Revista Colombiana de Biotecnología

The projection of the Universidad Nacional de Colombia as a collective project in the development of Nation

EDNRB and CDX2 expression as possible biomarkers in progression to cervical cancer

RESUMEN De acuerdo a la historia natural del cáncer del cuello uterino, en donde las lesiones preneoplásicas de bajo y alto grado pueden presentar fenómenos de regresión o progresión, existe gran interés en la búsqueda de biomarcadores que permita predecir la evolución de las lesiones preneoplásicas del cérvix hacia la progresión o regresión de la enfermedad. Estos biomarcadores pudieran ser de origen genético, o epigenético que alteren la expresión de los genes y que pudieran estar asociados con la carcinogénesis en diferentes tipos de tejido humano. El objetivo del estudio fue analizar la expresión del mARN de los genes SFRP1, PTPRN, CDO1, EDNRB, CDX2, EPB41L3 y HAND1 en muestras negativas para lesiones intraepiteliales cervicales (n=9), muestras con lesiones intraepiteliales de bajo grado (n=10) y alto grado (n=11). Se realizó análisis de expresión de los genes mencionados mediante qRT-PCR y el análisis de los datos se realizó mediante la prueba no paramétrica de ANOVA. La diferencia estadística se determinó en valores p< 0,05. Para los genes EDNRB y CDX2 se observó disminución 66,7% en las muestras sin alteraciones histológicas cervicales, comparado con una disminución en la expresión del 50% en muestras con LIEBG y para el grupo de LIEAG del 36,4% para el gen EDNRB y del 27,3% para el gen CDX2 dando una diferencia estadísticamente significativa p= 0,02. Sugiriendo que EDNRB y CDX2 podrían ser útiles como posibles biomarcadores en la carcinogénesis cervical.

ABSTRACT According into account the natural history of cervical cancer, where low- and high-grade preneoplastic lesions may present regression or progression phenomena, there is great interest in the search for biomarkers to predict the behavior of preneoplastic lesions of the cervix. These biomarkers may be of genetic origin, or epigenetics that alter the expression of genes and that may be associated with carcinogenesis in different types of human tissue. The objective of the study was to analyze the expression of the mRNA of the SFRP1, PTPRN, CDO1, EDNRB, CDX2, EPB41L3 and HAND1 genes in samples negative for cervical intraepithelial lesions (n = 9), low grade intraepithelial lesions (n=10) and high grade (n = 11). Expression analysis of the mentioned genes was performed using qRT-PCR and data analysis was performed using the non-parametric ANOVA test. The statistical difference was determined in values p <0.05. For the EDNRB and CDX2 genes, a 66.7% decrease was observed in the samples without cervical histological alterations, compared to a decrease in expression of 50% in LIEBG samples and 36.4% in the LIEAG group for the EDNRB gene And 27.3% for the CDX2 gene giving a statistically significant difference p = 0.02. Suggesting that EDNRB and CDX2 could be useful as potential biomarkers in cervical carcinogenesis.

Rol of the near attack conformers during enantioselective acylation of (R,S)-propranolol catalysed by Candida antarctica lipase B

RESUMEN La lipasa B de Candida antárctica (CalB) se ha utilizado en la acilación quimio- y enantioselectiva del racemato (R,S)-propranolol. CalB tiene enant¡oselect¡v¡dad moderada (£=63) por el R-propranolol. La enantioselectividad, se origina en la reacción de transferencia del grupo acilo desde la serina catalítica, acilada, al propranolol. La fase inicial de esta reacción involucra la formación de complejos de Michaelis y posteriormente conformaciones de ataque cercano. El análisis de las conformaciones de ataque cercano ha permitido en varios casos explicar el origen de la catálisis o reproducir el efecto catalítico. En este trabajo se profundiza en la comprensión la función de las conformaciones de ataque cercano en la enantioselectividad de la acilación del (R,S)-propranolol catalizada por CalB. Para lo anterior se realizó un estudio detallado de los complejos de Michaelis y de las conformaciones de ataque cercano del paso enantioselectivo de la reacción de acilación del (R,S)-propranolol utilizando un protocolo de dinámica molecular QM/MM (SCCDFTB/CHARMM) utilizando 6 distribuciones de velocidades iniciales y simulaciones de 2,5 ns. Se estudiaron 7 complejos CalB-propranolol. Los enlaces de hidrógeno del sitio activo de CalB acilada relevantes para la actividad catalítica fueron estables en todas las simulaciones. Las poblaciones de los complejos de Michaelis y de las conformaciones de ataque cercano son dependientes de la distribución de las velocidades iniciales de la dinámica molecular. La enantioselectividad moderada de CalB acilada, encontrada experimentalmente, puede ser parcialmente atribuida a la alta población de conformaciones de ataque cercano observada para el S-propranolol.

