Biomédica

La importancia creciente de las fiebres hemorrágicas en Colombia

**Probable case of flea-borne spotted fever ( Rickettsia felis )**

Rickettsia felis es el agente etiológico de la fiebre manchada transmitida por pulgas, cuyo principal vector y reservorio es Ctenocephalides felis . Típicamente, la enfermedad se presenta como fiebre aguda asociada a cefalea, astenia, exantema máculo-papular generalizado y, en algunos casos, con escara de inoculación. En los últimos años, R. felis ha venido adquiriendo un papel importante en la etiología del síndrome febril agudo, calificándola como una enfermedad emergente y subdiagnosticada. La inmunofluorescencia indirecta es actualmente el método diagnóstico de referencia. Sin embargo, esta técnica presenta limitaciones relacionadas con la reacción cruzada que existe entre las diferentes especies del género Rickettsia . En el presente reporte se describe el caso de un paciente de 16 años con síndrome febril agudo secundario a infección probable por R. felis .

Rickettsia felis is the etiologic agent of flea-borne spotted fever, with Ctenocephalides felis as its main vector and reservoir. Typically, the disease presents as acute fever associated with headache, asthenia, generalized maculo-papular rash, and in some cases, an inoculation eschar. In recent years, R. felis has acquired an important role in the etiology of the acute febrile syndrome; it is indeed an emerging infectious disease, albeit underdiagnosed. Indirect immunofluorescence assay (IFA) is currently the reference diagnostic method. However, this technique has limitations related to the cross reactivity among different species of rickettsiae. Herein, we describe a case of a 16 year-old patient with an acute febrile syndrome secondary to probable infection with R. felis.

Perinatal dengue

El dengue es en la actualidad la enfermedad viral más relevante de transmisión vectorial hiperendémica en las Américas. El incremento en el número de casos se ha relacionado con la aparición de dengue durante la gestación y en el periodo neonatal. De acuerdo con la edad de gestación en la que ocurra la infección, podrían presentarse manifestaciones en el feto, como aborto, y en los pacientes a término, dengue neonatal. En este artículo se presenta una reseña de los casos reportados a nivel mundial, y especialmente en las Américas, así como aspectos fisiopatogénicos de la enfermedad.

Dengue is currently the most important viral disease transmitted by arthropods and which is hyperendemic in the Americas. An increase in the number of cases is related to dengue during pregnancy and the neonatal period. According to the gestational age in which infection occurs, there could be different manifestations in the fetus including abortion, malformations or neonatal dengue in newborns. This article presents a review regarding some cases reported worldwide, especially in the Americas, and some pathophysiologic issues related to perinatal dengue.

Dengue virus serotype 1 (DENV-1) from Colombia: its contribution to dengue occurrence in Santander

Introducción. Los cuatro serotipos del virus del dengue circularon en el departamento de Santander entre 1998 y 2008. No existe información sobre el papel del serotipo 1 (DENV-1) en la epidemiología de la enfermedad. Objetivo. Analizar la relación entre el cambio de predominancia del (DENV-1) con su diversificación genética, predominancia de los otros serotipos y presentación del dengue grave. Materiales y métodos. La diversificación genética se estudió por análisis filogenético usando la secuencia del gen E de 12 cepas del virus. Para el análisis se utilizaron datos sobre predominancia de los serotipos obtenidos en estudios previos y datos oficiales de incidencia del dengue. Resultados. Los virus seleccionados se agruparon en el genotipo V junto a (DENV-1) de países de Latinoamérica y se evidenció segregación en cuatro linajes. Los cambios en la predominancia del virus coincidieron con el reemplazo de linaje y esto, a su vez, con incremento en la prevalencia de DENV-2 y DENV-3, e incremento del dengue grave. Conclusión. La diversificación genética podría contribuir a cambios de predominancia de (DENV-1), y la relación del virus con el DENV-2 y DENV-3 en situaciones que favorecen la presentación de casos graves. Se necesitan más estudios para precisar el papel de los serotipos en la epidemiología del dengue.

Introduction: Between 1998 and 2008 all dengue virus serotypes circulated in the Departamento de Santander, an endemic region in northeastern Colombia. No information is available as to the role of serotype 1 (DENV-1) with respect to epidemiology of dengue. Objective: To analyze the relationship between changes in DENV-1 predominance with respect to genetic diversity, prevalence of others serotypes and occurrence of severe dengue. Methods: Virus genetic diversity was studied by phylogenetic analysis comparing E gene sequences from 12 viral strains. Data about serotypes predominance obtained in previous studies and official data about dengue incidence were used for analysis. Results: Selected viruses grouped into genotype V together DENV-1 from Latin America countries, and segregation in four lineages was evidenced. Changes in virus predominance coincided with replacement of lineage, increase in prevalence of DENV-2 and DENV-3 and increase of severe dengue. Conclusion: Genetic divergence could have contributed to changes in DENV-1 predominance. The relationship of the virus with DENV-2 and DENV-3 could create scenarios that promote occurrence of severe cases. More studies are required to ascertain the precise role of serotypes in the epidemiology of dengue.

**Serologic evidence of human Rickettsia infection found in three locations in Panamá**

Introduction: Since the middle of last century, cases of rickettsiosis have been found in Panamá when outbreaks of murine typhus and spotted fever were reported. Since then, little information exists about its prevalence in this country, since it is most often is misdiagnosed as another disease. Objectives: The aim of this paper is to demonstrate the presence of Rickettsia infections in humans in three locations in Panamá. These locations are agricultural areas, near forested areas or those who work in zoo. Materials and methods: Three locations where chosen for this study: Tortí, El Valle de Antón and workers in the Summit Municipal Park in Panamá City. All volunteers signed an informed consent and answered a questionnaire. The samples were analyzed for the detection of rickettsial spotted fever and typhus group by the indirect immunofluorescence (using commercial kits) and antigens of Rickettsia rickettsii and R. amblyommii. Results: Blood samples were taken from 97 volunteers in Tortí (25), El Valle de Anton (37) and Summit Municipal Park (35). Of these, a total of 38 (39%) samples reacted to one of the two methods: eight (32%) in Tortí, 18 (48%) in El valle and 12 (34%) in Summit Municipal Park. Conclusion: The results show a high prevalence of antibodies to Rickettsia belonging to the spotted fever group in each of the three study areas, in addition to presenting evidence of the typhus group Rickettsia in El Valle de Anton. These areas could be considered endemic for rickettsiosis as there are conditions for maintaining them.

