Revista Colombiana de Biotecnología

Instituto de Biotecnología: Líder en Investigación, Desarrollo e Innovación

**Optimización de las condiciones de inoculación por biobalística de un Begomovirus en tomate y tabaco**

La transmisión experimental de Begomovirus es problemática. La mayoría de estos virus se pueden transmitir de planta a planta por su vector biológico, Bemisia tabaci. Las inoculaciones experimentales con mosca blanca son problemáticas debido a sus hábitos de alimentación, requerimiento de una planta viva infectada e instalaciones de contención para el vector. Por su parte la inoculación mecánica de Begomovirus es posible, pero generalmente a tasas bajas y no en todos los casos. Por esta razón el bombardeo de partículas (biobalística) de DNA viral como una estrategia de inoculación fue desarrollada. La posibilidad de utilizar el dispositivo de mano Helios Gen Gun System (Biorad®), un equipo de biobalística, para la transmisión de un Begomovirus bipartita a plantas de tomate y tabaco fue ensayado y optimizado. Los parámetros evaluados fueron: número de disparos (1-2), presión de helio (220 y 320 psi) y diámetro de las partículas de oro (0.6 y 1.6µm). Los síntomas característicos de la enfermedad viral (clorosis, mosaico y deformación de la hoja) aparecieron 3 semanas después del bombardeo en las hojas jóvenes no inoculadas. La replicación del DNA viral en las plantas se confirmó por Reacción en cadena de la polimerasa. Plantas infectadas en un 100% se obtuvieron cuando en el bombardeo se emplearon partículas de oro de 1.6 µm recubiertas con DNA viral a una presión de 320psi. A nuestro entender este es el primer reporte en Colombia de la inoculación directa de plantas de tomate y tabaco con un Begomovirus bipartita usando un dispositivo portátil de biobalística.

Experimental transmission of Begomovirus is problematic. Most Begomoviruses can be transmitted readily from plant to plant by the whitefly vector, but this also requires a live infected plant and extensive facilities to maintain the insect. Whitefly inoculations can also be problematic because of their preferential feeding habits on certain plants. Mechanical inoculation of Begomovirus is possible but generally at low rates and for others not at all. For this reason particle bombardment (biolistic) of DNA viral as an inoculum was developed. The possibility of using the Helios Gen Gun System (Biorad®), a biolistic hand-held device, for transmitting Begomovirus bipartite to tomato and tobacco plants was assayed and optimized. Biolistic inoculation was carried out with the hand held device at 220 or 320 psi, applying 1 or 2 shots /plant and using gold particles of 0.6 or 1.6µm in size. Characteristic symptoms of viral disease (chlorosis, mosaic and leaf deformation) appeared 3 weeks post-inoculation in the newly developing leaves. Replication of the viral DNA in plants was confirmed by Polymerase Chain Reaction. All bombarded plants became infected when biolistic inoculation was carried out with the hand held device at 320psi and using 1.6 µm gold particles in size. To our knowledge this is the first report in Colombia of successful direct inoculation of tomato and tobacco plants with Begomovirus bipartite geminivirus using a biolistic hand-held device.

**Balance de Flujos Metabólicos en Saccharomyces cerevisiae basado en Compartimentalización Intracelular**

Una de las técnicas más utilizadas para la predicción de producción de bioproductos y distribución intracelular de flujos de microorganismos es el Análisis de Balance de Flujos - FBA por sus siglas en inglés. El FBA requiere de una función objetivo que represente el objetivo biológico del microorganismo estudiado. En este trabajo se propone un nuevo tipo de funciones objetivo basada en la combinación de objetivos de compartimentos físicos presentes en el microorganismo estudiado. Este tipo de funciones objetivo son examinadas junto con un modelo estequiométrico extraído de la reconstrucción iMM904 del microorganismo S. cerevisiae. Su desempeño se compara con la función objetivo más usada en la literatura, la maximización de biomasa, en condiciones experimentales anaeróbicas en cultivos continuos y aeróbicas en cultivos tipo lote. La función objetivo propuesta en este trabajo mejora las predicciones de crecimiento en un 10% y las predicciones de producción de etanol en un 75% respecto a las obtenidas por la función objetivo de maximización de biomasa, en condiciones anaeróbicas. En condiciones aeróbicas tipo lote la función objetivo propuesta mejora en un 98% las predicciones de crecimiento y en un 70% las predicciones de etanol con respecto a la función objetivo de biomasa.

Flux Balance Analysis - FBA - is one of the most used techniques in prediction of microorganism bioproducts. It requires an objective function that represents biological objective of the studied microorganism. This paper presents a new kind of objective functions based on individual physical compartment objetives in the studied microorganism. These kind of functions was tested with a stoichiometric model extracted from iMM904 reconstruction of S. cerevisiae and its performance is compared with the most used objective function in literature, growth maximization, in anaerobic and aerobic batch conditions. The presented objective function outperform growth predictions in 10% and ethanol predictions in 75% compared with obtained by maximization of growth objective function, in anaerobic conditions. In aerobic batch conditions the presented objective function outperforms in 98% growth preditions and 70% ethanol predictions compared with growth maximization.

Estudios de transformación genética en arveja voluble cultivar Santa Isabel

Se probaron diferentes alternativas de transformación genética en arveja cultivar "Santa Isabel" con el fin de estudiar los factores que afectan el proceso. Se emplearon los métodos de infiltración mediante vacío, infección directa de explantes, transformación de polen, y microinyección de ovarios. La prueba histoquímica de expresión gus fue escogida como método de análisis en la determinación de transformantes positivos. Con las metodologías empleadas se detectaron puntos azules en el tejido vegetal, lo cual indica la expresión transitoria del transgen en los explantes utilizados. Los resultados obtenidos sugieren que la transformación genética en arveja cultivada en Colombia puede ser utilizada para la introducción de genes de interés como apoyo a los procesos de mejoramiento genético.

Different genetic transformation alternatives were tested in pea, "Santa Isabel" cultivar, with the purpose of studying the factors that affect the process. The methods of infiltration with vacuum, direct infection of the explants, pollen transformation and ovary microinjection were used. The hystochemical test of the gus expression was chosen as analysis method in the determination of positive transformants. With the used methodologies, blue spots in the plant tissue were detected, which indicates transient expression of the transgene in utilized explants. The obtained results suggest that the genetic transformation in pea genotypes planted in Colombia can be utilized for the introduction of genes of interest as support to genetic improvement.

