Biosalud

IMMUNOREACTIVITY TO CALBINDIN IN PURKINJE CELLS IN THE CEREBELLUM OF MICE IS NOT AFFECTED BY RABIES VIRUS INFECTION

Introducción: La calbindina (CB) es una proteína reguladora del calcio intracelular y la célula de Purkinje del cerebelo es la neurona con más alta concentración de CB. Se ha demostrado pérdida de inmunorreactividad a CB en diferentes áreas del sistema nervioso en ratones inoculados con virus de la rabia, pero faltaba estudiar este fenómeno en el cerebelo. Objetivo: Determinar el efecto de la inoculación con virus de la rabia sobre la expresión de CB en células de Purkinje del cerebelo de ratones. Metodología: Se inocularon ratones con el virus por vía intramuscular. Se sacrificaron los animales cuando alcanzaron la fase avanzada de la enfermedad y se fijaron mediante perfusión intracardiaca con paraformaldehído al 4%. Se les extrajo el cerebelo y se hicieron cortes sagitales de 50 micrómetros de espesor en un vibrátomo. Estos se procesaron mediante inmunohistoquímica para revelar la presencia de CB o de antígenos del virus de la rabia. El mismo procedimiento se realizó con animales no infectados (controles). Resultados: Las células de Purkinje fueron masivamente infectadas con el virus de la rabia. En las imágenes panorámicas observadas en el microscopio se comprobó que sólo estas células fueron inmunorreactivas a CB. No se hallaron diferencias significativas en la inmunorreactividad a CB, evaluada por densitometría óptica, entre los animales infectados y los controles. Conclusión: La expresión de CB en las células de Purkinje del cerebelo parece no afectarse por la infección con rabia, a diferencia de lo que se ha demostrado en otras áreas del sistema nervioso del ratón.

Introduction: Calbindin (CB) is a regulatory protein of intracellular calcium, and the cerebellar Purkinje cell is the neuron with the highest concentration of CB. Loss of CB immunoreactivity has been demonstrated in different areas of the nervous system in rabies virus-infected mice, but the study of this phenomena in the cerebellum lacked. Objective: To determine the effect of inoculation with rabies virus on the expression of CB in Purkinje cells of the cerebellum of mice. Methodology: Mice were intramuscularly inoculated with rabies virus. Animals were sacrificed when they reached an advanced stage of the disease and then they were fixed by intracardiac perfusion with 4% paraformaldehyde. Cerebellums were extracted and sagittal sections 50 microns thick were obtained in a vibratome. These were processed by immunohistochemistry to reveal the presence of CB protein or rabies virus antigens. The same procedure was performed with uninfected animals (controls). Results: Purkinje cells were massively infected with rabies virus. In the microscopic panoramic images observed was found that only these cells are immunoreactive to CB. No significant difference in CB immunoreactivity evaluated by optical densitometry was found between infected animals and controls. Conclusion: The expression of CB in Purkinje cells of the cerebellum appears not to be affected by infection with rabies unlike what has been shown in other areas of the mouse nervous system.

DIFFERENT BRAIN STRUCTURES EXHIBIT THE SAME CAFFEINE LEVELS AFTER THE ADMINISTRATION OF A SINGLE DOSE OF CAFFEINE

Caffeine is a highly consumed stimulant of the nervous system. Although caffeine has diverse effects on different brain functions, little is known about the specific pharmacokinetics of this substance in the brain. For instance, most studies that assessed caffeine distribution in the rat brain have only measured caffeine levels in the cortex and striatum but not in more specific brain areas. Aims: The purpose of this work was to measure the caffeine concentration in blood and different brain regions (i.e. cortex, striatum, hippocampus, cerebellum and brainstem) at different times after the administration of a single intraperitoneal dose of caffeine. Methods: Adult Wistar rats (250 to 300 gr) were injected with a single intraperitoneal dose of 30 mg/Kg of caffeine. 20, 40, 60 and 80 minutes after administration, subjects were sacrificed by decapitation and samples of plasma, cerebral cortex, striatum, hippocampus, cerebellum and brainstem were obtained. Caffeine levels in the blood and each brain structure were measured by RP-HPLC and statistical analysis was performed. Results: Caffeine levels were higher in the plasma compared to all the brain structures studied. Different brain regions displayed similar caffeine concentrations. For all brain regions, the maximal concentration levels of caffeine were reached in the first 40 minutes after caffeine administration. Conclusions: The results support previous studies that show similar caffeine concentration between cortex and striatum, but also extend the results to other brain structures. Furthermore, caffeine concentration increases similarly in the plasma and brain structures. 40, 60 and 80 minutes after administration, caffeine concentration in the blood is almost two times higher than in the brain. This suggests that the effects of caffeine on different brain functions do not depend on pharmacokinetic differences between brain areas and are rather explained by pharmacodynamics.