Introducción. Desde mediados del siglo pasado, se conocen en Panamá casos de rickettsiosis, cuando fueron reportados brotes de tifus en ratones y de fiebres manchadas. A partir de entonces, poca información se tiene sobre su prevalencia en este país, lo cual se debe principalmente a que son confundidos con otras enfermedades. Objetivos. El objetivo de este trabajo fue demostrar la presencia de rickettsiosis en humanos provenientes de tres localidades de Panamá, que corresponden a zonas agropecuarias, cercanas a bosques, o que trabajaban en zoológicos. Materiales y métodos. Se escogieron tres localidades para este estudio: Tortí (provincia de Panamá), El Valle de Antón (provincia de Coclé) y el Parque Municipal Summit en Ciudad de Panamá. Los voluntarios firmaron un consentimiento informado, además de responder un cuestionario. De cada voluntario se extrajo sangre venosa, la que fue analizada por medio de inmunoflorescencia indirecta, utilizando kits comerciales y láminas sensibilizadas con antígenos cultivados de Rickettsia rickettsii y Rickettsia amblyommii . Resultados. Se tomaron muestras de 97 voluntarios, 25 en Tortí, 37 en El Valle de Antón y 35 en el Parque Municipal Summit. De estos, 38 (39 %) de las muestras fueron positivas en algunas de las dos técnicas practicadas: 8 (32 %) en Tortí, 18 (48 %) en El Valle y 12 (34 %) en el Parque Municipal Summit. Conclusión. Se demuestra una alta prevalencia de anticuerpos contra Rickettsia del grupo de las fiebres manchadas en las tres áreas de estudio, además de presentarse evidencia de títulos para Rickettsia del grupo tifus en El Valle de Antón. Estas zonas podrían considerarse como endémicas por rickettsiosis, ya que existen condiciones que permiten el mantenimiento de las mismas.

Ecoepidemiology of rickettsial infection in rodents, ectoparasites and humans in northeastern Antioquia, Colombia

Introducción. Las rickettsias son bacterias patógenas usualmente transmitidas por ectoparásitos, como garrapatas, piojos o pulgas. En la última década se presentaron tres brotes de rickettsiosis con casos fatales en la región noroccidental de Antioquia y en un municipio limítrofe de Córdoba. Objetivo. Describir la ecología y la epidemiología de las infecciones por Rickettsia spp. en el Urabá antioqueño. Materiales y métodos. Se obtuvieron muestras de 354 roedores y se recolectaron 839 ectoparásitos de estos en los municipios de Apartadó, Turbo y Necoclí. Asimismo, se obtuvieron 220 sueros humanos. Estas muestras fueron estudiadas por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) e inmunofluorescencia indirecta (IFI) para la detección de infección por rickettsias. Resultados. Por IFI se detectaron anticuerpos antirickettsias en 130 (43 %) de los roedores y en 53 (24 %) de los sueros humanos estudiados. Además, se amplificaron secuencias del gen gltA específicas del género Rickettsia en 23 (6,8 %) muestras de hígado de roedores, las cuales mostraron una similitud del 98,7 % con R. prowazekii . Una secuencia de gltA obtenida de larvas de garrapatas del género Amblyomma sp., tuvo una identidad mayor de 99 % con las secuencias de R. tamurae . Conclusión. Estos resultados demuestran la circulación de rickettsias en roedores, ectoparásitos y humanos en los municipios estudiados.

Introduction: Rickettsia spp. are tick, flea or lice-borne pathogenic bacterium, usually carried by rodents. In the last decade three outbreaks of rickettsial disease including fatalities, occurred in the provinces of Antioquia and Córdoba in northwestern Colombia. Objective: The purpose of this study was to perform an ecological and epidemiological description of the Rickettsia spp infection in the recently affected region of Colombia. Materials and methods: Samples were obtained from 354 rodents and their parasites captured in the municipalities of Apartadó, Turbo and Necoclí. Likewise, 220 human sera were also collected, for detection of infection by Rickettsia spp. Results: Indirect immunofluorescence assay (IFA) revealed that 130 (43%) of the rodents and 53 (24%) of the humans produced antibodies to Rickettsia spp. Additionally, rickettsial DNA was amplified by PCR from 23 (6.8%) rodent liver samples using primers directed to the genus specific gltA gene. While gltA sequences from rodent samples exhibited a 98.7% similitude with R . prowazekii, a sequence amplified from larvae of Amblyomma sp exhibited identities of >99% similarity with R. tamurae . Conclusion: These results demonstrate the presence of rickettsia in rodents, ectoparasites and humans throughout the municipalities studied.

Trends in yellow fever mortality in Colombia, 1998-2009

Introducción. La fiebre amarilla es una enfermedad tropical desatendida, razón por la cual el conocer las tendencias de mortalidad por fiebre amarilla en Colombia, constituye una importante fuente de información para la toma de decisiones y las intervenciones en salud pública. Objetivo. Analizar las tendencias de mortalidad fiebre amarilla en Colombia (1998-2009) y las diferencias que presentan las fuentes de información de morbilidad y mortalidad en el país, que afectan indicadores como el de letalidad . Materiales y métodos. Es un estudio descriptivo de las muertes por fiebre amarilla, según el Departamento Administrativo Nacional de Estadística, y de la incidencia de la enfermedad, según el Instituto Nacional de Salud. Se usaron fuentes secundarias de información en el cálculo de proporciones de las características sociodemográficas de los fallecidos y las medidas epidemiológicas de letalidad, incidencia y mortalidad por fiebre amarilla, por departamento de residencia de los fallecidos. Resultados. Las muertes por fiebre amarilla se presentan principalmente en hombres, en edad de trabajar, residentes en zonas rurales dispersas, afiliados al régimen vinculado, residentes en las zonas oriental, suroriental, norte y central del país. Se observaron inconsistencias en los informes reportados que afectan el análisis comparativo. Conclusión. Los habitantes de los departamentos ubicados en los territorios nacionales y en Norte de Santander presentan mayor riesgo de enfermar y de morir por fiebre amarilla, pero esta información pudiera estar subestimada, según la fuente de información utilizada en su cálculo.

Introduction: Yellow fever is a neglected tropical disease, thus, knowing the trends in mortality from this disease in Colombia is an important source of information for decision making and identifying public health interventions. Objective: To analyze trends in yellow fever mortality in Colombia during the 1998-2009 period and the differences in the morbidity and mortality information sources for the country, which affect indicators such as the lethality one. Materials and methods: This is a descriptive study of deaths by yellow fever according to the Departamento Administrativo Nacional de Estadística and the incidence of the disease according to the Instituto Nacional de Salud . We used secondary sources of information in the calculation of proportions of socio-demographic characteristics of the deceased and epidemiological measures of lethality, incidence and mortality from yellow fever by department of residence of the deceased. Results: Yellow fever deaths occur primarily in men of working age residing in scattered rural areas, who were members of the regimen vinculado, and who were living in the eastern, southeastern, northern and central zones in the country. We observed inconsistencies in the reports that affect the comparative analysis. Conclusion: The inhabitants of the departments located in national territories and Norte de Santander have an increased risk of illness and death from yellow fever, but this information could be underestimated, according to the source of information used for its calculation.

