Infectio

Uso prudente de antimicrobianos basado en el Plan Obligatorio de Salud

Cornelis Johannes Marinkelle, biólogo, médico, Ph. D.

Comparación de los métodos de cuantificación de carga viral de VIH: COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan HIV-1 test, v 2.0, y VERSANT HIV-1 RNA 1.0 Assay (kPCR)

Objetivo. El propósito del estudio fue evaluar el desempeño del método VERSANTHIV-1RNA 1.0 Assay® (kPCR) (Siemens), para la cuantificación de la carga viral en pacientes con VIH-1, en comparación con el método COBAS® AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 test®, v2.0 (Roche Diagnostics) (CAP/CTM). Métodos. Las muestras fueron tomadas en dos tubos con EDTA, de 60 pacientes remitidos por el médico tratante para pruebas de carga viral como parte de su control de rutina de VIH/sida, y fueron procesadas para la cuantificación del ARN del VIH-1 por ambas técnicas. Se hizo análisis de regresión y se calcularon los coeficientes de correlación de Pearson, y los de correlación y concordancia de Lin. Se evalúo la concordancia entre las dos técnicas mediante el método de Bland-Altman. Resultados. El promedio de la carga viral por el método CAP/CTM fue 3,2±1,4 long10 copias/ml y, por el método kPCR, 3,0±1,3 long10 copias/ml. El 86,7 % de muestras presentó diferencias entre los dos métodos, menores de 0,5 long10 copias/ml, y el 13,3 % presentó diferencias mayores. El coeficiente de correlación de Pearson entre los dos métodos fue de 0,97 (IC95% 0,95-0,99) y el índice kappa ponderado entre los dos métodos en diferentes rangos de concentración, fue de 0,91 (IC95% 0,87-0,96). El promedio de las diferencias entre las mediciones fue 0,22 long10 copias/ml (IC95% -0,45 a 0,89). Conclusión. Las dos técnicas evaluadas fueron comparables, con el método kPCR se observaron resultados más bajos.

Objective: The purpose of this study was to evaluate the performance of the kPCR VERSANT (™) 440 HIV-1RNA 3.0 Assay® (Siemens) method for the quantification of viral load in HIV-1 patients, compared to the COBAS AmpliPrep/COBASTaqMan HIV-1 test®, v. 2.0 (Roche Diagnostics) (CAP/CTM). Methods: Samples were taken in 2 tubes with EDTA, in 60 patients referred by the attending physician for viral load tests as part of their routine control of HIV/AIDS, and were processed for quantification of HIV-1 RNA by both techniques. A regression analysis, the Pearson correlation coefficient and agreement of Lin were done. The agreement between the two techniques was evaluated with the Bland Altman analysis. Results: The mean viral load by CAP/CTM was 3.2 ± 1.4 long10 copies/ml and by kPCR it was 3.0±1.3 10 copies/ml. Most samples (86.7%) showed differences between the two methods lower than 0.5 long10 copies/ml, and 13.3% presented greater differences. The Pearson correlation coefficient between the two methods was 0.97 (95% CI 0.95-0.99) and the weighted kappa index between the two methods, in different ranges of concentration, was 0.91 (95% CI 0.87-0.96). The average difference between measurements by both techniques was 0.22 long10 copies/ml, (IC 95% -0.45-0.89). Conclusion: Both techniques were comparable, although lower values of viral load were observed with kPCR.

Predicción de la concentración de linfocitos T CD4 en sangre periférica con base en la teoría de la probabilidad: Aplicación clínica en poblaciones de leucocitos, linfocitos y CD4 de pacientes con VIH T