ABSTRACT Candida antarctica lipase B (CalB) has been used for chemo- and enantioselective acylation of racemic (R,S)-propranolol, with moderate enantioselectivity (£=63) for R-propranolol. The enantioselective step in this reaction is the transfer of an acyl group from the catalytic acylated serine to propranolol. The initial phase of this reaction involves the formation of Michaelis complexes, followed by the formation of near-attack complexes. The analysis of the near-attack complexes has in several cases permitted to explain the origin of the catalysis or to reproduce the catalytic effect. The aim of this study was improve the understanding of the role of the near-attack complexes for the enantioselectivity of the acylation of (R,S)-propranolol, catalyzed by CalB. To this purpose a detailed investigation of the Michaelis and near-attack complexes of the enantioselective step of the acylation of (R,S)-propranolol using QM/MM molecular dynamics was performed. Several simulations (each 2,5 ns) with different initial velocity distributions were performed. In total seven CalB-propranolol complexes were studied. The hydrogen bonds in the active site of CalB, which are relevant for the catalytic activity, are stable in all simulations. The lifetime of the Michaelis complexes is considerably shorter than the simulation time. Conclusions: The populations of the Michaelis and near-attack complexes depend on the initial velocity distribution in the molecular dynamics simulations. The experimentally observed moderate enantioselectivity may be partially attributed to the high population of near-attack conformations of S-propranolol.

Design of culture medium for biomass production of Microbacterium sp. (BSC3) to the humified organic matter generation from lignite

RESUMEN Se diseñó un medio de cultivo para la multiplicación de una cepa bacteriana solubilizadora de carbón (BSC3). Como sustratos se utilizaron tres residuos agroindustriales: melaza de caña, lactosuero y cabecilla de arroz. Mediante diseños de superficie de respuesta Box-Behnken se evaluaron dos rangos de concentraciones para cada sustrato (2-10% y 0-6%). De esta forma se obtuvo la combinación adecuada para la producción de biomasa de BSC3. Se construyeron curvas de crecimiento bacteriano para determinar algunos parámetros cinéticos (velocidad específica de crecimiento [u], tiempo de duplicación [Td] y producción final de biomasa), que fueron comparados con el crecimiento de la cepa en un medio de cultivo control, también se caracterizó elementalmente (CHN) el medio optimizado. Las concentraciones óptimas para la obtención de biomasa de BSC3 fueron: 6% melaza, 2,5% lactosuero más un contenido mínimo de sales, con un pH de 6,5. Los parámetros cinéticos en este medio fueron: biomasa final=3,2 g.L-1, u=0,0206 h-1, Td=33,64 h, y en el medio control: biomasa final=3,4 g.L-1, u=0,0139 h-1, Td=49,85 h, lo cual muestra que el medio permitió un incremento en la velocidad de crecimiento y un menor tiempo de duplicación de BSC3, de esta forma el medio optimizado permitió la multiplicación de BSC3 y le permitió conservar su actividad solubilizadora de carbón.

ABSTRACT A culture medium for the multiplication of a coal solubilizing bacterial strain was designed (BSC3); were used three agroindustrial wastes: cane molasses, whey and crushed rice. Through Box-Behnken surfaces responses designs, two concentration ranks (2-10% y 0-6%) were evaluated, so the adequate combination to BSC3 biomass production was found. Bacterial growth curves were constructed to determine some kinetics parameters (growth specific rate [u], duplication time [Dt] and biomass final production), that were compared with the strain growth in a control culture medium; the optimized culture medium was also elementally caracterizated. The optimal concentrations to BSC3 biomass obtaining were: 6% molasses cane, 2,5% whey plus a salts minimum medium, with pH of 6,5. The kinetics parameters in this medium were: final biomass = 3,2 g.L-1, u=0,0206 h-1, Dt=33,64 h, and in the control medium: final biomass = 3,4 g.L-1, u=0,0139 h-1, Dt=49,85 h, this shows that the optimized medium allows the increase of the specific growth rate and a less duplication time of BSC3, so the optimized medium allowed to conserve its coal solubilizing activity.