**Cultivos discontinuos alimentados con urea de la cianobacteria Phormidium sp. en función de la salinidad y edad del cultivo**

Se comparó la eficiencia de sistemas de cultivos discontinuos alimentados versus cultivos discontinuos convencionales, en cuanto a concentración de nitrógeno, adicionando 0,2 mM de urea cada tres días al final de la fase exponencial, durante 21 días. Se realizaron cultivos con un volumen de 1500 mL a 15 y 35 UPS de salinidad, enriquecidos con medio ALGAL 8mM NaNO3, a 238 µmol q m-2 s-1, aireación constante, fotoperiodo 12:12 horas y temperatura de 29 ±3°C. Phormidium sp. posee la capacidad de hidrolizar la urea; mostrando una asimilación de 65±7,07% de la misma, con la mayor producción (p<0,05) de clorofila a, ficocianina y proteínas de 20,26±1,24; 203,47±12,83 y 707,87±28,47 µg mL-1en los cultivos alimentados. La producción de pigmentos vario en el tiempo, independientemente a la salinidad y sistema de cultivo, mientras que la producción de proteínas y carbohidratos totales fue directamente proporcional a la edad del cultivo, con valores máximos de 612,74 ± 5,41 µg mL-1 y 8,96±0,08 mg mL-1 respectivamente a los 31 días. La síntesis de lípidos y EPS fueron influenciadas (p<0,05) por la salinidad, presentando los máximos de lípidos a 15 UPS con 12,22±2,91µg mL-1, y los EPS se incrementaron a 35 UPS con 2,00 ± 0,26 y 2,03 ± 0,15 mg mL-1. Estos resultados determinan que los cultivos de Phormidium sp. alimentados con urea y a salinidades de 15 y 35 UPS, representan una alternativa económica para la producción de clorofila a, ficocianina y proteínas, incrementándose un 31,04; 40,72 y 31,94 % respectivamente en comparación con cultivos no alimentados.

Fed-batch system efficiency versus batch cultures was compared in relation to nitrogen concentration, adding 0,2mM urea at the end of the exponential phase, during 21 days. Cultures were carried out in 1500 mL to 1.5 and 3.5 UPS of salinity, enriched with Algal medium 8mM NaNO3, 238 mol q m-2 s-1, constant aeration, photoperiod 12:12 h. and 29 ±3°C. Phormidium sp. is able to hydrolyze urea; showing a total assimilation of 65±7.07%, with the highest (p< 0.05) chlorophyll a, phycocyanin and protein production of 20.26 ± 1.24, 203.47 ± 12.83 and 707.87 ± 28.47 µg mL-1 in the fed-batch cultures. On the other hand, pigment production varies in time, regardless salinity and culture system. Proteins and total carbohydrate production were directly proportional to the age of cultures, with maximum values of 612.74 ± 5.41 µg mL-1 and 8.96 ± 0.08 mg mL-1, respectively. Lipid and EPS were influenced (p< 0.05) by salinity, showing maximum of lipids at 15 UPS with 12.22±2.91 µg mL-1, and EPS at 15 and 35 UPS with 2.00 ± 0.26 and 2.03 ± 0.15 mg mL-1. These results determine that Phormidium sp. cultures fed with urea, to salinities of 15-35 UPS, represent an economic alternative for chlorophyll a, phycocyanin and protein production, with an increase of 31.04, 40.72 and 31.94% respectively in comparison with non-fed cultures.

Estudio de las condiciones de mezclado en fermentador para la producción de blastosporas de Beauveria bassiana

Se caracterizaron tres fermentadores: New Brunswick M-19 de 14 litros, Applikon Biocontroller 1035 de 7 litros y New Brunswick Bioflo III de 7 litros, determinando el coeficiente volumétrico de transferencia de oxígeno (K La), la retención de gas (RG) y el tiempo de mezclado (tM). El fermentador New Brunswick Bioflo III tuvo los mejores valores con una relación de diámetro del impulsor/diámetro del tanque (D I/D T) de 0.43, K La = 9.5-208 h-1 y tM = 1.0-3.0 s, por lo que fue seleccionado para realizar la producción de blastosporas de Beauveria bassiana, utilizando melaza como fuente de carbono. Se estudiaron las condiciones de mezclado, utilizando diferentes combinaciones de impulsores tipo Rushton, Maxflo y Lightnin, bajo un diseño experimental factorial 3². El tiempo de propagación fue de 4 días, el volumen de trabajo 4 litros, 10% de inóculo (1x10(6) blastosporas/ml), temperatura 30°C, agitación de 400-500 rpm, aireación de 0.5-1.0 vvm, y pH de 5.4.El hongo se desarrolló mejor utilizando la combinación de impulsores Rushton-Maxflo a 400 rpm y 1.0 vvm (F = 10.324, p ≤ 0.0123) (DMS=0.585), obteniendo una concentración de 1.2x10(9) blastosporas/ml, 2.2 g/l de biomasa y 2.48 g/l de consumo de sustrato (Y x/s=0.89). Las condiciones de mezclado y los parámetros obtenidos pueden ser aplicados en otros fermentadores para optimizar la producción de blastosporas de B. bassiana en la elaboración experimental de bioinsecticidas.

In this work three fermenters were characterized: New Brunswick M-19 of 14 liters, Biocontroller Applikon 1035 of 7 liters and New Brunswick Bioflo III of 7 liters, determining the volumetric coefficient oxygen transfer (K La), gas hold up (GH) and the mixing time (tM). The fermenter New Brunswick Bioflo III had the best values with a ratio of diameter of the impeller/vessel (D I/D T) of 0.43, K La = 9.5-208 h-1 and tM = 1.0-3.0 s, so it was selected for the production of blastospores of Beauveria bassiana, using molasses as carbon source. We studied the mixing conditions, using different combinations of impellers, type Rushton, Lightnin and Maxflo under a factorial experimental design 3². The propagation time was of 4 days, working volume 4l, 10% inoculum (1x10(6) blastospores/ml), temperature 30°C, agitation of 400-500 rpm, aeration 0.5-1.0 vvm, and pH of 5.4. The fungus growth better using a combination of impellers Rushton-Maxflo at 400 rpm and 1.0 vvm (F = 10.324, p ≤ 0.0123) (LSD = 0.585) obtaining a concentration of 1.2x10(9) blastospores/ml, 2.2 g/l biomass and 2.48 g/l of substrate consumption (Y x/s = 0.89). The mixing conditions and the parameters obtained can be applied to optimize the blastospore productions of B. bassiana to fermenter level in the experimental production of bioinsecticides.

