Universitas Scientiarum

Modelo molecular teórico do receptor serotoninérgico 5-HT_2A acoplado à proteína G

Objetivo. Construir un modelo molecular teórico de la estructura terciara del receptor 5HT2A de Homo sapiens a partir de estructuras obtenidas experimentalmente como plantillas. Materiales y métodos. Para la realización del modelo teórico se contempló el protocolo establecido por Ballesteros y Weinstein para la construcción del receptor acoplado proteína G, por medio de alineamiento de la secuencia de aminoácidos, perfiles de hidrofobicidad, refinamiento de bucles por restricciones espaciales, y minimización de energía con el campo de fuerza OPLS_2005. Resultados. El modelo obtenido fue validado por el gráfico de Ramachandran con un 91,7% de aminoácidos dentro de los límites establecidos para ángulos phi y psi, y un RMSD de 0,95 A con respecto a rodopsina de bovino. Conclusiones. Se obtuvo un modelo teórico validado, útil para realización de estudios de acoplamiento ligando-receptor.

Objective Build a theoretical molecular model of the tertiary structure of the Homo sapiens 5HT2A receptor from experimentally obtained structures as templates. Materials and methods In the construction of the theoretical model we considered the protocol established by Ballesteros and Weinstein for the construction of the G-protein coupled receptor, by the alignment of the amino acid sequence, hydrophobicity profiles, refinement of loops by spatial restrictions and energy minimization with the force field OPLS_2005. Results The resulting model was validated by the Ramachandran plot with 91.7% of amino acids within the limits set for angles phi and psi and a RMSD of 0.95 A with respect to bovine rhodopsin. Conclusions We obtained a validated theoretical model useful in studies of ligand-receptor docking.

Objetivo Construir um modelo molecular teórico da estrutura terciária do receptor 5HT2A de Homo Sapiens, com estruturas obtidas experimentalmente como moldes. Materiais e métodos. Para a elaboração do modelo teórico se utilizou o protocolo estabelecido por Ballesteros e Weinstein para a construção do receptor acoplado à proteína G, por intermédio de alinhamento da seqiiência de aminoácidos, perfis de hidrofobicidade, refinamento de bucles por restrições espaciais e minimização da energia com o campo de força OPLS_2005. Resultados. O modelo obtido foi validado pelo gráfico de Ramachandran com 91,7% dos aminoácidos dentro dos limites estabelecidos para os ângulos phi e psi, e um RMSD de 0,95 A com respeito à rodopsina de bovino. Conclusões. Obteve-se um modelo teórico validado, útil para a realização de estudos de acoplamento ligante-receptor.

**Avaliação de um sistema para micorrização in vitro em plantas de amora-preta (Rubus glaucus, Benth)**

Objetivo. Obtener un sistema de micorrización in vitro en sistemas de cultivo autotrófico para plantas de mora de castilla (Rubus glaucus, Benth). Materiales y métodos. Se utilizaron esporas y fragmentos de raíces con vesículas del Hongo Formador de Micorriza Arbuscular (HFMA) Glomus sp. (GEV02). Se estableció un sistema de cultivo autotrófico para plántulas de mora, comparando dos métodos de inoculación directa con el HFMA. Se cuantificó el número de esporas producidas, la longitud del micelio extraradical; así como el porcentaje de colonización del HFMA. Adicionalmente se midió la longitud aérea y radical, el peso fresco y seco de la parte foliar y radical para determinar el desarrollo de las plantas. Resultados. El sistema de cultivo autotrófico fue exitoso para plantas de mora de castilla (Rubus glaucus, Benth); observándose un óptimo crecimiento de la parte aérea y radical de la planta. Adicionalmente en este estudio se pudo obtener un sistema que permitió el desarrollo de Glomus sp (GEV02) bajo condiciones in vitro, con formación de estructuras típicas de la simbiosis como una buena colonización intraradical, con producción de arbúsculos y vesículas, así como el desarrollo de micelio extraradical con hifas ramificadas y la formación de nuevas esporas. Conclusión. Las plantas de mora micropropagadas se asociaron con éxito, por primera vez, con un hongo formador de micorriza arbuscular bajo condiciones in vitro, permitiendo el desarrollo del sistema simbiótico HFMA Glomus sp., asociado a las raíces de plántulas de mora castilla micropropagadas.

