Revista Colombiana de Biotecnología

Institutional misunderstandings about genetic diversity research

Preferential Protection of Domains II and III of Bacillus thuringiensis Cry1Aa Toxin by Brush Border Membrane Vesicles

The surface exposed Leucine 371 on loop 2 of domain II, in Cry1Aa toxin, was mutated to Lysine to generate the trypsin-sensitive mutant, L371K. Upon trypsin digestion L371K is cleaved into approximately 37 and 26 kDa fragments. These are separable on SDS-PAGE, but remain as a single molecule of 65 kDa upon purification by liquid chromatography. The larger fragment is domain I and a portion of domain II (amino acid residues 1 to 371). The smaller 26-kDa polypeptide is the remainder of domain II and domain III (amino acids 372 to 609). When the mutant toxin was treated with high dose of M. sexta gut juice both fragments were degraded. However, when incubated with M. sexta BBMV, the 26 kDa fragment (domains II and III) was preferentially protected from gut juice proteases. As previously reported, wild type Cry1Aa toxin was also protected against degradation by gut juice proteases when incubated with M. sexta BBMV. On the contrary, when mouse BBMV was added to the reaction mixture neither Cry1Aa nor L371K toxins showed resistance to M. sexta gut juice proteases and were degraded. Since the whole Cry1Aa toxin and most of the domain II and domain III of L371K are protected from proteases in the presence of BBMV of the target insect, we suggest that the insertion of the toxin into the membrane is complex and involves all three domains.

La superficie de la toxina Cry1Aa, en el asa 2 del dominio II contiene expuesta la leucina 371, la cual fue modificada a lisina produciendo una mutante sensible a la tripsina, L371K. Esta mutante produce dos fragmentos de 37 y 26 kDa por acción de la tripsina que son separables por SDS-PAGE, pero que a la purificación por cromatografía líquida se mantienen como una sola molécula de 65 kDa. El fragmento grande contiene al dominio I y una parte del dominio II (aminoácidos 1 al 371). El polipéptido de 26 kDa contiene la parte restante del dominio II y dominio III (aminoácidos 372 al 609). Cuando la toxina mutante fue tratada con dosis altas de jugo intestinal de Manduca sexta, ambos fragmentos fueron degradados. Sin embargo, cuando fueron incubados en VMBC de M. sexta, el fragmento de 26 kDa fue protegido preferencialmente de las proteasas intestinales. Como se ha reportado, la toxina silvestre Cry1Aa también es protegida de la degradación de las proteasas cuando es incubada en VMBC de M. sexta. Sin embargo, cuando se adicionó VMBC de ratón a la mezcla de reacción, ni la toxina Cry1Aa ni la mutante L371K mostraron resistencia a las proteasas y fueron degradadas. Dado que la toxina completa de Cry1Aa y casi todo de los dominios II y III de L371K están protegidos de proteasas en presencia de VMBC del insecto, este estudio sugiere que la inserción de la toxina en la membrana involucra los tres dominios.

**Acclimatization of Phalaenopsis and Cattleya obtained by micropropagation**

The quality of micropropagated plants relies on the acclimatization stage. This research intends to develop an efficient protocol to obtain the acclimatization of Phalaenopsis and Cattleya. Plants of Phalaenopsis obtained from protocorms were selected. They came from flowering stalks grown at modified Murashige and Skoog (MS) (1962) medium and classified by growth ranks and put into moss, mesquite wood shaving and perlite (1:1:1), into a humidity chamber. The protocorms were multiplied at MS from Cattleya sown in Knudson C (1946) medium; regenerated plants of 1-2 cm were selected, and implanted in humidity chamber on: moss, coal and perlite (1:1:1) MCP; mesquite wood shavings, coal and perlite (1:1:1) ACP; moss and perlite (1:1) MP; mesquite wood shaving and perlite (1:1) AP. The following results were obtained: Phalanopsis: a) Survival: 44% in R0 and 100% in R I and R II of the. b) Number of leaves: R I gave on average 1 more leaf than the range 0; c) Roots number and length: R I and R II gave on average 2 more roots than R0, and there were no significant differences in length. d) Height: R II presented greater growth than R I and Ro. Cattleya: a) The survival in MCP was 0%, MP 16 %, ACP 32% and AP 80%. b) The height in MP was significantly superior to the ones in ACP and AP. Plants from both genera need to achieve a 2 to 4 cm growth rank in vitro to endure the greenhouse conditions. MAP was the best substrate in Phalaenopsis and moss-perlite in Cattleya.

La calidad final de las plantas producidas por micropropagación depende de la etapa de aclimatización. Se intenta desarrollar un protocolo eficiente para la aclimatización de Phalaenopsis y Cattleya. Se seleccionaron plantas de Phalaenopsis, obtenidas de protocormos provenientes de estacas florales cultivadas en Murashige y Skoog modificado (MS) (1962), por rangos de crecimiento e implantadas en musgo, viruta de algarrobo y perlita (1:1:1), en cámara húmeda. De siembras de Cattleya en medio de Knudson C (1951) se multiplicaron protocormos en MS; se seleccionaron plantas regeneradas de 1-2 cm, e implantadas en cámara húmeda en los sustratos: musgo, carbón y perlita (1:1:1) MCP; viruta de algarrobo, carbón y perlita (1:1:1) ACP; musgo y perlita (1:1) MP; viruta de algarrobo y perlita (1:1) AP. Se obtuvieron los siguientes resultados: en Phalaenopsis: a) Supervivencia: para R0 de 44% y R I y R II del 100%; b) número de hojas: R I generó en promedio 1 hoja más que el rango 0; c) número y longitud de raíces: R I y R II generaron en promedio dos raíces más que R0, no detectándose diferencias significativas en longitud; d) altura: R II presentó mayor crecimiento que R I y R0 En Cattleya: a) La supervivencia en MCP fue 0%, MP 16%, ACP 32% y AP 80%; b) La altura en MP resultó significativamente superior que en ACP y AP. Ambos géneros necesitan alcanzar un crecimiento de 2 a 4 cm in vitro para tolerar las condiciones de invernáculo. El mejor sustrato fue MAP en Phalaenopsis, y la mezcla musgo-perlita en Cattleya.

Numerical analysis of intrabronchial prosthesis used for the treatment of lung cancer

En México, la mortalidad debido a enfermedades bronco-respiratorias se ubica en el sexto lugar según datos estadísticos dados por el Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias (INER). Esto genera la necesidad de incrementar la eficiencia en la aplicación de los tratamientos usados para este tipo de patología. Algunos de los métodos utilizados con mayor frecuencia para el tratamiento de estas dolencias hacen uso de micro dispositivos, también conocidos como válvulas endobronquiales. Este es un sistema alternativo que evita cirugías invasivas y logra prolongar e incrementar la calidad de vida de los pacientes. En este trabajo se presenta el análisis del desempeño de la válvula IBV®. Para el desarrollo del estudio numérico se determinaron las dimensiones y propiedades mecánicas del modelo a partir de catálogos del fabricante. Se desarrolló un modelo para el cual se consideraron las propiedades del Nitinol® y Silastic®. Asimismo, se propusieron dos condiciones de operación para la válvula, una anclada en el bronquio y la otra en la condición en la que se encuentra plegada dentro del broncoscopio. Se utilizó el Método del elemento finito (MEF) para simular las condiciones de trabajo de la válvula. Los resultados encontrados muestran el funcionamiento estructural y el nivel de los esfuerzos generados en el implante durante el ciclo de respiración forzada del individuo. Además, se proporcionan las bases para generar un nuevo dispositivo que pueda emular el funcionamiento de este tipo de implantes y aumente la eficiencia del tratamiento de dicha patología.