**Efecto de la consistencia del medio de cultivo y del nitrato de plata en la micropropagación de dos cultivares de papa (Solanum tuberosum)**

Potato (Solanum tuberosum L.) is one of the main crops of the Andes region in Venezuela where some S. tuberosum ssp. andigena cultivars are used, including Arbolona negra. Since 1946, the Andean cultivars have been slowly substituted with foreign potato seeds, for example cv. Granola from Germany. Potato micropropagation is an excellent alternative for the conservation of native cultivars, for the massive production of potato seeds and for the production of plantlets with adequate growth parameters that allow the study of potato-pathogen interactions. However, potato's vitroplants frequently show symptoms caused by ethylene accumulation in the culture flasks. In this work, we compare the in vitro response of Granola and Arbolona negra cultivars using MS semi-solid or liquid medium supplemented or not with AgNO3. These potato cultivars did not show epinasty or hyperhidricity symptoms caused by ethylene when were cultivated on MS (1962) semi-solid medium supplemented with AgNO3 2 mg l-1. Under these conditions, leaf area shows the highest values for both cultivars, but there were no differences in others growth parameters such as stem length or leaf number in comparison with plantlets cultivated on medium without AgNO3. These results allowed us to recommend the use of semi-solid medium supplemented with AgNO3 for the micropropagation of these two cultivars.

La papa (Solanum tuberosum L.) es uno de los principales cultivos de la región de los Andes de Venezuela, donde algunos cultivares de S. tuberosum ssp. andigena se utilizan, entre ellos, Arbolona negra. Desde 1946, los cultivares andinos han sido poco a poco sustituidos por cultivares comerciales, por ejemplo Granola de Alemania. La micropropagación es una excelente alternativa para la conservación de cultivares nativos de papa, para la producción masiva de semillas y para la producción de vitroplantas con parámetros de crecimiento adecuados que permitan el estudio de la interacción papa-patógeno. Sin embargo, las vitroplantas de papa frecuentemente muestran síntomas causados por la acumulación de etileno en los envases de cultivo. En este trabajo, se compara la respuesta in vitro de los cultivares Granola y Arbolona negra en medio MS semisólido o líquido suplementado o no con AgNO3. Estos cultivares no presentaron síntomas de hiperhidricidad o epinastia causados por el etileno cuando se cultivaron en medio MS (1962) semisólido suplementado con AgNO3 2 mg·l-1. Bajo estas condiciones el área foliar mostró los valores más altos para ambos cultivares, pero no hubo diferencias en los otros parámetros de crecimiento medidos tales como la longitud del tallo o el número de hojas en comparación con vitroplántulas cultivadas en medio sin AgNO3. Estos resultados nos permiten recomendar la utilización del medio semisólido suplementado con AgNO3 para la micropropagación de estos dos cultivares.

Actividad antimicrobiana de Weissella confusa y sus metabolitos frente a Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae

Con el fin evaluar el campo de aplicación potencial de una bacteria ácido láctica y de sus metabolitos, se realizó la cinética de la actividad antimicrobiana de W. confusa y de sus metabolitos contra E. coli, y K. pneumoniae, dos patógenos causantes de enfermedades transmitidas por alimentos. La producción de W. confusa se realizó por fermentación discontinua en sustrato comercial MRS. Se realizaron tres fermentaciones durante 6 horas, sin aireación, agitación continúa 33°C y 100 rpm. Cada hora de fermentación se separaron tres sustancias biológicas, W. confusa con sus metabolitos (W+W10b), células de W. confusa libres de metabolitos (W) y metabolito (W10b) y se midió la actividad antimicrobiana contra los patógenos E. coli, y K. pneumoniae. Se encontraron diferencias estadísticas significativas entre tratamientos y tiempo de fermentación. Para E. coli el tratamiento W presentó la mayor actividad antimicrobiana, la cual se obtuvo entre la cuarta y sexta hora de fermentación (2.45 cm de diámetro promedio de inhibición). Para K. pneumoniae, los tratamientos W y W+W10b presentaron actividad antimicrobiana entre la cuarta y quinta hora de fermentación, sin diferencia significativa entre ellos. W. confusa y el metabolito W10b demostraron poseer capacidad antimicrobiana contra E. coli y K. pneumoniae, lo cual sugiere que W. confusa y W10b podrían utilizarse como alternativa de bioconservación o bioprotección de alimentos frescos y procesados, para alimentación humana y animal; y podría convertirse en una alternativa al uso de antibióticos para enfermedades causadas por E. coli y K. pneumoniae.

The kinetic of antimicrobial activity of Weissella confusa and their metabolites against E. coli, and K. pneumoniae, (two pathogens causing foodborne illness) was evaluated, in order to know the possible use in food processing. W. confusa was produced by batch fermentation using MRS commercial substrate. Three fermentations, of 6 hours at 33 °C, without aeration, stirring continuously (100 rpm) were performed. Every hour of fermentation, three biological substances, W. confusa with their metabolites (W + W10b), W. confusa free cells metabolites (W), and metabolite (W10b) were separated, and subsequently the antimicrobial activity against pathogenic E. coli and K. pneumoniae was measured. Statistically significant differences between treatments and fermentation time were found. Treatment (W) against E. coli, showed the greatest antimicrobial activity, it was obtained between the fourth and sixth hours of fermentation (2.45 cm diameter average inhibition). In treatments W and W + W10b against K. pneumoniae, statistically significant differences between them were not found. The antimicrobial activity was shown between the fourth and fifth hour of fermentation. W. confusa and W10b have antimicrobial activity against E. coli and K. pneumoniae, suggesting that W and W10b could be used as an alternative to biopreservation or bioprotection of fresh and processed food for human and animal consumption, and could become an alternative to antibiotics used for diseases caused by E. coli and K. pneumoniae.

**Obtención de microcápsulas de tamaño controlado conteniendo Lactococcus lactis, utilizando mezclas de gelanos de alto y bajo acilo**

Control the diameter of microcapsules obtained with functional biopolymer is a crucial parameter in the success of food applications, since it affects the protection of microencapsulated microorganism and also in the texture of the final product. The aim of this study was to assess the obtaining of controlled size microcapsules containing Lactococcus lactis, using mixtures of high acyl gellan (HA) and low acyl gellan (LA). A concentration of 0.2% (w/w) gellan was employed using a simple design, generating the following mixtures: 100HA/0.0LA, 0.0HA/100LA, 25HA/75LA, 50HA/50LA and 75HA/25LA. The diameter of the microcapsules, efficiency of microencapsulation and viability of the microencapsulated microorganism were studied in function of the speed of agitation (400-800 rpm) and surfactant concentration (sorbitan monooleate) (0.0-0.2%)v/v. The results indicated that mixtures with concentration equal or greater than 50% of HA gellan are not efficient for obtaining microcapsules, only the LA gellan and the mixture 25HA/75LA gave acceptable results. The viability of the microorganism and the efficiency of microencapsulation were descending function of the stirring speed and surfactant concentration. The microcapsules obtained had diameters not greater than 80 µm when the highest concentrations of surfactant (0.2% v/v) and stirring speed (800 rpm) were used, suggesting that the ionic gelation can be used to obtain microcapsules of controlled size (15-75 µm) containing Lactococcus lactis with high viability (83.32%) and high efficiency of microencapsulation (82.4%), which makes it feasible for use in food applications.