Biochemical alterations as prediction markers for the severity of illness in dengue fever patients

Introducción. El dengue es la infección transmitida por mosquitos más importante en el mundo. Existe información de que las alteraciones bioquímicas pueden utilizarse como herramientas predictoras de gravedad del dengue. Objetivo. Evaluar las alteraciones bioquímicas como posibles marcadores predictores de gravedad del dengue. Materiales y métodos. Se llevó a cabo un estudio de casos y controles anidado en una cohorte. Se seleccionaron al azar 125 casos con dengue grave y 120 controles con dengue no grave para evaluar los niveles séricos de lactato-deshidrogenasa (LDH), creatina cinasa (CK), proteína C reactiva (PCR) y albúmina, en sueros obtenidos en las primeras horas de la enfermedad. Para evaluar el valor diagnóstico de cada biomarcador, se establecieron puntos de corte con una sensibilidad del 90 % en la detección de casos graves. Resultados. Se observó una asociación entre los niveles de PCR por debajo de 9,8 mg/l (OR=0,04; IC 95% =0,02-0,08 ; p=0,000), de LDH inferiores a 400 U/L (OR=0,49; IC 95% =0,24-1,02; p=0,053) y de albúmina menor de 4 mg/dl (OR=3,46; IC 95% =1,96-6,12; p=0,000), con la gravedad del dengue. En contraste, los niveles de la CK no mostraron asociación con la gravedad de la enfermedad. Conclusiones. Los hallazgos de nuestro estudio sugieren una asociación de los niveles de PCR, LDH y albúmina con la gravedad del dengue. Estas pruebas bioquímicas podrían ser utilizadas como herramientas predictoras del curso clínico de la infección.

Introduction: Dengue is the most important mosquito-borne infection in the world. There is evidence supporting the use of biochemical alterations as prediction tools for severity of illness in dengue. Objective: To evaluate biochemical alterations as potential prediction markers for severity in dengue. Materials and methods: This was a case-control study nested in a cohort. We randomly selected 125 severe dengue cases and 120 controls with non-severe dengue for measuring LDH, CK, CRP and albumin serum levels using acute phase sera. To evaluate the predictive value for each biomarker, we established cut-off points with 90% sensitivity in detecting severe cases. Results: There was association among the CRP levels < 9.8 mg/L (OR=0.04; 95%CI=0.02-0.08; p=0.000), <400 U/L LDH levels (OR=0.49; 95%CI=0.24-1.02; p=0.053) and <4 mg/dl albumin levels (OR=3.46; 95%CI=1.96-6.12; p=0.000) with the severity of dengue. In contrast, the CK levels showed no association with the severity of the disease. Conclusions: Our findings suggest an association of CRP, LDH and albumin levels with the severity of dengue. These biochemical tests could be used as predictive tools in the clinical course of the infection.

**Determining the status of susceptibility to organophosphate, carbamate and pyrethroids insecticides in populations of Aedes aegypti Linneaus, 1762 ( Diptera: Culicidae ) in Panamá**

Introducción. Se llevó a cabo un estudio para determinar la sensibilidad de Aedes aegypti provenientes de regiones de alto riesgo de transmisión de dengue en Panamá, a insecticidas organofosforados, carbamatos y piretroides. Objetivo. Evaluar la sensibilidad a insecticidas piretroides, organofosforados y carbamatos en poblaciones de Ae. aegypti provenientes de ocho sitios pertenecientes a siete municipios de Panamá. Materiales y métodos. Se recolectaron poblaciones de Ae. aegypti en diferentes tipos de criaderos localizados en áreas urbanas y se criaron en condiciones controladas de laboratorio. Con la generación F 1 de cada una de las cepas se hicieron bioensayos de sensibilidad siguiendo la metodología estandarizada por la Organización Mundial de la Salud para larvas y adultos. Resultados. Las ocho cepas de Ae. aegypti resultaron sensibles a los insecticidas piretroides deltametrina, lambdacihalotrina y ciflutrina, el organofosforado fenitrotión y los carbamato propoxur y bendiocarb. Solo la cepa CHITRE resultó con resistencia moderada al insecticida deltametrina en larvas (FR 50 =5x). Sin embargo, en adultos resultó sensible. Conclusiones. Es necesaria la vigilancia periódica de la sensibilidad de las poblaciones de Ae. aegypti de los municipios evaluados, con el propósito de conservar en las poblaciones el carácter sensible a estos insecticidas. Los insecticidas aplicados para el control de Ae. aegypti pueden seguir siendo utilizados en los municipios evaluados, pero depende de la sensibilidad de los mosquitos en el área específica.

Introduction: We studied the susceptibility to organophosphate, carbamate and pyrethroid insecticides of Aedes aegypti from different regions of high transmission risk for dengue in Panama. Objective: To evaluate the susceptibility to organophosphate, carbamate and pyrethroid insecticides in Ae. aegypti from eight sites belonging to seven municipalities in Panamá. Materials and methods: We collected Ae. aegypti larval populations in different types of breeding sites located in urban areas. Insects were reared in laboratory control conditions. With the F 1 generation of each strain we performed susceptibility bioassays using WHO standardized methodology for larvae and adults. Results: The eight Ae. Aegypti strains were susceptible to the pyrethroid insecticides: deltamethrin, lambdacyhalothrin and cifluthrin, to the organophosphate fenitrothrion, and to the carbamates propoxur and bendiocarb. Only the CHITRE strain exhibited a moderate resistance to the insecticide deltamethrin in larvae (FR 50 =5x). However, adults were susceptible. Conclusions: It is necessary to perform periodic surveillance to evaluate the susceptibility of Ae. aegypti populations in the studied municipalities with the purpose of preserving their susceptible. The insecticides applied for Ae. aegypti control can still be used in the evaluated municipalities; however it will depend on the susceptibility of the mosquitoes in the specific area.