In Mexico, the mortality rate due to bronchial respiratory sickness is placed in the sixth position, according to statistics from the National Institute of Breathing Sickness (INER), so it is convenient to increment the efficiency of treatments for those pathologies. The intrabronchial valve is a recommended alternative method; being it main objective to avoid invasive surgery and increase the time and quality of patient´s life. Within this work a biomechanical analysis of an IBV® valve is carried out. Regarding the numerical analysis, the dimensions and mechanical properties of the valve were proposed based on catalogues published by the manufacturer as more reliable information was not available in the open literature. As a result, a new model was developed in which both materials Nitinol® and Silastic® are considered as the main valve materials. The proposed working conditions assume that the valve is implanted in folded form at the bronchus and then anchored when it is unfolded. Finite Element Method (FEM) was used to simulate the proposed working conditions. Results obtained show the structural performance and the level of stress generated in the implant during the breathing cycle. In addition, it provides the knowledge to generate a new device that could emulate the performance of these implants and develop a more efficient treatment this disease.

Construction of mutants of Salmonella enterica for inactivation of invG/invE y ssaJ/ssaK genes of pathogenicity islands 1 and 2

Para la comprensión de las bases genéticas de los mecanismos de patogenicidad de Salmonella se han descrito diversas metodologías para manipular el ADN genómico y generar mutantes con características particulares. En este estudio se reporta la construcción de mutantes a partir de varios serotipos de S. enterica, por sustitución e inactivación de los genes invG/invE en SPI-1 y de los genes ssaJ/ssaK en SPI-2 mediante la técnica de recombinasa Red del fago ? descrita por Datsenko y Wanner (2000). Los genes delecionados en las SPI-1 y SPI-2 codifican para las proteínas que participan en la formación de los sistemas de secreción tipo III, responsables de la invasión y supervivencia intracelular de S. enterica en las células hospedadoras. Los resultados de este trabajo permitirán realizar estudios futuros in vivo para evaluar la posible atenuación de la virulencia de las cepas mutantes, así como aportar nuevos conocimientos sobre los mecanismos genéticos involucrados en la fisiopatogenia de las enfermedades producidas por los serovares estudiados. Además, esta técnica se recomienda para generar de manera eficiente mutantes de diferentes serotipos de S. enterica con la finalidad de estudiar los genes cromosómicos y sus productos.

To understand the genetic basis of Salmonella pathogenicity mechanisms, various methods have been described to manipulate and generate mutant genomic DNA with specific characteristics. In this study we report the construction of mutants from several serotypes of S. enterica, substitution and inactivation of genes invG/invE in SPI-1 gene and ssaJ/ssaK in SPI-2 by the technique of phage ? Red recombinase, as described by Datsenko and Wanner (2000). The gene deletion in SPI-1 and SPI-2 encodes proteins involved in the formation of type III secretion systems responsible for the invasion and intracellular survival of S. enterica in the host cells. The results of this work will allow in vivo studies to evaluate the possible attenuation of virulence of the mutant strains, as well as to provide new insights into the genetic mechanisms involved in the pathogenesis of diseases caused by these bacteria. Moreover, this technique is recommended to efficiently generate mutants of different serotypes of S. enterica in order to study the chromosomal genes and their products.

Experimental wear analysis of UHMWPE and stainless 316l used in the manufacturing of coxofemoral prosthesis

La causa más común de falla en prótesis coxofemorales es el aflojamiento entre los componentes que conforman el sistema, de manera específica la copa acetabular y la cabeza femoral. En esta investigación se presenta un análisis tribológico del desgaste en los componentes mencionados, ya que cuando las superficies en contacto se desgastan, la funcionalidad mecánica del sistema se compromete, debido al cambio de geometría de los mismos, dando como resultado un juego mecánico entre la copa y la cabeza. Los materiales considerados en este estudio son el polietileno de ultra elevado peso molecular (UHMWPE, por sus siglas en inglés) para la copa acetabular, y acero inoxidable 316L para la cabeza femoral. Esta combinación de materiales representa hoy en día la recomendación más usual por parte de los cirujanos para pacientes de la tercera edad. La tasa anual de desgaste se determinó de manera experimental y se cuantificó la cantidad de material desprendido durante el contacto. Se establecieron las condiciones de carga de forma analítica, considerando las que actúan sobre la cabeza femoral a lo largo del área de desgaste durante la marcha humana. Posteriormente, se realizó el análisis experimental de desgaste utilizando una máquina tribológica de configuración perno-sobre-disco (pin-on-disk), diseñada de manera específica para este estudio. Las pruebas para determinar la pérdida volumétrica de los componentes se realizaron bajo tres condiciones de operación: en seco, lubricada con agua destilada y lubricada con suero bovino. El marco experimental considerado consistió en pernos de UHMWPE sobre discos de acero inoxidable 316L simulando el desgaste equivalente a diez años de uso de la prótesis. Finalmente, de los resultados obtenidos se puede establecer que el desgaste y la cantidad de partículas desprendidas disminuyen considerablemente cuando se utiliza suero bovino como lubricante para replicar las condiciones reales de operación del sistema por tener propiedades muy semejantes a las del fluido sinovial presente en la articulación de la cadera. El caso seco representó el peor escenario en donde se produce mayor daño.

The most common cause of failure in coxofemoral prostheses is the loosening between the components of the system, namely the acetabular cup and the femoral head. In this work a tribologic analysis of wear suffered in the components is presented, due to when the surfaces in contact are worn, the mechanical function of the system is compromised as the wearing implies a change in the geometry of the components, thus in their dimensions, resulting on a looseness between the cup and the head. The materials considered in this study are Ultra High Molecular Weight Polyethylene (UHMWPE) for the cup and 316L Stainless Steel for the femoral head, which represent the surgeons choice for elderly patients. The annual wearing rate between these components was experimentally determined, as well as the amount of debris produced during contact. Firstly, the loading conditions were determined analytically considering those acting on the femoral head taking into consideration the wearing area during human walk. Secondly, the experimental analysis consisted in wearing tests using a tribology pin-on-disk machine, specifically built for this study. The tests to determine the volumetric loss of the components were performed under three different operational conditions: dry, lubricated with bovine serum and lubricated with destilated water. The experimental set up consisted on UHMWPE pins and 316L Stainless steel discs simulating the equivalent wear of ten years of usage of the prostheses. Lastly, the obtained results proved that using the bovine serum as lubricant the wear and debris of the components was significantly reduced when compared with other cases, being the dry scenario where more damage was produced. It is important to point out that the bovine serum was chosen to simulate the synovial fluid in which the system is embedded.