Controlar el diámetro de microcápsulas obtenidas con biopolímeros funcionales es un parámetro crucial en el éxito de aplicaciones alimentarias, ya que influye en la protección del microorganismo microencapsulado y también en la textura del producto final. El objetivo de este trabajo fue evaluar la obtención de microcápsulas de tamaño controlado conteniendo Lactococcus lactis, utilizando mezclas de gelana de alto (HA) y bajo acilo (LA). Se empleó una concentración de gelana de 0.2% p/p usando un diseño de mezclas simple, generando las siguientes mezclas, 100HA/0.0LA, 0.0HA/100LA, 25HA/75LA, 50HA/50LA, 75HA/25LA. El diámetro de las microcápsulas, la eficiencia de microencapsulación y la viabilidad del microorganismo microencapsulado fueron estudiadas en función de la velocidad de agitación (400-800 rpm) y concentración de surfactante (sorbitan monooleate) (0.0-0.2%)v/v. Los resultaron indicaron que las mezclas con concentración igual o superior al 50% de gelana de HA, no son eficientes para obtener microcápsulas; solamente dieron resultados aceptables la gelana de LA y la mezcla 25HA/75LA. La viabilidad del microorganismo y la eficiencia de microencapsulación variaron en función descendente de la velocidad de agitación y concentración de surfactante. Las microcápsulas obtenidas no presentaron diámetros superiores a 80 µm cuando se emplearon las mayores concentraciones de surfactante (0.2%) y velocidad de agitación (800 rpm), sugiriendo que la gelación iónica puede ser utilizada para obtener microcápsulas de tamaño controlado (15-75 µm) conteniendo Lactococcus lactis con alta viabilidad (83.32%) y eficiencia de microencapsulación (82.4%), cuando se utiliza la mezcla 25HA/75LA a 800 rpm y 0.2% v/v de surfactante, lo cual la hace factible para su uso en aplicaciones alimentarias.

**Evaluación de rizobacterias promotoras del crecimiento bajo diferentes esquemas de fertilización en el cultivo de maíz variedad HIMECA-95**

Bacterias previamente aisladas, y caracterizadas como diazotróficas y disolventes de fosfatos inorgánicos se evaluaron en campo como promotoras del crecimiento vegetal en la producción de maíz variando las condiciones de fertilidad del suelo. Las cepas MF1b y MF5, en forma individual y en consorcio, se inocularon en semillas de maíz (HIMECA-95), y se sembraron bajo las siguientes condiciones de fertilización química: K, NK, PK, RK, NPK, y NRK (R: roca fosfórica). Al final del ensayo se determinó el peso seco total, y los contenidos de N y de P presentes en el grano para luego calcular el porcentaje de eficiencia agronómica relativa (%EAR). Los resultados obtenidos mostraron que la inoculación con la cepa MF5 en forma individual y en consorcio, con una fertilización quimica de NK, incrementaron la EAR del peso seco del grano en 130 y 403%, el contenido de N en 463 y 116%, y el de P en 152 y 376%, respectivamente, logrando un aumento en la producción del grano de maíz y su calidad. Asimismo, se observó una variabilidad en las respuestas de los parámetros evaluados, lo cual podría deberse a los bajos contenidos de N y P del suelo, a los cambios en la fertilidad del suelo por la adición de los fertilizantes de alta solubilidad, y a la interacción entre las comunidades microbianas autóctonas y las bacterias introducidas. Se concluye que la efectividad de los microorganismos con potencial como biofertilizante para la agricultura sea evaluada cuidadosamente bajo diversas condiciones de fertilidad de los suelos.

Bacteria previously isolated, characterized as diazotrophic and inorganic phosphate solubilizers were evaluated under field conditions as plant growth promoters on the maize production when soil fertility was changed. The strains MF1b and MF5, alone and in consortium, were inoculated on maize seeds (HIMECA-95), and these were sown under the following chemical fertility conditions: K, NK, PN, RK, NPK, and NRK (R: phosphate rock). Total dry weight, and N and P contents of the grain were determined at the end of the experiment; also, the % of relative agronomic efficiency (RAE) was calculated. Results showed that inoculation with the strain MF5 alone and in consortium, with the addition of NK fertilizer increased the % RAE in 130 and 403 for the dry weight, in 463 and 116 for the N content, and in 152 and 376 for the P content, respectively, allowing an increase in both production and grain quality. Moreover, it was observed variations among the evaluated parameters which could be related to the low N and P status of the soil, the soil fertility changes after the addition of the highly soluble chemical fertilizers, and the interaction between autochthonous microbial communities and the introduced bacteria. It is concluded that the affectivity of a potential microbial biofertilizer for agriculture should be carefully evaluated under different fertility conditions of soils.

**Antibióticos beta-lactámicos efectivos para eliminar el Agrobacterium tumefaciens en callos de arroz índica**

It was evaluated the antibacterial activity of seven β-lactam antibiotics against A. tumefaciens strain EHA105, living in indica rice calli. For detection of persistent Agrobacterium in callus tissues, homogenates of infected calli were spread over LB agar plates to count colony forming units per gram of calli. Agrobacterium growth was completely suppressed during plant regeneration at 250 mg/l of all of the antibiotics tested. Also it was appraised the effect of β-lactams on callus growth and plant regeneration. A similar tendency of increased calli fresh weight with 100 mg/l and 250 mg/l of all antibiotics was proven. But the use of 500 mg/l caused decreasing of callus growth. About 80% of calli formed shoots in a month when we used 100 mg/l or 250 mg/l of β-lactam during the regeneration stage. Two morphogenic responses were distinguished during regeneration stage: somatic embryogenesis and adventitious shoots organogenesis.