Histopathological kidney alterations in rats naturally infected with Leptospira

Introduction: Histopathological changes by Leptospira in naturally infected rodent reservoirs have been poorly described. Objective: The aim of the current study is to describe renal histopathology associated with leptospirosis infection of naturally infected rodents captured in the urban area of the city of Medellin, Colombia. Materials and methods: We performed hematoxilin-eosin (H-E) on kidney samples collected from 254 captured rodents. The positive samples were processed by Warthin Starry (W-S) staining and PCR- LipL 32. Results: Fifty one rodent kidneys showed H-E histopathological changes that consisted of inflammatory infiltrate with lympho-plasmocitary cells and histiocytes. We performed W-S staining and PCR- LipL 32 to 67 kidney samples, including the 51 that had shown detectable changes by H-E and 16 (8%) of 203 rodents with negative results. Eight of the samples that tested positive for H-E (15.7%) were also positive for W-S staining. All negative for H-E were also negative for W-S staining. Of the W-S positive samples also tested for culture only three tested positive for both. Additionally, 47 (92.1%) samples positive for H-E were positive for PCR; while eleven of the 16 (68.8%) negative for H-E were positive for PCR. The samples positive for PCR were subsequently tested for culture and 11 (23.4%) were positive. Seven samples were positive for PCR and W-S and three were positive for PCR, W-S and culture. All of the PCR- LipL 32 fragments were sequenced and showed specific amplicons for L. interrogans . Conclusions: The Leptospira infection was confirmed in all of the animals tested. The only histological kidney lesion attributable to leptospiral infection in the reservoir was interstitial nephritis.

Introducción. Los hallazgos histopatológicos ocasionados por Leptospira spp. han sido poco estudiados en poblaciones de roedores naturalmente infectados. Objetivo. Describir la histopatología renal asociada con las infecciones naturalmente adquiridas en un grupo de roedores capturados en el área urbana de Medellín, Colombia. Materiales y métodos. Se llevaron a cabo coloraciones de hematoxilina y eosina de los riñones de 254 roedores recolectados en el área de estudio. Las muestras positivas se procesaron con la coloración de Warthin-Starry y mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR)-LipL32. Results. Se observaron cambios histopatológicos con hematoxilina y eosina en 51 riñones de roedores, que consistieron en infiltrado inflamatorio con linfoplasmocitos e histiocitos. Se utilizó coloración de Warthin-Starry y PCR-LipL32 en 67 muestras de riñón que incluyeron las 51 muestras que tuvieron cambios detectables por hematoxilina y eosina y 16 de 203 (8 %) muestras con resultados negativos. Ocho de las muestras positivas por hematoxilina y eosina (15,7 %) también fueron positivas por la coloración de Warthin-Starry. Las muestras negativas por hematoxilina y eosina (8 %) también fueron negativas con la coloración de Warthin-Starry. Tres de las ocho muestras positivas por esta última, también lo fueron por cultivo. Además, 47 (92,1 %) muestras positivas por hematoxilina y eosina fueron positivas por PCR. Del grupo de 16 negativos por hematoxilina y eosina, 11 (68,8 %) fueron positivos por PCR. De las muestras positivas por PCR, 11 también lo fueron por cultivo (23,4 %). Siete muestras fueron positivas por PCR y Warthin-Starry y tres lo fueron por PCR, Warthin-Starry y cultivo. Todos los fragmentos de la PCR-LipL32 fueron secuenciados y mostraron secuencias específicas de L. interrogans . Conclusiones. Se confirmó la infección por Leptospira y la única lesión presente en el reservorio atribuible fue la nefritis intersticial.

**Genetic differences between populations of Aedes aegypti from municipalities in northern Colombia, with high and low dengue incidence**

Introducción. Aedes aegypti es el principal vector del dengue en zonas urbanas. A pesar de su importancia epidemiológica, se desconoce la variabilidad genética de las poblaciones del vector en Colombia. Objetivo. Determinar la variabilidad genética del gen mitocondrial ND4 , que codifica para la subunidad 4 de la enzima NADH-deshidrogenasa, entre poblaciones de Ae. aegypti de los municipios de Sincelejo y Guaranda, donde se registra alta y baja incidencia de dengue, respectivamente. Materiales y métodos. A partir del material genético extraído de 36 hembras de Ae. aegypti , se determinó la secuencia parcial del gen mitocondrial ND4 y se estimaron los parámetros de diversidad de nucleótidos, diversidad haplotípica, estructura genética y flujo de genes entre las poblaciones de Sincelejo y Guaranda. También, se analizó la varianza molecular y se construyó una red haplotípica. Resultados. Se obtuvieron 36 secuencias de nucleótidos de 282 pb; éstas presentaron doce sitios polimórficos y se agruparon en diez haplotipos, dos presentes en ambas poblaciones, tres exclusivos de la población de Sincelejo y cinco de la población de Guaranda. Los estimadores de estructura genética ( F ST =0,15) y de flujo de genes ( Nm =1,40) evidencian diferenciación genética y un limitado intercambio de genes entre las poblaciones. Conclusión. Las poblaciones de Ae. aegypti de Sincelejo y Guaranda son genéticamente divergentes.

Introduction: Aedes aegypti is the principal vector of dengue in urban areas. Despite its epidemiological importance, the genetic variability of Colombian populations of this species is unknown. Objetive: To determine the genetic variability of mitocondrial gene ND4, which codes for subunit 4 of the enzyme NADH deshydrogenase, between populations of Ae. aegypti from municipalities of Sincelejo and Guaranda. The incidences of dengue reported from these two localities are high and low, respectively. Materials and methods: Genetic material extracted from 36 females of Ae. aegypti was used to determine the partial sequence of the mitocondrial gene ND4 as well as to estimate the parameters of nucleotidic and haplotypic diversities, genetic structure and gene flow between the Sincelejo and Guaranda populations. The molecular variance was also analysed and a haplotypic network constructed. Results: In all 36 nucleotide sequences of 282pb were obtained. These presented 12 polymorphic sites and could grouped into 10 haplotypes, two of them present in both populations, three exclusive to the Sincelejo population and five to that of Guaranda. The estimators of genetic structure ( F ST = 0.15) and gene flow ( Nm = 1.40) are both indicative of genetic differentiation and a limited exchange of genes between the populations. Conclusions: The Sincelejo and Guaranda populations of Ae. aegypti are genetically divergent.

Etiology and epidemiological characterization of non-malarial febrile syndrome in three municipalities of Urabá (Antioquia), Colombia

Introducción. La región de Urabá es endémica para varias enfermedades febriles agudas de origen infeccioso. Sin embargo, solo los pacientes con malaria pueden acceder a un diagnóstico oportuno y rápido, motivo por el cual muchos síndromes febriles no palúdicos quedan sin diagnóstico etiológico claro. Objetivo. Establecer la etiología, describir las manifestaciones clínicas y explorar algunos posibles factores de riesgo relacionados con los síndromes febriles agudos no palúdicos en pacientes procedentes de los municipios de Necoclí, Turbo y Apartadó. Materiales y métodos. Se tomaron muestras de suero en fase aguda y de convalecencia de 220 pacientes febriles negativos para malaria, provenientes de zonas rurales y urbanas de Necoclí, Turbo y Apartadó en los años 2007 y 2008. Se practicaron pruebas para diagnóstico de dengue (detección de anticuerpos IgM por ELISA), leptospirosis (detección de anticuerpos IgM e IgG por IFI), rickettsiosis (detección de anticuerpos IgG por IFI), hantavirus y arenavirus (detección de anticuerpos IgG por ELISA). Resultados. Se encontraron frecuencias de dengue, leptospirosis, rickettsiosis y arenavirus de 37,3 %, 14,1 %, 2,7 % y 0,5 %, respectivamente. Se presentaron 12 casos de coinfección de leptospirosis-dengue y uno de leptospirosis-rickettsiosis-dengue. El sexo masculino y la humedad relativa media, fueron factores de riesgo para dengue. El inicio de signos clínicos en febrero de 2008, se asoció tanto con la infección por dengue como por leptospirosis. Conclusión. Se reafirma la importancia del virus del dengue, Rickettsia spp. y Leptospira spp., como agentes causantes del síndrome febril en la región del Urabá.