Effect of activated charcoal indol and acetic acid in the development of Masdevallia coccinea Linden ex Lindl y Maxillaria nutans Lindl. protocorm like bodies under in vitro

En esta investigación se pretende estimular el desarrollo de protocormos de Masdevallia coccinea y Maxillaria nutans bajo condiciones in vitro utilizando diferentes concentraciones de ácido indol acético y carbón activado. El protocolo obtenido es una alternativa de la conservación de orquídeas que se encuentran en vías de extinción, y además permite contribuir con el mejoramiento medioambiental. En la evaluación del desarrollo vegetativo bajo condiciones in vitro de los protocormos de Masdevallia coccinea y Maxillaria nutans, orquídeas en vías de extinción, se obtuvo que solamente Maxillaria nutans alcanzará su desarrollo exitoso mediante el cultivo in vitro en el medio Murashige y Skoog (1962), donde se evaluó el efecto de la interacción entre el carbón activado (0,0; 0,5, 1,0 % (p/v)) y el ácido indol acético (0,0; 0,5; 1,0 mg/L-1). El medio de cultivo empleado fue enriquecido con sacarosa al 3% y el Myo inositol al 0,1 g/L-1. Los protocormos de Masdevallia coccinea evidenciaron que se encontraban inmaduros, situación por la cual no lograron su desarrollarlo vegetativo en el experimento planteado, en atención a que se encontraban en el periodo de latencia. Por esta razón, es de gran importancia tener en cuenta que las cápsulas de las orquídeas deben estar bien maduras, a fin de garantizar que los protocormos que se forman in vitro sean maduros y completen con facilidad su morfofisiológía. Mientras que los protocormos de Maxillaria nutans dieron un mayor rendimiento en su desarrollo vegetativo. En esta investigación se determinó que el efecto de la interacción de 0,5% de carbón activado con 0,5 mg/L-1 de AIA es positivo sobre la tasa de crecimiento para el desarrollo de los protocormos de Maxillaria nutans bajo condiciones in vitro.

The evaluation of protocorms growth of Masdevallia coccinea and Maxillaria nutans under in vitro conditions, endangered orchids, it got only Maxillaria nutans reached its successful development by culture in vitro in Murashige and Skoog (1962), which evaluated the effect of the interaction between the activated carbon (0.0, 0.5, 1,0% (w / v)) and indole acetic acid (0.0, 0.5, 1.0 mg.L-1). The culture medium used was enriched with 3% sucrose and 0.1 g/L-1 Myo inositol. Protocorms of Masdevallia coccinea, showed that they were immature, state why they did not achieve their vegetative development in the experiment raised, considering that they were in the latency period. It is therefore very important to note that the capsules of the orchid should be ripe, to ensure that protocorms formed in vitro are mature and they respond with ease morphphysiology development. While protocorms of Maxillaria nutans, gave a higher yield in its vegetative development. This research found that the interaction effect of 0.5% activated carbon with 0.5 mg/L-1 of IAA is positive on the growth rate for the development of Maxillaria nutans protocorms under in vitro conditions. The protocol obtained in this investigation is an alternative of conservation of orchids that are endangered and can contribute to further environmental improvement.

Effect of biofertilization and bioregulators on germination and growth of Carica papaya L.

Con el objetivo de incrementar y acelerar el proceso de germinación de las semillas y obtener una alta producción y homogeneidad de plántulas de Carica papaya variedad Maradol en vivero, se evaluó el efecto de tres biofertilizantes aplicados solos o en combinación (Azotobacter chroococcum, Azospirillum brasilense y Glomus intraradices), y un biorregulador del crecimiento vegetal, el ácido giberélico (AG3), en la germinación y el crecimiento vegetal. Se realizó un experimento bajo un diseño completamente al azar con ocho tratamientos y tres repeticiones. A las semillas se les aplicó un pretratamiento germinativo con alternancia de temperatura para superar la dormancia. Los tratamientos simples con A. chroococcum y A. brasilense, incrementaron el porcentaje de germinación a 90,28 y 88,89% respectivamente. Además, con la aplicación de los biofertilizantes y el AG3, la velocidad de germinación se incrementó y el tiempo medio de germinación se redujo. La doble aplicación en semillas y foliar de los biofertilizantes y el AG3 en plántulas mejoró el crecimiento vegetal. La población de A. chroococcum fue mayor cuando se inoculó en combinación con G. intraradices. La prevalencia de colonización de las plántulas inoculadas con G. intraradices varió de 18,53 a 26,67%, con el mayor valor registrado para el tratamiento combinado con A. brasilense. Finalmente, aplicando esta metodología se logró acelerar la germinación, obteniéndose una mayor homogeneidad en la emergencia de las plántulas, disminuyendo así el tiempo de permanencia en el vivero.

In order to increase and accelerate the process of seed germination and obtain a high yield and homogeneity of papaya seedlings cv. Maradol in nurseries, we evaluated the effect of three biofertilizers applied single or in combination (Azotobacter chroococcum, Azospirillum brasilense and Glomus intraradices) and a plant growth bioregulator, the gibberellic acid 3 (AG3), on the germination and subsequent growth of papaya seedlings. An experimental design completely random with eight treatments and three replications were used. The application of a pre-germinal treatment with alternating temperature had to be applied to seeds to overcome dormancy. Single biofertilization with A. chroococcum and A. brasilense, promoted the germination percentage 90.28 y 88.89% respectively. Germination rate could be enhanced and the mean germination time was reduced with the application of biofertilizer and AG3. Both applications on seeds and leaves of biofertilizers and AG3, had a positive effect on plant growth. The population of A. chroococcum was higher in the combined inoculation with G. intraradices. The prevalence of colonization of plants inoculated with G. intraradices ranged from 18.53 to 26.67%, with the greatest values recorded for the treatment involving combined inoculation with A. brasilense. Finally, with the application of this methodology the seed germination rate was improved, as well as the uniformity of seedlings emergence.

Productivity and selectivity of culture medium from the sour guava (Psidium araca) in the growth of native yeast Candida sp

El presente trabajo se llevó a cabo para evaluar la eficiencia del medio de cultivo a partir de guayaba agria (Psidium araca) frente a medios comerciales en el crecimiento de tres cepas nativas: Candida guillermondii, Candida famita y Candida sp. Se evaluó el crecimiento microbiano a diferentes concentraciones de fruta, 5, 10, 25 y 50% p/v, tomando como control los medios comerciales: Malta, Sabouraud y agar papa dextrosa (PDA). La productividad y selectividad del medio de guayaba agria fue determinada mediante el método Ecométrico en un tiempo de 48 horas. Los análisis estadísticos aplicados para evaluar y comparar el crecimiento de las cepas en los medios comerciales y en el medio de guayaba agria a diferentes concentraciones demostraron lo siguiente: Candida guillermondii presentó crecimiento mayor o igual a 25 y 50% p/v comparado con los medios comerciales; Candida famata y Candida sp presentaron mejores crecimientos al 5% p/v, con respecto a los diferentes medios comerciales. Los resultados demostraron que el medio de cultivo es altamente productivo y no selectivo, lo que representa una alternativa en la conservación, el mantenimiento y el desarrollo de las levaduras estudiadas.

