Acta Biológica Colombiana

**Karyologic Variation in Different Phenotypes of Sciurus granatensis (Rodentia, Sciuridae)**

Siete ejemplares de Sciurus granatensis (ardilla colombiana) de diferentes fenotipos según color, rescatadas del tráfico ilegal de fauna silvestre de Colombia fueron estudiadas. Mediante técnicas convencionales de bandeo cromosómico G, C, Q, R y NOR se estableció su cariotipo 2n=42. Se encontraron tres cariomorfos de acuerdo al Número Fundamental (NF) y características propias de cada uno de los complementos ocasionadas por distintos rearreglos cromosómicos, lo cual sugiere que S. granatensis es un complejo de especies. No se observó relación entre cariotipo y fenotipo. La variación en el color del pelaje se debe probablemente a las condiciones ambientales.

Seven specimens of Sciurus granatensis (redtailed squirrel) rescued from illegal fauna traffic in Colombia were studied; they had different phenotypes according to colour. G, C, Q, R and NOR chromosome banding was used, being found a 2n=42 diploid number for the Sciurus granatensis Colombian squirrels. There were 3 karyomorphs according to fundamental number (FN) and different chromosomal characteristics caused by rearregement, suggesting that S. granatensis represents a complex of species. Relationships between karyotype and phenotype were not observed. The variation in the colour of sqirrels fur was probably due to environmental conditions.

**DYNAMICS OF SOMATIC CELLLINEAGE COMPETITION IN CHIMERAS OF Hydractinia symbiolongicarpus (CNIDARIA: HYDROZOA)**

Sessile colonial invertebrates often fuse with conspecifics to form chimeras. Chimerism represents an unequivocal instance of withinindividual selection where genetically different celllineages compete for representation in the somatic and gametic pools. We analyzed temporal and spatial variations in somatic celllineage composition of laboratoryestablished chimeras of the hydroid Hydractinia symbiolongicarpus (Cnidaria: Hydrozoa). Using three clones with different allotypic specificities (i.e., two rejecting one another but fusing with a third one), we established two classes of twoway chimeras, a single threeway chimera class, and an incompatible interaction as control. Chimeras were sampled at five time intervals for a year. Celllineages in samples were identified by polyp fusibility assays against tester colonies of known fusibility. The cell lineages composing the chimeras showed a differential competitive ability, with one of them representing close to 80% by the end of the study. Rare celllineages stabilized at low frequencies but preserved their ability to gain somatic representation and to colonize distant parts of the chimera. This behavior characterizes cell parasites. As a consequence of the reproductive plasticity of most colonial invertebrates, celllineage variability may be transmitted to the offspring both sexually and asexually. Successful somatic competitors are expected to be preferentially transmitted asexually, whereas cell parasites would be preferentially transmitted sexually

Los invertebrados coloniales y sésiles con frecuencia se fusionan con conespecíficos para formar quimeras. Estas quimeras son un ejemplo de selección natural actuando al interior del individuo en donde células genéticamente distintas compiten por acceso tanto a la línea somática como a la germinal. En este estudio se analizaron las variaciones temporal y espacial de linajes celulares somáticos en quimeras establecidas en el laboratorio del hidroide colonial Hydractinia symbiolongicarpus (Cnidaria: Hydrozoa). Usando tres clones con distintas especificidades alotípicas (dos de ellas se rechazaban pero ambas se fusionaban a una tercera), se establecieron dos clases de biquimeras, una triquimera y una interacción incompatible como control. Muestras de tejido de quimeras se obtuvieron en cinco intervalos de tiempo durante 50 semanas. La identidad celular de cada muestra se determinó por ensayos de fusibilidad de pólipos con colonias estándar de fusibilidad conocida. Los distintos linajes celulares de cada quimera mostraron una habilidad competitiva diferencial, con una de ellas representando cerca del 80% de las quimeras hacia el final del estudio. Las líneas celulares con menor representación se estabilizaron a bajas frecuencias pero mantuvieron la capacidad de aumentar en frecuencia y de colonizar partes distantes en la quimera. Este comportamiento caracteriza los parásitos celulares. Como consecuencia de la plasticidad reproductiva de la mayoría de invertebrados coloniales, la variabilidad de los linajes celulares puede ser trasmitida a la descendencia tanto sexualmente como asexualmente. Linajes celulares somáticos con alta capacidad competitiva serían heredados asexualmente, mientras que los linajes celulares parásitos se transmitirían preferencialmente por reproducción sexual