Objective. Obtain an in vitro mycorrhization system in autotrophic culture systems of blackberry plants (Rubus glaucus, Benth). Materials and methods. We used spores and root fragments with vesicles of Arbuscular Mycorrhizal Fungus (AMF) Glomus sp (GEV02). We established an autotrophic culture system of blackberry plantlets comparing two methods of direct inoculation of the AMF. We measured the number of spores produced, the length of the extraradical mycelium as well as the percentage of colonization of the AMF. Additionally, we measured the shoot and root length, and the fresh and dry weight of the leaf and root parts to determine the plant development. Results. The autotrophic culture system was successful for blackberry plants (Rubus glaucus, Benth; an optimal shoot and root growth was observed. Additionally, we obtained a system that allowed the development of Glomus sp. in in vitro conditions, with the formation of structures typical of the symbiosis as well as a good intraradical colonization, with the production of arbuscules and vesicles, development of extraradical mycelium with branched hyphae, and formation of new spores. Conclusion. For the first time, micropropagated blackberry plants associated successfully with an AMF under in vitro conditions, enabling the development of the symbiotic system AMF Glomus sp. associated to roots of micropropagated blackberry plantlets.

Objetivo. Obter um sistema de micorrização in vitro em sistemas de cultura autotróficos para plantas de amora-preta (Rubus glaucus, Benth). Materiais e métodos. Foram usados esporos e fragmentos de raízes com vesículas do Fungo Formador Micorrízico Arbuscular (FFMA) Glomus sp. (GEV02). Foi estabelecido um sistema de cultivo autotrófico para mudas de amora-preta, comparando dois métodos de inoculação direta com o FFMA. Foi quantificado o número de esporos produzidos, o comprimento do micélio extra radicular; bem como a porcentagem de colonização do FFMA. Além disso, foi medido o comprimento e o peso fresco e seco da parte folhar e radicular para determinar o desenvolvimento das plantas. Resultados. O sistema de cultivo autotrófico foi bem-sucedido para as plantas de amora-preta (Rubus glaucus, Benth), onde foi observado um crescimento ótimo da parte aérea e da raidicular da planta. Além disso, neste estudo foi obtido um sistema que permitiu o desenvolvimento de Glomus sp (GEV02) sob condições in vitro, com formação de estruturas típicas da simbiose como uma boa colonização intra radicular, com produção de arbúsculos e vesículas, assim como o desenvolvimento de micélio extra radicular com hifas ramificada e a formação de novos esporos. Conclusão. As plantas de amora-preta micropropagadas associaram-se com sucesso, pela primeira vez, com um fungo formador micorrízico arbuscular em condições in vitro, permitindo o desenvolvimento do sistema simbiótico FFMA Glomus sp., associado às raízes das plántulas de amora-preta micropropagadas.

Seleção de uma bateria de bioensaios para avaliar a toxicidade em afluente e efluente de três estações potabilizadoras

Objective. The assessment of water quality includes the analysis of both physical-chemical and microbiological parameters. However, none of these evaluates the biological effect that can be generated in ecosystems or humans. In order to define the most suitable organisms to evaluate the toxicity in the affluent and effluent of three drinking-water treatment plants, five acute toxicity bioassays were used, incorporating three taxonomic groups of the food chain. Materials and methods. The bioassays used were Daphnia magna and Hydra attenuata as animal models, Lactuca sativa and Pseudokirchneriella subcapitata as plant models, and Photobacterium leioghnathi as bacterial model. To meet this objective, selection criteria of the organisms evaluated and cluster analysis were used to identify the most sensitive in the affluent and effluent of each plant. Results. All organisms are potentially useful in the assessment of water quality by meeting four essential requirements and 17 desirable requirements equivalent to 100% acceptability, except P. leioghnathi which does not meet two essential requirements that are the IC50 for the toxic reference and the confidence interval. The animal, plant and bacterial models showed different levels of sensitivity at the entrance and exit of the water treatment systems. Conclusions. H. attenuata, P. subcapitata and P. leioghnathi were the most effective organisms in detecting toxicity levels in the affluents and D. magna, P. subcapitata and P. leioghnathi in the effluents.

