological diagnoses. Material and methods. A prospective trial assessed the diagnostic tests. Sign, symptoms, and laboratory tests were included in scales selected. Surgeon decision was maintained independent from the results of the scales. Sensitivity, specificity, positive and negative predictive value and positive and negative likelihood ratio for each scale was compared with the surgeon evaluation. Results. The sample included 374 patients with approximately equal sexes. Of these 269 patients underwent surgery. Howeve, 16.9% of the male and 31.4% of female patients did not have appendicitis. For men, a diagnosis made by the surgeon had better sensitivity than scales (86.2% vs. 73% for Alvarado and 67.2% for Fenyö) without significant differences in specificity. For women, surgeon and Alvarado scale diagnoses were similar, and better than Fenyö scale (77.1% vs. 79.5% for Alvarado and 47% for Fenyö), but specificity was higher for Fenyö scale (92.9% vs. 71.4% for Alvarado and 75.9% for surgeon). Accuracy in diagnosis of appendicitis increases with a higher Alvarado score. Conclusion. For men with abdominal pain on right lower quadrant, surgeon diagnosis is more accurate than scales. For women, Fenyö scale offers a better sensitivity. Alvarado score can facilitate decision-making in patients with these abdominal symptoms.

Análisis de la estructura primaria y secundaria del ARN de transferencia mitocondrial para serina en siete especies de Lutzomyia

Introducción. Los insectos del género Lutzomyia son los responsables de la transmisión del parásito Leishmania spp. en América. La taxonomía de estos vectores se fundamenta en los caracteres morfológicos que exhiben los adultos, principalmente, en las estructuras pareadas de la cabeza y los genitales. Aunque estos caracteres permiten distinguir la mayoría de los taxones, la similitud en algunos subgéneros y grupos de especies pone límites a la identificación por criterios morfológicos. Objetivo. Evaluar la utilidad del ARN de transferencia mitocondrial para serina ARNt Ser en la determinación taxonómica de Lutzomyia. Materiales y métodos. Se analizaron siete especies flebotomíneas, L. trinidadensis, L. panamensis, L. cayennensis cayennensis, L. dubitans, L. gomezi, L. rangeliana y L. evansi. A partir de cada individuo, se extrajo, amplificó y obtuvo la secuencia del gen mitocondrial que codifica para el ARNtSer, delimitado por los genes citocromo b y NAD deshidrogenasa uno. La estructura secundaria del ARNt Ser se infirió teniendo como base las estructuras homólogas descritas en otros insectos del orden Diptera. Resultados. La longitud del gen ARNt Ser osciló entre 66 pb en L. gomezi y 69 pb en L. trinidadensis. En el alineamiento nucleotídico de 70 posiciones, se detectaron 14 sitios polimórficos, incluyendo cuatro eventos indel. La mayoría de las sustituciones correspondieron a las lupas dihidrouridina, ribotimidina-pseudouridina-citosina y variable, así como al extremo basal del brazo anticodón. Conclusión. Los cambios en la secuencia primaria de nucleótidos y los rearreglos en la estructura secundaria del ARNt Ser son potencialmente útiles para la discriminación taxonómica de las especies flebotomíneas estudiadas.

Introduction. Lutzomyia sand flies are involved in the transmission of the parasite Leishmania spp. in America. The taxonomy of these vectors is traditionally based on morphological features of the adult stage, particularly the paired structures of the head and genitalia. Although these characters are useful to distinguish most species of Lutzomyia, morphological identification may be complicated by the similarities within subgenera and species group. Objective. To evaluate the utility of mitochondrial serine transfer RNA tRNA Ser for taxonomic identification of Lutzomyia. Materials and methods. Seven sand fly species, each representing one of the 27 taxonomic subdivisions in genus Lutzomyia, were analyzed including L. trinidadensis (Oswaldoi group), L. (Psychodopygus) panamensis, L.(Micropygomyia) cayennensis cayennensis, L. dubitans (Migonei group), L. (Lutzomyia) gomezi, L. rangeliana (ungrouped) and L. evansi (Verrucarum group). The mitochondrial tRNA Ser gene, flanked by the cytochrome b and NAD dehydrogenase subunit one genes, was extracted, amplified and sequenced from each specimen. Secondary structure of the tRNA Ser was predicted by comparisons with previously described homologous structures from other dipteran species. Results. The tRNA Ser gene ranged in size from 66 base pairs in L. gomezi to 69 base pairs in L. trinidadensis. Fourteen polymorphic sites, including four insertion-deletion events, were observed in the aligned 70 nucleotide positions. The majority of the substitutions were located in the dihydrouridine, ribothymidine-pseudouridine-cytosine and variable loops, as well as in the basal extreme of the anticodon arm. Conclusion. Changes of primary sequence of the tRNASer provided useful molecular characters for taxonomic identification of the sand fly species under consideration.