This work was carried out to evaluate the efficiency of the culture medium from sour guava (Psidium araca) against commercial media in the growth of three native strains: Candida guillermondii, Candida famata and Candida sp. Microbial growth was evaluated at different concentrations of fruit, 5, 10, 25, 50% w /v, using as control the commercial media: Malta, Sabouraud and PDA (Potato Dextrose Agar). The productivity and selectivity of the sour guava medium was determined by the Ecometric method in a time of 48 hours. The applied statistical analysis to evaluate and compare growth of strains in commercial culture medium and in the medium from sour guava at different concentrations showed: Candida guillermondii grew greater than or equal to 25 and 50% w / v compared with commercial medium, Candida famata and Candida sp showed better growth at 5% w / v, with respect to commercial medium. The results showed that the medium is highly productive and non-selective representing an alternative to the conservation, maintenance and development of the yeasts.

Evaluating oxygen transfer in a Lactococcus lactis cultures using an external aeration fermentation system (EAFS)

En fermentaciones aerobias el oxígeno, como aceptor terminal de electrones en el proceso de respiración, comúnmente se constituye en limitante debido entre otros factores al diseño del biorreactor (factores geométricos), a las condiciones de operación de los fermentadores (condiciones ambientales requeridas en el cultivo, potencia transferida al cultivo por el sistema de agitación, propiedades del medio líquido), demanda de oxígeno por parte del microorganismo, sistema de aireación (concentración de oxígeno en el gas, solubilidad del oxígeno). La limitación de oxígeno se refleja en la fermentación con Lactococcus lactis cepa IBUN 34.1, en que presenta una baja disponibilidad de oxígeno desde muy temprano en la fase exponencial del cultivo. Para superar estas limitaciones se diseñó y desarrolló un sistema de suministro de oxígeno de alta tasa de transferencia, consistente en un sistema de fermentación con aireación externa (SFAE), el cual es comparado en este trabajo con el sistema tradicional de fermentador agitado dotado con dos turbinas tipo Rushton y aireación por difusor interno. En este trabajo se evalúa la operación del SFAE, se seleccionan y estudian algunas variables operacionales y su efecto sobre la transferencia de oxígeno gas-líquido. Los resultados indican que las variables que tienen efecto significativo sobre el coeficiente volumétrico global de transferencia de masa kLa son la agitación y el flujo de medio de cultivo que circula por el aireador externo denominado flujo de recirculación. Los valores de kLa obtenidos indican que con el fermentador convencional con aireación interna el mayor valor de kLa alcanzado fue de 40,68 (h-1), en tanto que con el SFAE se alcanzaron valores de 63,18 (h-1).

In aerobic fermentations, oxygen as terminal electron acceptor in respiration process, is commonly a limiting due to factors like its low solubility in aqueous solutions, bioreactors’ geometric factors and operating characteristics, liquid media properties, oxygen concentration in gas supply, microorganisms’ characteristics, environmental culture conditions, power supply by agitation system, etc. Oxygen limitation is present in cultures using the IBUN 34.1 Lactococcus lactis strain where oxygen availability is low some minutes after the exponential phase starts. A high transfer rate oxygen supply system was thus designed to overcome such limitations; it consisted of an external aeration fermentation system (EAFS) which was compared in this work with a conventional agitated tank fermenter equipped with two Rushton turbines and internal diffuser aeration flute mechanism. This paper evaluates the EAFS; some operational variables were selected and studied as well as their effect on oxygen transfer. Our results showed that agitation and culture medium flow through the aerator (called external recirculation flow) were the variables having the main effect on overall volumetric mass transfer coefficient (kLa). The highest kLa value in the conventional bioreactor having internal aeration was 40.68 kLa (h-1), while the EAFS reached 90 (h-1).

Influence of inoculum concentration on the cellulase and xylanase production by Aspergillus niger

Existe un gran interés por el uso de enzimas lignocelulolíticas en varias industrias, y en la biodegradación de biomasa para la producción de biocombustibles y otras aplicaciones. Entre las fuentes microbianas de enzimas, Aspergillus niger es uno de los microorganismos más utilizados en la producción de enzimas industriales, debido a sus niveles altos de secreción de proteína y a su condición GRAS (generally regarded as safe). El objetivo del presente estudio fue evaluar la influencia de la concentración de inóculo en la morfología y producción de celulasas y xilanasas con A. niger en cultivo sumergido. Para ello, fueron inoculados matraces de 250 mL con 40 mL de medio con 3% (v/v) de una suspensión de 104 o 108 esporas por mililitro e incubados a 28 ºC y 175 rpm durante 120 horas. Se utilizaron 10 g*L-1 de lactosa como fuente de carbono. En cada caso se determinó la cantidad de biomasa, la proteína extracelular soluble, lactosa residual, actividad celulasa total y xilanasa cada 24 horas. Aunque no hubo un efecto notorio en la morfología de crecimiento, salvo en el color y el diámetro de pellets obtenidos, sí se afectó la µmax (0,06 y 0,03 h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente) y la concentración máxima de biomasa. Además, mientras que las productividades volumétricas de celulasa (GFPA) (8,2 y 8,0 UI.*L-1*h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente) fueron similares para ambos inóculos, la productividad de xilanasa (GXIL) fue mayor para el inóculo más concentrado (29,7 y 33,4 UI¨*L-1*h-1 para 104 y 108 esporas*mL-1, respectivamente). Los resultados indican que la productividad de celulasas y xilanasas está estrechamente relacionada con la concentración de inóculo.

There is a great interest for the use of lignocellulolytic enzymes in several industries and in biomass degradation for production of biofuels and other applications. Among the microbial sources of enzymes, Aspergillus niger is one of the most used microorganisms in the production of industrial enzymes due to its high levels of protein secretion and its GRAS (generally regarded as safe) condition. The aim of the present study was to evaluate the influence of A. niger inoculum concentration in the morphology and production of cellulases and xylanases in submerged cultures. For this, 250 mL flasks containing 40 mL culture medium were inoculated with a 3% (v/v) of either 104 or 108 spores per milliliter suspension and incubated at 28 º C and 175 rpm during 120 hours. Lactose (10 g*L-1) was used as the carbon source. In each case, the amount of biomass, the extracellular soluble protein, residual lactose, total celullase activity and xylanase activity were determined every 24 hours. Even thought there was not a notorious effect on the growth morphology, except in color and diameter of pellets; µmax was affected (0.06 and 0.03 h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively) as well as maximum biomass concentration. In addition, while the volumetric productivity of cellulase (8.2 and 8.0 UI*L-1*h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively) were similar for both inocula, the productivity of xylanase was greater for the more concentrated inoculum (29.7 and 33.4 UI*L-1*h-1 for 104 and 108 spores*mL-1, respectively).The results show that cellulase and xylanase productivities are closely related to the inoculum concentration.