Introducción. Se han desarrollado modelos para la predicción de la tasa de disminución de células CD4 en pacientes con VIH/sida con base en redes neurales y, también, en la variabilidad de la disminución de los recuentos de CD4 en pacientes seropositivos y seronegativos, con el recurso de métodos epidemiológicos. Objetivo. Predecir la población de linfocitos T CD4, a partir de la información del cuadro hemático sobre leucocitos y linfocitos, mediante la teoría de la probabilidad. Métodos. Se evaluaron los cuadros hemáticos de siete casos particulares, determinando la cantidad total de leucocitos y linfocitos, y la cantidad de linfocitos CD4 por medio de citometría de flujo. A partir de un trabajo previo, se desarrolló una inducción con la que se determinaron los conjuntos A, B, C y D, con base en los cuales se calculó la probabilidad de aparición de combinaciones específicas de valores de leucocitos, linfocitos y CD4, en rangos de 1.000 leucocitos para 128 casos. Resultado. Se predice que los rangos de leucocitos inferiores a 5.000 y 4.000 por mm3 de sangre periférica se asocian a menos de 570 linfocitos CD4 por µl con una probabilidad de 0,92 y 1, respectivamente. A medida que disminuye la cantidad de las poblaciones de leucocitos, el porcentaje de aciertos entre las tres medidas es más efectivo. Conclusión. La teoría de la probabilidad reveló una autoorganización matemática de las poblaciones celulares estudiadas, que permitió desarrollar predicciones clínicas para el número de células CD4 a partir del cuadro hemático, disminuyendo los costos y deduciendo los resultados de la citometría de flujo.

Background: Models for the prediction of the CD4 decrease rate in VIH/AIDS patients have been developed with neural networks, and also for the prediction of the variability in CD4 counts decrease in seropositive and seronegative patients with epidemiological models. Objective: to predict the TCD4 lymphocyte population, beginning with the Complete Blood Count (CBC) information of leucocytes and lymphocytes, through probabilistic theories. Methods: Seven CBC of particular cases were evaluated, by determining the total count of leucocytes and lymphocytes, and the proportion of CD4 Lymphocytes by flow cytometry. Based on a previous work an induction was developed; with that induction the sets A, B, C and D were determined. Based on that sets we established the probability of aparition of specific combinations of leucocytes, Lymphocytes ans CD4 values, in ranges of 1.000 leucocytes, in 128 cases. Results: it is predicted that the leucocytes ranges lower than 5,000 and 4,000 per cubic milimeter of peripheral blood are associated with less than 570 CD4 per microliter with a probability of 0.92 and 1 respectively. As the quantity of populations diminishes, the success percentage between the three measures is more effective. Conclusion: The probability theory revealed a mathematical self-organization of the studied cellular populations, allowing the development of predictions in a clinical level for the CD4 number from the CBC, diminishing costs and deducting the results of the flow cytometry.

Transmisión del virus de la rabia entre murciélagos urbanos del departamento del Valle del Cauca, Colombia, 1999-2008

Introducción. La intromisión humana en ecosistemas silvestres ha provocado cambios de comportamiento en los murciélagos, con la consecuente invasión a viviendas, convirtiéndolos en un factor de riesgo para la transmisión de la rabia a humanos y mascotas. Objetivos. Determinar en el departamento del Valle del Cauca, las asociaciones entre hábitos de comportamiento y transmisión de rabia entre murciélagos y su significado epidemiológico con énfasis en riesgo para la población humana. Materiales y métodos. Durante el periodo de diciembre 1999 a junio 2008, fueron capturados 1.321 murciélagos por el programa de vigilancia de rabia en el departamento del Valle del Cauca. El diagnóstico de rabia se hizo por inmunofluorescencia directa e inoculación en ratones, utilizando tejido encefálico de los murciélagos capturados. La tipificación viral se hizo por inmunofluorescencia indirecta usando anticuerpos monoclonales. Resultados. Se detectaron dos ejemplares de Eptesicus brasiliensis positivos para rabia en los años 2000 y 2002, y dos casos más en especímenes de E. brasiliensis y Molossus molossus, en el 2008. No se detectó el virus de la rabia en E. brasiliensis ni en M. molossus, ni en ninguna otra especie durante los años 1999, 2001, 2003, 2004, 2006 y 2007. Se encontraron distintas especies de murciélagos, como E. brasiliensis, M. molossus, Myotis nigricans, Glossophaga soricina, Noctiliio albiventris y Carollia perspicillata, compartiendo refugios en casas. Se detectaron virus rábicos de las variantes antigénicas 3 y 4, en murciélagos M. molossus y E. brasiliensis. Conclusiones. La presencia en el Departamento del Valle del Cauca de las variantes antigénicas 3 y 4 del virus rábico en murciélagos no hematófagos de hábitos caseros, probablemente, ha sido facilitada por la deforestación de los hábitats naturales de estas especies; además, el estilo de arquitectura urbana provee un hábitat artificial que posibilita el contacto físico entre las especies y la transmisión de rabia entre ellas. Ante las dificultades para controlar la rabia en murciélagos y la falta de herramientas adecuadas, la vigilancia continua de la enfermedad en los murciélagos, basada en el diagnóstico y la tipificación de los virus rábicos por laboratorio, en de los asentamientos humanos y alrededor de ellos, la vacunación preventiva en animales domésticos y de producción, así como la educación de la comunidad (para la concientización del riesgo y la recolección pasiva de muestras para su análisis), se convierten en las mejores herramientas para prevenir la transmisión a humanos.