Objetivo. La evaluación de la calidad del agua incluye el análisis de parámetros tanto físico-químicos como microbiológicos. Sin embargo, ninguno de estos evalúa el efecto biológico que se puede generar en los ecosistemas o en el hombre. Con el objetivo de definir los organismos más indicados para evaluar la toxicidad en el afluente y efluente de tres plantas potabilizadoras, se utilizaron cinco bioensayos de toxicidad aguda, incorporando tres grupos taxonómicos de la cadena trófica. Materiales y métodos. Los bioensayos empleados fueron Daphnia magna e Hydra attenuata como modelos animales, Lactuca sativa y Pseudokirchneriella subcapitata como modelos vegetales y Photobacterium leioghnathi como modelo bacteriano. Para cumplir con este objetivo, se utilizaron criterios de selección de los organismos a evaluar y análisis de conglomerados (AC) para identificar los más sensibles en los afluentes y efluentes de cada una de las plantas. Resultados. Todos los bioensayos son pruebas potencialmente útiles para evaluar la calidad del agua, al presentar cuatro requisitos esenciales y 17 requisitos deseables, salvo P. leioghnathi que no cumple con dos de los requisitos esenciales que son la CI50 para los tóxicos de referencia y el intervalo de confianza. En los modelos animales, vegetales y bacteriano se observaron diferentes niveles de sensibilidad a la entrada y salida de los sistemas de potabilización. Conclusiones. H. attenuata, P. subcapitata y P. leioghnathi fueron los organismos más eficaces para detectar la toxicidad en los afluentes y D. magna, P. subcapitata y P. leioghnathi en los efluentes.

Objetivo. A avaliação da qualidade da água inclui a análise dos parâmetros físico-químicos e microbiológicos. No entanto, nenhum destes avalia o efeito a nível biológico que pode ser gerado nos ecossistemas ou no homem. Com o objetivo de definir os organismos mais adequados para avaliar a toxicidade no afluente e efluente de três estações potabilizadoras, foram utilizados cinco bioensaios de toxicidade aguda, incorporando três grupos taxonómicos da cadeia alimentar. Materiais e métodos. Os bioensaios utilizados foram Daphnia magna e Hydra attenuata como modelos animais, Lactuca sativa e Pseudokirchneriella subcapitata como modelos vegetais e Photobacterium leioghnathi como modelo bacteriano. Para cumprir com este objetivo foram utilizados critérios de seleção dos organismos a avaliar e análise de agrupamento (AC), para definir os mais sensíveis nos afluentes e efluentes de cada estação de tratamento. Resultados. Todos os bioensaios são testes potencialmente úteis para avaliar a qualidade da água ao apresentar 4 requisitos essenciais e 17 requisitos desejáveis; exceto P. leioghnathi que não cumpre com dois dos requisitos essenciais: com o CI50 para substâncias tóxicas de referência e com o intervalo de confiança. Nos modelos animais, vegetais e bacteriano, foram observados níveis diferentes de sensibilidade à entrada e à saída dos sistemas de potabilização. Conclusões. H. attenuata, P. subcapitata e P. leioghnathi foram os organismos mais eficazes na detecção de toxicidade em afluentes e D. magna, P. subcapitata e P. leioghnathi nos efluentes.

Estabelecimento de um sistema de pontuação semi-automático para ensaios histoquímicos e imuno-histoquímicos para avaliar diferenciação condrogênica in vitro