Antecedentes: La cafeína es el estimulante del sistema nervioso más consumido a nivel mundial. Aunque, la cafeína tiene diferentes efectos sobre las funciones cerebrales, poco se sabe acerca de su farmacocinética en el cerebro. Por ejemplo, la mayoría de estudios que evaluaron la distribución de cafeína en el cerebro de rata han medido niveles de cafeína en corteza y estriado, pero no en áreas cerebrales más específicas. Objetivo: El propósito del trabajo fue medir la concentración de cafeína en sangre y diferentes regiones encefálicas (corteza, estriado, hipocampo, cerebelo, tallo cerebral), a diferentes tiempos, después de administrar una única dosis de cafeína. Método: Ratas Wistar adultas (250-300 gr) recibieron una dosis intraperitoneal de cafeína de 30mg/Kg de peso. 20, 40 60 y 80 minutos después de la administración, los sujetos se sacrificaron por decapitación y se obtuvieron muestras de plasma, corteza cerebral, estriado, hipocampo, cerebelo y tallo cerebral. Los niveles de cafeína en plasma y estructuras encefálicas se determinaron por RP-HPLC y se realizó análisis estadístico. Resultados: Los niveles de cafeína fueron mayores en plasma que en las regiones encefálicas estudiadas. Las distintas regiones encefálicas presentaron concentraciones similares de cafeína. En todas las regiones, la mayor concentración de cafeína se obtuvo 40 minutos después de la administración de cafeína. Conclusiones: Este estudio soporta resultados previos que muestran concentraciones similares de cafeína entre la corteza y el estriado, además los extiende a otras regiones encefálicas. La concentración de cafeína aumenta similarmente en plasma y estructuras encefálicas. 40, 60 y 80 minutos después de la administración, la concentración de cafeína en plasma es casi el doble de la encontrada en el cerebro. Lo anterior sugiere que los efectos de la cafeína en distintas funciones cerebrales no dependen de diferencias farmacocinéticas entre regiones encefálicas sino que son más bien explicadas por factores farmacodinámicos.

USE OF INFLAMMATION OR INFECTION BIOMARKERS IN SEPSIS DIAGNOSIS IN INTENSIVE CARE UNITS IN SANTA MARTA, COLOMBIA

Objetivo: Evaluar la capacidad diagnóstica de los biomarcadores presepsina, procalcitonina y proteína C reactiva (PCR), en pacientes sépticos de las unidades de cuidado intensivo de Santa Marta, Colombia. Materiales y métodos: Estudio de casos y controles, la determinación de biomarcadores se hizo mediante métodos analíticos. Se valoró la capacidad discriminante de los diferentes marcadores mediante el área bajo la curva ROC. Resultados: de los pacientes con diagnóstico de sepsis, 55% presentaron hemocultivos negativos y 45% positivos. En este estudio el área bajo la curva (AUC) para la presepsina fue de 0,996, para la procalcitonina de 0,709 y para la PCR de 0,607. Con un nivel de significancia de 0,05, la presepsina dio un valor p de 0,006; la procalcitonina de 0,084 y la PCR de 0,23. Conclusiones: Se determinó que la presepsina es el mejor biomarcador para el diagnóstico temprano de sepsis.

Objective: To evaluate the diagnostic ability of presepsin, procalcitonin and C-reactive protein (CRP) biomarkers in septic patients in intensive care units in Santa Marta (Colombia). Materials and Methods: Case-control studies, biomarker determination, was made by analytical methods. The discriminant ability of different markers was valued by using the area under the ROC curve. Results: Of the patients diagnosed with sepsis, 55% had negative blood cultures, and 45% were positive. In this study the area under the curve (AUC) for presepsin was 0.996; for procalcitonin was 0.709, and for CPR was 0.607. With a significance level of 0.05, presepsin showed a p-value of 0.006; procalcitonin showed a value of 0.084 and C-reactive protein showed a value of 0.23. Conclusions: It was determined that presepsin is the best biomarker for early diagnosis of sepsis.

**BIOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF Ulomoides dermestoides (COLEOPTERA, TENEBRIONIDAE) AQUEOUS EXTRACTS: EXPLORATION OF DUAL INHIBITION OF LIPOXYGENASE (15-LOX) AND CYCLOOXYGENASE (COX-1 AND COX-2)**

Ulomoides dermestoides es usado en medicina tradicional oriental para aliviar enfermedades inflamatorias y como afrodisíaco. En Colombia, comunidades campesinas lo consumen para el tratamiento del asma. El propósito de este estudio fue obtener extractos acuosos del cuerpo entero de U. dermestoides y explorar su potencial para inhibir enzimas involucradas en la biosíntesis de reguladores de la inflamación, la 15-lipoxigenasa (15-LOX) y las ciclooxigenasas COX-1 y COX-2 (COXs). Los extractos se obtuvieron con tampón salino fosfato 0,01M (PBS) y bicarbonato de amonio 0,1M (NH4HCO3), en presencia de un detergente (Tween-20 o Dodecilsulfato sódico, SDS). Posteriormente se determinó el contenido de proteínas totales solubles, el perfil electroforético y las actividades enzimáticas a 19 hidrolasas. Las inhibiciones 15-LOX y COXs se midieron por método colorimétrico y por inmunoensayo enzimático, respectivamente. El rendimiento más alto de proteínas se obtuvo con el tampón PBS/SDS (1,603 %p/p). Este extracto mostró 13 bandas electroforéticas mayoritarias, con tamaños entre 8,8 y 151,2 kDa; también, se demostraron actividades enzimáticafosfosfohidrolasas, peptidasas, esterasas, B-glucoronidasa, a-glucosidasa, N-acetil-B-glucosaminidasa y a-manosidasa. Todos los extractos mostraron actividad inhibitoria dual 15-LOX y COXs. Las inhibiciones 15-LOX y COX-1 más altas se obtuvieron con el extracto obtenido con PBS/SDS (15-LOX: 62,8±2,0%; COX-1: 88,5±3,9%). Adicionalmente, un análisis de regresión lineal simple mostró que no hay asociación entre la concentración de proteínas y la inhibición 15-LOX (valor p = 0,493), este resultado sugiere que la actividad anti-lipooxigenasa podría ser debido a compuestos no proteicos.

Ulomoides dermestoides is used in traditional oriental medicine to alleviate inflammatory diseases and as an aphrodisiac. In Colombia, rural communities consume it as treatment for asthma. The purpose of this study was to obtain aqueous extracts of whole body of U. dermestoides and explore their potential to inhibit enzymes involved in the biosynthesis of inflammation regulators, 15-lipoxygenase (15-LOX) and cyclooxygenases COX-1 and COX-2 (COXs). Extracts were obtained with phosphate buffered saline 0.01M (PBS) and ammonium bicarbonate 0.1M (NH4HCO3) in the presence of one detergent (Tween-20 or Sodium dodecyl sulfate, SDS). Then, total soluble protein, electrophoretic profile and enzymatic activities at 19 hydrolases were determined. Inhibition of 15-LOX and COXs were measured by colorimetric method and enzymatic immunoassay respectively. The highest protein yield was obtained with PBS/SDS buffer (1.603 %p/p). This extract showed 13 major electrophoretic bands with molecular weights between 8.8 and 151.2 kDa; also, enzymatic phosphohydrolase, peptidase, esterase, B-glucuronidase, a-glucosidase, N-acetyl-B-glucosaminidase and a-mannosidase activities were proven. All extracts showed dual inhibitory activity for 15-LOX and COXs. The higher inhibitions for 15-LOX and COX-1 were obtained with PBS/SDS extract (15-LOX: 62.8±2%; COX-1: 88.5±3.9%). Additionally, a simple linear regression analysis showed non-relationship between the protein concentration and 15-LOX inhibition (p value = 0.493). This result suggests that anti-lipoxygenase activity could be due to non-protein compounds.