Introduction: Human activities in the wild have recently increased the changes in bat behavior and invasion of houses, turning these animals into a health threat for humans and pets. Objectives: To determine the associations between behavioral habits and rabies transmission among bats in the department of Valle del Cauca and to assess the risk the existence of rabies in house dwelling bats presents for human health. Material and methods: In the period from December 1999 to June 2008, 1,321 hematophagous and non-hematophagous bats were captured for rabies epidemiological surveillance in the department of Valle del Cauca, Colombia. Rabies was diagnosed by direct immunofluorescence test on the brain tissue of collected animals. Viral typification was achieved by indirect immunofluorecense using rabies specific monoclonal antibodies. Results: Four bats were positive for rabies: two Eptesicus brasiliensis in 2000 and 2002, and an Eptesicus brasiliensis and a Molossus molossus in 2008. During the years 1999, 2001, 2003, 2004, 2006 and 2007 no rabies virus was found in E. brasiliensis and M. molossus or in any other bat species. Various species including E. brasiliensis, M. molossus, Myotis nigricans, Glossophaga soricina, Noctiliio albiventris and Carollia perspicillata were found sharing shelters in houses. Rabies virus antigenic variants 3 and 4 were found in M. molossus and E. brasiliensis bats only. Conclusions: The presence and potential spread of rabies antigenic variants 3 and 4 to cities have very likely been facilitated by the perturbation of the natural habitats of non-hematophagous bats in the department of Valle del Cauca; the urban architecture style also provides an artificial habitat which allows for physical contact and rabies transmission among the species. Seeing the difficulty for controlling rabies in bats and the lack of adequate tools, intensive laboratory based rabies surveillance in and around human settlements, preventive vaccination for house and production animals, and education for the community (in relation to increasing the awareness concerning the risk, and passive recollection of samples for analysis) represent major preventive strategies against bat rabies transmission to humans and pets.

Seroprevalencia de anticuerpos anti-Leptospira en trabajadores de plantas de sacrificio animal en Boyacá, Colombia

Objetivo. Evaluar la seroprevalencia de Leptospira spp. en trabajadores de cinco plantas de sacrificio del departamento de Boyacá, en los municipios de Sogamoso, Chiquinquirá, Paipa, Aquitania y Tuta. Materiales y métodos. Se llevó a cabo un estudio descriptivo, observacional de corte transversal, para el cual se tomaron muestras de suero a 80 operarios de los mataderos de cinco municipios del departamento de Boyacá. El análisis de laboratorio se hizo mediante la técnica de microaglutinación (MAT), en búsqueda de anticuerpos contra diversas serovariedades de Leptospira spp. Se consideró positiva una reacción en la que el 50 % o más de las leptospiras se aglutinaron o se lisaron, tomando como referencia el control positivo. Además, se realizó una encuesta a cada trabajador, con el fin de explorar la presencia de factores de riesgo que pudieran estar asociados con el resultado positivo de la prueba. Resultados. El 35,0 % (n=28) de todos los sueros fueron positivos por MAT. Según la serovariedad, los sueros positivos se distribuyeron así: 41,67 % (n=15) para L. hardjo, 38,89 % (n=14) para L. Bratislava, 8,33 % (n=3) para L. icterohaemorragiae, 5,56 % (n=2) para L. canicola, 2,78 % (n=1) para L. pomona y 2,78 % (n=1) para L. grippotyphosa. Conclusión. Se encontró alta prevalencia de los títulos anti-Leptospira en las muestras de los trabajadores examinados, por lo cual se sugiere enfatizar las medidas de protección laboral, y las medidas preventivas y de promoción de la salud.