**Hematology and Blood Chemistry of Juveniles Rubio (Salminus affinis Pisces: Characidae) Captured in the River Sinú**

Rubio Salminus affinis es un pez reofílico, distribuido en ríos de Colombia y Ecuador . Se estudiaron características hematológicas y química sanguínea buscando generar información básica para desarrollar tecnologías de producción piscícola. Fueron examinados diez rubios juveniles aparentemente sanos (117,5±38,6 g de peso y 17,6±3,3 cm de longitud total) capturados en el río Sinú. Los peces se tranquilizaron durante cinco minutos en agua a 18 °C y se tomaron 2 mL de sangre por vacutecnia con EDTA (Vacuette®, Greiner Bioone, USA). La química se determinó utilizando reactivos para cada parámetro (ByoSystems SA, España) y el hemograma se desarrolló con técnicas tradicionales, a excepción del recuento total de leucocitos y trombocitos en el que se utilizó el reactivo de Natt y Herricks. Los frotis sanguíneos fueron teñidos con Wright y en ellos se determinaron las dimensiones celulares. El recuento total de eritrocitos fue 2,2±0,4x10(6)/mm³, los trombocitos 25,4±4,4x10³/mm³ y los leucocitos fueron estimados en 6,1±2,0x10³/mm³. El conteo diferencial de leucocitos fue 68,8±5,9% linfocitos, 28,5±5,2% neutrófilos, 2,1±0,9% monocitos, 0,4±1,3% basófilos y 0,2±0,4% eosinófilos. La hemoglobina en 12,53±2,2 g/dL y el hematocrito 36,2%. Los índices eritrocitarios: volumen corpuscular medio (VCM) 163,8±22,6 fL, concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM) 35,0±7,5 g/dL y hemoglobina corpuscular media (HCM) de 58,5±19,7 pg. Las proteínas totales fueron 3,8±5,9 g/dL, glucosa 128,9±21,9 mg/dL, colesterol 277,8±92,7 mg/dL, triglicéridos 192,0±109,1 mg/dL y albúmina 2,0±0,3 g/dL. Los resultados sugieren que las características hematológicas de rubio están en el rango reportado para peces neotropicales aparentemente sanos.

Rubio Salminus affinis is distributed in Colombia and Ecuador rivers. To develop new technologies of fishery production, hematological and blood chemistry of 10 juvenile Rubios captured in Sinú river, apparently healthy were examined (117.5+38.6 g of weight and 17.6+3.3 cm of total length). Fishes were calmed during five minutes in water at 18 °C and 2 mL of blood samples were taken in EDTA (Vacuette®). The chemistry was determined using ByoSystems INC ( Spain ), reagents and blood count were developed with traditional techniques with the exception of total leukocyte and thrombocyte for which the reagent of Natt and Herricks was used. The blood smears were dyed with Wright and cellular dimensions were determined. The total erythrocytes were of 2.2+0.4x10(6)/mm³, thrombocytes 25.4+4.4x10³/mm³ and leukocytes were estimated in 6.1+2.0x10³/mm³. The differential count of leukocytes were of 68.8+5.9% Lymphocytes, 28.5+5.2% neutrophils, 2.1+0.9% monocytes, 0.4+1.3% basophils and 0.2+0.4% eosinophils. The hemoglobin in 12.53+2.2 g/dL, and the hematocrit 36.2%. The erythrocyte index: Mean corpuscular volume (MCV) 163.8+22.6 fL; mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC) 35.0+7.5 g/dL and mean corpuscular hemoglobin (MCH) 58.5+19.7 pg. Total proteins were 3.8+5.9 g/dL, glucose 128.9+21.9 mg/dL, cholesterol 277.8+92.7 mg/dL, triglycerides 192.0+109.1 mg/dL and albumin 2.0+0.3 g/dL. The results suggest that the hematological characteristics of Rubio are in range for neotropical apparently healthy fishes.

