Revista Colombiana de Biotecnología

FERIA DE BIOTECNOLOGÍA. HANNOVER, 2008

Genetics variability estimation among coconut ecotypes in Cuba by ISTR

Se realizó la caracterización molecular entre 16 ecotipos de cocoteros pertenecientes a una población del municipio de Baracoa, provincia Guantánamo, empleando la técnica Inverse Sequence Tagged Repeat (ISTR). El análisis molecular ISTR detectó un polimorfismo del 81,8%, demostrando la potencialidad de este marcador para realizar estudios de diversidad molecular en el cocotero. El porcentaje de identificación fue alto (Pi=91,2%), lo cual sugiere que las combinaciones de oligonucleótidos empleadas pudieran ser utilizada para estudios de identificación de ecotipos en poblaciones de cocotero de la zona de Baracoa mientras, que la heterocigocidad esperada fue baja (He=0,30). La evaluación de la diversidad en los diferentes ecotipos de cocoteros mediante marcadores ISTR mostró que se cuenta con un nivel de variabilidad, atendiendo a los grupos formados, lo que se corresponde con la gran variación morfológica observada en la población in situ. Además, estos resultados sugieren que la hibridación natural ha sido un factor determinante en la generación de la variabilidad encontrada entre los ecotipos, característica de las variedades de cocotero.

The molecular characterization among 16 coconut ecotypes belonging to a population of Baracoa municipality, Guantanamo province, employing the ISTR technique (Inverse Sequence Tagged Repeat) has been done. The molecular analysis ISTR detected a polymorphism of 81.8%, showing the potenciality of this marker to do studies on molecular diversity in coconut. The identification percentage was high (Pi= 91.2%) suggesting that primer combinations employed could be used to ecotype identification studies on coconut populations of Baracoa. The heterocigocity hoped was low (He=0.30). Diversity evaluation in different coconut ecotypes by means of ISTR markers showed the variability level, according to the groups. This corresponds with the great morphologic variation observed in the population in situ. These results suggest that natural hybridization has been a determinant factor generating the variability found between the ecotypes, typical of coconut varieties.

Application of Differential Photoacoustic Cell to Determine Water Permeability in Decalcified Bone

La espectroscopia mediante celda fotoacústica diferencial (CFD) tiene la capacidad de medir in situ el desarrollo de diversos procesos dinámicos, entre otros la difusión de agua a través de una membrana. Mediante esta técnica se realizó el estudio de permeación de agua en huesos de rata Wistar sanos y descalcificados. Los huesos descalcificados fueron tratados mediante estimulación electromagnética a fin de evaluar la actividad celular en el hueso y, en su caso, detener la descalcificación del mismo. En este trabajo fue posible determinar la viabilidad de la CFD para la evaluación de densidad ósea indirectamente, siendo posible efectuar la evaluación in situ de permeación de agua, así como la cantidad de agua retenida en la estructura ósea al finalizar las pruebas en CFD.

Differential photoacoustic cell (DPC) spectroscopy is able to measure the development of several dynamic processes in situ, such as water diffusion through a membrane. This technique was used for studying water permeation in healthy and decalcified Wistar rat bones. Decalcified bones were given electromagnetic stimulation to evaluate cell activity in bone and attempt to detain decalcification. It was possible to determine the viability of applying DPC for indirectly evaluating bone density in situ, as well as the amount of water retained within bone structure.

Evaluation of substrates and fermentation solid process for spores production of Trichoderma sp.