During embryological limb formation mesenchymal cells condense and differentiate into chondrocytes, in a process known as chondrogenesis. These chondrocytes synthesize glycosaminoglycans (GAGs), thus playing an important role in this process. A simplified system in vitro chondrogenesis, using adult mesenchymal stromal cells (MSCs) has been demonstrated. This differentiation potential is usually assessed by histological staining. Objective. Establishment of a semi-automatic grading system for histochemistry stains and immunohistochemistry assays. Materials and methods. For chondrogenesis cells were cultured for three weeks in aggregates with inducing media. Total GAGs were measured using dimethylmethylene blue (DMB) method. For histological analyses aggregates were stained with Alcian blue for total GAGs detection and immunohistochemistry (IHC) for aggrecan was performed. Semi-automatic grading for all slides was obtained after ImageJ analysis. Results. MSCs cultured as aggregates in chondrogenic differentiation media had similar protein concentrations for all time points, suggesting cellularity remained homogenous during culture. Total GAGs was higher for aggregates cultured in chondrogenic compared to complete media. The same trend was observed for Alcian blue stain grades by blinded observer and analysis using ImageJ software. Aggrecan's IHC analysis had a decreasing tendency with time for aggregates in chondrogenic media for blinded observer and ImageJ evaluation. Conclusion. We developed a functional system for semi-automatic slide grading. We corroborated these results by biochemical analysis with comparable results. To our knowledge, for in vitro chondrogenesis, this is the first report to evaluate stains using this methodology. This procedure might be useful for other applications in the field of Biology and Medical Sciences.

Durante el desarrollo embriológico las extremidades surgen de la condensación de células mesenquimales y su diferenciación a condrocitos en un proceso llamado condrogénesis. Estos condrocitos sintetizan glicosaminoglicanos, jugando un papel importante durante este proceso. Existe un sistema de condrogénesis in vitro utilizando células mesenquimales generalmente evaluado mediante histoquímica. Objetivo. Establecer un sistema de puntaje semi-automático para ensayos histoquímicos e inmunohistoquímicos. Materiales y métodos. Para condrogénesis las células fueron cultivadas con medio inductor en agregados por tres semanas. Los glicosaminoglicanos totales fueron determinados mediante azul de dimetileno. Para el análisis histológico los agregados fueron teñidos con azul de alcian e inmunohistoquímica para detección de agrecán. La puntuación semi-automática fue obtenida utilizando el programa ImageJ. Resultados. Las células mesenquimales cultivadas en medio de diferenciación condrogénica tuvieron una concentración de proteína comparable durante las tres semanas de cultivo, sugiriendo una celularidad similar. La concentración de glicosaminoglicanos fue superior para los agregados cultivados en medio condrogénico. La misma tendencia fue observada para la tinción de azul de alcian mediante puntajes del observador ciego y análisis con ImageJ. Finalmente, los resultados de inmunohistoquímica de puntajes asignados por el observador y los del análisis por ImageJ revelaron una tendencia decreciente con el tiempo para agregados en medio condrogénico. Conclusión. Desarrollamos un sistema funcional para generación de puntaje semi-automático para diferenciación condrogénica. Corroboramos estos resultados mediante análisis bioquímico con resultados comparables. En nuestro saber este es el primer reporte en evaluar esta metodología, la cual puede ser útil para otras aplicaciones en el campo biológico o médico.

Durante o desenvolvimento embrionário os membros emergem a partir da condensação de células mesenquimais e sua diferenciação em condrócitos em um processo chamado condrogênese. Estes condrócitos sintetizam glicosaminoglicanos, desempenhando um papel importante neste processo. Existe um sistema de condrogénese in vitro utilizando células mesenquimatosas, geralmente avaliado por histoquímica. Objetivo. Estabelecer um sistema de pontuação semi-automático para ensaios histoquímicos e imuno-histoquímicos. Materiais e métodos. Na condrogênese as células foram cultivadas com meio indutor em agregados, durante três semanas. Os glicosaminoglicanos totais foram determinados pelo azul de dimetileno. Para a análise histológica os agregados foram corados com Azul Alciano e imuno-histoquímica para detecção de agrecan. A pontuação semi-automática foi obtida utilizando o programa ImageJ. Resultados. As células mesenquimais cultivadas em meio de diferenciação condrogênica tiveram uma concentração de proteína comparável durante as três semanas de cultura, o que sugere uma celularidade similar. A concentração de glicosaminoglicanos foi maior para os agregados cultivados em meio condrogênico. A mesma tendência foi observada para a coloração com Azul Alciano segundo as pontuações do observador cego e a análise com ImageJ. Finalmente, os resultados de imuno-histoquímica de pontuações dados pelo observador e aqueles dados pela análise ImageJ revelaram uma tendência decrescente ao longo do tempo para os agregados em meio condrogênico. Conclusão. Nós realizamos um sistema funcional para gerar pontuação semi-automática para diferenciação condrogênica. Nós corroboramos esses resultados por análise bioquímica com resultados comparáveis. Segundo nosso conhecimento, este é o primeiro estudo a avaliar esta metodologia, que pode ser útil para outras aplicações no campo biológico ou médico.