Identificación molecular de micobacterias no tuberculosas mediante el análisis de los patrones de restricción, Colombia 1995-2005

Introducción. Las micobacterias no tuberculosas pueden ser saprofitas, patógenas u oportunistas; las enfermedades más comunes producidas por estos microorganismos son las infecciones posquirúrgicas, principalmente por procedimiento estéticos, infecciones asociadas con catéteres, enfermedades cutáneas diseminadas, enfermedades pulmonares y del sistema nervioso central que afectan especialmente a pacientes infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana. La identificación fenotípica de las micobacterias no tuberculosas incluye pruebas microbiológicas y bioquímicas, las cuales pueden tomar varias semanas y algunas veces no logran diferenciar entre los miembros de un complejo. Objetivo. El objetivo fue evaluar la metodología de reacción en cadena de la polimerasa-análisis de restricción, como método de identificación genotípica de micobacterias no tuberculosas aisladas de muestras clínicas que pertenecen a la colección del Instituto Nacional de Salud. Materiales y métodos. Se estudiaron 70 aislamientos clínicos de micobacterias no tuberculosas, criopreservados en glicerol al 50% e identificados mediante metodologías fenotípicas. La identificación genotípica se realizó por reacción en cadena de la polimerasa-análisis de restricción y se evaluó la concordancia entre las metodologías. Resultados. Se obtuvo una concordancia del 100% en la identificación de Mycobacterium terrae, M. szulgai, M. avium, M. chelonae y M. scrofulaceum, en las especies M. fortuitum, M. abscessus M. gordonae y M. intracellulare varió de 44% a 89%; no se obtuvo concordancia en la identificación de las especies M. flavescens y M. malmoense. Conclusiones. El análisis de restricción es una alternativa para la identificación de especies de micobacterias no tuberculosas, rápida, económica y segura para la identificación, que permite la diferenciación entre especies de un complejo y la determinación del subtipo de cada especie.

Introduction. Nontuberculous mycobacteria can be saprophytic, pathogenic or opportunistic. The most common diseases produced by these microorganisms are the post-surgical infections due to anesthetic procedures, infections associated with catheters, disseminated cutaneous diseases and pulmonary and central nervous system diseases that especially affect HIV patients. Identification of the nontuberculous mycobacteria can take several weeks and even then, differentiation of complex members is not possible. Objective. The PCR-restriction analysis (PRA) technique was evaluated as a method for genotypic identification of nontuberculous mycobacteria isolated of clinical samples located in the culture collection of the Instituto Nacional de Salud (National Institute of Health), Bogotá, Colombia. Materials and methods. Seventy clinical isolates of nontuberculous mycobacteria stored in 50% glycerol at -70°C were identified by phenotypic techniques. The genotypic identification was made using the PCR-restriction analysis (PRA) using the restriction enzymes BstEII and HseIII, the restriction products were visualized on gels of agarose to 3%, and the concordance between the methodologies was evaluated. Results. A matching of 100% was obtained in the identification of Mycobacterium terrae, M. szulgai, M. avium, M. chelonae and M. scrofulaceum, the matching between M. fortuitum species, M. abscessus, M. gordonae and M. intracellulare varied from 44 to 89%; there was no concurrence in the identification of species M. flavescens and M. malmoense. Conclusions. PRA provided a fast, inexpensive and accurate alternative for the identification of nontuberculous mycobacteria that permited the differentiation among species of a complex and determining the subtype of each species sample.

Evaluación de una prueba de aglutinación directa como método alternativo para el diagnóstico de leishmaniasis visceral canina y humana en Venezuela