Se evaluó un aislado nativo del hongo Trichoderma sp. en 13 sustratos y dos procesos de fermentación sólida. Se utilizaron sustratos sólidos a base de semillas de Artocarpus incisa (fruta de pan) y desechos agroindustriales como cascarilla de arroz y algodón. La mejor producción de esporas se registró en el sustrato compuesto por cascarilla de algodón (enriquecida con soluciones de melaza) y semillas de Artocarpus incisa con valores de concentración de esporas entre 2,1 x 10(8) conidios/g, y 8,38 x 10(8) conidios/g. Mientras que las más bajas concentraciones se presentaron en cascarilla de arroz. Los sustratos EA-5 (cascarilla de algodón enriquecida con solución de melaza 1% - Urea 1% (5:1)) y E-FP-1 (cascarilla de algodón al 60% - semillas de Artocarpus incisa, al 40%) se diferenciaron significativamente del resto de los sustratos probados por presentar las más altas concentraciones. Se seleccionaron estos dos sustratos para evaluar dos procesos de producción masiva de esporas de Trichoderma sp. utilizando los procesos de fermentación sólida: artesanal y semi-industrial, este último caracterizado por suministro de aire con presión de 2L/min. Mediante conteos de conidias/g. del polvo cosechado en cámara de Neubauer, se determinó la concentración de esporas en cada uno de los sustratos, obteniéndose concentraciones para los procesos artesanal y semi-industrial de 2,53 x 10(9) y 2.31 x 109 conidios/g, respectivamente. Para estos procesos estadísticamente no se encontraron diferencias significativas, indicando que la aireación aplicada para el proceso semi-industrial no tuvo incidencia relevante para mejorar la esporulación con respecto al proceso artesanal.

A native Trichoderma sp. fungus strain was evaluated in 13 substrates and two solid fermentation processes. Solid substrates based on Artocarpus incisa seed (breadfruit) were used as well as agro-industrial waste, such as rice and cotton husks. The best spore production was recorded in substrate consisting of cotton husks (enriched with molasses solution and 40% Artocarpus incisa seeds) returning 2,1 x 10(8) spore/g to 8,38 x 10(8) spore/g spore concentration values. While that lowest spore concentrations were presented in rice husks, EA-5 (cotton husks enriched with 1% molasses -1% urea solution (5:1) and E-FP-1 substrates (60% cotton husks - 40% Artocarpus incisa seeds) significantly differed from the other substrates tested as they presented the highest concentrations. These two substrates were thus selected for evaluating two solid fermentation-based Trichoderma sp. spore mass production processes: artisanal and semi-industrial; the latter was characterised by air being supplied at 1,6 lb/min pressure. Spore concentration was determined in each substrate by counting conidia/g. harvested dust in a Neubauer chamber, obtaining 2,53 x 10(9) spore/g concentration for the artisanal process and 2,3 x 10(9) spore/g concentration for the semi-industrial one. No statistically significant differences were found for these processes, indicating that the air applied for the semi-industrial process had no outstanding effect on improving sporulation regarding the artisanal process.

Trichoderma harzianum Rifai in vitro antagonism against Fusarium solani (Mart.) Sacc., associated to withering in passion fruit

Cultivos de maracuyá de la región Caribe colombiana presentan problemas de marchitez y el hongo Fusarium solani (Mart.) Sacc., está asociado a esta patología. Plantas de maracuyá de la Estación Experimental (E.E Caribia de Corpoica) poseen este problema y por tal razón se determinó el antagonismo in vitro de aislamientos de Trichoderma harzianum Rifai, frente a F. solani, aislado de plantas enfermas de maracuyá (Passiflora edulis). Utilizando la técnica de cultivo dual en platos Petri con Agar Sabouraud, se evaluaron competencia por nutrientes y espacio, micoparasitismo y porcentaje de inhibición del crecimiento radial (PICR), empleando un diseño estadístico factorial 2x6x1 con arreglo completamente aleatorio. Se obtuvieron tres aislamientos nativos de T. harzianum (TCN-009, TCN-010, TCN-014) de suelo de Palma de Aceite (Elaeis guineensis) de la E.E Caribia, y se compararon con tres aislamientos comerciales (TCC-001, TCC-005, TCC-006). TCC-001 y TCN-014, reportaron ser más competentes por nutrientes y espacio, con el mayor radio de crecimiento de 7,50 y 7,32 cm el día 10, comparado a FSM-011 en el cual solo fue de 2,30 cm. Aunque, TCN-014 mostró micoparasitismo grado 4 con ambos aislamientos de F. solani y TCC-005 únicamente con FSM-012, el cual fue más susceptible a ser micoparasitado. En cuanto al PICR, los tratamientos con mejores porcentajes de inhibición fueron TA-9, TA-12 y TA-6 con valores de 70,56, 68,52 y 65,32% respectivamente. El aislamiento del patógeno mayormente inhibido fue FSM-011. Todos estos resultados demuestran que hubo antagonismo in vitro al utilizar los aislamientos nativos y comerciales de T. harzianum sobre F. solani.