Alteração dos mecanismos hemostáticos da placenta em restrição de crescimento intra-uterino idiopático

Intrauterine growth restriction is a complication of pregnancy with a high probability of perinatal morbidity and mortality. It appears to be caused by abnormal development of placental vasculature. Haemostatic processes are important for the development of the placenta, and an imbalance between procoagulant and anticoagulant factors has been associated with risk of intrauterine growth restriction. Objective. To evaluate coagulation abnormalities in placenta of pregnancies complicated with idiopathic intrauterine growth restriction. Materials and methods. Five placentas from pregnancies with idiopathic intrauterine growth restriction were compared to 19 controls. We performed gross and histological examination of the placenta. Analysis was made of both mRNA expression by real-time PCR and protein by ELISA of tissue factor and thrombomodulin in placental tissue. Results. Results based on histological evaluation were consistent with an increased prothrombotic state in placentas from pregnancies with idiopathic intrauterine growth restriction, and thrombosis of chorionic vessels was the most important finding. The study showed an increased expression of tissue factor protein (p=0.0411) and an increase in the ratio of tissue factor/thrombomodulin mRNA (p=0.0411) and protein (p=0.0215) in placentas from pregnancies with idiopathic intrauterine growth restriction. There were no statistically significant differences neither between cases and controls in the mRNA levels of tissue factor or thrombomodulin nor at the protein level of thrombomodulin. Conclusion. Evidence of alteration of local haemostatic mechanisms at the level of the placenta, including abnormal expression of tissue factor and tissue factor/ thrombomodulin ratio, in pregnancies that occur with idiopathic intrauterine growth restriction is presented.

La restricción del crecimiento intrauterino es una complicación del embarazo con alta probabilidad de morbilidad y mortalidad perinatal, que parece ser causada por desarrollo anormal de la vasculatura placentaria. Los procesos hemostáticos son importantes para el desarrollo de la placenta y el desequilibrio entre factores procoagulantes y anticoagulantes se ha asociado con restricción del crecimiento intrauterino. Objetivo. Evaluar el compromiso hemostático en la placenta de los embarazos complicados con restricción del crecimiento intrauterino idiopática. Materiales y métodos. Se estudiaron cinco placentas de embarazos con restricción de crecimiento intrauterino idiopática y 19 controles. Se realizó examen macroscópico e histológico, y análisis de la expresión de factor tisular y trombomodulina a nivel de ARNm por PCR en tiempo real y proteínas por ELISA. Resultados. Se evidenció compromiso hemostático en las placentas de embarazos con restricción de crecimiento intrauterino idiopática, siendo la trombosis de los vasos coriales el hallazgo histológico más importante. Se encontró aumento en la expresión de la proteína del factor tisular (p=0,0411) y en la razón de factor tisular/trombomodulina a nivel de ARNm (p=0,0411) y proteína (p=0,0215). No hubo diferencias estadísticamente significativas entre los grupos en los niveles de ARNm de factor tisular o trombomodulina, ni de trombomodulina a nivel de proteína. Conclusión. Se presenta evidencia de alteración de los mecanismos hemostáticos de la placenta, incluyendo la expresión anormal de factor tisular y de la razón factor tisular/trombomodulina, en embarazos complicados con restricción del crecimiento intrauterino idiopática.

