Revista Colombiana de Biotecnología

Antibiotics: magic bullets which have not yet hit the target?

Extraction systems for isolating esterases having interfacial adsorption

Interfacial esterases present great functional versatility, making them very attractive molecules for industrial applications. The conditions for extracting interfacial esterases previously detected in the sea anemone Stichodactyla helianthus and the shrimp Litopenaeus vannamei were optimised in this work. Animal homogenates were treated with Triton X-100, Tween 20 and Tween 80 detergents at two different concentrations: critical micellar concentration (CMC) and half of that concentration; 0.5 mol/L NaCl and n-butanol at 5%, 10% and 20% v/v ratios were also tested. Each procedure was compared to the control extraction method using distilled water. The best results were obtained with 20% n-butanol for recovering esterase and phospholipase activity whilst 10% n-butanol extraction was the most effective for lipase activity isolation. This solvent's suitability for isolating interface-activated enzymes could be explained by its ability to dissociate biomolecule aggregates and cause enzyme desorption from the membranes and tissues remaining in the preparation.

En el presente trabajo se optimizaron las condiciones de extracción de esterasas con actividad en interfaces, a partir de la anémona marina Stichodactyla helianthus y del camarón peneido Litopenaeus vannamei. Las esterasas interfaciales, cuya presencia en estas especies había sido informada previamente, presentan características funcionales que las hacen muy atractivas para su empleo industrial. Los homogenados de los animales se trataron con los detergentes Tritón X-100, Tween 20 y Tween 80 en dos concentraciones cada uno: la Concentración Micelar Crítica (CMC) y la mitad de ésta. Además se empleó NaCl 0,5 mol/L y n-butanol a las proporciones 5, 10 y 20%. Cada variante fue comparada con el método tradicional de extracción con agua destilada, que fue tomado como control. Los mejores resultados se obtuvieron empleando n-butanol al 20%, para recuperar las actividades esterasa y fosfolipasa, y al 10%, en el aislamiento de la actividad lipasa. La efectividad de este solvente en el aislamiento de estas enzimas con afinidad por las interfaces lípido/agua, pudiera estar dada por su capacidad para romper los agregados entre estas moléculas y causar la desorción de las mismas a los restos de membrana y tejidos presentes en la preparación.

The effect of activated charcoal, indol acetic acid (IAA) and benzylaminopurine (BAP) on Epidendrum elongatum Jacq protocorm-like body (PLB) development in in vitro conditions

El desarrollo vegetativo de los protocormos de Epidendrum elongatum Jacq., una orquídea endémica y en vías de extinción, se logró eficazmente mediante el cultivo in vitro en el medio Murashige y Skoog (1962), donde se evaluó el efecto de la interacción entre los siguientes tres factores: carbón activado (0,0; 0,5; 1,0% (w/v)); ácido indol acético (0,0; 0,5; 1,0 mg.L-1); bencil amino purina (0,0; 0,5; 1,0 mg.L-1). El medio de cultivo empleado fue enriquecido con sacarosa al 3%, y el Myo inositol al 0,1 g.L-1. En este estudio se evaluó que el efecto sobre la tasa de crecimiento de la interacción del carbón activado en concentraciones de 0,5 y 1,0% con 0,5 mg.L-1 de AIA es positivo para el desarrollo de los protocormos de E. elongatum bajo condiciones in vitro, mientras que la interacción del BAP, tanto en concentraciones de 0,5 mg.L-1 y 1,0 mg.L-1, muestra resultados no tan favorables en cuanto al grado de desarrollo de los protocormos estudiados. Este estudio describe un protocolo que permite alcanzar más de 270.000 plántulas en excelente desarrollo vegetativo dentro de 30 semanas, a partir de una cápsula de esta importante orquídea. Este protocolo es un modelo de conservación para especies que se encuentran en vías de extinción, y además permite la propagación a gran escala de Epidendrum elongatum.