Objective: To assess the serum prevalence of Leptospira spp. in workers from five centers for animal sacrifice in the department of Boyacá (Sogamoso, Chiquinquirá, Paipa, Aquitania and Tuta). Materials and methods: An observational, descriptive, cross sectional study was carried out. We took serum samples from 80 workers at the sacrifice plants at five municipalities of the department of Boyacá. Laboratory analysis was done by microagglutination technique (MAT), searching for antibodies against several serovars of Leptospira spp. We considered a reaction positive, if 50% or more leptospiras agglutinated or lysed their membranes, taking as reference the positive control. Furthermore, we applied a survey to each worker to explore the presence of risk factors associated with a positive test. Results: The global serum positive percentage by MAT test was 35.0% (n=28). The discriminated serum positivity test, by serovar was: 41.67% (n=15) for serovar Hardjo, 38.9% (n=14) for Bratislava, 8.33 (n=3) for Icterohaemorragiae, 5.56% (n=2) for Canicola, 2.78% (n=1) for Pomona, and the other 2.78% (n=1) was identified as serovar Grippotyphosa. Conclusion: We found a high prevalence in the levels of anti-Leptospira antibodies in the samples of the workers evaluated, so we suggest emphasizing the protection standards and focusing on preventive and health promotion norms.

Estado de los genes dhps y dhfr de Plasmodium falciparum en Colombia antes de la recomendación de tratamiento basado en artemisinina

Introduction: Surveillance of the genetic characteristics of dhps and dhfr can be useful to outline guidelines for application of intermittent preventive therapy in Northwest Colombia and to define the future use of antifolates in artemisinin-based combination therapy schemes. Objective: To evaluate the frequency of mutations in dhps and dhfr and to characterize parasite populations using msp-1, msp-2 and glurp in historic samples before artemisinin-based therapy was implemented in the country. Methods: A controlled clinical study was carried out on randomly selected Plasmodium falciparum infected volunteers of Northwest Colombia (Turbo and Zaragoza). A sample size of 25 subjects per region was calculated. Treatment efficacy to antifolates was assessed. Molecular analyses included P. falciparum genotypes by msp-1, msp-2 and glurp and evaluation of the status of codons 16, 51, 59, 108 and 164 of dhfr and 436, 437, 540, 581 and 613 of dhps. Results: In total 78 subjects were recruited. A maximum number of 4 genotypes were detected by msp-1, msp-2 and glurp. Codons 16, 59 and 164 of the dhfr gene exhibited the wild-type form, while codons 51 and 108 were mutant. In the dhps gene, the mutant 437 glycine was detected in 85% on day 0, while codons 436, 540, 581 and 613 were wild-type. Conclusions: Plasmodium falciparum populations were very homogeneous in this region of Colombia, and the triple mutants of dhfr and dhps Asn108, Ile51 and Gly437 were predominant in clinical isolates.

Introducción. La vigilancia de las características genéticas de dhps y dhfr puede utilizarse para delinear guías de aplicación de terapia preventiva intermitente en el nordeste de Colombia y para definir el uso futuro de los antifolatos en esquemas terapéuticos basados en artemisinina. Objetivo. Evaluar la frecuencia de mutaciones en dhps y dhfr, y caracterizar las poblaciones parasitarias usando msp-1, msp-2 y glurp, en muestras históricas obtenidas antes de la implementación en el país de la terapia basada en artemisinina. Métodos. Se llevó a cabo un estudio clínico controlado en voluntarios infectados con Plasmodium falciparum seleccionados aleatoriamente y provenientes del nordeste de Colombia (Turbo y Zaragoza). Se calculó una muestra de 25 sujetos por región. Se evaluó la eficacia al tratamiento con antifolatos. Los análisis moleculares incluyeron la obtención de genotipos de msp-1, msp-2 y glurp y el estado de los codones 16, 51, 59, 108 y 164 de dhfr, y 436, 437, 5540, 581 y 613 de dhps. Resultados. Se estudiaron 78 sujetos. Se detectó un número máximo de 4 genotipos con msp-1, msp-2 y glurp. Los codones 16, 59 y 164 del gen dhfr se encontraron en su forma silvestre, mientras que los codones 51 y 108 estaban mutados. En el gen dhps, la forma mutante (glicina) en el codón 437, se detectó en 85% el día 0, mientras que los codones 436, 540, 581 y 613 se encontraron silvestres. Conclusiones. Las poblaciones de P. falciparum son muy homogéneas en esta región de Colombia y las triple mutantes de dhfr y dhps Asn108, Ile51 and Gly437, predominaron en los aislamientos clínicos.