A restrição do crescimento intra-uterino é uma complicação da gravidez com alta probabilidade de morbidade e mortalidade perinatal, que parece ser causada pelo desenvolvimento anormal da vasculatura placentária. Os processos hemostáticos são importantes para o desenvolvimento da placenta, e o desequilíbrio entre fatores pró-coagulantes e anticoagulantes têm sido associadas com a restrição de crescimento intra-uterino. Objetivo. Avaliar o compromisso hemostático na placenta com gestações complicadas com restrição de crescimento intra-uterino idiopático. Materiais e métodos. Foram estudadas cinco placentas de gestações com restrição de crescimento intra-uterino idiopático e 19 controles. Foi realizada uma análise macroscópica e histológica e análise da expressão do factor tecidual e trombomodulina em ARNm por PCR em tempo real e de proteína pelo método de ELISA. Resultados. Foi evidente o compromisso hemostático nas placentas de gestações com restrição de crescimento intra-uterino idiopático; a trombose dos vasos coriônicos é o descobrimento histológico mais importante. Aumentaram a expressão de proteína do fator tecidual (p= 0,0411) e a proporção do fator tecidual/ trombomodulina ao nível de ARNm (p= 0,0411) e de proteína (p= 0,0215). Não houve diferenças estatisticamente significativas entre os grupos nos níveis de ARNm do fator tecidual ou trombomodulina, nem de trombomodulina ao nível de proteína. Conclusão. Se apresenta evidência de alteração dos mecanismos hemostáticos da placenta, incluindo a expressão anormal de fator tecidual e da proporção do fator tecidual/ trombomodulina, em gestações complicadas com restrição de crescimento intra-uterino idiopático.

Biossíntese de alcalóides benzilisoquinolinas

Los alcaloides bencilisoquinolínicos (ABI) son metabolitos especializados con una distribución filogenética antigua pero conservada todavía en clados modernos. Varios de ellos, como la morfina, sanguinerina y berberina tienen importancia en la medicina moderna. En esta revisión se analizan los aspectos más sobresalientes del estado actual de la biosíntesis de ABI. Se han realizado estudios que han permitido conocer la biosíntesis de 22 de estos metabolitos nitrogenados. En su formación participan 43 enzimas agrupadas en oxido-reductasas, transferasas y liasas, que en algunos casos representan ejemplos atípicos de la forma en la que se originó la diversificación del metabolismo secundario, entre ellos proteínas citocromo P450 (CYP450) con actividades catalíticas para la ruta de los ABI, o la enzima norcoclaurina sintasa (NCS) que esta emparentada con proteínas alergénicas de defensa. Así mismo, hay avances genéticos en los que se ha podido caracterizar 30 enzimas, permitiendo conocer procesos de regulación. Otro aspecto interesante es la compartimentación de los sitios de biosíntesis y acumulación de ABI ya que en varios casos están separados espacialmente y en distintas especies o en la misma pueden participar varios tipos de células. Ello ha sugerido el transporte intra e intercelular de los alcaloides, los precursores y de las enzimas, se ha documentado el transporte de berberina entre el citoplasma y las vacuolas del almacenamiento. El panorama de la biosíntesis de ABI se ha construido con los estudios de ejemplares de importancia farmacológica.

The benzylisoquinoline alkaloids (BIA) are specialized metabolites with an ancient phylogenetic distribution, but still preserved in modern clades. Some of them, such as morphine, sanguinerine or berberine, are important for modern medicine. This review discusses the highlights of the current state of the biosynthesis of BIA. There have been studies that show the biosynthesis of 22 of these nitrogenous metabolites. In their formation there are 43 enzymes grouped into oxidoreductases, transferases and lyases, which in some cases represent atypical examples of the manner in which the secondary metabolism diversification was originated. Two of these examples are the cytochrome proteins P450 (P450), with catalytic activities for ABI route, or the norcoclaurine synthase enzyme (NCS), which share substantial identity with defense allergenic proteins. Likewise, there are genetic advances that have produced the characterization of 30 enzymes, allowing knowledge of regulatory processes. Another interesting aspect is the compartmentation of the biosynthesis sites and accumulation of BIA, since in several cases they are spatially separated and in different species, or in the same species several types of cells may be involved. This has suggested intra and intercellular transport of alkaloids, precursors and enzymes, and it has been documented berberine transport between the cytoplasm and the vacuoles of storage. The picture for the biosynthesis of BIA has been constructed with exemplary studies of alkaloids with pharmacological importance.