DETERMINATION OF BIOSECURITY MEASURES IN SMALL ANIMALS CLINICS AND VETERINARY OFFICES IN PASTO, NARIÑO

La medicina veterinaria es considerada como una de las profesiones más expuestas a sufrir daños a la salud humana como consecuencia de accidentes y enfermedades profesionales relacionadas con los animales, las enfermedades zoonóticas son el principal riesgo laboral que enfrenta el personal veterinario a diario. El presente estudio se realizó en la ciudad de Pasto, en ocho clínicas y consultorios veterinarios, con el objetivo de determinar las medidas de bioseguridad que implementan durante la prestación de sus servicios profesionales. La recolección de los datos se realizó mediante encuestas para determinar las medidas profilácticas que usan los médicos veterinarios en su ejercicio profesional para prevenir el contagio de enfermedades zoonóticas. Los resultados obtenidos a partir de la encuesta personal revelan que el 87,5% de los profesionales desconocen los alcances de la ley 776 de 2002 sobre accidentes de trabajo y enfermedades profesionales. Las enfermedades zoonóticas que conocen son principalmente rabia (100%) y brucelosis (87,5%). El 87,5% de los profesionales se encuentran vacunados profilácticamente contra tétanos y solo el 25% contra rabia. El 37% de los profesionales ha sido afectado por alguna enfermedad zoonótica durante el tiempo de su ejercicio profesional. Las principales medidas profilácticas implementadas son el lavado de manos y depósito de material cortopunzantes en recipientes adecuados. El uso de barreras de protección varía dependiendo del procedimiento y tipo de paciente. En conclusión, los profesionales encuestados dedicados a clínica y cirugía de pequeñas especies, conocen los riesgos a los que están expuestos en su práctica profesional y la necesidad de implementar medidas profilácticas, sin embargo no cuentan con un esquema de bioseguridad que sigan estrictamente.

Veterinary medicine is considered one of the most vulnerable professions to human health damage as a result of occupational accidents and diseases related to animals, being zoonotic diseases the primary occupational hazard faced by the veterinary staff daily. This study was conducted in the city of Pasto, in eight clinics and veterinary offices with the purpose of determining the biosecurity measures implemented during the provision of professional services. The collection of data was done using surveys to determine the protective measures used by veterinarians in their professional practice to prevent the spread of zoonotic diseases. The results obtained from the study show that 87.5% of the professionals are unaware of the scope of law 776 of 2002 on occupational accidents and diseases. Zoonotic diseases mainly known by veterinaries are rabies (100%) and brucellosis (87.5%). The 87.5% of the professionals surveyed are prophylactically vaccinated against tetanus and only 25% against rabies. A 37% of professionals have been affected by any zoonotic disease at the time of their professional practice. The primary preventive measures implemented are handwashing and deposit of sharp pointed material into suitable containers. The use of protective barriers varies depending on the method and type of patient. In conclusion, professionals surveyed dedicated to clinical and surgery of small species in Pasto know the risks they are exposed to in their professional practice and the need to implement prophylactic measures, but they do not have a biosafety scheme to follow strictly.

Blastocystis sp: EVIDENCE OF ITS PATHOGENIC ROLE

Blastocystis sp. es un parásito de distribución mundial, que se transmite por vía fecal-oral, colonizando el tracto gastrointestinal, tanto de animales como de humanos. Existen múltiples factores que favorecen su transmisión tales como el pobre saneamiento, el consumo de alimentos contaminados y la propagación de vectores. Este parásito ha despertado gran interés científico y clínico en los últimos años, por su potencial asociación con enfermedad; sin embargo, no ha sido posible establecer con exactitud su rol patógeno. También ha sido considerado agente oportunista, por su alta prevalencia en pacientes inmunosuprimidos, específicamente en aquellos con VIH/SIDA y cáncer. Actualmente, en el GenBank se han descrito secuencias de 33 subtipos (STs) diferentes, si bien en la literatura solo se encuentran reportados 17 subtipos hasta el momento, de los cuales 9 han sido aislados en el ser humano. Aunque buena parte de los estudios reportan a ST3 como el de mayor prevalencia, unos cuantos autores sugieren predominio de ST1 y ST4 en ciertas zonas, indicando que algunos subtipos varían dependiendo de la distribución geográfica. Varios de estos STs se han relacionado directamente con sintomatología gastrointestinal aguda y crónica e incluso con manifestaciones clínicas extraintestinales, encontrándose con mayor frecuencia el ST3 en pacientes sintomáticos, generalmente seguido de ST1 y en algunos casos de ST2. Además, se han reportado infecciones mixtas, de las cuales la más común se ha presentado entre los ST1 - ST3. En Latinoamérica, y particularmente en Colombia, se han desarrollado pocas investigaciones orientadas a identificar y definir la prevalencia, coinfección y potencial patógeno de las diferentes formas y subtipos conocidos de Blastocystis sp., por lo cual el conocimiento que se tiene hasta el momento es escaso e inespecífico, requiriéndose más estudios que permitan obtener mayor información al respecto.