Se evaluó la actividad antibacteriana de siete antibióticos β-lactámicos sobre la cepa EHA105 de Agrobacterium tumefaciens inoculada en callos de arroz. Para detectar el Agrobacterium persistente en los callos, se cultivó en medio LB sólido un extracto de callos infectados, y se contó el número de unidades formadoras de colonias por gramo de callo. La bacteria se eliminó totalmente en la fase de regeneración utilizando 250 mg/l de cualquiera de los antibióticos probados. Se evaluó además el efecto de los β-lactámicos sobre el crecimiento de los callos y la regeneración de plantas. El incremento del peso de los callos fue similar cuando se utilizó 100 y 250 mg/l de antibiótico, pero disminuyó significativamente cuando la concentración se elevó a 500 mg/l. La regeneración de plantas ocurrió a partir del 80% de los callos cultivados con 100 y 250 mg/l de antibiótico. En la regeneración se distinguieron dos respuestas morfogénicas: embriogénesis somática y organogénesis adventicia.

**Evaluación de diferentes medios de cultivo in vitro en el desarrollo de híbridos de Phalaenopsis (Orchidaceae)**

Los híbridos de Phalaenopsis tienen una gran importancia económica a nivel mundial, como flor cortada y planta ornamental, debido a sus flores vistosas y a la capacidad de adaptación a diferentes condiciones ambientales. Las técnicas de cultivo in vitro resultan indispensables para mejorar la eficacia germinativa, el crecimiento y desarrollo de orquídeas con fines comerciales e investigativos. En esta investigación se determinó el medio de cultivo más apropiado para la germinación in vitro de un híbrido de Phalaenopsis. Inicialmente se evaluó la viabilidad de las semillas utilizando la prueba de tetrazolio (TZ). Las semillas se desinfectaron y se cultivaron aplicando el método de la jeringuilla. El porcentaje de viabilidad en promedio fue de 92,2 % (P≤ 0,05: Tukey HSD), con un porcentaje de germinación entre todos los medios de 95,1 % (P≤ 0,05: Tukey HSD). El medio de cultivo más eficiente para la germinación de híbridos de Phalaenopsis a las 18 semanas de cultivo fue el Murashige & Skoog (MS) suplementado con agua de coco, y jugo de piña con diferencias estadísticamente significativas (P≤ 0,05: Tukey HSD), con respecto a los demás medios de cultivo, contribuyendo de esta manera al uso de componentes orgánicos con el fin de mejorar la germinación y desarrollo de Phalaenopsis.

The Phalaenopsis hybrids have a significant economic importance throughout the world, as ornamental flower or plant. It is because of its attractive flowers and its adaptation capacity into different environments. The different culture media in vitro are vital to improve the efficacy of germination, growing and development of the Orchids for commercial and research purposes. In this research, the most appropriated medium for in vitro propagation of Phalaenopsis hybrid was determined. At first, the seeds viability was evaluated by using tetrazolium test (TZ). The seeds were disinfected and cultivated by means of the syringe method. The viability percentage average was 92.2 % (P≤ 0.05: Tukey HSD), with a percentage of germination of 95.1 % (P≤ 0.05: Tukey HSD) in all the environments. The most efficient culture Medium for Phalaenopsis hybrid phenological development, at 16 weeks, was Murashige & Skoog (MS). Coconut water and pineapple juice were used as supplement showing statistically significant differences (P≤ 0,05: Tukey HSD), in comparison with the other culture media, contributing this way to the usage of organic components, which will be employed to improve the germination and development of the Phalaenopsis.

Evaluación de la transferencia de oxígeno en un biorreactor convencional con aireador externo

En el cultivo de microorganismos aerobios se ha observado que los biorreactores convencionales conducen a inconvenientes asociados a la limitación de oxígeno. Para dar solución a esta problemática se diseñó, construyó y evaluó un prototipo de biorreactor con aireador externo. Este sistema permitió incrementar la velocidad de transferencia del oxígeno desde la fase gaseosa a la fase líquida, superando la limitación de oxígeno. Sin embargo, esta nueva configuración carece de modelos empíricos o teóricos para predecir la transferencia de oxígeno a través del cálculo del coeficiente global de transferencia de oxígeno (K La). En ese sentido, en este trabajo se propuso el uso de análisis dimensional (Teorema Pi de Buckingham), como herramienta para evaluar el efecto sobre el K La de las diferentes variables involucradas en el proceso, como las de operación, las propiedades de los fluidos y dimensiones geométricas. Luego de desarrollar el análisis propuesto, se encontró una correlación de 0.89 entre los valores generados por el modelo y los datos experimentales disponibles. Se encontró que las variables con mayor incidencia sobre el coeficiente K La son el flujo de medio de cultivo que circula por el aireador externo denominado flujo de recirculación, la presión en el aireador externo y la velocidad de agitación.

In aerobic microorganism culture, it has been observed that conventional bioreactors lead to disadvantages associated with oxygen limitation. To solve this problem it was designed, built and tested a bioreactor prototype with external aerator. This system allowed increasing the speed of oxygen transfer from gas phase to liquid phase, overcoming the limitation of oxygen. However, this new configuration doesn't have theoretical or empirical models to predict the oxygen transfer by calculating the global volumetric coefficient of transfer of oxygen (K La). In that way, this paper proposed the use of dimensional analysis (Buckingham's Pi Theorem), as a tool to evaluate the effect of various operating variables, fluid properties and geometrical dimensions involved in the process over K La. After developing the proposed analysis, we found a correlation of 0.89 between the values generated by the model and the available experimental data. It was found that the main variables which affect the coefficient K La are: the medium flow flowing through the external aerator called recirculation flow, the pressure in the external aerator, and the stirring speed.

Caracterización de bacterias diazotróficas solublizadoras de fosfato como promotoras de crecimiento en plantas de maíz

Phosphorus is limiting for growth of maize plants, and because of that use of fertilizers like rock phosphate has been proposed. However, direct use of rock phosphate is not recommended because of its low availability, so it is necessary to improve it. In this study, a group of diazotrophic bacteria were evaluated as phosphate-solubilizing bacteria, for their production of indolic compounds and for their effects on growth of maize plants. Strains of the genera Azosporillum, Azotobacter, Rhizobium and Klebsiella, were quantitatively evaluated for solubilization of Ca3(PO4)2 and Rock Phosphate as a single source of phosphorous in SRS culture media. Additionally, the phosphatase enzyme activity was quantified at pH 5.0, 7.0 and 8.0 using p-nitrophenyl phosphate, and production of indolic compounds was determined by colorimetric quantification. The effect of inoculation of bacteria on maize was determined in a completely randomized greenhouse experiment where root and shoot dry weights and phosphorus content were assessed. Results showed that strain C50 produced 107.2 mg.L-1 of available-P after 12 days of fermentation, and AC10 strain had the highest phosphatase activity at pH 8 with 12.7 mg of p-nitrophenol mL.h-1. All strains synthetized indolic compounds, and strain AV5 strain produced the most at 63.03 µg.mL-1. These diazotrophic bacteria increased plant biomass up to 39 % and accumulation of phosphorus by 10%. Hence, use of diazotrophic phosphate-solubilizing bacteria may represent an alternative technology for fertilization systems in maize plants.