Polyphenol Oxidase Induction in Lulo Fruits (Solanum quitoense) Infected by Colletotrichum acutatum

Se evaluó la actividad polifenoloxidasa (PFO) en corteza de frutos de lulo con el fin de determinar su participación en respuestas hacia el patógeno Colletotrichum acutatum, causante de la antracnosis. Se estudiaron condiciones para la adecuada extracción de esta enzima, encontrándose que con buffer fosfatos 100 mM pH 7, 1% SDS y 1% PVPP se logran las mayores actividades. Se determinaron como mejores parámetros para medir la actividad de la enzima extraída, sustrato catecol 40 mM, pH 7,0, 23 °C y 30 µL de extracto. Para determinar su posible inducción en la interacción con el patógeno, se realizó un ensayo in vivo usando frutos verdes, pintones y maduros, inoculados con el hongo o con agua estéril. A nueve tiempos postinoculación se determinó la actividad PFO encontrándose que hay una respuesta diferencial con el tiempo y la madurez de los frutos y por efecto del patógeno. Se obtuvo aumento de actividad en lulos verdes a 48, 96 y 144 horas postinoculación (hpi) y en maduros a la mayoría de los tiempos evaluados, siendo éste estado en el que se presentó la respuesta más notable de inducción. En pintones aumentó solo a 72 y 144 hpi. Los mayores valores se registraron en general para frutos en estado verde. Los frutos respondieron al estrés ocasionado por la herida activando también esta enzima. La inducción de actividad se presentó a tiempos más rápidos en los frutos menos afectados por la enfermedad (verdes y maduros), por lo que se puede postular una relación positiva entre inducción de PFO y respuesta de tolerancia a la antracnosis.

Polyphenol oxidase (PFO) activity induction was evaluated in lulo fruits to determine the role of this enzyme in resistance responses towards the pathogen Colletotrichum acutatum which causes anthracnose disease. We studied the experimental conditions to obtain the enzyme, using lulo peel, and found that extraction with phosphates buffer 100 mM pH 7, 1% SDS y 1% PVPP showed higher activities. The adequate parameters for activity measurement was also evaluated and established as cathecol 40 mM, pH 7,0, 23 °C and 30 µL of extract. Then, we performed an in vivo assay using lulo fruits in three maturity stages, green, semimature and mature, which were inoculated with the fungus or with sterile water. Enzymatic induction of this protein was studied at nine postinoculation times, and it was found that the induction was differential according to the time, the maturity stage, and as consequence of pathogen presence. The PFO activity increased in green fruits at 48, 96 y 144 (hours postinoculation (hpi), and in mature lulos for the majority of times studied, with the most significant induction response at this stage. In semimature lulo, the induction was observed only at 72 and 144 hpi. The highest nominal value of activity was found in green fruits. Fruits responded to incision with enzyme activation. The increase in the activity of the enzyme was faster in the fruits with the minor anthracnose symptoms than the ones that were more affected. Therefore, it is possible to postulate a positive relation between PFO induction and tolerance to anthracnose symptoms.