Blastocystis sp. is a globally distributed parasite which is transmitted by the fecal-oral route by colonizing the gastrointestinal tract of both animals and humans. There are many factors which allow its transmiBion such as poor sanitation, the consumption of contaminated food and vectors propagation. This parasite has awakened scientific and clinical interest in recent years because of its aBociation with disease. However, its pathogen role has not been accurately established. Also, it has been considered as an opportunistic agent due to its high prevalence in immunosuppreBed patients, specifically in those with HIV / AIDS and cancer. Currently, in GenBank database the sequences of 33 different subtypes (STs) have been described even though only 17 subtypes are reported in the literature so far, from which nine have been isolated in humans. Although many studies indicate the subtype 3 (ST3) as the most prevalent, some authors suggest the predominance of ST1 and ST4 in particular areas, suggesting that some subtypes vary depending on the geographical distribution. Several of these STs have been directly related to acute and chronic gastrointestinal symptoms and even with clinical extraintestinal manifestations, being ST3 found with more frequency in symptomatic patients followed by ST1 and ST2 in some cases. Furthermore, mixed infections have been reported of which the most common has been present between ST1 - ST3. In Latin America, and particularly in Colombia, little research has been developed that aims to identify and define the prevalence, coinfection, and pathogenic potential of different forms and known subtypes of Blastocystis sp., therefore the knowledge at hand so far is scarce and unspecific, requiring more studies which allow obtaining more information about it.

SCIENTIFIC ADVANCES IN THERAPEUTIC STRATEGIES AGAINST DISEASE BY EBOLA VIRUS

La enfermedad por el virus del Ébola se conoce desde hace treinta años como mortal, contagiosa y de difícil diagnóstico y tratamiento. Numerosos estudios se han realizado para comprender la patogénesis del virus y con ello los posibles tratamientos que puedan generar control de la enfermedad. Sin embargo, no hay hasta la fecha un fármaco o vacuna con licencia para combatir el virus del Ébola. El tratamiento está basado solo en aliviar los síntomas y prevenir el contagio por medio de acciones que ayuden a minimizar el riesgo de infección. En esta revisión, se presentan las diferentes perspectivas del estado actual de la investigación sobre fármacos antivirales y vacunas en fases de desarrollo para la infección del virus del Ébola.

Ebola virus disease has been known for thirty years as a lethal, contagious and difficult to diagnose and treat disease. Numerous studies have been conducted to understand the pathogenesis of the virus and thus the possible treatments that may promote disease control. However, to date there is no licensed vaccine or medicine to fight Ebola virus. The treatment is based only on relieving symptoms and preventing contagion through actions that help minimize the risk of infection. This review presents different perspectives of the current state of research on antiviral medicine and vaccines in development stages for Ebola virus infection.