Os alcalóides benzilisoquinolinas (ABI) são metabólitos especializados com uma distribuição filogenética antiga, mas ainda preservada em clados modernos. Vários deles, como a morfina, sanguinarina e berberina são importantes na medicina moderna. Neste artigo, se analisam os aspectos mais destacados do estado atual da biossíntese de ABI; há estudos que tem permitido conhecer a biossíntese de 22 desses metabólitos nitrogenados. Na sua síntese participam 43 enzimas agrupadas em oxidoreductases, transferases, liases e, em alguns casos, representam exemplos atípicos da forma pela qual se originou a diversificação do metabolismo secundário, incluindo as proteínas do citocromo P450 (CYP450), com atividades catalíticas para a rota dos ABI, ou a enzima norcoclaurina sintase (NCS), que está relacionada com proteínas alergênicas de defesa. Da mesma forma, há avanços genéticos na caracterização de 30 enzimas, permitindo conhecer processos de regulação. Outro aspecto interessante é a compartimentalização dos sítios de biossíntese e acumulação de ABI uma vez que em muitos casos estão separados espacialmente e em diferentes espécies, ou na mesma podem participar vários tipos de células. Isto há sugerido o transporte intra e intercelular de alcalóides, precursores das enzimas; tem sido documentado o transporte de berberina entre o citoplasma e os vacúolos de armazenamento. A perspectiva na biossíntese de ABI foi construída com os estudos de exemplares de importância farmacológica.

p < 0,05 Critério mágico para resolver qualquer problema ou lenda urbana?

Las Pruebas de Hipótesis son el procedimiento de análisis más conocido por los investigadores y utilizado en las revistas científicas pero, a su vez, ellas han sido fuertemente criticadas, su uso ha sido cuestionado y restringido en algunos casos por las inconsistencias observadas en su aplicación. Este problema se analiza, en este artículo, tomando como punto de partida los Fundamentos de la Metodología Estadística y los diferentes enfoques que históricamente se han desarrollado para abordar el problema del análisis de las Hipótesis Estadísticas. Resaltándose un punto poco conocido por algunos: el carácter aleatorio de los valores P. Se presentan los fundamentos de las soluciones de Fisher, Neyman-Pearson y Bayesiana y a partir de ellas se identifican las inconsistencias del procedimiento de conducta que indica identificar un valor P, compararlo con el valor del error de tipo I -que usualmente es considerado como 0,05- y a partir de ahí decidir las conclusiones del análisis. Adicionalmente se identifican recomendaciones sobre cómo proceder en un problema, así como los retos a enfrentar, en lo docente y en lo metodológico, para analizar correctamente los datos y determinar la validez de las hipótesis de interés.

Hypothesis testing is a well-known procedure for data analysis widely used in scientific papers but, at the same time, strongly criticized and its use questioned and restricted in some cases due to inconsistencies observed from their application. This issue is analyzed in this paper on the basis of the fundamentals of the statistical methodology and the different approaches that have been historically developed to solve the problem of statistical hypothesis analysis highlighting a not well known point: the P value is a random variable. The fundamentals of Fisher's, Neyman-Pearson's and Bayesian's solutions are analyzed and based on them, the inconsistency of the commonly used procedure of determining a p value, compare it to a type I error value (usually 0.05) and get a conclusion is discussed and, on their basis, inconsistencies of the data analysis procedure are identified, procedure consisting in the identification of a P value, the comparison of the P-value with a type-I error value -which is usually considered to be 0.05- and upon this the decision on the conclusions of the analysis. Additionally, recommendations on the best way to proceed when solving a problem are presented, as well as the methodological and teaching challenges to be faced when analyzing correctly the data and determining the validity of the hypotheses.

Os testes de hipóteses são o método de análise melhor conhecido por pesquisadores e utilizado em revistas científicas; mas por sua vez, têm sido fortemente criticados, seu uso tem sido questionado e, em alguns casos restritos pelas inconsistências observadas na sua aplicação. Esse problema é discutido neste artigo, tendo como ponto de partida os Fundamentos da Metodologia Estatística e as diferentes abordagens que historicamente têm sido desenvolvidas para resolver o problema da analise das Hipóteses Estatísticas. Destacando-se um ponto pouco conhecido por alguns: o caráter aleatório do p-valor. Apresentam-se os fundamentos das soluções de Fisher, Neyman-Pearson e Bayesiana e delas são identificadas as inconsistências do procedimento de conduta que orienta identificar um p-valor para compará-lo com o valor do erro de tipo I, que é geralmente considerado como 0,05 - e, posteriormente, decidir as conclusões da análise. Além disso, se identificam recomendações sobre como proceder num problema, e os desafios a serem enfrentados no ensino e no metodológico, para analisar corretamente os dados e determinar a validade das hipóteses de interesse.