Biología del Trypanosoma cruzi: Actualización

Chagas disease, an illness caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, is clinically and epidemiologically important in Latin America, and particularly in Brazil. This article presents the main biological characteristics of Trypanosoma cruzi, emphasizing ultrastructural, morphological, evolutionary, transcriptomic, and proteomic aspects. With this purpose a literature review was conducted, which allowed for the construction of different sections of the text. The efforts to expand the knowledge of this protist biology may bring positive implications for the understanding of the pathogenesis, control, and above all, treatment of patients affected by this disease.

A moléstia de Chagas, enfermidade causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, apresenta grande relevância clínica e epidemiológica na America Latina, com destaque para o Brasil. Neste artigo serão apresentadas as principais características biológicas do Trypanosoma cruzi, enfatizando-se os aspectos ultra-estruturais, morfológicos, evolutivos, transcriptômicos e proteômicos. Para tanto, foi realizada revisão da literatura, a qual subsidiou a construção de diferentes seções do texto. As investidas para ampliar o conhecimento acerca da biologia do protista poderão trazer implicações positivas para a compreensão da patogênese, do controle e, sobretudo, do tratamento dos pacientes portadores da moléstia.

AMPc: una molécula clave en los eventos de regulación inmune y en el control de la replicación del VIH

El monofosfato de adenosina cíclico (AMPc) induce la activación de la proteína cinasa A, la cual regula negativamente la activación, la proliferación celular y la producción de IL-2, en células T. En células infectadas con el virus de inmunodeficiencia humana, el monofosfato de adenosina cíclico suprime la actividad de transcripción del promotor del virus y el paso del ADN viral del citoplasma al núcleo. El incremento del monofosfato de adenosina cíclico mediado por células T reguladoras CD4+, empleando la inyección de esta molécula en células blanco a través de las uniones comunicantes o empleando el eje CD39-CD73 para generar adenosina es utilizado para suprimir otras poblaciones celulares. En esta revisión se propone que la modulación del monofosfato de adenosina cíclico por las células T reguladoras CD4+ podría tener un papel dual durante la evolución de la infección por el virus de inmunodeficiencia humana. Su papel benéfico se centraría principalmente en el control de la replicación viral y factores de transcripción, o evitando la infección de nuevas células blanco por disminución en la expresión de los receptores virales. Paradójicamente, la segunda posibilidad es que el aumento del monofosfato de adenosina cíclico podría tener un papel perjudicial, debido al efecto negativo sobre la proliferación, activación, respuesta citotóxica y en la producción de citocinas que se observa durante la infección viral.

Cyclic adenosine monophosphate induces the activation of protein kinase A, which negatively regulates activation, proliferation and IL-2 production in T cells. In cells infected with human immunodeficiency virus, cyclic adenosine monophosphate suppresses the transcriptional activity of long terminal repeats and the amount of viral DNA from the cytoplasm to the nucleus. The increase in cyclic adenosine monophosphate mediated by CD4+ regulatory T cells, using either the influx of this molecule in target cells through the GAP junctions or by CD39-CD73 to generate adenosine, is used by CD4+ regulatory T cells to suppress other cell populations. In this review, we suggest that modulation of cyclic adenosine monophosphate by CD4+ regulatory T cells may have a dual role during the evolution of human immunodeficiency virus infection. The beneficial role would be mainly focused on the control of viral replication and transcription factors to replicate the virus, and/or preventing the infection of new target cells, decreasing the expression of the viral co-receptors. Paradoxically to this beneficial role, the second possibility is that increased cyclic adenosine monophosphate could have a detrimental role, due to the negative effect on proliferation, activation, cytotoxic response and cytokine production, which occurs during viral infection.