Introduction: Urabá, a region on the northern coast of Colombia, is endemic to several acute febrile illnesses of infectious origin; however, only patients with malaria may have access to quick and effective diagnosis. For this reason, many non-malarial febrile patients go without a clear etiologic diagnosis. Aim: To establish the etiology and clinical signs of acute febrile non-malaria syndromes and explore some of the likely risk factors in patients originating in the municipalities of Necocli, Turbo and Apartado who exhibit these symptoms. Materials and methods: We obtained acute and convalescent sera from 220 non-malarial febrile patients from the rural and urban zones of Necocli, Turbo and Apartado during 2007 and 2008. Serologic tests for dengue (IgM by ELISA), leptospirosis (IgM and IgG by IFA), rickettsiosis (IgG by IFI), hanta and arenavirus (IgG by ELISA) were performed. Results: We found that the frequency of infection for dengue, leptospirosis, rickettsiosis and arenavirus, was 37.3%; 14.1%; 2.7% and 0.5%, respectively. There were 12 co-infection cases of leptospirosis-dengue and one of leptospirosis-rickettsiosis-dengue. Male gender and relative humidity were considered risk factors for dengue, and the beginning of clinical signs in February of 2008 was associated with the infection of dengue and leptospirosis. Conclusion: This study confirms previous records that underline the importance of Rickettsia spp, dengue virus and Leptospira spp as causal agents of febrile syndrome in this region of Colombia.

Biomarkers for the prognosis of severe dengue

Introduction: There are very few strategies for the early detection of the patients who might develop the severe form of the illness. Objective: To evaluate the utility of serum levels of some immune response mediators as early biomarkers for the severe dengue prognosis during the early phase of the illness. Materials and methods: Using a case-control design nested in a multicenter cohort from the AEDES network (a Colombian multicenter study), we compared TNF a, ST2, TRAIL and IDO levels in samples which were obtained during the early phase of the illness. Results: ST2, TRAIL and TNF a levels were higher in severe dengue patients compared with uncomplicated patients (p<0.0001), as follows: OR=24.8, CI95%= 6.1- 98.0; OR=18.0, CI95%= 4.6-69.1; OR=NC, CI95%= NC, respectively. We did not find statistically significant differences between IDO levels in severe dengue and uncomplicated dengue (p=1.000, OR=1.0, CI95%= 0.2-6.1). Conclusions: In the early phase of the dengue infection (96 hours), ST2, TRAIL and TNF a quantifications could contribute to the prediction of complications of the illness.

Social and environmental risk factors associated with leptospirosis of inpatient and outpatient management, Turbo, Colombia

Introducción. La leptospirosis es un problema de salud pública en el Urabá colombiano y poco se sabe sobre las condiciones ambientales y sociales de esta enfermedad en la región. Objetivo. Explorar algunos factores de riesgo relacionados con leptospirosis de manejo hospitalario y ambulatorio, en pacientes del municipio de Turbo durante los años 2010 y 2011. Materiales y métodos. Mediante un estudio descriptivo se exploraron factores relacionados con la exposición a Leptospira spp. (aspectos socio-demográficos, hábitos, condiciones físicas y de saneamiento de la vivienda, hacinamiento, fuentes de agua potable, presencia de roedores sinantrópicos y convivencia con animales) en pacientes con leptospirosis que requirieron manejo hospitalario en el municipio de Turbo durante los años 2010 y 2011. Se utilizaron medidas estadísticas estandarizadas para estudios descriptivos. Resultados. Se encontró que el hábito de caminar descalzo en ambientes domésticos representó 4,27 (1,32-13,82) veces el riesgo para presentar leptospirosis de manejo hospitalario (p=0,012). El análisis multivariado exploratorio mostró que la presencia de fauna silvestre en las viviendas puede estar relacionada también con casos de manejo hospitalario. Este hallazgo representó 4,22 (1,13-15,72) veces el riesgo comparado con los casos ambulatorios que manifestaron no tener este tipo de animales dentro de la vivienda (p=0,032). Conclusión. Este estudio plantea bases para diseñar e implementar intervenciones efectivas, orientadas desde el perfil de riesgos al que se exponen sus habitantes, en un área geográfica que exhibe una epidemiología dinámica de contexto complejo para leptospirosis.

Introduction: Leptospirosis is a public health problem in the Colombian Urabá area and little is known about the environmental and social conditions of this disease in the region. Objective: To explore some risk factors associated with leptospirosis of inpatient and outpatient management in the municipality of Turbo during the years 2010-2011. Materials and methods: A descriptive study was performed to explore factors related to Leptospira spp. exposure (socio-demographic aspects, habits, housing physical and sanitary conditions, overcrowding, drinking water sources, presence of synanthropic rodents, and living with animals) in patients with leptospirosis that required hospital management in the municipality of Turbo during the years 2010 and 2011. We used standard statistical measures for descriptive studies. Results: We found that the habit of barefoot walking in domestic environments represented 4.27 (1.32 to 13.82) times the risk for leptospirosis present in inpatient management (p=0.012). Exploratory multivariate analysis showed that the presence of wildlife in homes could also be related to cases of inpatient management. This finding represented 4.22 (1.13 to 15.72) times the risk compared with outpatient cases reported as not having this type of animals inside their home (p=0.032). Conclusion: This study suggests a basis for designing and implementing effective interventions, thought from the risk profile its inhabitants are exposed to, in a geographic area that exhibits a dynamic epidemiology of complex leptospirosis context.