**Estado atual da resistência do Helicobacter pylori à tetraciclina: uma revisão sistemática da literatura**

Objetivo. Determinar la prevalencia de resistencia de Helicobacter pylori a tetraciclina y las posibles mutaciones que generan esta resistencia mundialmente. Materiales y método. Se realizó una búsqueda sistemática de literatura en las bases de datos: Medline, Science Direct (Elsevier), Ovid, Pubmed, Lilacs y MEDICLATINA, con el uso de palabras clave relevantes. La extracción de los datos fue independiente y se realizaron listas de verificación para evaluar la calidad metodológica de los estudios. El análisis de la información fue realizado en el programa RevMan 5®. Resultados. Se evidenció resistencia a tetraciclina por Helicobacter pylori con prevalencias de 1% para Norte América, 8% para Centro y Sur América; 5% para Asia y 2% para Europa . La alta resistencia se debe a la triple mutación AGA(926-928)-->TTC, en el gen 16S rDNA. Conclusiones. La resistencia antibiótica es una de las causas que más se asocia a falla terapéutica en la erradicación de Helicobacter pylori, así como la poca adherencia al tratamiento y el uso indiscriminado de antibióticos. Se evidenció que la tasa de resistencia a tetraciclina aumenta después de un primer tratamiento con este antibiótico, sin embargo la prevalencia de la resistencia global a tetraciclina es baja sin aún alcanzar límites que impidan su utilización en los esquemas de tratamiento.

Objective. To determine the prevalence of Helicobacter pylori resistance to and the possible mutations that generate this worldwide resistance. Materials and methods. A systematic search for literature was performed in the databases Medline, Science Direct (Elsevier), Ovid, PubMed, Lilacs and MedicLatina using relevant key words. Data extraction was independent and checklists were prepared to assess the methodological quality of the studies. Analysis of information was done with RevMan 5®. Results. We found Helicobacter pylori resistance prevalence rates of 1% for North America, 8% for Central and South America, 5% for Asia, and 2% for Europe. The mutation associated to this resistance is in the 16S rDNA gene at nucleotide position 967TTC to AGA965 responsible of high resistance to tetracycline. Conclusions. Antibiotic resistance is one of the causes most associated to treatment failure in the eradication of Helicobacter pylori, as well as poor adherence to treatment and indiscriminate use of antibiotics. We also evidenced that the rate of tetracycline resistance is higher when it is used in a second treatment scheme. The distribution of resistance is variable in different areas and it is important to know these resistances to avoid treatment failures.

Objetivo. Determinar a prevalência da resistência do Helicobacter pylori à tetraciclina e possíveis mutações que geram esta resistência a nível mundial. Materiais e métodos. Foi realizada uma procura sistemática da literatura nas bases de dados Medline, Science Direct (Elsevier), Ovid, Pubmed, Lilacs e MEDICLATINA, usando palavras-chave relevantes. A extração dos dados foi independente e realizaram-se listas de verificação para avaliar a qualidade metodológica dos estudos. A análise dos dados foi realizada em REVMAN 5®. Resultados. Foi evidenciada a resistência de Helicobacter pylori com taxas de prevalência de 1% para a América do Norte, 8% para América Central e América do Sul; 5% para Ásia e 2% para Europa. A mutação associada a estas resistências no gen 16S rDNA nos nucleótidos da posição AGA965 a 967TTC é responsável da alta resistência à tetraciclina. Conclusões. A resistência aos antibióticos é uma das razões mais associadas à falha do tratamento na erradicação de Helicobacter pylori, assim como a pouca adesão ao tratamento e uso indiscriminado de antibióticos; também foi evidente que a taxa de resistência à tetraciclina é maior quando utilizado em regime de segundo tratamento; a distribuição da resistência varia em diferentes áreas e é importante saber estas resistências a fim de evitar falhas terapêuticas.