The vegetative development of protocorm-like bodies (PLB) from Epidendrum elongatum Jacq. (an endemic and endangered orchid) was effectively achieved through in vitro culture in Murashige and Skoog medium (1962); the effect of the interaction between the following three factors was studied: activated charcoal (0.0, 0.5, 1.0% (w/v)), indol acetic acid (0.0, 0.5, 1.0 mg.L-1), benzylaminopurine (0.0, 0.5, 1.0 mg.L-1). The culture medium being gerused was enriched with 3% sucrose and 0.1 g.L-1 myo-inositol. This study revealed that the effect of 0.5% and 1.0% activated charcoal concentrations interacting with 0.5 mg.L-1 AIA on PBL growth rate was positive for E. elongatum PBL development in vitro conditions, whereas the interaction of BAP (at both 0.5 mg.L-1 and 1.0 mg.L-1 concentration) did not produce such favourable results regarding the degree of development of the PLB being studied. This study describes a protocol leading to more than 270,000 seedlings enjoying excellent vegetative growth being obtained within 30 weeks from a single capsule from this important orchid. This protocol represents a model for conserving endangered species and promotes large-scale Epidendrum elongatum propagation.

Studies of lead biosorption by Saccharomyces cereviceae in aqueous solutions

El ecosistema del lago Titicaca (Puno, Perú) y sus tributarios, viene siendo perturbado por metales pesados producto de la actividad minera emergente. Para controlar y reducir la contaminación existen procesos biológicos llevados a cabo por microorganismos como las levaduras (biorremediación). Este trabajo de investigación tiene como objetivos evaluar la capacidad de bioadsorción de plomo mediante Saccharomyces cereviceae en soluciones acuosas y la influencia de dos niveles de pH durante la bioadsorción. Para esto se ensayaron dos concentraciones de S. cereviceae (cel/mL), las cuales fueron cuantificadas por un hemocitómetro y luego traspasadas a una solución con concentraciones conocidas de plomo (5 y 25 mg/L). Se realizaron lecturas de las concentraciones de plomo a los 5, 60 y 120 minutos. La mayor capacidad de bioadsorción resultó cuando S. cereviceae estaba a una concentración de 5 x 10(6) cel/mL, y el pH óptimo fue de 5,14. Se concluye que S. cereviceae constituye una buena alternativa para la bioadsorción de plomo, quedando abierta su validación en condiciones de campo en el altiplano peruano.

Lake Titicaca's ecosystem and that of its tributaries in Puno (Peru) are being disturbed by heavy metals resulting from emergent mineral activity. Biological processes involving microorganisms such as yeasts (bioremediation) are being used for controlling and reducing such pollution. This research was aimed at evaluating Saccharomyces cereviceae's lead biosorption capacity in aqueous solutions and evaluating the influence of two pH levels on biosorption. Two S. cereviceae concentrations (cel/mL) were tested; these concentrations were quantified in a haemocytometer and then put into a solution having a known lead concentration (5 and 25 mg/L). Lead concentrations were read after 5, 60 and 120 minutes. The results revealed that the best biosorption level was obtained with a 5 x 10(6) cel/mL S. cereviceae concentration at 5.14 pH. S. cereviceae thus constitute a good alternative for lead biosorption; however, its validation in Peruvian altiplano field conditions remains to be tested.

Autoctonous yeasts having fermentation ability in producing ethanol from Musa (AAB Simmonds) plantain surplus pulp in the Córdoba department of Colombia

Se evaluó la capacidad fermentativa de levaduras nativas de la zona costanera del departamento de Córdoba, Colombia, para la obtención de etanol a partir de la pulpa de excedentes de plátano Musa (AAB Simmonds), con el objetivo de encontrar cepas eficientes. Los microorganismos utilizados correspondieron a las especies: Kloeckera sp, Candida guillliermondii 14AD, Candida albicans y Candida guillliermondii 13AD (nativas), y una cepa comercial de referencia, Saccharomyces cerevisiae T73. La fermentación se realizó a diferentes concentraciones de sustrato, siendo la concentración del 40% la mejor; se evaluó la producción de etanol mediante el método colorimétrico del dicromato de potasio utilizando un equipo espectrofotómetro Lambda 11. Se observó que la levadura Candida guilliermondii 14AD nativa fue la más eficiente con una producción promedio de 3,45% v/v de etanol a las 72 horas de fermentación; no se encontraron diferencias estadísticamente significativas con la producción de etanol a partir de la cepa de referencia, la cual produjo 3,59% v/v. Estos resultados sugieren la existencia de levaduras nativas con capacidad para ser utilizadas en la obtención de etanol a partir de material residuo de plátano.