El fósforo es limitante para el crecimiento de plantas de maíz y debido a eso se ha propuesto el uso de fertilizantes como la roca fosfórica. Sin embargo, el uso directo de roca fosfórica no es recomendado por su baja solubilidad, por lo que es necesario mejorarlo. En este estudio, un grupo de bacterias diazotróficas fueron evaluadas como bacterias solubilizadoras de fosfato, productoras de compuestos indólicos y sus efectos sobre el crecimiento de plantas de maíz. Cepas de los géneros Azospirillum, Azotobacter, Rhizobium y Klebsiella fueron evaluadas cuantitativamente en la solubilización de Ca3(PO4)2 y roca fosfórica como única fuente de fósforo en medio de cultivo SRS. Adicionalmente, la actividad de la enzima fosfatasa fue cuantificada a pH 5.0, 7.0 y 8.0 usando p-nitrofenil fosfato y, la producción de compuestos indólicos fue determinada por cuantificación colorimétrica. El efecto de la inoculación de las bacterias sobre plantas de maíz fue determinado en un experimento en invernadero con un diseño completamente al azar donde los pesos secos de raíz y hojas y el contenido de fósforo fueron evaluados. Los resultados mostraron que la cepa C50 produjo 107.2 mg.L-1 de fósforo disponible después de 12 días de fermentación y que la cepa AC10 tuvo la más alta actividad fosfatasa a pH 8 con 12.7 mg de p-nitrofenol mL.h-1. Todas las cepas sintetizaron compuestos indólicos y la cepa AV5 produjo la más alta cantidad con 63.03 µg.mL-1. Estas bacterias diazotróficas incrementaron la biomasa de las plantas por encima del 39 % y de la acumulación de fósforo por el 10 %. Aquí, el uso de bacterias diazotróficas solubilizadoras de fosfato puede representar una alternativa tecnológica para los sistemas de fertilización en plantas de maíz.

**Cultivos celulares de Choibá Dipteryx oleifera Benth**

Choibá (Dipteryx oleifera Benth) es un árbol de la familia Fabaceae (Papilionoideae), con una distribución geográfica reportada desde Nicaragua hasta Colombia a una altura de hasta 1000 msnm. Crece en bosque húmedo, muy húmedo o premontano húmedo. Esta especie es considerada vulnerable debido a la sobreexplotación de su madera, ya que es un árbol altamente apetecido por esta y por sus frutos. Su almendra almacena una buena cantidad de aceites con potencial para la industria alimentaria, lo que podría resultar en una nueva fuente alimenticia, por lo cual el cultivo in vitro de vegetales con el propósito de producir compuestos de interés, marca un punto de partida para reducir el uso del suelo y lograr componentes bioactivos bajo condiciones controladas. En este trabajo, como una primera etapa experimental, se evaluó el crecimiento celular en suspensiones, a partir de callo inducido en explantes de cotiledón; se ensayaron 6 tratamientos diferentes, la mitad de estos con MS como medio basal y la otra mitad con B5, cada uno de los dos grupos con un control y la combinación hormonal de 2.5 mg/L de 2,4-D y 1 mg/L de BAP o kinetina, suplementado con adenina, biotina, glutamina y ácido pantoténico y 30 g/L de sacarosa, bajo completa oscuridad. Se encontró que dos tratamientos con MS en combinación con 2.5 mg/L de 2,4-D y 1 mg/L de kinetina o BAP fueron los mejores.

Choibá (Dipteryx olifera) is a tree of the Fabaceae family, with a geographical distribution reported from Nicaragua to Colombia, nearly 1.000 msnm in a tropical rain forest. This species is a highly desired tree for its timber and fruits, the kernel store a lot of important oils for the food industry, resulting in a new possible food source, so we are making in vitro cultivation of vegetables with the purpose of producing compounds of interest and that mark a starting point on the reduction of land use and it achieves bioactive components under controlled conditions. In this work, as a first experimental step was evaluated the tissue cell growth in suspension, using fragments of cotyledon and testing 6 different treatments, the half of those with MS as basal medium and the other half with B5, each of the two groups with one control and hormone combination of 2.5 mg/L 2,4-D and 1 mg/L BAP or kinetin, supplemented with adenine, biotin, pantothenic acid and glutamine and 30 g l sucrose under complete darkness. It was found that two treatments with MS in combination with 2.5 mg/L 2,4-D and 1 mg/L kinetin or BAP were the best.

**Compatibilidad in vitro de un bioplaguicida a base de Lecanicillium lecanii (Hypocreales: Clavicipitaceae) con agroquímicos empleados en los cultivos de algodón y berenjena**

El aislamiento colombiano de Lecanicillium lecanii Vl026 formulado como un granulado dispersable WG, ha demostrado una alta eficiencia para el control de Bemisia tabaci en los cultivos de algodón y berenjena. Teniendo en cuenta el potencial de este bioinsumo, el objetivo del siguiente fue determinar la compatibilidad in vitro del bioplaguicida a base de L. lecanii con agroquímicos (insecticidas y fungicidas) que se utilizan con mayor frecuencia en dichos cultivos. La compatibilidad in vitro se estableció determinando el porcentaje de germinación (%) y las Unidades Formadoras de Colonia (UFC) en presencia de los plaguicidas y estimando la concentración inhibitoria 10 (CI10). Cada plaguicida se evaluó a la dosis recomendada, a la mitad y a un cuarto de ésta. Los fungicidas químicos (Benomil®, Vitavax®, Ridomil® y Manzate®) no fueron compatibles con L. lecanii, ya que inhibieron la germinación y las Unidades Formadoras de Colonia del hongo en las tres dosis evaluadas. En cuanto a los insecticidas químicos, el producto Confidor® no inhibió la viabilidad en comparación con el tratamiento control, considerándose compatible con el bioplaguicida. Cuando se evaluó la dosis completa de los demás insecticidas (Oportune®, Actara®, Match® y Malathion®) se obtuvieron germinaciones inferiores al 80%, por lo que dichos productos se clasificaron como no compatibles con el bioplaguicida a base de L. lecanii. El único agroquímico que fue compatible en condiciones in vitro con L. lecanii fue el producto Confidor®. Sin embargo, se recomienda evaluar el efecto in vivo de los productos químicos habitualmente utilizados por los agricultores sobre L. lecanii, con el propósito de desarrollar y establecer estrategias de manejo integrado de la mosca blanca Bemisia tabaci.