Introduction. Visceral leishmaniasis is the most severe clinical form of leishmaniasis and is often fatal without proper treatment. Therefore, early and accurate diagnosis is important, but often difficult in endemic areas. Objective. The aim was to evaluate a direct agglutination test as a potential visceral leishmaniasis diagnostic method in endemic areas of Venezuela Materials and methods. The performance of the direct agglutination test, based on freeze-dried Leishmania donovani antigen was evaluated under laboratory conditions using serum samples of humans and dogs from several Venezuelan visceral leishmaniasis endemic areas: Nueva Esparta (Margarita Island), Lara, Anzoátegui and Trujillo Status. The study included confirmed visceral leishmaniasis patients (n=30), visceral leishmaniasis suspected subjects (n=4), healthy controls (n=19) and patients with other confirmed diseases (n=20). In addition, 24 serum samples from dogs with confirmed visceral leishmaniasis and 18 healthy control dogs were tested. Results. All serum samples of visceral leishmaniasis patients, either active or recovered, were positive. They showed anti-L. donovani titers above 1:1600. Three out of four suspected visceral leishmaniasis cases were also positive, while serum samples from endemic controls and patients with other diseases had titers lower than 1:800. A sensitivity of 100% was obtained for all threshold levels under consideration and 100% specificity at the threshold titer of 1:800 (95% confidence interval: 91-100%). A 93% sensitivity (95% confidence interval: 76-99%) was observed in dog samples, with 100% specificity (95% confidence interval: 79-100%) at the threshold titer of 1:200. Conclusion. The direct agglutination test seems suitable for use in epidemiological studies and for serological diagnosis of human visceral leishmaniasis and canine visceral leishmaniasis.

Introducción. La leishmaniasis visceral es la forma clínica más grave de la leishmaniasis. Ésta puede ser fatal si no se administra el tratamiento adecuado. Por ello, el diagnostico temprano es importante, pero a menudo difícil, en las áreas endémicas. Objetivo. Evaluar el potencial de la prueba de aglutinación directa como un método para el diagnóstico de leishmaniasis visceral en zonas endémicas de Venezuela. Materiales y métodos. La efectividad de la prueba de aglutinación directa con el antígeno congelación-descongelación de Leishmania donovani fue evaluada bajo condiciones de laboratorio usando muestras de sueros de humanos y perros provenientes de diferentes regiones endémicas de leishmaniasis visceral de Venezuela: Nueva Esparta (Isla de Margarita), Estados Lara, Anzoátegui y Trujillo. Se incluyeron pacientes con diagnóstico confirmado de leishmaniasis visceral (n=30), sospecha de leishmaniasis visceral (n=4), voluntarios sanos (n=19) y pacientes con otras enfermedades (n=20). Además, se evaluaron 24 muestras de suero de perros con leishmaniasis visceral y 18 controles. Resultados. Todas las muestras de los pacientes con leishmaniasis visceral activa o curada fueron positivas. Mostraron títulos anti-L. donovani por encima de 1:1.600. Tres de cuatro casos con sospecha de leishmaniasis visceral también resultaron positivos a la prueba, mientras que los sueros controles y los de los pacientes con otras patologías dieron títulos por debajo de 1:800. Se obtuvo una sensibilidad de 100% a todos los puntos de corte considerados y una especificidad de 100% al punto de corte de 1:800 (intervalo de confianza de 95%, IC95%: 90,97%-100%). Las muestras de perros mostraron una sensibilidad de 92,59% (IC95%: 75,69%-99,09%) y 100% de especificidad (IC95%: 79,42%-100%) al punto de corte de 1:200. Conclusión. En general, nuestros resultados indican que el uso de la prueba de aglutinación directa es apropiado para la realización de estudios epidemiológicos y para el diagnóstico serológico de leishmaniasis visceral humana y canina en las áreas rurales de Venezuela.

**Identificación de Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae y Neisseria meningitidis por reacción en cadena de la polimerasa**

Introducción. Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae y Neisseria meningitidis son los principales patógenos humanos causantes de meningitis. Objetivo. Se evaluaron los iniciadores omp2, lytA y crgA en el desarrollo de una reacción en cadena de la polimerasa múltiple, para la identificación simultánea de los tres principales microorganismos responsables de la meningitis bacteriana. Materiales y métodos. Se evaluaron en un formato de PCR múltiple los iniciadores para la proteína de membrana externa (omp2, 1.000 pb) de H. influenzae, la autolisina A (LytA, 395 pb) de S. pneumoniae y el gen regulador de contacto A (cgrA, 230 pb) de N. meningitidis y se determinó la sensibilidad y la especificidad de la técnica. Resultados. Se obtuvieron resultados reproducibles con una concentración de 50 nM de cada uno de los tres iniciadores y una temperatura de anillamiento de 57°C obteniendo una sensibilidad de 12,5 fg para H. influenzae y S. pnemoniae y de 3,12 fg para N. meningitidis. No se presentaron reacciones cruzadas con otros microorganismos causantes de meningitis o relacionados con los géneros. Conclusión. Los resultados de sensibilidad y especificidad sugieren que los iniciadores evaluados pueden ser utilizados para el desarrollo de una PCR en formato múltiple que permita la identificación de los tres principales patógenos causantes de meningitis.