Native yeasts' (Cordoba, Colombia) fermentation ability for producing ethanol from plantain (Musa AAB Simmonds) surplus pulp was evaluated; the object was to find efficient yeasts. The microorganisms used here came from the Kloeckera sp, Candida guillliermondii (14AD), Candida albicans and Candida guillliermondii 13AD strains (native) and Saccharomyces cerevisiae T73 (a commercial reference yeast). Fermentation was carried out on different substrate concentrations, the 40% one giving the best result; ethanol production was evaluated by the potassium dichromate colorimetric method using a Lambda 11 spectrophotometer. It was observed that the Candida guilliermondii 14AD native yeast was the most efficient, having an average 3.45% v/v ethanol production after 72 hours' fermentation. There were no statistically significant differences compared to reference yeast strain ethanol production (3.59% v/v). These results suggest that native yeasts can be used in obtaining ethanol from residual plantain matter.

The bla_CTX-M-12 gene's genetic environmnt in Klebsiella pneumoniae hospital isolates

En Colombia se han detectado genes del grupo CTX-M-1 con alta frecuencia en aislamientos de Klebsiella pneumoniae causantes de infección intrahospitalaria. El conocimiento de los factores genéticos que pueden favorecer la diseminación de estos genes entre especies bacterianas es un aspecto importante para el control de la resistencia. En este estudio se identificaron los plásmidos portadores del gen blaCTX-M-12 en 21 aislamientos clínicos de K. pneumoniae. Se evaluó por conjugación la transferencia de resistencia a antibióticos. Integrones, secuencias de inserción y otros elementos genéticos fueron detectados por amplificación del ADN plasmídico con la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Mediante análisis por PCR se determinó la relación entre el gen blaCTX-M-12 y los elementos genéticos detectados. En todos los aislamientos, el gen blaCTX-M-12 se encontró en plásmidos conjugativos de tamaños entre 65 y 106 kpb. La transferencia por conjugación de estos elementos móviles puede explicar la amplia diseminación de este gen entre enterobacterias causantes de infección nosocomial en hospitales de Bogotá, Colombia. El gen blaCTX-M-12 se encontró corriente abajo de ISEcp1, secuencia de inserción que se ha asociado con la movilización de determinantes genéticos de resistencia. Los promotores de ISEcp1, detectados por análisis de secuencia, pueden facilitar la expresión de la cefotaximasa codificada por este gen.

Genes from CTX-M-1 group have been detected with great frequency in Colombia in intrahospital infection- causing Klebsiella pneumoniae isolates. Knowledge regarding the genetic factors favouring such genes' dissemination amongst bacterial species is an important issue for resistance control blaCTX-M-12 gene- carrying plasmids were identified in this study in 21 clinical K. pneumoniae isolates. Antibiotic resistance transfer was evaluated by mating. Integrons, insertion sequences and other genetic elements were detected by plasmid DNA amplification using polymerase chain reaction (PCR). The relationship between the blaCTX-M-12 gene and other genetic elements was determined by PCR analysis. The blaCTX-M-12 gene was disemifound on 52 to 106 Kpb conjugative plasmids in all isolates. These mobile elements' transfer by mating may explain their wide dissemination amongst nosocomial infection-causing enterobacteria in hospitals in Bogota, Colombia. The blaCTX-M-12 gene was found downstream from ISEcp1, this being an insertion sequence which has been associated with resistance genetic determinants' mobilisation. ISEcp1 promoters (detected by sequence analysis) may increase the expression of cefotaximase encoded by this gene.