Characterization of quality traits in transgenic strawberry fruits with genes encoding pectinolytic enzymes down-regulated

RESUMEN Se han evaluado algunos indicadores de calidad del fruto en líneas transgénicas de fresa con los genes de poligalacturonasa FaPGI (líneas PG) o pectato liasa FaplC (líneas APEL) silenciados. Se analizaron dos líneas independientes por genotipo transgénico. No se observaron diferencias en el contenido de sólidos solubles entre las líneas transgénicas y el control. De igual forma, la acidez total y el pH fueron similares en las líneas PG29, APEL21 y el control; sin embargo, la acidez de los frutos de las líneas PG62 y APEL39 fue superior al control. Los parámetros de color L*, a* y b* fueron similares en todos los genotipos; sin embargo, el contenido en antocianos fue menor en la línea APEL21. Los valores más altos de firmeza de fruto, estimada mediante un ensayo de extrusión, se observaron en las dos líneas transgénicas PG y en la línea APEL39. En cuanto a las pérdidas por goteo (drip loss), la línea APEL39 presentó un valor mayor que el control, pero la línea APEL21 registró valores menores. El contenido de compuestos fenólicos se analizó en la línea PG29, no encontrándose diferencias estadísticas con respecto al control. Finalmente, la capacidad del fruto para captar radicales libres fue ligeramente menor en la línea PG29 que en el control. Los resultados indican que el silenciamiento de los genes de pectinasas incrementa significativamente la firmeza de la fresa sin modificar sustancialmente parámetros de calidad del fruto maduro como color, acidez, sólidos solubles o contenido en antocianos.

ABSTRACT Some quality traits of transgenic strawberry fruits with low levels of expression of the pectinase genes FaPGI (PG lines) or FaplC gene (APEL lines) were evaluated. Two independent lines per transgenic genotype were analyzed. Soluble solids were similar in control and transgenic lines. Similarly, pH and titratable acidity was similar in lines PG29, APEL21 and control; however, lines PG62 and APEL39 showed acidity values higher than the control. The color parameters L*, a* and b* were similar in control and transgenic fruits; however, line APEL21 displayed a lower value of anthocyanin content. The highest values of fruit firmness, measured with an extrusion test, were observed in both PG transgenic lines and in the APEL39 line. Regarding the drip loss, APEL39 line showed a higher value than the control, but the APEL21 line displayed lower values. The content of phenolic compounds was analyzed in line PG29, not observing significant differences with the control. Finally, the antiradical activity of the fruit was slightly lower in the line PG29 than in the control. The results obtained indicate that the silencing of the pectinase genes increases the firmness of the fruit without substantially modifying other quality parameters such as color, acidity, soluble solids or anthocyanin content.

Influence of blue light on the productivity of the solid culture of Ganoderma lucidum

RESUMEN Ganoderma lucidum es un hongo macromiceto reconocido por sus propiedades medicinales y su contenido de compuestos bioactivos que incluyen polisacáridos, triterpenoides, proteínas inmunomoduladoras, entre otros, lo que ha generado un incremento notable en su producción. La mayoría de especies de hongos responden y se adaptan a diversas señales ambientales incluida la luz, que favorece su productividad, tanto en calidad como en cantidad al estar estrechamente relacionada con la formación de cuerpos fructíferos. Por tal razón, el objetivo de este estudio fue evaluar la eficiencia biológica (EB) y la tasa de producción (TP) como parámetros de productividad del cultivo sólido de Ganoderma lucidum bajo irradiación de los sustratos con luz emitida por diodos azules (LED) con dos periodos de foto-estímulo de 12 y 24 h durante todas las fases de cultivo para inducir el crecimiento micelial y la formación de los cuerpos fructíferos. Se aplicaron parámetros convencionales para el crecimiento y desarrollo del hongo en las etapas de producción. Para la formulación de los sustratos, se emplearon residuos agroindustriales y materiales lignocelulósicos. El diámetro de los cuerpos fructíferos sometidos a tratamientos con luz azul fue mayor que los exhibidos a luz blanca fluorescente (Testigo). Los resultados muestran que el cultivo de Ganoderma lucidum con exposición a la luz azul es útil para la inducción de cuerpos fructíferos de alta calidad, logrando una disminución del periodo de fermentación en 16 días para el foto-estímulo de 24 h con EB de 28,04% y TP de 0,64.