Introduction: Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae and Neisseria meningitidis are the main human pathogens that cause meningitis. Objective: Primers omp2, lytA and crgA were evaluated with H. influenzae, S. pnumoniae and N. meningitidis DNA in a multiplex PCR, determining the sensitivity and the specificity of the technique. Materials and methods: Primers for H. influenzae outer membrane protein (omp2, 1000 pb), S. pneumoniae autolysin (lytA, 395 pb) and N. meningitidis, contact regulated gene (crgA, 230 pb) were evaluated in a multiplex PCR, determining the sensitivity and the specificity of the technique. Results: Reproducible results were obtained with 50 nM of each of the three primers and annealing temperature of 57°C in the multiplex PCR, obtaining a sensitivity of 12.5 fg for H. influenzae and S. pneumoniae and 3.12 fg for N. meningitidis. No cross reactions with other microorganisms agents of meningitis or related with the genera, appeared. Conclusions: The results for sensitivity and specificity suggest that the evaluated primers can be used for the development of a PCR in a multiplex format to the identification of the three main pathogens that cause meningitis.

Detección por reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa inversa del virus de la fiebre amarilla en monos silvestres: una herramienta sensible para la vigilancia epidemiológica

Introducción. La fiebre amarilla es una enfermedad zoonótica mantenida en la naturaleza por primates no humanos; su vigilancia por técnicas sensibles de laboratorio es necesaria para hacer evidente la actividad viral en territorio selvático. Objetivo. Detectar el virus de la fiebre amarilla en muestras de tejido hepático de primates no humanos, mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa inversa (RT-PCR) con iniciadores diagnósticos específicos. Materiales y métodos. Se procesaron muestras de tejido hepático de cinco monos del genero Alouatta spp. encontrados muertos en territorio selvático de los departamentos de Cesar y Magdalena entre diciembre de 2003 y junio de 2004. Las muestras fueron tratadas con una solución de lisis para aislar el ARN viral que, posteriormente, fue utilizado en una RT-PCR, utilizando iniciadores específicos para fiebre amarilla; paralelamente, se identificaron proteínas virales mediante inmunohistoquímica sobre cortes de tejido hepático incluidos en parafina. Resultados. Se obtuvieron productos de amplificación del tamaño esperado, (424 pb) en cuatro de las muestras analizadas; estas muestras mostraron, además, una reacción inmunohistoquímica positiva, lo que confirma la presencia del virus. Conclusión. El hallazgo del virus de la fiebre amarilla en monos silvestres representa una evidencia de su actividad enzoótica en nuestro territorio, que incrementa el riesgo de transmisión a humanos y de urbanización por procesos de migración de la población. La detección por técnicas moleculares rápidas y específicas del virus en monos silvestres representa una herramienta de vigilancia epidemiológica que permite activar de manera precoz los sistemas de control necesarios para impedir brotes y epidemias.

Introduction. Yellow fever is a zoonotic infection maintained in nature by non-human primates. Appropriate surveillance with sensitive laboratory techniques is necessary to evidence viral activity in the tropical forest habitats of these primates. Objective. Yellow fever virus was detected in hepatic tissue samples from non-human primates by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) technique using specific primers for diagnosis. Materials and methods. Hepatic tissue samples were processed from five monkeys belonging genus Alouatta spp found dead in sylvatic areas of Cesar and Magdalena Provinces, Colombia, between December 2003 and June 2004. Samples were treated with lysis buffer prior to the isolation of viral RNA, which was then subjected to reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) using yellow fever-specific primers. Simultaneously, viral proteins were identified by immunohistochemistry on parafin-embedded hepatic tissue. Results. The PCR method amplified fragments of the expected size (424 bp) in four of the tested samples. In addition, these samples showed a positive reaction by immunohistochemistry, supporting the evidence that the virus was present. Conclusion. The detection of yellow fever virus in wild monkeys was clear evidence of enzootic activity in northern Colombia. Increased probability of yellow fever transmission among human populations is indicated due to urbanization processes as a consequence of forced migration and displacement of the human populations. Molecular tests for rapid and specific detection of yellow fever in tissue samples of non-human primates is an important tool for epidemiologic surveillance. Rapid virus identification will permit the timely activation of control systems for prevention of further cases and epidemic situations.