Immobilising lignilolytic fungus for removing reactive black 5 dye

La presencia de colorantes azoicos en aguas residuales de la industria textil es un problema ambiental y sanitario, porque muchos de estos compuestos son cancerígenos. Los tratamientos biológicos son una alternativa para la remoción de ese tipo de colorantes. En el presente trabajo se evaluó el efecto de tres hongos de podredumbre blanca, Trametes versicolor, Pleurotus ostreatus y Phanerochaete chrysosporium sobre la decoloración de un agua que contiene colorante negro reactivo 5 (NR5), ampliamente usado en la industria textil. Se estudió la inmovilización de estos hongos en dos soportes, espuma de poliuretano y estropajo (L. cylíndrica) para seleccionar el mejor soporte y el hongo con mayor capacidad para la decoloración. Ambos soportes fueron igualmente efectivos, pero se seleccionó estropajo por ser un producto natural. El hongo que generó los mayores porcentajes de decoloración en 4 días fue Trametes versicolor, con 96%, 98% y 98% para agua con concentración de NR5 300 ppm, 150 ppm y 75 ppm, respectivamente. La actividad lacasa para cada concentración de NR5 fue 8 U L-1, 7 U L-1 y 5 U L-1.

Waste water from the textile industry represents a major environmental and health problem because it contains azo dyes whose carcirogenic effect has been tested in research. Biological treatment represents a valuable alternative for removing these dyes. The effect of Trametes versicolor, Pleurotus ostreatus and Phanerochaete chrysosporium rot fungi on decoloration of water containing reactive black five (NR5) textile dye was evaluated in this work. Immobilising the fungi on polyurethane foam and luffa sponge (Luffa cylindrica) supports was studied in order to select the best support and the fungi having the best decolorisation. Both supports were equally effective; however, the luffa sponge was selected as being a natural product. Trametes versicolor produced the highest decolorisation percentages in four days (96%, 98% and 98% for 300 ppm, 150 ppm and 75 ppm NR5 concentrations, respectively) while lacase enzyme activity was 8 UL-1, 7 UL-1 and 5 UL-1 for each of them.

Phytase production by Aspergillus ficuum in submerged and solid state fermentation using agroindustrial waste as support

Se describe la producción de fitasa mediante cultivos del tipo sumergido (SmF) y sobre sustrato sólido (SSF) con Aspergillus ficuum DSM 932 en medios de cultivos basados en residuos de la agroindustria. La actividad enzimática fitásica se usó como medida indirecta de la producción de la enzima. En SmF, pH 5,3 y 25 °C, se trabajó en fermentadores de diferentes volúmenes y con el mayor se operó con diferentes niveles de aireación y agitación. En SSF a 25 °C se usaron placas de Petri. En SmF con un medio basado en cereales se presentó la mejor actividad neta (0,25 FTU/mL) al sexto día para 300 rpm y 0,5 vvm. En SSF, la torta de canola resultó ser el mejor sustrato con una actividad fitásica neta máxima al tercer día de 6,79 FTU/mL de extracto, equivalente a 33,96 FTU/g de sustrato sólido o 56,43 FTU/g de sustrato seco. Aplicando tecnologías de membrana se concentró un extracto de fitasa a partir de una SmF en medio basado en cereales y también fue posible purificar 6,33 veces un extracto de fitasa producido en SSF con torta de canola, diafiltrando tres veces consecutivas el retenido de 100 kDa. La enzima fitasa de la cepa A. ficuum DSM 932 mostró tener un tamaño = 100 kDa.

Phytase production by submerged fermentation (SmF) and solid state fermentation (SSF) using Aspergillus ficuum DSM 932 in agro-waste-based culture media is described here. Phytase enzyme activity was used for the indirect measurement of enzyme production. Fermentation was carried out in SmF, pH 5.3 at 25 °C with two fermenters having different volumes; the largest one had different levels of aeration and agitation. Petri dishes were used for SSF at 25 °C. A cereal-based medium obtained the best net activity (0.25 FTU mL-1) for SmF on the sixth day at 300 rpm at 0.5 vvm. Canola cake was the best substrate for SSF, having maximum net phytase activity on the third day: 6.79 FTU mL-1 extract, equivalent to 33.96 FTU g-1 solid substrate or 56.43 FTU g-1 dry substrate. A phytase extract was concentrated from an SmF-based medium in cereals by applying membrane technologies. A phytase extract produced in SSF with canola cakes was purified 6.33 times using three consecutive diafiltrations of the 100 kDa retentate. A. ficuum DSM 932 phytase was = 100 kDa in size.