**Infección asociada a catéter central por Cryptococcus laurentii en niño críticamente enfermo: a propósito de un caso y revisión del tema**

La criptococosis es una infección fúngica que afecta de forma predominante a pacientes con compromiso de la inmunidad celular; Cryptococcus neoformans es el agente patógeno más frecuente de este género. La infección asociada a los catéteres endovasculares es una entidad muy poco frecuente descrita con Cryptococcus laurentii y, en casos excepcionales, con C. neoformans. Se presenta el caso de un paciente de tres meses de edad con bronquiolitis aguda por adenovirus que lo llevó a falla respiratoria, requirió manejo inotrópico y desarrolló múltiples complicaciones infecciosas. Se aisló C. laurentii en el cultivo de la punta del catéter central, el cual no se logró obtener en los hemocultivos. Recibió tratamiento con anfotericina B con una dosis acumulada de 10 mg/kg y los cultivos de control también fueron negativos. La evolución, desde el punto de vista respiratorio, fue mala con fracaso de la respiración mecánica asistida y muerte.

Cryptococcosis is a fungal infection that predominantly affects patients with compromised cellular immunity. Cryptococcus neoformans is the most common pathogen of this class. Endovascular catheter-related infection is a rare entity described for Cryptococcus laurentii and, in exceptional cases, for C. neoformans. A case of a 3-month-old child with adenovirus acute bronchiolitis which lead to respiratory failure requiring inotropy and developing multiple infectious complications is presented. Cryptococcus laurentii was isolated in the culture from the tip of the central catheter, which could not be obtained in blood cultures. He was treated with amphotericin B in a cumulative dose of 10 mg/kg with negative control cultures. From a respiratory point of view, evolution was not good, with a failure from mechanical ventilation and posterior death.

Varicela visceral en paciente pediátrico, reporte de un caso clínico

Se presenta el caso de un paciente pediátrico de 10 años, inmunosuprimido con corticosteroides y metotrexato por enfermedad reumatológica de base, que presentó varicela visceral con manifestaciones atípicas tales como compromiso pulmonar, hepático y alteraciones hematológicas. Inicialmente, no tuvo manifestaciones cutáneas, las cuales desarrolló a los ocho días de evolución, por lo cual requirió apoyo en la unidad de cuidados intensivos pediátricos y manejo multidisciplinario. La varicela es una enfermedad exantemática frecuente, considerada benigna con presentación leve y de resolución espontánea, en pacientes sin compromiso inmunitario. Por el contrario, la infección por este virus en pacientes inmunosuprimidos es una entidad que amenaza potencialmente la vida, principalmente cuando se presenta con compromiso visceral. Se debe considerar la posibilidad de infección por el virus varicela zóster en pacientes con disfunción hepática inexplicable asociada a dolor abdominal o lumbar, bajo condiciones de inmunosupresión, aun en ausencia de exposición viral o compromiso en piel; tanto la complicación hepática como la de los otros sistemas se han relacionado con alta morbimortalidad. Un alto índice de sospecha de varicela grave en el paciente inmunosuprimido, es importante para el diagnóstico y manejo oportuno.

We report the case of a 10 years old pediatric patient immunosuppressed with steroids and methotrexate for rheumatological disease who presents atypical varicella with visceral involvement such as lung, liver and blood disorders, without skin manifestations initially which development to the 8-day, requiring support in pediatric intensive care unit and multidisciplinary management. Chickenpox is a common rash illness, considered benign with a mild and limited in immunocompetent patients. By contrast, infection with this virus in immunosuppressed patients is an entity that potentially life threatening, especially when presented with visceral involvement. Infection with varicella-zoster virus should be considered in patients with unexplained liver dysfunction associated with abdominal or back pain under conditions of immunosuppression, even in the absence of viral exposure or skin compromise, The hepatic involvement as both of the other systems has been associated with high morbidity and mortality. A high index of suspicion of severe varicella in immunosuppressed patients is important for diagnosis and timely management.