Environmental effects of agrochemicals and agricultural machinery in transgenic and conventional crops cotton

La producción de alimentos se basa en el uso de diferentes tecnologías agrícolas, que pueden derivar en conflictos entre medioambiente y agricultura. Es significativo estudiar el impacto ambiental de las nuevas tecnologías aplicadas a la agricultura, la más importante de las cuales es la transgénesis. Este trabajo se realizó en la zona algodonera del municipio del Espinal, departamento del Tolima, para la cosecha de algodón del primer semestre de 2009, usando las metodologías de Brookes y Barfoot (2006) y Kovach y colaboradores (1992). Se estudió el efecto ambiental de la aplicación de agroquímicos y el uso de maquinaria agrícola en cultivos de algodón transgénico y convencional. Se recogió información mediante encuestas en veinte fincas productoras de algodón. El análisis de las encuestas se realizó de forma descriptiva, determinando diferencias de tipo cuantitativo y cualitativo para los predios que utilizan la tecnología convencional o la tecnología transgénicas (doble gen, Bt/RR), para luego realizar una correlación con el "Enviromental Index Quotient" (EIQ). No se encontraron diferencias entre el EIQ de campo de las dos tecnologías, aunque la tecnología transgénica tiene ventajas ambientales en el control de algunas plagas de lepidópteros. En relación con el uso de maquinaria agrícola, se encontró que la tecnología convencional genera menor liberación de CO2, gas de efecto invernadero. La metodología de Brookes y Barfoot puede adaptarse para estudios comparativos de tecnologías agrícolas en países tropicales.

Food production is based on the use of various agricultural technologies, which can lead to conflicts between environment and agriculture. It is important to study the environmental impact of new technologies applied to agriculture, the most important of which is transgenesis. This work was carried out in the cotton belt of the town of Espinal, Tolima Department for the cotton crop in the first half of 2009, through methodologies Brookes & Barfoot (2006) and Kovach et al (1992). We studied the environmental impact of pesticide application and use of agricultural machinery for cultivation of transgenic and conventional cotton. Information was collected through surveys of 20 farms producing cotton. The analysis of the survey was conducted descriptively, by determining differences in quantitative and qualitative for the sites that use conventional technology, and transgenic (Bt gene and double RR / RR), and then make a correlation with the Environmental Index Quotient (EIQ). No differences were found between the fields EIQ the two technologies, although transgenic technology has environmental advantages in the control of some lepidopteran pests. In connection with the use of agricultural machinery, was found to conventional technology generates less release of CO2, greenhouse gas. The Brookes and Barfoot methodology could be adapted in comparative studies of agricultural technologies in tropical countries.

Production and partial purification of Aspergillus ficuum hydrolytic enzymes in solid state fermentation of agroindustrial residues

En el presente trabajo se describe la producción de las enzimas fitasa, celulasa, xilanasa y proteasa con Aspergillus ficuum cepa DSM 932 mediante fermentación en estado sólido (SSF) usando torta de canola y pomaza de cranberry como sustratos. Como medida indirecta de la producción de las enzimas se usó en cada caso la actividad enzimática. la torta de canola resultó ser un mejor sustrato para fitasa, celulasa y xilanasa, en tanto que la pomaza de cranberry resultó ser un sustrato potencial para proteasa. Mediante ultrafiltración escalonada fue posible purificar parcialmente los extractos enzimáticos de fitasa, celulasas y xilanasas, obtenidos a partir de torta de canola. La fitasa resultó tener un tamaño >100 kDa, en tanto que las celulasas y xilanasas presentan actividad en los retenidos de 10, 30 y 50 kDa, lo que indicaría que las isoenzimas de ambos complejos tienen pesos moleculares que oscilan entre 10 y 100 kDa.

In this paper, describes the production of the enzymes phytase, cellulase, xylanase and protease by Aspergillus ficuum DSM 932 strain, in solid state fermentation (SSF) using canola cake and cranberry pomace as substrates. The enzyme activity was used in each case as an indirect measure of the enzymes production. Canola meal turned out to be a better substrate for phytase, cellulase and xylanase, while cranberry pomace was found to be a potential substrate for protease. Various ultrafiltration operations were carried out, decreasing the cut off membranes out in order to purify partially extracts of enzymes phytase, cellulase and xylanase, obtained from canola meal. Phytase was found to have a size >100 kDa, whereas cellulase and xylanase activity present in the retained 10, 30 and 50 kDa, suggesting that isozymes of both complexes have molecular weights ranging between 10 and 100 kDa.

Yeast diversity associated to Colombian traditional "chichas"

En Colombia el conocimiento de la comunidad levaduriforme ha sido limitado, ya que los estudios se han enfocado principalmente en especies de interés clínico. Las fermentaciones espontáneas a partir de diversos sustratos representan hábitats de gran importancia para el estudio de la dinámica de las poblaciones de levaduras nativas, por esta razón, en el presente estudio se aislaron e identificaron las levaduras asociadas a las chichas de maíz, piña y arracacha, que son bebidas fermentadas de manera artesanal en Colombia. Se realizó el aislamiento de las levaduras más representativas de la chicha durante sus tres fases de fermentación: inicial, tumultuosa y final. Inicialmente, se hizo una caracterización parcial de los aislados, que incluyó pruebas fisiológicas, y medición de su capacidad para producir filamentos y esporas. Sin embargo, debido a que estas técnicas no fueron suficientes para identificar los aislados hasta el nivel taxonómico de género o de especie, se complementó el estudio de cada aislado empleando técnicas moleculares basadas en el análisis de restricción del gen rRNA 5.8S y los espaciadores transcritos internos (ITS1 e ITS2). Cuando el empleo de esta técnica no permitió obtener resultados definitivos y para confirmar las asignaciones realizadas usando PCR-RFLPs, se secuenció el dominio D1/D2 del gen 26S rRNA de los aislados más representativos. Mediante estas técnicas se lograron identificar las especies más representativas de los tres tipos de chicha: Candida tropicalis, Pichia kluyveri, Pichia guilliermondii, Hanseniapora guilliermondii, Pichia fermentans, Saccharomyces cerevisiae, Candida maltosa, Rhodotorula glutinis, Torulaspora delbrueckii, Hanseniaspora uvarum, Kazachstania exigua, Kluyveromyces marxianus, Yarrowia lypolitica, Candida parapsilosis, Debaromyces hansenii, Cryptococcus arboriformis, Saccharomyces martiniae, Dekkera anomala, Aureobasidium pullulans y Candida pseudointermedia. La caracterización preliminar de los aislados obtenidos, basada en pruebas de tolerancia a etanol y halo-tolerancia, permitió identificar levaduras nativas con posible utilización biotecnológica en el sector industrial.