Mass communication of dengue surveillance data: effect of an intervention in Guadalajara de Buga, Colombia

Introducción. La retroalimentación a las comunidades de la situación de dengue en su localidad, podría ser útil para mantener la motivación para su participación en el control del dengue y disminuir los índices entomológicos de Aedes . Objetivos. Evaluar la cobertura y el alcance de una intervención basada en la difusión masiva de reportes situacionales sobre el dengue y su efecto en la presencia de criaderos intradomiciliarios de Aedes spp. en Guadalajara de Buga, Colombia. Materiales y métodos. Se llevó a cabo un estudio observacional de corte transversal en 1.426 viviendas, para establecer la presencia de criaderos intradomiciliarios y caracterizar la exposición a la intervención. El efecto de la intervención se evaluó en un estudio de casos y controles. Los casos obedecieron al total de viviendas con criaderos positivos y, entre las viviendas sin criaderos positivos ubicadas en la misma manzana del caso, se seleccionaron aleatoriamente cuatro controles por caso. Resultados. El índice de viviendas positivas fue de 2,5 %. La cobertura fue del 59,4 % y el alcance del 22,3 %. El contacto con la intervención no se asoció con la ausencia de criaderos intradomiciliarios positivos. La presencia de matas con agua o floreros se asoció con criaderos positivos (p=0,01) y el uso de anjeos se consideró como factor protector (p=0,02). Conclusiones. Aunque la cobertura de la intervención fue adecuada, no se observó que tuviera efecto sobre la ausencia de criaderos intradomiciliarios positivos. Por lo tanto, se requiere la evaluación de la intervención en términos de su fidelidad, diseño y proceso de implementación.

Introduction: Maintaining communities abreast of their local dengue situation could help to keep them motivated to participate in dengue control and to decrease Aedes entomological indexes. Objectives: To evaluate the coverage and reach of an intervention based on mass-media communication of dengue surveillance reports and its effect on the presence of intra-domiciliary breeding sites for Aedes in Guadalajara de Buga, Colombia. Materials and methods: An observational cross-sectional study was conducted in 1,426 households to identify the intra-domiciliary breeding sites and to characterize the intervention exposure. To evaluate the effect of the intervention, a case-control study was performed. All households with positive breeding sites were considered as cases. Four controls per case were randomly selected among the non-positive breeding site households located on the same block of the case. Results: The positive house index was 2.5%; coverage was 59.4% and reach was 22.3%. There was no association between the intervention and the presence of intra-domiciliary breeding sites. The presence of water plants and flower pots were associated to positive breeding sites (p=0.01) and the use of screens was associated to the absence of breeding sites (p=0.02). Conclusions: Although intervention coverage was adequate, the lack of association between the intervention and the absence of positive breeding sites requires assessing its fidelity, factors related to the design, and the implementation process.

Modelling the effect of local climatic variability on dengue transmission in Medellin (Colombia) by means temporary series analysis

ntroducción. El dengue es una enfermedad de transmisión vectorial de gran impacto en la salud pública. La transmisión del dengue es afectada por factores entomológicos, socioculturales y económicos. Además, la variabilidad climática juega un importante papel en la dinámica de transmisión. Un amplio consenso científico ha indicado que la fuerte asociación entre la enfermedad y las variables climáticas podría ser empleada para desarrollar modelos que expliquen la incidencia de la enfermedad. Objetivo. Desarrollar un modelo que permita comprender la dinámica de transmisión del dengue en Medellín y predecir incrementos en la incidencia de la enfermedad. Materiales y métodos. Se empleó la incidencia de dengue como variable dependiente y como variables independientes, los factores climáticos (temperatura máxima, media y mínima, humedad relativa y precipitación) registrados a escala semanal. Se utilizó el programa Expert Modeler para desarrollar un modelo que explique mejor el comportamiento de la enfermedad. Mediante modelos ARIMA, se seleccionaron las variables climáticas que tuvieron una relación significativa con la variable dependiente. Resultados. El 34 % de la variabilidad observada se explicó por el modelo. La precipitación fue la variable climática que mostró una asociación estadísticamente significativa con la incidencia del dengue, pero con un rezago de 20 semanas. Conclusiones. La transmisión del dengue en Medellín se vio afectada por la variabilidad climática, en particular, por la precipitación. La fuerte asociación entre el dengue y la precipitación permitió construir un modelo que ayuda a comprender la dinámica de transmisión, información que será de gran utilidad para el desarrollo de adecuadas y oportunas estrategias de control.

Introduction: Dengue fever is a major impact on public health vector-borne disease, and its transmission is influenced by entomological, sociocultural and economic factors. Additionally, climate variability plays an important role in the transmission dynamics. A large scientific consensus has indicated that the strong association between climatic variables and disease could be used to develop models to explain the incidence of the disease. Objective: To develop a model that provides a better understanding of dengue transmission dynamics in Medellin and predicts increases in the incidence of the disease. Materials and methods: The incidence of dengue fever was used as dependent variable, and weekly climatic factors (maximum, mean and minimum temperature, relative humidity and precipitation) as independent variables. Expert Modeler was used to develop a model to better explain the behavior of the disease. Climatic variables with significant association to the dependent variable were selected through ARIMA models. Results: The model explains 34% of observed variability. Precipitation was the climatic variable showing statistically significant association with the incidence of dengue fever, but with a 20 weeks delay. Conclusions: In Medellin, the transmission of dengue fever was influenced by climate variability, especially precipitation. The strong association dengue fever/precipitation allowed the construction of a model to help understand dengue transmission dynamics. This information will be useful to develop appropriate and timely strategies for dengue control.

Epidemiological surveillance of human leptospirosis in Colombia, 2007-2011

Introducción. La leptospirosis es una zoonosis reemergente de distribución mundial causada por una espiroqueta del género Leptospira. Durante los últimos años en Colombia aumentó el número de casos en humanos y animales. Objetivo. Caracterizar epidemiológicamente los casos de leptospirosis notificados al Sistema Nacional de Vigilancia en Salud Pública de Colombia y hacer una aproximación para conocer los serogrupos que circulan en el país. Materiales y métodos. Se diseñó un estudio observacional de corte retrospectivo, con registros del proceso de vigilancia de los casos reportados por el software Sivigila y muestras enviadas al Grupo de Microbiología de la Red Nacional de Laboratorios, durante el periodo 2007 a 2011. Se registraron variables de tipo sociodemográficas y se analizaron 17 serogrupos de Leptospira . En el análisis se utilizaron medidas de frecuencia, tendencia central y dispersión. Resultados. Se procesaron 11.786 registros, confirmándose 4.621 casos de leptospirosis. Las entidades territoriales con mayor registro fueron Valle del Cauca, Antioquia, Risaralda, Atlántico y Barranquilla; y las de incidencia más alta fueron Guaviare, Risaralda, San Andrés, Santa Marta y Barranquilla. El mayor número de casos reportados perteneció al área urbana, con mayor frecuencia de hombres (77 %), estudiantes (19,4 %) y amas de casas (13,6 %), con una mediana por edad de 29 años (rango intercuartílico: 45-19). Se evidenció la circulación de 17 serogrupos en el país; los más frecuentes fueron Australis (24,89 %), Hebdomadis (9,33 %) y Sejroe (8,0 %). Conclusión. En Colombia se ha mejorado la notificación y clasificación final de los casos, lo que ha permitido identificar al serogrupo Australis como el de mayor circulación.