Passion fruit cultivation of the Colombian Caribbean region presents problems withering and the fungus Fusarium solani (Mart.) Sacc., this associated with this pathology. Plant of passion fruit of the experimental station of Corpoica Caribia EE. presented this problem and for that reason it was determined the antagonism in Vitro of isolations of Trichoderma harzianum Rifai, compared with F. solani, isolated from diseased plant of passion fruit (Passiflora edulis). Using the technique of cultivation dual petri dishes with Sabouraud agar was evaluated competition for space and nutrients, mycoparasitism and percentage of inhibition of radial growth (PICR), using a factorial design 2x6x1 under completely random. Three native isolations of T. harzianum were obtained (TCN-009, TCN-010, TCN-014) in soil of oil palm (Elaeis guineensis) in Caribia EE and were compared with three commercial isolations (TCC-001, TCC-005, TCC-006). TCC- 001 and TCN-014 resulting be more competent for nutrients and space, the native isolations with the highest growth of 7.50 and 7.32 radius of centimeters the day 10, compared to FSM-011 in which was only 2.30cm. Although, TCN-014 showed mycoparasitism degree 4 with both isolations of F. solani and TCC-005 only with FSM-012 which was more susceptible to micoparasitism. As for the PICR, treatments with better percentages of inhibition were TA-9, TA-12 and TA-6 with values of 70.56%, 68.52% and 65.32% respectively. The pathogenic isolation largely inhibited was FSM-011. All these results demonstrate that there was antagonism in Vitro to use the native and commercial isolations of T. harzianum on F. solani.

Chemical composition of a culture medium from bitter guava (Psidium araca) and its relation to the ruminals microorganisms nutrition

En el presente trabajo se realiza una comparación entre los resultados obtenidos de la caracterización química a un nuevo medio de cultivo modificado preparado a partir del jugo de guayaba agria (Psidium araca) al 25% p/v, utilizado para el aislamiento y mantenimiento de microorganismos ruminales y del estiércol, y su relación nutricional. Los resultados encontrados presentan al medio de cultivo modificado como una alternativa para el desarrollo y crecimiento de esta microbiota.

The present work compares the results obtained from the chemical characterisation of a new modified culture medium prepared from 25% p/v bitter guava (Psidium araca) juice used for isolating and maintaining microorganisms from rumen and dung and their nutritional relationship. The results suggested that the modified culture medium could be a useful alternative for this microbiota’s development and growth.

Producing and formulating a prototype biofertiliser from a native bacterial strain associated with rice (Oryza sativa)

Los biofertilizantes son productos con base en microorganismos que están involucrados en los procesos nutritivos de las plantas. Además de los microorganismos, es necesario mejorar las condiciones de formulación de los productos para mantener la viabilidad y estabilidad en almacenamiento y campo. El objetivo de este trabajo fue evaluar formulaciones, las cuales se realizaron mezclando el ingrediente activo (bacteria fijadora de nitrógeno) en diferentes relaciones con sustancias húmicas, Polietilenglicol, Carbopol® y quelatos. Los prototipos que mantuvieron la viabilidad durante un periodo de aproximadamente tres meses se evaluaron en cultivos de arroz. Los formulados se evaluaron teniendo en cuenta la dosis aplicada (1 y 2 L/ha); el resultado de uno de los prototipos (M= 8500 kg/ha) mostró un efecto benéfico sobre la producción superando a los testigos (7625 kg/ha). Los resultados de este trabajo, además de contribuir con el aumento de la estabilidad en almacenamiento de algunos prototipos, permitieron mostrar buenos resultados en campo (producción), ratificando la importancia que tienen estos microorganismos en los agroecosistemas.