**Oligonucleotide Probe Design for the Study of Cellulolytic and Solventogenic Genes in Colombian Clostridiumsp. strains (Clostridiaceae)**

El objetivo de este estudio fue analizar las rutas metabólicas para la producción de solventes y degradación de celulosa en cepas colombianas promisorias del género Clostridium. Para ello se diseñaron sondas de hibridación que sirvieran para posteriores estudios de mejoramiento genético de las cepas. Se construyó la base de datos denominada MULTICLOST en Microsoft Access® con las secuencias de 485 genes involucrados en las rutas metabólicas arriba mencionadas, provenientes de 45 especies bacterianas y 10 especies fúngicas. Los genes fueron agrupados de acuerdo al tipo de enzima y a los dominios catalíticos o de unión a sustrato en el caso de las celulasas. Cada grupo se sometió a alineamiento múltiple en ClustalW 1.83 y con base en los resultados se crearon subgrupos de similitud mayor al 50%. Se localizaron secuencias conservadas de longitud mayor a 19 nucleótidos en GeneDoc 2.6.002 y sus valores termodinámicos fueron estimados con GeneRunner v3.05, mientras que la sensibilidad y especificidad fue verificada por búsquedas en GenBank usando BLASTN 2.2.8. En total se obtuvieron 94 secuencias conservadas con las siguientes características: longitud promedio de 24 nucleótidos, Tm promedio de 65,8 ºC y contenido de (G+C) entre 14,3 y 60,0%. Se determinó que ninguna de las sondas diseñadas forma estructuras secundarias estables con Tm superior a 36,1 ºC. De acuerdo a sus características y valores termodinámicos, todas las sondas podrían ser utilizadas en la construcción de un microarreglo o en reacciones de PCR para la identificación de regiones relevantes en el mejoramiento del proceso por ingeniería metabólica.

The goal of the present study was to analyze the metabolic pathways involved in solvent production and cellulose consumption by promising Colombian native strains of the genus Clostridium. Therefore a set of oligonucleotide probes was designed, with the aim of analyzing potential targets for genetic improvement of the Colombian strains. The database named MULTICLOST was created in Microsoft Access® using the sequences from 485 genes involved in solventogenesis, 1,3propanodiol production and cellulolysis from 45 bacterial and 10 fungal species. The genes were grouped according to their respective enzyme function and to the catalytic domain or the substrate binding domain in the case of cellulases. ClustalW 1.83 was used for multiple alignment of every group. Subgroups of sequences with more than 50% identity among themselves were created. Conserved sequences longer than 19 nucleotides were identified using GeneDoc 2.6.002 and their thermodynamic values were calculated with GeneRunner v3.05, while their sensitivity and specificity were verified by searching in GenBank with BLASTN 2.2.8. Ninetyfour conserved sequences were obtained with an average 24nucleotide length, 65.8ºC average Tm and a (G+C) content between 14.3% and 60.0%. None of these probes forms stable secondary structures at temperatures higher than 36.1ºC. According to the former results, all of the probes could be used in an oligonucleotide microarray or in PCR reactions for the identification of metabolic targets for improvement of the industrial process.

Floristic Diversity of Two Zones of Humid Tropical Forest at Alto Baudó, Chocó, Colombia

Entre junio y agosto de 2005 se determinó la composición florística de las plantas ≥1 cm de DAP en un área de 0,2 ha de bosque húmedo tropical en los corregimientos de Pie de Pató (05º 30' 56" N y 76º 58' 26" W) y Nauca (5º 41' 6" N y 77º 00' 36" W), Alto Baudó, Chocó Colombia. En cada sitio se muestreó un área de 0,1 ha, la cual se dividió en diez transecto de 2 x 50 m cada uno. Se registraron 1.618 individuos, representados en 257 especies, 156 géneros y 56 familias botánicas de los cuales 842 individuos, 161 especies, 108 géneros y 46 familias fueron encontrados en Pie de Pató, y 776 individuos, 161 especies, 98 géneros y 45 familias en Nauca. En Pie de Pató las familias mejor representadas en lo que se refiere a géneros y especies fueron: Rubiaceae (doce géneros y 27 especies), Arecaceae (ocho géneros y ocho especies) y Bombacaceae (siete géneros y diez especies). En Nauca fueron Rubiaceae (once géneros y 25 especies), Moraceae (ocho géneros y trece especies) y Arecaceae (ocho géneros y ocho especies). El índice de riqueza arrojó valores de 23,75 y 24,05 para Pie de Pató y Nauca, en cambio la diversidad fue de 4,43 para ambos sitios. Los resultados indican que los bosques del Alto Baudó son muy diversos y de gran importancia para estudios de la diversidad florística, debido a su ubicación estratégica en el departamento del Chocó.