Relationships between nitrogen fixation and auxins production in Gluconacetobacter diazotrophicus strains from different crops

Se determinó la capacidad de fijar nitrógeno mediante la actividad reductora de acetileno para 8 cepas de G. diazotrophicus aisladas de diferentes ecosistemas empleando el medio LGI-P. Además, se determinó la producción de auxinas a través del método de Salkowski y se analizó la influencia del aminoácido triptófano y del AIA en la actividad de la nitrogenasa. El triptófano, al igual que otros aminoácidos y las diferentes concentraciones de AIA, inhiben en distinta medida la actividad de la enzima solo parcialmente. Se demostró que las condiciones de nitrofijación no afectan la producción de AIA en esta bacteria. Esta relación entre ambas capacidades fisiológicas beneficiosas para los cultivos agrícolas pudiera tener gran importancia ya que pueden desarrollarse paralelamente, y potenciar la acción beneficiosa hacia la planta, basada en la dinitrofijación y la producción de auxinas estimuladoras del crecimiento vegetal.

The capacity to fix nitrogen of 8 strains of G. diazotrophicus from different ecosystems was determined by acetylene reduction assay using LGIP medium. Moreover, auxins production was determined by Salkowski´s method and the influence of triptophan and indoleacetic acid (IAA) in the nitrogenase activity were analyzed. The triptophan as other aminoacids and different concentrations of IAA, inhibit at different levels the nitrogen fixation only partially. There were demonstrated that the nitrogen fixation conditions do not affect the auxins production of this bacteria. This relationship between both crop beneficial physiological capacities should be a great importance since they may be parallely developed, and enhance the beneficial action to the plant, based on dinitrogen fixation and stimulating plant growth auxins production.

In situ serological, microscopy and hybridization detection of CVT

El virus de la tristeza de los cítricos (CTV), es perjudicial para la citricultura y causa la enfermedad llamada tristeza de los cítricos. Infecta las especies del género citrus ocasionando la muerte de millones de árboles. Los síntomas son decaimiento rápido (QD) y acanalamiento de tallo (SP). En el trabajo se diagnosticó molecular y serológicamente al CTV en aislados provenientes de Citrus aurantifolia o Lima Tahití (LT) y citrus madurensis (Lour) o Calamondino (Ca), y se realizaron estudios preliminares de detección viral por medio de microscopía óptica e hibridación in situ. Se utilizó IC-RT-PCR e inmunoimpresión de tejido (IMI) expuestos a los anticuerpos monoclonales 3DF1+3CA5, y con el anticuerpo discriminante MCA 13 con técnica de Enzyme Linked Inmunossorbent Assay Doble Sándwich (Elisa-DAS). La detección por microscopia microscopía se realizó sobre secciones de pecíolo de LT y C que se tiñeron con Azure A, y con acetato de uranilo y citrato de plomo. Para la hibridación in situ se empleó una sonda marcada con digoxigenina dirigida hacia el gen de la proteína mayor de la cápside. Los resultados de IC-RT-PCR, IMI y Elisa fueron positivos para LT y C, indicando la presencia de variantes virales de tipo severo. Con microscopía de luz se detectaron inclusiones citoplasmáticas en las células acompañantes y del floema, confirmado con IMI y por hibridación in situ. Se visualizaron inclusiones de partículas virales en el tejido vegetal con microscopía electrónica con cambios en la ultraestructura celular como presencia de grandes vacuolas propias de la infección viral. Este trabajo integra distintas técnicas diagnósticas sobre dos especies cítricas exóticas.