A colombian isolate of Lecanicillium lecanii formulated as dispersible granules WG, has shown high efficiency to control Bemisia tabaci in cotton and eggplant crops. Considering that, the objetive of this work was to determine the in vitro compatibility of biopesticide based on L. lecanii with agrochemicals (insecticides and fungicides) that are most frequently used in tobacco and eggplant crops. In vitro compatibility of L. lecanii with agrochemicals was determinated by germination (%) and Colony Forming Units (CFU) in the presence of pesticides and also estimating the inhibitory concentration 10 (IC10). Each agrochemical was evaluated at the recommended dose, a half and a quarter of it. For the three doses tested (Benomyl®, Vitavax®, Ridomil® and Manzate®) were not compatible with L. lecanii, because these inhibited germination and Colony Forming Units of the fungus. Confidor® did not inhibit viability compared to control treatment, and it was considered compatible with the biopesticide. When the recommended dose (Oportune®, Actara®, Match® and Malathion®)was used, the germination of the L. lecanii was lower than 80%, then these products were classified as non-compatible with the biopesticide based on L. lecanii. The only agrochemical that was compatible in vitro with L. lecanii was Confidor®. However, is necesary to evaluate the in vivo effect of agrochemicals commonly used by farmers on L. lecanii, in order to develop and establish integrated management strategies for the control of the whitefly Bemisia tabaci.

Baculovirus: Hospederos y especificidad

Los baculovirus son virus patógenos de insectos ampliamente empleados a nivel mundial como bioinsecticidas para el control de diferentes plagas de importancia agrícola y más recientemente como vectores de expresión de proteínas y vectores para terapia génica. Una de sus características principales es su alta especificidad de hospedero que incluye un rango muy estrecho de especies de insectos, que a menudo pertenecen a la misma familia. Sin embargo, es necesario entender los mecanismos involucrados en la definición del rango de hospederos de los baculovirus con el fin de evaluar la seguridad e inocuidad de su uso y determinar la posibilidad de mejorar sus propiedades para aplicaciones biotecnológicas mediante la construcción de baculovirus recombinantes con diferentes rangos de hospederos. En el presente artículo se revisarán los principales mecanismos comprendidos en la definición del rango de hospederos de los baculovirus, dentro de los que se destacan la especificidad para entrar en las células, la posibilidad de replicación del genoma viral, el control de los procesos bioquímicos y moleculares del insecto y las interacciones virus-hospedero que regulan la multiplicación del agente infeccioso, así como las perspectivas de la aplicación de este conocimiento.

Baculoviruses are insect pathogenic viruses widely used as bioinsecticides for controlling of several agricultural important pests and more recently as protein expression vectors and gene therapy vectors. One of its main characteristics is its high host-specificity including a very narrow range of insect species, which often belong to the same family. However, to understand the mechanisms involved in the definition of baculoviruses host range is necessary in order to assess the security and safety of its use and to determine the possibility of improving their properties for biotechnological applications through the construction of recombinant baculovirus with different host ranges. In the present article the main mechanisms involved in baculoviruses host range as specificity for entering into the host cells, the possibility of viral genome replication, the control of biochemical and molecular insect processes and the interactions virus-host regulating the multiplication of the infectious agent, and the prospects of applying this knowledge will be reviewed.

viral infection

host range

evolution

resistance

Incursión de la biotecnología en la educación: Tendencias e implicaciones

Este artículo presenta elementos tenidos en cuenta desde la década de los ochenta, especialmente por países como Reino Unido y Estados Unidos de América, para incluir la educación en biotecnología en las escuelas y así responder a las exigencias sociales y de mercado. Se describen eventos que orientaron la constitución de la educación biotecnológica formal y sirvieron como base para su incorporación en otros contextos. Se hace un acercamiento a los resultados alcanzados hasta este momento, y a las actividades y propuestas establecidas para la educación en biotecnología. Se abordaron algunas de las primeras publicaciones que permitieron la aproximación a los conceptos y contextos que tuvieron lugar para que la biotecnología fuera parte de la educación en varios países del mundo. Se destaca la importancia de configurar la didáctica de la biotecnología y sus implicaciones en la formación de profesores, así como en sus prácticas.

This paper presents elements that were taken into account from the 80's decade, especially in countries such as the United Kingdom and United Stated of America, to include Biotechnology education in the schools and in this way respond to the social and the market demands. Events that directed the formal biotechnological education setting up were described, which were used as a basis for its incorporation in other contexts. An approach to the reached results so far as well as the activities and established proposals for Biotechnological education is made. Some of the first publications that allowed the approach to the concepts and contexts that took place so that Biotechnology can be part of education in various countries around the world were tackled. The importance of configuring the didactics of biotechnology and its implications in Teachers' training as well as in their practices is highlighted.

**Una revisión sobre la producción de taxoides anticancerígenos en cultivos in vitro de callos y células de Taxus spp**

Los taxoides son diterpenos polioxigenados provenientes de la ruta metabólica del 2-metil-eritritol 4-fosfato cuya biosíntesis se genera en los plastidios. La importancia de los taxoides entre ellos el taxol, en el área de la medicina humana es muy valiosa debido a la utilización en oncología, fármaco utilizado contra el cáncer de seno, pulmón y ovario. Las especies de árboles de Taxus spp. están en peligro de extinción debido a la tala inmoderada, a la baja reproducción, lento crecimiento; por lo que el cultivo de tejidos vegetales in vitro es una alternativa biotecnológica de alto impacto y de gran ayuda para el conocimiento de la producción de los taxoides a nivel in vitro y sobre todo, para la conservación de este valioso recurso natural. Los objetivos de este artículo son: origen del taxol, su mecanismo de acción biológico, la biosíntesis de los taxoides, el método de extracción así como la producción de taxoides in situ y en cultivos in vitro de callos y células de Taxus spp.

The taxoids are polioxigenated diterpenes from the metabolic pathway of the 2-methyl-erythritol 4-phosphate whose biosynthesis is generated in the plastides. The importance of the taxoides including taxol, in the area of human medicine is very valuable due to the use in oncology, drug used against breast, lung and ovarian cancer. The species of trees of Taxus spp. are in danger of extinction due to logging immoderate, to the low reproduction rate, slow growth; therefore, the plant tissue culture in vitro is a biotechnological alternative high-impact and a great help to the knowledge of the production of the taxoides to level in vitro and above all, for the conservation of this valuable natural resource. The objectives of this article are to determine some general information about the geographical distribution of Taxus spp.; chemical characteristics of taxoids, biological mechanism of action of taxol; path of biosynthesis, methods of extraction and analysis of the taxoids and a current review of the production of taxoids in situ and in vitro cultures and cells of Taxus spp.