Biofertilisers are products based on microorganisms involved in plants’ nutritional processes. As well as the microorganisms, the products’ formulation conditions must be improved for maintaining viability and stability during storage and in the field. This investigation evaluated formulation stability and viability; this was done by mixing an active ingredient (a nitrogen-fixing strain) humic substances, polyethylenglycol, Carbopol and chelates, in several ratios. Prototypes maintaining their viability for around 3 months were evaluated on rice crops in the field. Formulations were evaluated considering the applied dose (1 and 2 L/ha); one of these formulations (M = 8,500 Kg/ha) showed an increased beneficial effect regarding the controls (7,625 Kg/ha) in terms of rice crop yield. The results obtained in this work are promissory since they contribute towards increasing

Temperature stress provoke necrosis in black tobacco; quantification by image analysis

El tabaco negro (Nicotiana tabacum L.) es un importante cultivo económico en Cuba por su uso en la manufactura de puros Habanos. Factores bióticos y abióticos lo afectan, de ahí que sea valioso el estudio de los daños fisiológicos que le produce el estrés. El objetivo de este trabajo fue cuantificar los efectos del estrés por temperatura sobre el daño por necrosis en hojas, y determinar la acumulación de peróxido de hidrógeno (H2O2) in situ en los tejidos de Nicotiana tabacum L. (variedad Habana-2000). Se aplicaron diferentes tratamientos de temperatura (4 ºC, 25 ºC, 45 ºC y 60 ºC) a hojas de plantas de 4 semanas de edad; la necrosis se reveló con solución de azul de tripano. El área de tejidos con acumulación de peróxido (H2O2) en plántulas completas de 7 días de edad, sometidas a las mismas condiciones de estrés, se determinó con DAB. Se estimó el porcentaje de área necrosada y de acumulación de H2O2 utilizando el programa de análisis y procesamiento de imágenes ImageJ. Este programa es capaz de adquirir, mostrar, editar, resaltar y analizar imágenes. Se demostró que las hojas sometidas a 4 ºC, independientemente del tiempo de exposición, presentaron una mayor área necrosada (35%) en comparación con el resto de los tratamientos. Las áreas con acumulación de H2O2 in situ fueron mayores en los tratamientos de estrés por temperaturas altas (45 y 60 oC). La detección y cuantificación de la necrosis producida por temperaturas extremas, combinando el método del azul de tripano con el análisis de imágenes, es una herramienta útil para valorar los daños producidos por estrés de temperaturas y pudiera ser utilizado para valorar los daños celulares provocados por otros tipos de estrés.

Black tobacco (Nicotiana tabacum L.) is an important cash crop in Cuba; it is used in the manufactory of Habano cigars. Biotic and abiotic factors affect it, so the studies of physiological damages caused by stress are valuable. The aim of this research was to quantify the effects of temperature stress causing necrotic damage in leaves and to determine the accumulation of hydrogen peroxide (H2O2) in situ on the tissues of Nicotiana tabacum L. (variety Havana-2000). Different treatments of temperature were applied (4 ºC, 25 ºC, 45 ºC and 60 ºC) in leaves of 4 weeks old plants; the necrosis was revealed with trypan blue solution. The area of peroxide accumulation (H2O2) in tissues of complete plants 7 days after germination, submitted to the same stress conditions, was determined with DAB. The percentage of necrotic area and of accumulation of H2O2 was measured using the ImageJ software. It can acquire, display, edit, enhance, and analyze images. It was demonstrated that leaves treated to temperature of 4 ºC, independently of the time of exhibition, presented a bigger necrotic area (35%) in comparison with the rest of the treatments. The areas with H2O2 accumulation in situ were higher in the stress treatments with higher temperatures (45 ºC and 60 ºC). The detection and quantification of the necrosis produced by extreme temperatures combining the trypan blue method with the analysis of images is a useful tool to evaluate damages produced by temperature stress and it could be used to evaluate cell damages provoked by other types of stress.

Micropropagation of Ilex kunthiana Triana & Planchon (Aquifoliaceae), a specie of great importance in vegetal covers programs