ABSTRACT Ganoderma lucidum, a renowned fungus for its medicinal properties and content of bioactive compounds include polysaccharides, triterpenoids, immune modulatory proteins, among others; it has generated a significant increase and interest in its production. Most species of fungi respond and adapt to various environmental signal including light, which affects it not only in productivity, but also in quality and quantity to be closely related to the fruiting bodies. Therefore, the objective of this study was evaluating the biological efficiency (EB) and the rate of production (TP) as production parameters of the solid culture of Ganoderma lucidum at under irradiation of the substrate with light emitting diodes blue (LED) with two levels of photo-stimulation constant 12 and 24 h during all steps of culture to induce mycelial growth and the formation of fruiting bodies. Conventional parameters were applied to stimulate the growth and development of the fungus in the stages of production. For the formulation of substrates agro-industrial waste and lignocellulosic materials were used. The diameter of the fruiting bodies under blue light treatments was higher than those exposed to white fluorescent light (control). The results show that the cultivation of Ganoderma lucidum with exposure to blue light is useful for induction of fruiting bodies of high quality, achieving a reduction of the period of fermentation in 16 days for the photo-stimulation of 24 h with EB of 28,04% and TP of 0,64.

Identification and screening of lignocellulosic activity in native isolates of Trichoderma spp., obtained from palm oil biomass

RESUMEN Se aislaron previamente ocho cepas nativas de racimos de palma de aceite en descomposición de Trichoderma sp. provenientes de la región de Cumaral, Meta, Colombia. Se utilizó la región de los ITS1-ITS4 para la identificación molecular y se determinó la actividad celulolítica (actividad sobre papel filtro) del complejo producido por las cepas utilizando residuos de palma como sustrato. Siete aislamientos nativos presentarón 100% de similaridad con hongos del género Trichoderma. Se observó para siete cepas, la presencia de las cinco anclas que identifican hongos del género Trichoderma, identificándose cuatro de los hongos nativos como Trichoderma koningiopsis (HR-04-89; HR-11-89; HR-19-89; y HR-06-89) y cuatro como Trichoderma asperellum (HR-01-89; HR-03-89; HR-16-89; HR-18-89). El bioensayo mostró que las cepas evaluadas de Trichoderma son estadísticamente significativas sobre la actividad enzimática de celulasas sobre papel filtro (p<0.05). Además, las cepas HR-01-89, HR-03-89, HR-11-89, HR-04-89 y HR-18-89 no presentaron diferencias en la actividad enzimática. La cepa Trichoderma reesei utilizada como referencia, presentó un comportamiento superior y diferente comparado con las cepas nativas. La cepa nativa HR-18-89 (Trichoderma asperellum) presentó mayores niveles de actividad enzimática, 78% del valor de la cepa referencia. Es importante identificar y evaluar cepas nativas de Trichoderma sp. con novedosas actividades biológicas que permitan degradar la celulosa recalcitrante de los racimos de palma africana.

ABSTRACT Previously, there were isolated eight native strains of Trichoderma sp. from a cluster of decomposing oil palm from Cumaral, Meta, Colombia. The ITS1-ITS4"s region was used for the molecular identification and the cellulase activity (filter paper activity) of the complex produced by strains was determined using palm waste as substrate. Seven native isolations showed between 97-100% similarity with fungi of the genus Trichoderma. It was observed for seven of the eight strains the presence of the five anchors which identify fungi of the genus Trichoderma, finding five of the native fungi such as Trichoderma koningiopsis (HR-04-89; HR-11-89; HR-19-89; y HR-06-89) four as Trichoderma asperellum (HR-01-89; HR-03-89; HR-16-89; HR-18-89). The bioassay showed that Trichoderma strains tested are statistically significant on the enzymatic activity of cellulases on filter paper (p <0.05). In addition, strains HR-01-89, HR-03-89, HR-11-89, HR-04-89 and HR-18-89 showed no differences in enzymatic activity. The reference strain used, Trichoderma reesei produce a superior and different behavior compared with the native strains. The native strain HR-18-89 (Trichoderma asperellum) had higher levels of enzyme activity, 78% of the value of the reference strain. It is important to identify and evaluate native strains of Trichoderma sp. with innovative biological activities that allow to degrade the recalcitrant cellulose of the African palm clusters.