Citrus tristeza virus (CTV), is deleterious for citriculture and cause citrus tristeza disease. CTV infects all Citrus species causing the death of millions of trees. Main symptoms are quick decline (QD) and stem pitting (SP). In this work serological, molecular and microscopical CTV diagnose was done in Citrus aurantifolia or Tahití Lime (Citrus latifolia Tanaka) (LT) and citrus madurensis (Lour) or Calamondino (Ca) isolates. Petioles were tissue printing (IMI) and exposed to 3DF1+3CA5 monoclonal antibodies; they were then Elisa buffer extracted and exposed to MCA 13 monoclonal discriminant antibody in a double-antibody sandwich indirected enzyme-linked Inmunossorbent Assay (DASI-Elisa). Immunocapture-reverse transcriptase amplification (IC-RT-PCR) with specific mayor coat protein gene (CPG) primers were used on the Elisa buffer extracts as template. Optic and electron microscopy detection was carried out on transversal sections of petiole and were stained with Azure A or uranile acetate and plumb citrate, respectively. Digoxigenine marked mayor CPG CTV probes were used for in situ hybridization of petioles printing. All IC-RT-PCR, IMI and Elisa results were positive for LT and C too indicating the presence of severe viral variants. Light microscopy cytoplasm inclusions were detected in the phloem and accompanying cells, confirmed with IMI and in situ hybridization. Electronic microscopy analysis showed cellular abnormalities with changes in ultraestructure with big vacuoles presence that are characteristic of cytoplasmic viral infection. This is the first work that integrate all different diagnostic techniques in this two exotics citrus species.

Selection of natives strains of Bacillus sp. with chitinolytic and proteolytic activity, isolated from tropical soils

El objetivo de este trabajo fue la selección de cepas nativas del género Bacillus con actividad quitinolítica y proteolítica, en suelo tropical en la costa de Oaxaca, México. Se aislaron 150 cepas, de las cuales 22 fueron seleccionadas por presentar actividad quitinolítica y proteolítica. Dicha actividad se evaluó por la formación de halo de hidrólisis alrededor de la colonia en medios de cultivo suplementados con quitina coloidal al 5% y leche descremada al 1% respectivamente. Las cepas LUM B001, B003, B013, B015 y B065 presentaron mayor actividad quitinolítica y proteolítica, por lo que tienen el potencial para ser evaluadas en control biológico de hongos fitopatógenos. Se encontró al género Bacillus distribuido en suelos cultivados y no cultivados, no se encontraron diferencias estadísticas según el cultivo establecido (P<0,05), sin embargo se encontraron diferencias significativas (P<0,05) entre las zonas estudiadas, correspondiendo las menores recuperaciones de cepas a los terrenos del municipio de Tututepec, Oaxaca.

The aim of this work was the selection of native strains of the genus Bacillus with chitinolytic and proteolytic activity in soil in the tropical coast of Oaxaca, Mexico. We isolated 150 strains, of which 22 strains were selected by submitting chitinolytic and proteolytic activity. This activity was assessed by the formation of hydrolysis halo around the colony in culture media supplemented with colloidal chitin, and 5% skim milk to 1% respectively. LUM strains B001, B003, B013, B015 and B065-chitin showed higher proteolytic activity, have the potential to be evaluated in biological control of plant pathogenic fungi. The genus Bacillus were found distributed in cultivated and uncultivated soils, we found no statistical differences according to the crop (P <0.05), but differences were significant (P <0.05) between the areas studied, with lower recoveries of strains For land in the municipality of Tututepec, Oaxaca.

Microbial metabolisms over advanced processes for Nitrogen removal, a prospective review

Los procesos avanzados para la remoción de nitrógeno están íntimamente relacionados con los metabolismos de las comunidades microbianas que intervienen en las transformaciones del mismo. Para el diseño, la optimización o el mejoramiento de los sistemas de tratamiento de aguas residuales domésticas, el ingeniero y el microbiólogo en forma conjunta, han logrado configurar reactores terciarios adecuados para el desenvolvimiento de estas comunidades, obteniendo altas eficiencias de remoción de los nutrientes. Este artículo presenta una revisión sobre la actividad bacteriana y su aplicación en los sistemas de tratamiento, inicia conceptualizando la influencia de los microorganismos y de la actividad humana en el ciclo global del nitrógeno, para después hacer un análisis de los procesos particulares en los cuales los microorganismos intervienen. Se clasifican e incluyen nuevas evidencias de metabolismos relacionados, y se describen como ejemplos algunos de los procesos de tratamiento terciario para aguas residuales desarrollados con éxito en las últimas décadas.