En este trabajo se evalúo el cultivo de tejidos vegetales in vitro como una alternativa en la propagación y preservación de Ilex kunthiana, especie endémica de gran interés en programas de revegetalización. Se determinó que el efecto del Benlate® a 0,5% durante 12 horas y el hipoclorito de sodio al 0,5% por 1 min., como agentes desinfectantes de las semillas, permiten obtener el 100% de explantes adaptados a condiciones in vitro. Las semillas son cultivadas en medio MS con Ácido Giberélico (AG3) (0,0, 0,5, 1,0 mg/L). Cuando las plántulas germinaron, se aislaron los nudos con yemas axilares y se cultivaron en medio MS enriquecido con la Auxina Ácido Indol Butírico (AIB) (0,0, 0,5, 1,0 mg/L) y la citoquinina 6-bencilaminopurina (BAP) (0,0, 0,5, 1,0 mg/L). A fin de inducir su enraizamiento, posteriormente los brotes regenerados se cultivaron con las Auxinas Ácido Indol Butírico (AIB) (0,0, 0,5, 1,0 mg/L) y Ácido Naftalén Acético (ANA) (0,0; 0,5; 1,0 mg/L). Se estableció que 0,5 mg/L de AG3 favoreció la 100% de germinación de las semillas que fueron la fuente de los nudos. El mejor índice de formación de brotes se logró cuando los nudos se cultivaron con 0,5 mg/L del BAP y 0,5 mg/L del AIB que posteriormente fueron exitosamente enraizados con 0,5 mg/L de AIB, estableciendo las condiciones mas adecuadas para la propagación in vitro de Ilex kunthiana.

This work evaluated the plant tissue culture like propagation and preservation alternative of Ilex kunthiana, an endemic shrub. It was found that NaOCl (0,5% by 1 min.) and Benlate®, used as disinfectants of I. Kunthiana seeds, showed the best results in regards to the percentage of seeds adapted to in vitro conditions. Seeds were cultured on the basal medium MS enriched with Gibberellic Acid (GA3) (0,0; 0,5; 1,0 mg/L). When seeds were germinated in vitro, from the seedlings were isolated buds and were cultured in the MS medium enriched with Indol butyric acid (IBA) (0,0; 0,5; 1,0 mg/L) and 6-bencilaminopurina (BAP) (0,0; 0,5; 1,0 mg/L). Subsequently, the regenerated shoots were cultured with Auxins Indol Butyric acid (IBA) (0.0, 0.5, 1,0 mg/L) and Naftalen acetic acid (NAA) (0.0, 0.5; 1,0 mg/L) in order to induce their rooting. It was established that 0.5 mg/l of GA3 facilitated seeds germination (100%) that were the source of buds when were cultured with 0,5 mg/L of BAP and 0,5 mg/L of IBA, obtained the highest number of buds that are then successfully rooted with 0,5 mg/L of IBA establishing better conditions for mass propagation of Ilex kunthiana.

Toxicity of Bacillus thuringiensis recombinant δ-endotoxins on Guatemalan potato moth (Tecia solanivora) (Lepidoptera: Gelechiidae) larvae

Con el objetivo de determinar la actividad tóxica específica de las proteínas recombinantes Cry1Aa, Cry1Ac, Cry1B y Cry1C de Bacillus thuringiensis (Bt), sobre larvas de primer instar de Tecia solanivora se estableció la CL50 para las toxinas. Para este fin se implementó la cría masiva de este insecto bajo condiciones de laboratorio, 58±5% de humedad relativa, 18±5ºC de temperatura y un fotoperiodo de 23 h oscuridad y 1 h luz. Se utilizó una dieta seminatural consistente en láminas de papa variedad parda pastusa autoclavada con solución preservante (ácido ascórbico 7 g/L y metilparabeno 5 g/L), ya que fue estable en el tiempo, garantizó la reproducibilidad de los resultados y fue de fácil evaluación. Las proteínas recombinantes se evaluaron a una concentración de 0,1 µg/cm². Los resultados obtenidos de porcentaje de mortalidad indicaron que no había diferencias entre las delta-endotoxinas recombinantes Cry1Aa, Cry1Ac, Cry1B y Cry1C de Bt (P<0,01 y P<0,05). Se calculó la CL50 de las cuatro toxinas, evaluándolas a concentraciones de 0,05; 0,1; 0,15; 0,2; 0,25 y 0,3 µg/cm² de proteína, obteniendo las CL50: Cry1Aa 0,103, Cry1Ac 0,107, Cry1B 0,085 y Cry1C 0,112 µg de proteína/cm². Se comprobó que las δ-endotoxinas evaluadas poseen una alta toxicidad sobre larvas de T. solanivora, siendo levemente mayor la proteína Cry1B. Este resultado es promisorio para posteriores investigaciones en ingeniería genética para la posibilidad de obtener cultivos de papas transgénicas resistente a T. solanivora