Plant growth promoting rhizobacteria: a biofertilization alternative for sustainable agriculture

RESUMEN La agricultura moderna enfrenta nuevos desafíos, integrando enfoques ecológicos y moleculares, para lograr mayores rendimientos de los cultivos y reducir al mínimo los impactos sobre el ambiente. Para generar mayores rendimientos se han incrementado significativamente las dosis de fertilizantes sintéticos por unidad de superficie, los cuales pueden provocar contaminación, daños a la salud y pérdida de la fertilidad de los suelos, convirtiéndose en una de las preocupaciones más importantes en la producción agrícola. Para mejorar la producción sin el uso de fertilizantes de origen sintético, las investigaciones se han orientado hacia el desarrollo de nuevas biotecnologías: provocando que exista un interés creciente en los microorganismos benéficos del suelo ya que éstos pueden promover el crecimiento de las plantas y, en algunos casos, evitar infecciones del tejido vegetal por patógenos. Las interacciones de las rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal (RPCV) con el medio biótico - plantas y microorganismos - son muy complejas y utilizan diferentes mecanismos de acción para promover el crecimiento de las plantas. Estos mecanismos se agrupan en: 1) Biofertilización; 2) Fito-estimulación; y 3) Biocontrol. Inocular los cultivos con RPCV reduce sustancialmente el uso de fertilizantes sintéticos y los impactos negativos al suelo, aumenta el rendimiento de los cultivos, contribuyendo a la economía del productor y a la alimentación de la población. Esta revisión describe aspectos básicos inherentes a la interacción entre las RPCV y las especies vegetales, centrándose en los beneficios que aportan las RPCV a la actividad agrícola.

ABSTRACT Modern agriculture faces new challenges, integrating ecological and molecular approaches, to achieve higher crop yields and to minimize negative impacts on the environment. To generate higher yields, the doses of synthetic fertilizers per unit area have been significantly increased, which can cause contamination, damage to the health and loss of soil fertility, making this one of the most important concerns in agricultural production. To improve production without the use of fertilizers of chemical origin, research has been oriented towards the development of new biotechnologies: causing a growing interest in beneficial microorganisms in the soil, as these can promote plant growth and, in some cases, avoid infections of plant tissue by pathogens. The interactions of plant growth promoting rhyzobacteria (PGPR) with the biotic medium - plants and microorganisms - are very complex and use different mechanisms of action to promote plant growth. These mechanisms are grouped into: 1) Biofertilization; 2) Phytostimulation and 3) Biocontrol. Inoculating the crops with PGPR could substantially reduce the use of synthetic fertilizers and the negative impacts to the soil, increase crop yields, contributing to the producer's economy and the population's nutrition. This review describes basic aspects inherent to the interaction between PGPR and plant species, focusing on the benefits of PGPR to the agricultural activity.

Comparison of the populational characteristics of Lemna minuta (ARACEAE: LEMNOIDEAE) in three culture media

RESUMEN Las investigaciones en macrófitas acuáticas neotropicales son escasas, principalmente en Colombia comparadas con países como Brasil, aunque se consideran comunidades apropiadas en diversas aplicaciones por su gran capacidad reproductiva y alta sensibilidad a condiciones cambiantes del ambiente. Se propuso aclimatar y cultivar un clon de Lemna minuta, lenteja de agua flotante de amplia distribución en Colombia y América. Sus frondas hijas se mantuvieron dos meses en el medio de cultivo APHA y posteriormente se comparó su propagación en tres medios de cultivo: Hoagland's E+, APHA y AAP20x. Se analizaron variables de crecimiento poblacional como tasa de crecimiento, mortalidad, tiempo de duplicación y tiempo de vida. Adicionalmente, se evaluó la eficiencia del método de limpieza de frondas propuesto por Acreman para obtener cultivos axénicos. Los resultados indicaron que el medio Hoagland's E+ (sin compuestos orgánicos) es el más adecuado para el crecimiento de las frondas en condiciones de laboratorio, debido a su mayor tasa de producción de frondas (0,16 frondas-d"1) y tiempo de vida (13,8 días), con menor mortalidad (0,11 frondas-d"1) y tiempo de duplicación (4,61 días). Conocer los parámetros de crecimiento poblacional y las condiciones de cultivo de L. minuta permiten proponerla como una macrófita relevante y candidata para diversos bioensayos de calidad de agua.