Advanced processes for nitrogen removal are intimately related to the microbial community metabolisms that take part in the transformations. For the design, optimization or improvement of domestic waste water treatment systems, engineers and microbiologists working together, have managed to implemented suitable tertiary reactors for the development of these communities, improving the efficiency of nutrient removal. This article presents a revision of the bacterial activity and its application in treatment systems. The article begins by giving an explanation about the influence of microorganism and human activity on the global nitrogen cycle. Then, it analyzes the particular processes in which the microorganisms take part. New evidence of related metabolisms are classified and included. Some of the processes of wastewater tertiary treatment, successfully developed over the last decades, are described as examples.

Standarization of a simple protocol for yeast genomic DNA extraction

Se estandarizó un protocolo rápido, sencillo y de bajo costo para la extracción de ADN genómico de levaduras a partir de lisis de la pared celular mediante tratamiento enzimático y precipitación por alcoholes. El empleo de la enzima Beta-glucoronidasa en reemplazo de la enzima Zimolasa, permitió obtener ADN en alta concentración (124,9±30,2 ng/µl) y de buena calidad (A260/A280 nm = 1,86±0,1), ideal para su uso en estudios de biología molecular. Además, se adicionó un paso de incubación del ADN obtenido a 100° C para inactivar ADNasas. La calidad del ADN obtenido fue evaluada por medio de la amplificación de la región ITS1-5.8S-ITS2, presentando bandas definidas y cuantificables (entre 380 y 880 pb) ideales para estudios de identificación molecular y filogenia.

A quick, simple and low-cost protocol for yeast DNA extraction by enzymatic treatment and alcoholic precipitations for cell wall lysis was standardized. By using Beta-glucuronidase instead of Zymolyase higher yields of DNA were obtained (124.9±30.2 ng/µl) with very high quality (A260/A280 nm = 1.86±0.1) and suitable for molecular biology assays. Moreover, a DNAse inactivation step by incubation at 100° C, was also introduced to ensure further DNA stability. DNA quality was assayed by PCR amplification of the ITS1-5.8S-ITS2 region, showing defined, quantifiable bands between 380 and 880 bp. These results are ideal for molecular identification and phylogenetic studies.

Conservation of ombusillo, an endangered plant from the Buenos Aires province, Argentina

Phytolacca tetramera Hauman "ombusillo", es una especie vegetal endémica del SE de la Provincia de Buenos Aires, Argentina, que se halla en peligro crítico de extinción. Su principal factor de amenaza es la reducción del hábitat por acción antrópica. Esta especie presenta principios activos fungicidas y, posiblemente, dada su afinidad con otras especies del mismo género, presente compuestos antivirales, antitumorales, bactericidas e insecticidas. Se realizaron ensayos de macropropagación con distintas concentraciones de reguladores de crecimiento de tipo auxínicos que muestran claramente un enraizamiento óptimo correspondiente a segmentos de ejes aéreos vegetales "estacas" sometidas a 300 ppm de ácido indol butírico y a segmentos de tallos subterráneos sin aplicación de hormonas. Así mismo, se realizaron ensayos de germinación, en condiciones de luz y de oscuridad, comprobándose que las semillas presentan fotoblastismo positivo con un porcentaje de germinación del 65%, el cual disminuye enormemente luego del año de cosecha.

Phytolacca tetramera Hauman "Ombusillo" is an endemic species of plant of the south-east of Buenos Aires province that is in critical danger of extinction. The main factor that threatens this species is the reduction of natural environment by antropic action.This species owns antifungal properties, and due to the relationship with other species of the same genus, it could also own antiviral, antitumoral, antibacterial and insecticidal compounds. Macropropagation experiments with different concentrations of auxinic grouth regulators were carried out. As a result, segements of aerials axis "stakes" treated with 300 ppm of indol-butiric acid and segments of underground stems without hormonal treatment,showed an optimum rooting.Germination experiments under dark and light conditions were also developed finding that seeds showed positive photoblastisme with a germination rate of 65 %, declining considerably after a year of the crop.