The specific toxicity of Cry1Aa, Cry1Ac, Cry1B and Cry1C recombinant proteins from Bacillus thuringiensis (Bt) was determined on Tecia solanivora first instar larvae. Mass breeding of this insect was established in laboratory conditions: 58 ± 5% relative humidity, 18 ± 5ºC temperature and 23 h dark and 1 h light photoperiod. A semi-natural diet was supplied consisting of brown pastusa variety potato slices sterilised with preserver solution (7 g/L ascorbic acid and 5 g/L methylparabene) as it was steady over time, thereby guaranteeing the reproducibility of results and was easy to assess. The recombinant proteins were also evaluated at 0.1 µg/cm² concentration to find significant differences between them. Mortality percentage results indicated that there were no differences between the B thuringiensis Cry1Aa, Cry1Ac, Cry1B and Cry1C delta-recombinant endotoxins (p<0.01 and p<0.05); however, difference s were seen when comparing them with the reference B. thuringiensis var. kurstaki HD1 strain. CL50 was calculated for the four toxins, testing at 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25 and 0.3 µg/cm² protein concentration. Probit Polo PC software was used for determining that the CL50 obtained inside this rank was: Cry1Aa 0.103, Cry1Ac 0.107, Cry1B 0.085 and Cry1C 0.112 µg protein/cm². It was clear that the evaluated d-endotoxins had high toxicity on T. solanivora larvae, the Cyr1B protein being slightly stronger. This result is promissory for further research on genetic engineering aimed at obtaining transgenic T. solanivora-resistant potato crops.

Blanco de Guinea (Dioscorea cayenensis - D. rotundata ) yam clone in vitro nodal segment multiplication in a temporary immersion system

Con el empleo del sistema de inmersión temporal fue posible incrementar la multiplicación in vitro de los segmentos nodales en el clon de ñame Blanco de Guinea. Con este tipo de sistema de cultivo se obtuvieron los más altos valores para la altura de la planta, número de entrenudos por planta, así como para la masa fresca y seca de las mismas. Las condiciones de cultivo creadas en el sistema de inmersión temporal para la multiplicación in vitro de los segmentos nodales lograron el más alto coeficiente de multiplicación (8,50), así como redujeron el número de plantas con síntomas de vitrificación (3,30). Las plantas cultivadas en este tipo de sistema de cultivo se caracterizaron por el mayor crecimiento de los segmentos nodales, coloración verde y hojas más desarrolladas. La utilización de este tipo de sistema de cultivo en la fase de multiplicación in vitro de los segmentos nodales posibilitará incrementar el empleo de la micropropagación para la producción de semilla en el complejo Dioscorea cayenensis - D. rotundata.

´Blanco de Guinea´ yam clone nodal segment multiplication was increased by using the temporary immersion system (TIS). The highest values for plant height, internodal number per plant and fresh and dry weight were obtained in this culture system. Nodal segments cultivated in TIS produced the highest multiplication coefficient (8,50). These plants were characterised by their green colour and rapid growth. The number of plants having vitrification symptoms (3,30) became reduced due to the favourable culture conditions created in the TIS. It is recommended that nodal segment multiplication in TIS be include in the available micropropagation protocols for Dioscorea cayenensis - D. rotundata to decrease propagation/production costs.

Comparison of two kits of RT-PCR in RNAm Detection of two endegenous genes of potato (Solanum tuberosum spp. Andigena)

RT-PCR es una técnica en la que usando ARN mensajero como molde, se obtiene complementario o cADN por transcripción inversa, y luego se amplifica uno de los cADN por PCR, mediante el uso de primers específicos. Esta técnica permite realizar estudios de expresión, a nivel de ARN mensajero. Con el propósito de implementar la técnica en papa (Solanum tuberosum spp. Andígena), se utilizaron plántulas cultivadas in vitri de la variedad Pastusa Suprema. Inicialmente se establecieron las condiciones para la extracción de ARN total usando el kit TRizol® Reagent de Invitrogen™, con el que se obtuvieron excelentes resultados. Este ARN se usó como molde para evaluar dos kits: "ONE Step superScript™" y "SuperScript™ First Strand Syntesis For RT-PCR SS™ II RT", de Invitrogen™. Se usaron primers específicos para dos genes endógenos: cox y actina. El primero es un gen mitocondrial y el segundo es un gen nuclear. Se observaron señales claras y diferenciables de amplificación para cox, utilizando el kit "ONE Step superScript™", con un tamaño esperado de 96 pb. Para actina, se observó una señal clara de amplificación de 300 pb, con el kit "SuperScript™ First Strand Syntesis For RT-PCR SS™ II RT".