ABSTRACT Although neotropical macrophytes are considered appropriate for diverse applications due to their great reproductive capacity and high sensitivity to changing environmental conditions, research on these plants is currently scarce, especially in Colombia when compared to countries such as Brazil. The current research work intended to acclimatize and cultivate a clone of the duckweed Lemna minuta, which is widely distributed in Colombia and America. After keeping daughter fronds of this species for two months in APHA culture medium, their propagation was compared in three culture media: Hoagland's E+, APHA and AAP20x. Population growth variables such as growth rate, mortality, doubling time and life span. Additionally, the efficiency of the frond cleaning method proposed by Acreman to obtain axenic cultures was evaluated. The results indicated that Hoagland's E+ medium (without organic compounds) is the most suitable one when it comes to frond growing under laboratory conditions, due to its associated higher frond production rate (0.16 fronds-d-1) and life span (13.8 d), as well as lower mortality (0.11 fronds-d-1) and doubling time (4.61 d). Knowing the population growth and cultivation conditions of L. minuta allows proposing it as a relevant macrophyte and candidate for various water quality bioassays.

Induction of polyploidy with colchicine in vitroplants of Aloe vera (L.)

RESUMEN La inducción artificial de la poliploidía es una técnica de fitomejoramiento empleado en plantas de interés medicinal. Sin embargo, pocas especies del género Aloe han sido sometidas a este tratamiento. El objetivo de esta investigación fue estandarizar la técnica de inducción de poliploidía en vitroplantas de Aloe vera (L.). Se realizó un diseño experimental con dos grupos (control y experi mental) a los cuales se les aplicó un estudio citogenético pre y postratamiento por tres generaciones consecutivas. Se evaluaron tres concentraciones de colchicina (0,05; 0,10 y 0,15%) y dos tiempos de exposición (48 y 72 horas). Las vitroplantas controles mantenidas en agua destilada (sin colchicina) por 48 y 72 (T y T2 respectivamente) y las tratadas con solución de colchicina al 0,05% por 48 y 72 horas (T3 y T4 respectivamente), presentaron pocos cambios citogenéticos, siendo la mayoría de sus células diploides. Las plantas tratadas con solución de colchicina a 0,10% por 48 y 72 horas (T5 y T6 respectivamente), lograron la duplica ción cromosómica en más del 50% del tejido. Las tratadas con una concentración de 0,15% por 48 horas (T7) mostraron tejido quimérico con un alto predominio de células poliploides y al aumentar el tiempo de exposición a 72 horas (T8), todas las células fueron poliploides, pero el desarrollo de estas plantas in vitro, fue anormal y con tejido necrótico. Las plantas con T5, se desarrolla ron mejor que con el T6. Se recomienda el uso de la colchicina a una concentración de 0,10% por 48 horas para obtener vitro plantas poliploides en A. vera.

ABSTRACT The artificial induction of polyploidy is a plant breeding technique used in plants of medicinal interest. However, few species of the genus Aloe have been subjected to this treatment. The objective of this research is to standardize the induction technique of polyploidy in vitroplants of Aloe vera (L.). An experimental design was performed with two groups (control and experimental), to which a cytogenetic study was applied pre and post treatment for three consecutive generations. Three concentrations of colchi cine (0.05, 0.10 and 0.15%) and two exposure times (48 and 72 hours) were considered. The control vitroplants kept in distilled water (without colchicine) for 48 and 72 hours (T1 and T2 respectively) and those treated with colchicine's solution at 0.05% for 48 and 72 hours (T3 and T4 respectively), presented few cytogenetic changes, being diploid most of their cells. Plants treated with 0.10% colchicine's solution for 48 and 72 hours (T5 and T6 respectively) achieved chromosomal duplication in more than the 50% of the tissue. Those treated with a concentration of 0.15% for 48 hours (T7) showed chimeric tissue with a high predominance of polyploid cells, and by increasing the exposure time to 72 hours (T8) all cells were polyploid, but the development of these plants in vitro were abnormal and with necrotic tissue. Plants with T5, developed better than with T6. The use of colchicine at a concen tration of 0.10% for 48 hours is recommended to obtain polyploid vitroplants in A. vera.