Between June and August of 2005 the floristic composition ≥1 cm of DAP was determined in an area of ? 0.2 ha of humid tropical forest at the localities of Pie de >Pató (05º 30' 56" N and 76º 58' 26" W) and Nauca (5º 41' 6" N and 77º 00' 36" W), Alto Baudó, Chocó Colombia . En each locality an area of 0.1 ha was sampled which was divided into smaller areas of 2 x 50 cm each. A total of 1618 inidivduals were recorded represented by 257 species, 156 genres and 56 botanical families from which 842 individuals, 161 species, 108 genres and 46 families where found at Pie de Pató, and 776 individuals, 161 species, 98 genres and 45 families at Nauca. At Pie de Pató the families best represented in terms of genres were Rubiaceae (12 genres and 27 species), Arecaceae (eight genres and eight species) and Bombacaceae (seven genres and ten species). At Nauca they were Rubiaceae (eleven genres and 25 species), Moraceae (eight genera and 13 species) and Arecaceae (eigth genres and eight species). The richness index was of 23,75 and 24,05 for Pie de Pató and Nauca respectively. Diversity change was stimated as 4,43 for both localities. These results indicate high diversity of these forests at Alto Baudó

**Phenotypic Plasticity of Lippia alba and Lippia origanoides (Vervenaceae) in Response to Availability of Light**

La distribución de la especies es usualmente relacionada con la magnitud de la plasticidad fenotípica (PF). Con el fin de examinar la posible relación entre la magnitud de la PF y la amplitud ecológica en respuesta a la disponibilidad de luz, este trabajo evaluó la PF a través de la ontogenia en clones de Lippia alba y Lippia origanoides, especies congenéricas que presentan diferencias en su distribución. Clones de cada especie fueron distribuidos aleatoriamente en tres tratamientos, baja (33%), media (53%), y alta (100%) disponibilidad lumínica. Se evaluó la PF de caracteres morfológicos y de asignación de biomasa a través de la ontogenia por medio de un análisis de varianza (ANAVA) y la comparación interespecífica se realizó a través del índice de plasticidad fenotípica (RDPI). L. alba y L. origanoides presentaron variación de la plasticidad a través de la ontogenia en varios de los caracteres estudiados. La comparación interespecífica a través del RDPI mostró que la mayor PF de L. alba sobre L. origanoides en algún estado de la ontogenia no fue consistente ni uniforme a través de esta. Estos resultados sugieren una débil asociación entre la magnitud de la PF en respuesta a la disponibilidad lumínica. Además, indican que la mayor distribución de L. alba, se debe a un mayor desempeño en la tasa de crecimiento relativa y consecuentemente a una mayor acumulación de biomasa total, que posiblemente, le permiten alcanzar rápidamente su madurez sexual y así la colonización de nuevas áreas.

The distribution of the plant species is usually related to the magnitude of the phenotypic plasticity (PF). With the purpose of to stablish the possible relationship between the magnitude of the PF and the ecological breadth in response to light availability, the PF during the ontogeny in clones of Lippia alba and Lippia origanoides was evaluated. Both species are congeneris and show differences in their distribution. Three random treatments of light availability were set up, low (33%), medium (53%), and high (100%). The PF of morphologic and biomass allocation traits was evaluated during the ontogeny in clones of L. alba and L. origanoides through the ANOVA and the interspecific comparison were carried out through relative distance plasticity index (RDPI). L. alba and L. origanoides displayed variation of the plasticity through the ontogeny in several of the studied traits. The interspecific comparison through RDPI showed that the PF greather of L. alba in comparison to L. origanoides in some state of the ontogeny was not consistent nor uniform. These results suggest a lack association between the magnitudes of the PF in response to the availability of light. Additionally this indicate that the greater distribution of L. alba could be cause by a greater performance in the relative rate of growth and the greater accumulation of total biomass, therefore, it would likely contribute L. alba to reach its sexual maturity faster and the colonization of new areas.