RT-PCR is a technique which using a RNAm like template is obtained a cDNA (complementary DNA) for reverse transcription, then is amplified one of them by PCR using specifics primers. This technique allows make expression studies to mRNA level. In order to implement this technique in potato (Solanum tuberosum spp. Andigena), was used in vitri grow plants Pastusa Suprema variety. Initially was established the total RNA extraction conditions using the Invitrogen ™ TRizol® Reagent kit., with this the results were successful. Extracted RNA was used as a template to probe two Invitrogen™ kits: "ONE Step superScript ™"and "SuperScript™ First Strand Syntesis For RT-PCR SS™ II RT". The specifics primers were designed for endogenous genes: cox and actin. The first one is a mitocondrial gene and the second one is a nuclear gene. Defined amplification signals for cox, using "ONE Step superScript ™" kit, whit a spected 96 bp size. In actin, a clear amplification signal was observed (size 300 bp) with the "SuperScript™ First Strand Syntesis For RT-PCR SS™ II RT" kit.

The effect of different sucrose concentrations on coconut (Cocos nuciferas L.) in vitro conservation

Tradicionalmente el germoplasma de cocotero en Cuba se encuentra mantenido en colecciones in situ; esta forma de conservación conlleva elevados costos de manutención y altos riesgos de erosión genética debido principalmente a la exposición del material vegetal al ataque de plagas y enfermedades, y a la incidencia de desastres naturales. El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto de la adición de diferentes concentraciones de sacarosa en el medio de cultivo in vitro de embriones cigóticos de coco para la conservación de los recursos genéticos de esta especie. Se utilizó el medio Eeuwens con la adición de sacarosa al 20, 40, 60 y 80 g/l-1. A los 6 meses de cultivo se determinó el porcentaje de germinación, y a los 18 meses las siguientes variables: los porcentajes de supervivencia y enraizamiento, el número de hojas, la longitud y el grosor del vástago de las plántulas mantenidas in vitro. Se utilizó un diseño experimental completamente aleatorizado con análisis de varianza de clasificación simple y prueba de comparación múltiple de medias de Tukey. Los resultados obtenidos demostraron que la incorporación de 60 g/l-1 de sacarosa en el medio Eeuwens es la más adecuada para la conservación de los recursos genéticos de coco (Cocos nucifera L) en condiciones in vitro a partir de embriones cigóticos, donde se muestran los más altos porcentajes de supervivencia y el mayor vigor de las plántulas a los 18 meses de cultivo.

Cuban coconut germplasm is traditionally maintained in in situ collections; such conservation leads to high maintenance costs and genetic erosion risks, mainly due to plant material becoming exposed to pest and disease attack and that of natural disasters. The present research evaluated the effect of different sucrose concentrations on in vitro coconut zygotic embryo culture media for conserving this species’ genetic resources. Eeuwens medium was used, containing added 20, 40, 60 and 80 g/l-1 sucrose. Germination percentage was evaluated after six months’ cultivation and the following variables after 18 months’ cultivation: survival and rooting percentages, the number of leaves, shoot length and the thickness of the plantlets maintained in vitro. A totally randomised experimental design was used; one-way variance analysis and Tukey multiple means comparison tests were applied to the data. The results demonstrated that 60 g/l-1 sucrose in Eeuwens medium was the most appropriate for zygotic embryo coconut (Cocos nucifera L) conservation in in vitro conditions, where plantlets showed the highest survival percentages and the most vigorous growth at 18 months of in vitro culture.

Biological Data Resources at the EMBL-EBI

Applied Biotechnology Achievement of the BIOSEC Group

Ethics and Biotechnology: More questions then answers