In Colombia, knowledge about yeast communities has been limited because most reports have focused on yeast species with clinical relevance. The spontaneous fermentation of different substrates creates important habitats for analyzing wild yeast populations; for this reason, in this study we isolated and identified yeasts associated with the "chichas" of corn, pineapple, and "arracacha," which are traditional fermented Colombian beverages. The most representative yeasts were isolated from "chicha" during its three phases of fermentation: initial, tumultuous and final. Initially, we made a partial characterization of isolated yeasts, including macroscopic and microscopic descriptions, physiological tests, and measurement of capacity for producing spores and filaments. However, because these techniques were not sufficient for identification of isolated yeasts to the level of genus and species, the study was complemented by using molecular techniques based on restriction analysis of the ITS1-5.8S rRNA gene-ITS2. When this technique did not permit us to obtain positive results and confirm the PCR-RFLP results, we used the sequence of the D1/D2 domain of the 26S rRNA gene instead for most representative isolates. With these techniques, we identified the most representative yeast species of the three classes of "chicha": Candida tropicalis, Pichia kluyveri, Pichia guilliermondii, Hanseniapora guilliermondii, Pichia fermentans, Saccharomyces cerevisiae, Candida maltosa, Rhodotorula glutinis, Torulaspora delbrueckii, Hanseniaspora uvarum, Kazachstania exigua, Kluyveromyces marxianus, Yarrowia lypolitica, Candida parapsilosis, Debaromyces hansenii, Cryptococcus arboriformis, Saccharomyces martiniae, Dekkera anomala, Aureobasidium pullulans and Candida pseudointermedia. The preliminary characterization of isolated yeasts, based on ethanol-tolerance and salt-tolerance tests, permitted recognition of wild yeasts for possible biotechnological uses in industry.

**Study of itaconic acid production by Aspergillus terrus MJL05 strain with different variable**

Itaconic acid (IA) production by Aspergillus terreus MJL05 strain was investigated in submerged batch fermentation in a stirred bioreactor to determine the effect of varying the nitrogen, phosphorous and carbon sources concentrations in the production medium. Glycerol, a biodiesel by-product was reported as an efficient substrate to achieve high itaconic acid productivities. This was used as the sole carbon source. The resulting C:N 18, N:P 10.8 and C:P 195 ratios were selected as the best and allowed to improve IA concentration from 11.0 to 27.6 g/l with a volumetric productivity of 0.192 g IA/l.h and a specific productivity 0.013 g IA/g biomass.h. Bioprocess yields, Yx:s 0.27 g d.w. biomass/g substrate; Yp:x 1.63 g IA/g d.w. biomass and Yp:s 0.44 g IA/g substrate, allowed to assume the feasibility of using this strain for IA production.

La producción de ácido itacónico (AI) con Aspergillus terreus MJL05 se realizó en fermentación sumergida en lote en un biorreactor agitado para estudiar el efecto de la variación de las concentraciones de nitrógeno, fósforo y carbono en el medio de producción. El glicerol, subproducto del biodiesel, fue reportado como un sustrato eficiente para obtener altas productividades de AI. Este fue utilizado como única fuente de carbono. Las relaciones entre nutrientes, C:N 18, N:P 10,8 y C:P 195 fueron seleccionadas como las mejores para aumentar la concentración de AI de 11,0 a 27,6 g/l con un a productividad volumétrica de 0,192 g IA/l.h, y una productividad específica de 0,013 g IA/g biomasa.h. Los rendimientos del bioproceso obtenidos fueron de Yx:s 0,27 g p.s. biomasa/g sustrato; Yp:x 1,63 g IA/g p.s. biomasa y Yp:s 0,44 g IA/g sustrato, lo que permite asumir la factibilidad de usar esta cepa para la producción de AI.

Effectiveness of savannah native rhizobial strains in Vigna unguiculata (L.) Walp. cv. C4A-3

Se estima que la población mundial se incrementará y demandará mayor cantidad de alimentos y uso de fertilizantes nitrogenados. En Venezuela, el frijol es altamente consumido y se cultiva en las sabanas orientales, cuyas características edáficas pueden afectar negativamente la población rizobiana. Estos planteamientos refuerzan la importancia de la evaluación de la flora rizobiana nativa, y enfatizan la necesidad de aumentar la explotación de la fijación biológica de nitrógeno. En este contexto, se evaluaron 6 cepas rizobianas en el cultivar C4A-3, aisladas, de frijol cv. Tejero Criollo y previamente catalogadas como efectivas (JV91, JV94 y JV101) e inefectivas (JV99, JV103, y JV104) en el cultivar TC9-6. El experimento se llevó a cabo en umbráculo por 45 días, donde además se incluyeron dos tratamientos control no inoculados. La suspensión de las cepas individualmente cultivadas se usó para inoculación. De acuerdo con la tipología de la nodulación (número de nódulos, peso total y por nódulo, tamaño y color), los valores de los parámetros de crecimiento (peso seco, altura y número de hojas del vástago) y los estimados de la concentración de nitrógeno y nitrógeno total, las cepas JV91, JV99 y JV101, fueron las más efectivas en la fijación de nitrógeno. El nitrógeno total y la concentración de nitrógeno tuvieron una correlación significativa con peso seco, altura y número de hojas del vástago. Los resultados muestran la existencia de cepas efectivas en los suelos de sabana para este cultivar, y enfatizan la importancia de evaluar las cepas indígenas, antes de proceder a la inoculación con foráneas.

It is estimated that world-wide population will increase and demand higher amount of food and use of nitrogen fertilizer. In Venezuela, cowpea is highly consumed and is cultivated in eastern savannahs, whose soil characteristics may negatively affect rhizobial population. These expositions reinforce the importance of the evaluation of the native rhizobial flora and emphasize the necessity to increase the exploitation of the Biological Nitrogen Fixation. In this context, 6 rhizobial strains isolated from cowpea cv. Tejero Criollo non-inoculated and previously catalogued as effectives (JV91, JV94 y JV101) and ineffectives (JV99, JV103, y JV104) in cultivar TC9-6 were evaluated in the cultivar C4A-3. The experiment was carried out in greenhouse by 45 days, where in addition, two non-inoculated control treatments were included. Suspension of individually cultivated strains was used for inoculation. Accordingly with nodulation typology (nodule number, total dry weight and per nodule and colour), growth parameter values (shoot dry weight, height and leaves number) and nitrogen concentration and total nitrogen estimates, the strains JV91, JV99 and JV101 were the most effective in nitrogen fixation. Total nitrogen and concentration correlated significantly with dry weight and height of shoots and leaves number. The results show the existence of effective strains in savannah soils for this cultivar, and emphasize the importance of evaluating the indigenous strains, before proceeding to inoculate with foreign strains.