**A New Species of Geotrigona(Hymenoptera: Apidae, Meliponini), with Comments on the Genus in Colombia**

Se describe la abeja sin aguijón Geotrigona kaba sp. nov. de la cordillera Central de Colombia. También se presentan nuevos registros geográficos y comentarios para las otras dos especies del género que se encuentran en Colombia.

We describe the stingless bee Geotrigona kaba sp. nov. from the cordillera Central of Colombia. We also provide new geographical records and comments on the other two species of the genus that occur in Colombia.

**Characterization of Microorganisms Associated to Leave Decomposing Comsumed by Tremarctos ornatus (Urcidae) and Its Possible Data Relation**

Se establecieron bases para un método de datación de hojas consumidas por Tremarctos ornatus, con base a la presencia de microorganismos aislados de restos vegetales de las hojas de Tillandsia spp. recogidos en campo, correspondientes a diferentes etapas de descomposición. Las muestras (2 cm de la base de la hoja consumida por el animal) fueron procesadas en el laboratorio para el aislamiento y caracterización de los microorganismos presentes, encontrando que los morfotipos bacterianos predominantes fueron cocobacilos (Pseudomonas sp.) y bacilos Gram negativos, (los primeros se encontraron en todas las edades de descomposición y los segundos solo en las muestras menores a seis meses). Morfotipos correspondientes a cocobacilos Gram positivos solo se encontraron en hojas entre 13 meses y bacilos Gram positivos (Bacillus sp.) en hojas de menos de un mes. Cocos y diplococos Gram positivos solo se presentaron en la muestra de hoja con 56 meses de descomposición. Se encontraron cuatro morfotipos de hongos, dos corresponden a Mucor sp. y Trichoderma sp., además de Epicoccum sp., Alternaria sp., Rhizoctonia sp. El género Trichoderma sp. se encontró asociado a por lo menos uno de los morfotipos anteriormente mencionados en rastros mayores de un mes e inferiores a cinco meses.

We established basis for a datetelling method of leaves (Tillandsia spp.) consumed by Tremarctos ornatus by determining or detecting the presence of microorganisms. We used samples from the field that corresponded to different states of decomposition. The samples (2 cm from the leaf base consumed by the animal) were processed in the laboratory, characterized and determined. Cocobacilli (Pseudomonas sp.) and negative bacilli Gram were the most common bacteria morphotypes, the first were founded on samples from all ages and the second on samples no older than six months. Positive cocobacili Gram (Bacillus sp.); were just present in samples between one and three months old. Positive Gram bacilli occurred only in samples no older than a month, cocos and diplococos in samples between five and six months. Four fungus morphotypes were found, two of them being Mucor sp., and Trichoderma sp., in addition to Epicoccum sp., Alternaria sp., Rhizoctonia sp. Trichoderma was associated with at least one more kind of fungus, for samples to older than one month, but no older than five months.

The Calcium Wave of Vegetable Cells

El calcio es un nutriente esencial para las plantas, se encuentra involucrado en procesos de desarrollo y de respuesta a factores bióticos y abióticos. Numerosas señales modifican la concentración de calcio en el citoplasma, núcleo, retículo endoplásmico o plastídios. El incremento del calcio en el citosol es rápidamente disminuido, pero en el lapso de incremento, se forman innumerables y complejas cascadas de señalización que conllevan a la respuesta celular. Este nota expone los mecanismos implicaciones de la entrada del calcio en las células vegetales.

Calcium is an essential nutrient for plants; it is involved in developmental processes and in responses to biotic and abiotic factors. Several signals that modify the calcium concentration in the cytoplasm, endoplasmic reticulum, nucleus and/or plastids have been observed. These changes in the calcium concentration in the cell interior are rapidly returned to basal levels, in the meantime, innumerable and complex signaling cascades. This note exposes the mechanisms of calcium transport through the cell membranes of the entrance of calcium in the plant cells.