Introduction: Leptospirosis is a reemerging zoonosis of worldwide distribution, caused by a spirochete of the genus Leptospira . In Colombia, the disease represents a major public health issue, and there has been an increased number of cases in humans and animals. Objective: To characterize epidemiologically cases of leptospirosis reported to the National Public Health Surveillance in Colombia, and to make an approach to determine the serogroups circulating in the country. Materials and methods: A retrospective observational study was designed using a process of monitoring records, which included cases reported by the software SIVIGILA and samples sent to the Microbiology Group of the National Laboratory Network (GM-RNL), for the period 2007-2011. We registered socio-demographic variables and analyzed 17 serogroups of Leptospira . Results: A total of 11,786 records were processed, with 4,621 confirmed cases of leptospirosis. The geographic places which reported the highest number of cases were: Valle del Cauca, Antioquia, Risaralda, Atlántico and Barranquilla, and those with the highest incidence were Guaviare, Risaralda, San Andres, Santa Marta and Barranquilla. The largest number of cases was from urban areas, and more commonly in men (77%), students (19.4%) and housewives (13.6%). A median age of 29 years (IQR 45-19) was observed. There was evidence of 17 serogroups circulating in the country, from which the three most frequent were Australis (24.89%), Hebdomadis (9.33%) and Sejroe (8.0%). Conclusions: In Colombia, the reported cases have improved as well as their final classification, allowing us to determine the Australis serogroup as the most widely circulating one.

Tick-borne rickettsioses in the Americas: clinical and epidemiological advances, and diagnostic challenges

Las rickettsiosis son entidades clínicas de tipo zoonótico, causadas por bacterias intracelulares estrictas de los géneros Rickettsia y Orientia, pertenecientes a la familia Rickettsiaceae. Su ecología está determinada por factores ambientales y la presencia de vectores específicos que condicionan el establecimiento y la epidemiología en diferentes regiones del mundo. En las Américas, durante el siglo XX, únicamente eran reconocidas tres de estas enfermedades: la fiebre manchada de las Montañas Rocosas, el tifus epidémico y el tifus endémico, Sin embargo, a partir del año 2000 se han descrito mas de 10 especies diferentes previamente desconocidas en este continente, tanto en artrópodos como en casos clínicos, hecho que permite clasificarlas como entidades clínicas emergentes y reemergentes. Dadas las manifestaciones clínicas de las enfermedades causadas por rickettsias, siendo la gran mayoría inespecíficas y, por lo mismo, compartidas con otras enfermedades infecciosas, especialmente virales y bacterianas, han sido enmarcadas entre los diagnósticos diferenciales del síndrome febril agudo, tanto en áreas urbanas como tropicales. En la actualidad, se cuenta con métodos diagnósticos directos e indirectos, que son útiles en la identificación del agente infeccioso, en este caso, causante de rickettsiosis.

Rickettsioses are a group of zoonotic diseases caused by strict intracellular bacteria of the genus Rickettsia and Orientia which belong to the Rickettsiaceae family. Their ecology is influenced by environmental factors and the presence of specific vectors that determine the establishment and epidemiology in different world regions. In America, during the 20 th century, only three of these diseases were recognized: Rocky Mountain spotted fever, epidemic typhus and endemic typhus. However, since 2000, more than 10 different species that had previously been unknown in this continent have been described, both in arthropods and in clinical cases, fact that classifies them as emerging and re-emerging diseases. Given the clinical manifestations of the diseases caused by rickettsias, being the majority unspecific and, therefore, shared with other infectious diseases, especially viral and bacterial, they have been framed within the differential diagnoses of acute febrile syndrome in urban and tropical areas. Nowadays, there are direct and indirect diagnostic methods, which are useful in the definition of the infectious agent, in this case, the cause of rickettsioses.

**Molecular serovar characterization of Leptospira isolates from animals and water in Colombia**

Introduction: Leptospirosis is a bacterial disease transmitted directly or indirectly from animals to humans that may result in severe hemorrhagic, hepatic/renal and pulmonary disease. There are 20 known Leptospira species and hundreds of serovars, some of which belong to different species. It is essential to identify pathogenic Leptospira serovars and their potential reservoirs to prepare adequate control strategies. Objective: To characterize the Leptospira serovars isolated from rodents, dogs, pigs and water samples in Colombia. Materials and methods: Leptospira organisms were isolated and cultured, and pathogenic strains were identified using a polymerase chain-reaction (PCR). Leptospira DNA and Salmonella Braenderup H9812 (molecular weight standard) DNA were cleaved using NotI and subjected to pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). The PFGE patterns were analyzed based on bacterial strain-typing criteria and Dice coefficients (DCs) between these isolates and over 200 Leptospira organisms isolated from other parts of the world. Results: All of the isolates were pathogenic strains, and five were genetically characterized. The P275 (84% DC) and P282 (95% DC) pig isolates were related to the Leptospira interrogans Pomona serovar; the I15 (DC: 100%) rat isolate was identical to the Leptospira interrogans Icterohameorrhagiae or Copenhageni serovars, while the C67 (64% DC) dog and A42 (60% DC) water isolates were not related (< 73.7% DC) to any of the 200 reference serovars; the closest serovars were the Leptospira noguchii Nicaragua and Orleans serovars, respectively. Conclusion: This was the first molecular characterization of Colombian Leptospira spp isolates; these isolates will be used to develop a Colombian diagnostic panel.

Introducción. La leptospirosis es una infección bacteriana transmitida directa o indirectamente de animales a humanos, la cual puede resultar en una enfermedad hemorrágica grave, hepática o renal y pulmonar. Hay 20 especies de Leptospira conocidas y cientos de serovariedades, algunas de las cuales pertenecen a diferentes especies. Es esencial identificar las serovariedades patógenas y sus reservorios potenciales para enfocar estrategias de control. Objetivo. Caracterizar las serovariedades de Leptospira aisladas de muestras de roedores, perros, cerdos y agua en Colombia. Materiales y métodos. Las cepas de leptospiras aisladas fueron identificadas como patógenas usando la reacción en cadena de la polimerasa (PRC). Sus ADN y el ADN de Salmonella Braenderup H9812 (marcador de peso molecular) fueron cortados con NotI y corridos en electroforesis de campo pulsado. Los patrones de la ECP se analizaron con base en los criterios de tipificación para cepas bacterianas y el coeficiente de Dice, cuando se compararon con 200 cepas aisladas en otras partes del mundo. Los perfiles de ADN con un coeficiente de Dice entre 73,7 % y 100 % se consideraron pertenecientes a la misma especie. Resultados. Todos los aislamientos fueron cepas patógenas y cinco se caracterizaron genéticamente. El aislamiento P275 (coeficiente de Dice: 84 %) y el P282 (coeficiente de Dice: 95 %) de cerdos, se relacionaron con Leptospira interrogans de serovariedad Pomona; el aislamiento de rata (I15) fue indistinguible de Leptospira interrogans de serovariedades Icterohaemorrhagiae o Copenhageni (coeficiente de Dice: 100 %), mientras que los aislamientos de perro (C67) y agua (A42) no se relacionaron (coeficiente de Dice <73,7 %) con ninguna de las 200 cepas de referencia; las más cercanas fueron Leptospira noguchii de serovariedades Nicaragua (coeficiente de Dice: 63 %) y Orleans (coeficiente de Dice: 60 %). Conclusiones. Esta fue la primera caracterización molecular de serotipos de aislamientos colombianos, los cuales serían los primeros miembros de un panel diagnóstico colombiano.