Identificación del agente causal de la pudrición blanca en Morelos, México

Cepas aisladas de Trametes versicolor (L.:Fr.) Pilát causando pudrición blanca en especies arbóreas de amate amarillo (Ficus petiolaris), cirián o cuatecomate (Crescentia alata), guayaba (Psidium guajava) y sauce colorado (Salix humboltiana) en los municipios de Ayala, Cuautla, Cuernavaca, Jojutla, Tepalcingo, Tlaltizapán, Tlaquiltenango y Zacatepec de Hidalgo en el estado de Morelos, México se desarrollaron en medio de cultivo agua-agar enriquecido con 2,4-D amina en concentraciones de 0, 50, 100, 150, 250, 500, 1000, 2000, 3000, 4000 y 5000 ppm, con el objetivo de conocer su desarrollo en esta sal. Los mejores resultados se obtuvieron en un intervalo de 50 a 1000 ppm con un óptimo de 500 a 1000 ppm.L, las concentraciones de 2000 a 5000 ppm inhiben el desarrollo del hongo. Se confirma que las cepas aisladas de T. versicolor pueden emplearse como herramienta potencial de biorremediación de aguas contaminadas por ácido 2,4-D que es empleado como herbicida para el control de malezas de hoja ancha en cultivos de maíz, arroz, caña de azúcar y sorgo en la región de estudio.

Trametes versicolor (L.: Fr) Pilát was identified causing white rot of hardwood tree species of amate amarillo (Ficus petiolaris), cuatecomate or cirián (Crescentia alata), guayava (Psidium guajava) and sauce colorado (Salix humboltiana) in municipalities of Ayala, Cuautla, Cuernavaca, Jojutla Tepalcingo Tlaltizapan, Tlaquiltenango and Zacatepec de Hidalgo in the state of Morelos, Mexico. Collected strains were grown in water-agar culture medium with 2,4-D amine at concentrations of 0, 50, 100, 150, 250, 500, 1000, 2000, 3000, 4000 and 5000 ppm with the aim of know their growth in this salt. The best results were found from 50 to 1000 ppm concentration with an optimum from 500 to 1000 ppm. Concentrations from 2000 to 5000 ppm inhibited fungal growth. The strains of T. versicolor can be used as a potential tool of bioremediation of water contaminated by 2,4-D which is wide used as a herbicide to control of broadleaf weeds in corn, rice, sugarcane and sorghum in the studied region.

Comparación de dos métodos de extracción de ADN a partir de plantas del género Solanum, subgénero Leptostemonum

Se evaluaron dos métodos para la extracción de ADN en plantas del género Solanum, con el fin de obtener ADN disponible y de buena calidad para la obtención de secuencias. El producto comercial DNeasy® Plant Mini Kit se comparó con un método que incluye el uso de una solución tampón de lisis. Para este último método también se evaluó si el rendimiento mejoraba cuando las muestras se maceraron previamente con nitrógeno líquido. Los resultados en términos de calidad (A260/A280) no mostraron diferencias significativas entre los métodos de extracción (índice < 1,5). Sin embargo, se encontraron diferencias en la concentración de ADN obtenida (prueba de Dunnet, p<0,05) y en los porcentajes de amplificación mediante PCR (², p<0,05). Los mejores resultados, en cuanto al éxito en la PCR (89%), se obtuvieron con el producto comercial, sin embargo la dilución 1:100 de las muestras obtenidas con el método de solución de lisis, permitió obtener resultados de PCR comparables. La maceración de las muestras con nitrógeno líquido, también mejoró el rendimiento (éxito de PCR) del método con solución de lisis. Se propone este método como una alternativa costo-efectiva para la extracción de ADN a partir de plantas del género evaluado, con base en los resultados obtenidos.

**Rescate de embriones para la obtención de vitroplantas de vid (Vitis vinífera L.)**

Este trabajo es la primera fase de un macroproyecto sobre la optimización de un protocolo para la obtención de metabolitos secundarios de interés comercial mediante la utilización de suspensiones celulares de Vid (Vitis vinífera L.). Se investigó el rescate de embriones como alternativa para la obtención de vitroplantas de vid (Vitis vinífera L.). El material vegetal utilizado se obtuvo de frutos de vid variedad Red Globe comerciales. Las semillas se desinfectaron sumergiéndolas en 5 g/l de ácido dicloroisocianúrico (NaDCC) por 15 min y luego en 2 g/l de Benomyl® por 15 min, con una efectividad del 92%. Se realizaron diferentes tratamientos para la obtención de plántulas utilizando semillas como explantes, las cuales se cultivaron en el medio Murashige Skoog suplementado con diferentes concentraciones de ácido indolacético (AIA) en combinación con ácido giberélico (AG3) y kinetina (K) sin obtener respuesta favorable para la germinación. Como alternativa, se extrajeron semillas inmaduras de frutos de la planta y se colocaron en el mismo medio pero suplementado con 100 mg/l de polivinilpirrolidona (PVP), 0.35 mg/l de AG3 y 1.75 mg/l de AIA por un mes. Posteriormente, se abrieron las semillas y se realizó el rescate de embriones, sembrándolos bajo condiciones de oscuridad por ocho días en los medios de cultivo Murashige Skoog 1 y 2 modificados, encontrando la formación de vitroplantas en un 40% al mes de cultivo.

This work is the first phase of a macroproyect about the optimization of a protocol for the obtaining of secondary metabolites of commercial interest by means of the use of cellular suspensions of Vitis vinífera L. The embryos rescue was investigated as alternative for the obtaining of grapevine (Vitis vinífera L.) vitroplants. The vegetable material used was obtained from commercial fruits of grapevine Red Globe variety. The seeds were disinfected submerging them in 5 g/l of dicloroisocianuric acid (NaDCC) for 15 min, and then in Benomyl® 2 g/l for 15 min, with an effectiveness of 92%. Different treatments were performed to obtain plants using seeds as explants, which were cultured on Murashige Skoog medium supplemented with different concentrations of indole acetic acid (AIA) in combination with gibberellic acid (AG3) and kinetin (K) without obtaining favorable answer for the germination. As alternative, immature seeds were extracted from grape fruits and placed on Murashige Skoog medium supplemented with 100 mg/l polyvinyl pyrrolidone (PVP), 0.35 mg/l of gibberellic acid and 1.75 mg/l of indol acetic acid for a month. Seeds were then opened and performed embryo rescue, planting them under dark conditions for eight days in the culture media Murashige Skoog 1 and 2 modified, finding plants formation by 40% a month after growing.