ENCAPSULATION OF PROBIOTICS FOR FOOD APPLICATIONS

Los alimentos funcionales contienen componentes activos que con un consumo habitual favorecen la salud de consumidor. Dentro del concepto de funcional se encuentran los alimentos con microorganismos probióticos, los cuales al ser ingeridos en dosis adecuadas confieren diversos beneficios, estos microorganismos son sensibles a factores tecnológicos y ambientales que pueden reducir su viabilidad, estabilidad y su capacidad funcional. Existen tecnologías como la encapsulación, las cuales permiten mejorar la estabilidad de los probióticos al protegerlos mediante un material de recubrimiento. En este trabajo se realizó una búsqueda sistemática en diversas bases de datos sobre los probióticos más empleados en la industria de alimentos, su capacidad catalítica en matrices alimenticias, métodos de encapsulación, tipos de matrices en la encapsulación, estabilidad bajo condiciones gastrointestinales y los mecanismos de liberación. Se encontró que la encapsulación, además de favorecer la estabilidad de los microorganismos probióticos frente a factores adversos, condiciona según sus características, su aplicación e incorporación en matrices alimenticias de diversas cualidades.

Functional foods contain active components, which under their regular use favor consumers' health. Within the functional concept food with probiotics are found, which when ingested in adequate doses confer various benefits. These microorganisms are sensitive to technological and environmental factors that can reduce their viability, stability, and functional capacity. There are some technologies such as encapsulation, which allow improving the stability of probiotics by protecting them with a coating material. This a systematic search in several databases on the most widely used probiotics in the food industry, their catalytic capacity in food matrices, encapsulation methods, types of matrices in encapsulation, stability in gastrointestinal conditions and release mechanisms. It was found that encapsulation, besides favoring the stability of probiotic microorganisms against adverse factors, conditions, according to their characteristics, their application and incorporation in food matrices of different qualities.

MYOTONIC DYSTROPHY TYPE 1: CASE REPORT OF A COLOMBIAN PATIENT

Introducción: La distrofia miotónica es una enfermedad poco frecuente de origen genético. Se produce por aumento de repeticiones de la tripleta CTG en el gen DMPK (locus 19q13.32), o por aumento de repeticiones de CCTG en el gen ZNF9 (locus3q21.3). Su fenotipo es variable y sus principales características son la debilidad muscular progresiva y la miotonía. El objetivo de esta publicación es reportar un caso colombiano de distrofia miotónica tipo 1 con diagnóstico molecular y contribuir a la construcción de datos epidemiológicos locales sobre esta patología. Además, aportar información a médicos generales, pediatras, internistas, fisiatras, neurólogos, y en general al personal de salud que puede tener contacto con pacientes con debilidad muscular progresiva, escenario en el cual la distrofia miotónica es una posibilidad diagnóstica a considerar. Descripción del caso: Hombre de 37 años, con historia de pobre succión neonatal, retraso en los hitos del desarrollo, discapacidad intelectual y, en la adolescencia, aparición de debilidad progresiva generalizada, miotonía y disfagia. El Southernblot y PCR del gen DMPK mostraron un alelo expandido en un rango entre 1100 a 1700 repeticiones del triplete CGT y un alelo normal, confirmando el diagnóstico de distrofia miotónicatipo 1. Conclusión: El paciente aquí reportado presentó fenotipo sugestivo de DM1; el diagnóstico fue confirmado con la prueba molecular. Con el resultado fue posible realizar una consejería genética adecuada y brindar información sobre la enfermedad.

Introduction: Myotonic dystrophy (MD) is a rare genetic disease. It is produced by an increased repetition of the CTG triplet in the DMPK gene (locus 19q13.32), or by increasing repetitions of CCTG in the ZNF9 gene (locus 3q21.3). Its phenotype is variable, and its key features are progressive muscle weakness and myotonia. The aim of this publication is to report a Colombian case of myotonic dystrophy type 1 with molecular diagnosis and to contribute to the construction of local epidemiological data on this pathology. Also, to provide information to general practitioners, pediatricians, internists, physiatrists, neurologists, and health personnel who may have contact with patients with progressive muscle weakness, scenario in which myotonic dystrophy is a diagnostic possibility to be considered. Case description: Thirty-seven year old male with a history of poor neonatal suction, delay in developmental milestones, intellectual disability and, in adolescence, the onset of progressive generalized weakness, myotonia and dysphagia. Southern blot and PCR of DMPK gene showed one expanded allele in a range between 1100-1700 repetitions of the CGT triplet and one normal allele, confirming the diagnosis of myotonic dystrophy type 1. Conclusion: The patient reported here presented a phenotype suggestive of myotonic dystrophy type 1; the diagnosis was confirmed by molecular testing. This result made it possible to offer a proper genetic counseling and provide information about the disease.