Evaluation of the changes in the some physical and chemical properties of an ultisol for effect of the Bacillus subtilis

El interés en estudios de biorremediación de suelos deteriorados por sobreexplotación y uso indiscriminado de agroquímicos se debe a que alteran la microflora, el sistema de autorregulación y la sustentabilidad en el largo plazo. Un Ultisol, suelo de baja fertilidad química y sometido a reducción de tamaño de agregados (<2,0 mm), solarizado para reducir la población microbiológica, fue inoculado con la bacteria Bacillus subtilis en concentraciones de 10(6), 10(7), 10(8), 10(9) unidades formadoras de colonias (ufc). En 120 días se observó un incremento importante en magnitud de: estabilidad estructural, tamaño promedio de agregados, pH, fósforo disponible y una disminución del aluminio intercambiable. Estas variaciones en la respuesta estuvieron relacionadas con la actividad de los microorganismos en el suelo, y responden a la capacidad de solubilización de minerales por la bacteria, de producción de condiciones alcalinas y de biofilms, que unidos al aumento de biomasa de raíces de la planta, mucílagos y carbohidratos, coadyuvan en la formación de agregados estables y de mayor tamaño. Las propiedades físicas y químicas al final del experimento se estabilizaron en valores mayores a los encontrados en el suelo inicial, produciendo un efecto positivo general sobre el mismo, desde el punto de vista de la fertilidad global, al aumentar el fósforo disponible, disminuir la acidez intercambiable e incrementar la estabilidad y el tamaño promedio de agregados del suelo a corto plazo.

The interest about the studies of bioremediation in deteriorated soils under and over exploitation, indiscriminate use of agrochemicals that alter the microflora, the self regulation system and the sustainability in the long term. An Ultisol, with poor chemical properties and low fertility, because the reduction of aggregates size (< 2.0 mm). Solarize to reduce the microbiological population, it was inoculated with the bacteria Bacillus subtilis in concentrations of 10(6), 10(7), 10(8), 10(9) colony forming units (cfu). In 120 days important increment in magnitude of: structural stability, size average of aggregates, pH, available phosphorus. Also diminish the interchangeable aluminum. These variations in the answer were related with the activity of the microorganisms in the soil, and it responds so that solubilisation capacity of minerals because the bacteria activity, production of alkaline conditions and biofilms too. Furthermore the increase of plant roots biomass, mucilages and carbohydrates cooperate in the formation of stable aggregates and bigger size of them. The physical and chemical properties at the end of the experiment were stabilized in bigger values than found in the initial soil. Confirming a positive general effect overall the soil, since the point of view of the global fertility, when increasing the available phosphorus, reduce the interchangeable acidity and increase the soil stability and average size aggregates in the short term.

Effect of chitosan on the in vitro developtment of Rhizopus stolonifer (Ehrenb.:Fr.) Vuill. on two culture medium

En este trabajo se evaluó el efecto antifúngico del quitosano (0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 mg mL-1) en el desarrollo in vitro (crecimiento micelial, formación de cuerpos fructíferos, esporulación, germinación y liberación de proteínas) de Rhizopus stolonifer en dos medios de cultivo (papa dextrosa agar y medio mínimo). Los resultados obtenidos demostraron que el quitosano inhibió el crecimiento micelial de R. stolonifer en ambos medios de cultivo. El mayor índice antifúngico se observó en el medio papa dextrosa agar. El quitosano no afectó la formación de los cuerpos fructíferos de R. stolonifer en los medios estudiados. La esporulación y la germinación de las esporas se afectaron en ambos medios de cultivo por efecto de quitosano, siendo más notable en el medio medio mínimo. Se demostró la liberación de proteínas por efecto del quitosano en medio mínimo y caldo papa dextrosa. En general, en este estudio se evidenció el efecto antifúngico del quitosano en el desarrollo in vitro de Rhizopus stolonifer con independencia del medio de cultivo empleado. Sin embargo, en medio medio mínimo podrían observarse mejor los efectos antifúngicos del quitosano.

In this work the antifungal effect of chitosan (0, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 mg mL-1) on the in vitro development (mycelial growth, fruit bodies formation, sporulation, germination and proteins release) of Rhizopus stolonifer on two culture medium (Potato Dextrose Agar and Minimal medium) was evaluated. The obtained results demonstrated that chitosan inhibited the mycelial growth of R. stolonifer in both culture medium. The highest antifungal effect was observed on potato dextrose agar medium. Chitosan was not affected the fruit bodies formation of R. stolonifer on the studied medium. Sporulation and spore germination were affected in both culture mediun by effect of chitosan, it was more noticeable in minimal medium. It was demonstrated proteins release by effect of chitosan in minimal medium and potato dextrose broth medium. In general, in this study it was showed the antifungal effect of chitosan on in vitro development of Rhizopus stolonifer regardless of the culture medium used. However, in minimal medium could be observed best the antifungal effects of chitosan.

First report of the employment of ISTR markers in Cactaceae (Pilosocereus sp)

Pilosocereus sp es una especie en peligro crítico de extinción, la única población conocida se encuentra en una mina de mármol verde, hoy abandonada, en la que su explotación produjo la disminución del 80% de la población en 3 años; en la actualidad quedan 28 ejemplares, de ellos unos pocos son adultos, de los cuales solo dos producen frutos. Una de las etapas necesaria para su recuperación es la producción de plántulas para realizar el reforzamiento de la población natural. Como las plantas obtenidas serán plantadas en condiciones naturales, donde se enfrentarán a diversas situaciones ambientales, es conveniente realizar un estudio de diversidad genética. El objetivo de este trabajo fue estimar la variabilidad genética de plántulas de Pilosocereus sp empleando la técnica Inverse Sequence Tagged Repeat (ISTR). Se realizó la germinación in vitro de semillas y se determinó la variabilidad genética de las plántulas obtenidas. Con el análisis molecular se detectaron un total de 97 bandas, de ellas el 62,8% fueron polimórficas. El mayor porcentaje de bandas polimórficas (85,7%) se obtuvo con la combinación de oligonucleótidos F6/B6. Con las combinaciones de oligonucleótidos empleados se detectaron de 4 a 6 patrones de banda diferentes. La heterocigosidad media esperada fue de 0,39.

Pilosocereus sp is a species in critical extinction danger, the only known population is in a mine of green marble, abandoned today, but it exploitation produced the decrease of the population's 80% in 3 years, at the present time they are 28 individuals, of them some few ones are mature, of those which alone two produce fruits. One of the necessary stages for their recovery is the seedlings production to carry out the natural population's reinforcement. As the obtained plants they will be planted under natural conditions, where they will face diverse environmental situations, it is convenient to carry out a study of genetic diversity. The objective of this work was to estimate the genetic variability using the technical Inverse Sequence Tagged Repeat (ISTR). In vitro germination of seeds of Pilosocereus sp and the genetic variability of the obtained seedlings was determined. With the molecular analysis a total of 97 bands were detected, of them 62.8% were polymorphic. The biggest percentage of polymorphism (85.7%) was obtained with the primer combination F6/B6. With the primer combinations employed were detected from 4 to 6 different band patterns. The heterocigocity hoped was 0.39.