**Registry and distribution update of the species of the Haemagogus (Diptera: Culicidae) genus in the Caribbean region of Colombia**

Introducción. Los mosquitos del género Haemagogus son importantes en salud pública, porque algunas de sus especies han sido involucradas como vectores del virus de la fiebre amarilla en su ciclo selvático. Objetivo. Actualizar la distribución de especies del género Haemagogus en las áreas urbanas y periurbanas de los departamentos de Atlántico y Sucre de la Región Caribe. Materiales y métodos. El material entomológico se recolectó mediante larvitrampas en los departamentos de Atlántico y Sucre, durante los años 2010 y 2011. El 80 % de los ejemplares inmaduros se preservó en alcohol al 70 %; algunos se mantuvieron vivos para obtener series entomológicas. La determinación taxonómica se hizo con las claves y descripciones de Arnell (1973). Resultados. En Atlántico, 2,32 % (871) de los 37.573 Culicidae inmaduros eran larvas del género Haemagogus . En Sucre se recolectaron 44 larvas del mismo género (1,22 % de los 3. 611 culícidos). Las especies del género Haemagogus fueron determinadas o identificadas como Hg. equinus , Hg. anastasionis y Hg. celeste en ambos departamentos. En los dos, la mayor abundancia de especies del género Haemagogus se registró durante los meses de mayor precipitación, de junio a noviembre. Conclusión. Se registra la presencia de Hg. anastasionis , Hg. celeste y Hg. equinus en recipientes artificiales en áreas urbanas y periurbanas de los departamentos de Atlántico y Sucre, y se amplía su distribución en la Región Caribe colombiana.

Introduction: The mosquitoes of the Haemagogus (Williston, 1896) genus are relevant in public health because of the involvement of some species as vectors of yellow fever in its sylvan cycle. Objective: To update the distribution of the species of the Haemagogus genus in urban and periurban areas in the departments of Atlántico and Sucre in the Caribbean region of Colombia. Materials and methods: The entomological material was collected in the departments of Atlántico and Sucre by means of larval traps during 2010 to 2011. Eighty per cent of the immature forms were preserved in 70% alcohol. Some were kept alive for the sake of obtaining entomological series. Taxonomical determination was done with Arnell's keys and description, 1973. Results: In Atlántico, 2.32% of 37.573 immature Culicidae (871) were larvae of the Haemagogus genus. In Sucre, 44 larvae of the same genus were collected (1.22% of 3.611). The species collected in both regions were Hg. equinus, Hg. anastasionis , and Hg. celeste . The Haemagogus genus was most abundant during the months of heaviest rainfall, from June to November. Conclusion: The presence of Hg. anastasionis, Hg. celeste and Hg. equinus was detected in artificial containers, in urban and periurban areas of Atlántico and Sucre. Their distribution in the Caribbean region of Colombia has widened.

Development of a reverse transcription polymerase chain reaction method for yellow fever virus detection

Introduction. Yellow fever is considered a re-emerging disease and is endemic in tropical regions of Africa and South America. At present, there are no standardized or commercialized kits available for yellow fever virus detection. Therefore, diagnosis must be made by time-consuming routine techniques, and sometimes, the virus or its proteins are not detected. Furthermore, co-circulation with other flaviviruses, including dengue virus, increases the difficulty of diagnosis. Objective. To develop a specific reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) and nested PCR-based assay to improve the detection and diagnosis of yellow fever virus using both serum and fresh tissue samples. Materials and methods. RT-PCR primers were designed to amplify a short fragment of all yellow fever virus genotypes reported. A second set of primers was used in a nested PCR to increase sensitivity. Thirty-three clinical samples were tested with the standardized reaction. Results. The expected amplicon was obtained in 25 out of 33 samples analyzed using this approach, and 2 more samples tested positive after a subsequent nested PCR approach. Conclusion. This improved technique not only ensures the specific detection of a wide range of yellow fever virus genotypes but also may increase the sensitivity of detection by introducing a second round of amplification, allowing a rapid differential diagnosis between dengue and yellow fever infection, which is required for effective surveillance and opportune epidemiologic measures.

Introducción. La fiebre amarilla se considera una enfermedad reemergente y endémica en regiones tropicales de África y Suramérica. Actualmente, no existen estuches estandarizados o comerciales disponibles para la detección del virus de la fiebre amarilla y, por lo tanto, el diagnóstico debe hacerse mediante técnicas de rutina que consumen mucho tiempo y algunas veces no garantizan la detección del virus o de sus proteínas. Además, la cocirculación con otros flavivirus, incluyendo el del dengue, hacen el diagnóstico más complicado. Objetivo. Desarrollar un ensayo específico de amplificación basado en transcripción inversa seguida de reacción en cadena de la polimerasa, con el fin de mejorar la detección y el diagnóstico de la fiebre amarilla, tanto a partir de suero como de tejido fresco. Materiales y métodos. Se diseñaron iniciadores específicos para amplificar un fragmento conservado del virus de la fiebre amarilla. Un segundo par de iniciadores se usó en una reacción de amplificación anidada para incrementar la sensibilidad. Se probaron 33 muestras clínicas con la técnica estandarizada. Resultados. El amplímero esperado se obtuvo en 25 de las 33 muestras analizadas usando este método y 2 más resultaron positivas después de la reacción anidada. Conclusión. Esta técnica mejorada garantiza la detección de todos los genotipos virales de fiebre amarilla y puede incrementar la sensibilidad del ensayo introduciendo una segunda etapa de amplificación, lo cual permite el diagnóstico diferencial con infección por dengue y otros flavivirus, lo cual es de gran importancia para la vigilancia y la toma de medidas epidemiológicas oportunas.

Anexo 1 Departamentos de Colombia con reportes serológicos, clínicos o moleculares para especies de Ricketsias patógenas