Anaerobic biodegradation of wastewater generated in the pulping of coffee

El cultivo y procesado del café es una de las actividades agroindustriales más importantes en varios países de Latinoamérica; sin embargo, dicha actividad conlleva grandes impactos ambientales, ya que genera aguas residuales con alta carga contaminante. La peligrosidad ecológica de estos vertidos ha potenciado la búsqueda de alternativas para su tratamiento y disposición final. En este trabajo se empleó una comunidad microbiana proveniente del fluido ruminal vacuno, para investigar la factibilidad de su empleo en la depuración de aguas residuales provenientes del despulpado del café, mediante la disminución de la carga orgánica expresada como DQO, además del volumen de metano generado. La cinética de degradación fue seguida en un reactor por lotes, anaerobio y mesofílico de dos litros de capacidad, bajo diferentes condiciones de temperatura (28 y 36 ºC) y pH (4,6; 7 y 8,5). Los resultados mostraron un índice volumétrico de lodos de 0,44 mL/g y actividad metanogénica específica de 0,0076 gDQO/gSST*d. En la mayoría de los casos, los resultados de remoción de DQO fueron superiores a la mitad del contenido orgánico inicial, llegando a 91,2% con pH de 4,6 y 28 ºC en 16 días. Los resultados muestran que el consorcio bajo estudio es capaz de adaptarse al sustrato y degradar la mayor parte de su carga orgánica, lo cual lo convierte en una interesante opción biotecnológica para el tratamiento de vertidos del despulpado de café.

The cultivation and processed of coffee, is one of the agro-industrial activities more important in several countries in Latin America; however this activity involves high environmental impacts, because generate wastewater with high pollution load. The danger ecological these discharges, has maximized the search for alternatives of treatment and disposal. In this work, was used a microbial community from fluid ruminal of cow, to investigate the feasibility of your employment in the depuration of wastewater generated in the pulping of the coffee, through the reduction of organic matter expressed as COD, in addition of volume of methane generated. The kinetic of degradation was followed in a reactor batch, anaerobic and mesophilic of two liters of capacity, under different conditions of temperature (28 and 36ºC) and pH (4.6, 7 and 8.5). The results showed a volume index of sludge of 0.44 ml/g and activity specific methanogenic of 0.0076 gDQO/gSST*d. In most cases, the results of removal of COD was more than half of the initial organic content, reaching 91.2% with pH of 4.6 and 28 ºC in 16 days. The results show that the consortium under study is able to adapt to the substrate and degrade greater part of organic load, which makes it an interesting option biotechnology for the treatment of wastewater of pulping of coffee.

Effect of inoculum density on formation and morphology of plantain somatic embryos (Musa spp. AAAB, cv. Hybrid ‘FHIA-21’)

La embriogénesis somática constituye una interesante propuesta para la propagación masiva de plantas del cultivar híbrido FHIA-21 (Musa AAAB). Sin embargo, se caracteriza por ser un proceso asincrónico, dado por la presencia de embriones somáticos en diferentes etapas de desarrollo ontogénico. La reducción de la asincronía es un aspecto importante para la utilización de este sistema de regeneración en la propagación de plantas. Esta investigación se realizó con el objetivo de determinar el efecto de la densidad de inoculación sobre la formación y el desarrollo morfológico homogéneo de los embriones somáticos del cv. FHIA-21. Con este propósito se adicionaron 0,5; 1,0; 1,5 y 2,0 g de masa fresca (gMF) de agregados celulares embriogénicos en Erlenmeyers (250 ml), que contenían 30 ml de medio de cultivo líquido. Las evaluaciones se realizaron a los 30 días de cultivo con la determinación del número y la longitud de los embriones somáticos (mm). Además de una descripción morfológica e histológica de estos. Los resultados mostraron el efecto regulatorio de la densidad de inoculación en la formación y el desarrollo morfológico de los embriones somáticos. La mayor formación de embriones con un desarrollo morfológico homogéneo se produjo en 1,5 gMF de densidad de inoculación. Esta proporcionó un 86,4% de embriones con una longitud de 0,21 a 4,0 mm, y el estudio de las secciones histológicas mostró evidencias histológicas de la etapa globular. La sincronización durante la formación y el desarrollo de los embriones somáticos del cv. FHIA-21 aumentó la eficiencia del proceso de embriogénesis somática.

Somatic embryogenesis is an interesting proposal for mass propagation of plants from the FHIA-21 (Musa AAAB). However, it is characterized by an asynchronous process, due to the presence of somatic embryos at different stages of ontogenetic development. Reduction of asynchrony is an important aspect to use this system of regeneration in plant propagation. Effect of inoculation density on the formation and uniform morphological development of somatic embryos of cv. ‘FHIA-21’ was determine by adding 0.5, 1.0, 1.5 and 2.0 g of fresh mass (gMF) of embryogenic cell aggregates, in Erlenmeyer flasks (250 ml) containing 30 ml liquid culture medium. Evaluations were made within 30 days of culture determining the number and length of somatic embryos (mm). Also, morphological and histological descriptions of these were analyzed. Results showed the regulatory effect of inoculation density on the formation and morphological development of somatic embryos. The biggest formation of embryos with a uniform morphological development occurred in 1.5 gMF inoculation density. This provided 86.4% of embryos with a length of 0.21 to 4.0 mm and the study of histological sections showed histological evidence of the globular stage. Synchronization during the formation and development of somatic embryos cv. FHIA-21 increased the efficiency of somatic embryogenesis.

New method for rapid selection of banana (Musa spp. AAA cv. Grande naine) plants with bar gene in the field using ammonium gluphosinate

Los genes marcadores de la selección son ampliamente utilizados para la transformación eficiente de diferentes cultivos, sin embargo, existen muy pocas referencias sobre el desarrollo de métodos de selección temprana en campo de plantas supuestamente transformadas con marcador de selección tipo herbicidas. La presente investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto del glufosinato de amonio a partir del herbicida Finale® en los fragmentos de hojas de plantas de campo cultivados in vitro, para la selección de líneas transformadas de banano cv. Grande naine (Musa spp. AAA), con una construcción que porta como marcador de selección el gen bar. A partir del método desarrollado con el empleo de fragmentos de hojas de plantas procedentes de campo, cultivados in vitro en el medio de cultivo agar al 1% más agua y 30,0 g/l-1 de glufosinato de amonio se logró diferenciar las dos líneas transformadas del control no transformado, a partir de la expresión del gen bar. Ambas líneas fueron positivas en el análisis molecular de PCR. Estos resultados permiten disponer de una herramienta útil y simple como parte de un protocolo de transformación genética para el cultivo del banano, siendo el primer informe de este resultado a nivel internacional.

Selector marker genes are widely used for the efficient transformation of different crops; however, there are very few references on the development of early selection methods in the fields of potentially transformed plants for herbicides. The objective of this research was to evaluate the effect of ammonium gluphosinate from the herbicide Finale® in leaf fragments from in vitro plants grown in the fields for the selection of putative transformed lines of banana cv. Grande naine (Musa spp. AAA), with a construction that has the bar gene as the selector marker gene. Since the method developed with the use of leaf fragments from field plants culture in vitro in the agar at 1% more water and 30.0 gl-1 ammonium gluphosinate did differentiate the two transformed lines untransformed control, from the bar gene expression. Both lines were positive in the PCR molecular analysis. These results were a useful tool and form a part of a protocol of genetic transformation for banana, being the first reported result.

First protected area in the partido de Magdalena for the preservation of Ombustillo (Phytolacca tetrámera Hauman),in situ. Agreement between the Department of Transportation of the Province of Buenos Aires and the Faculty of Agricultural Sciences and Forestry of the National University of La Plata, Argentina