Abstract

PEREANEZ, Jaime Andrés; QUINTANA, Juan Carlos; ALARCON, Juan Carlos  and  NUNEZ, Vitelbina. AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL DE UNA FOSFOLIPASA A₂ BÁSICA DEL VENENO DE Bothrops asper DE COLOMBIA. Vitae [online]. 2014, vol.21, n.1, pp.38-48. ISSN 0121-4004.

Antecedentes: Los accidentes ofídicos representan un grave problema de salud pública en muchas regiones del mundo, particularmente en países tropicales y subtropicales de África, Asia, América latina y Oceanía. Los venenos de serpiente son mezclas complejas de enzymas y proteínas tóxicas, donde las fosfolipasas A₂ (PLA₂s) son uno de los principales y más abundantes componentes que destruyen el tejido muscular. Objetivo: Aislar y caracterizar una fosfolipasa A₂ del veneno de Bothrops asper de Colombia, con el fin de obtener información acerca de la composición del veneno de esta especie. Materiales y Métodos: Se empleó cromatografía de intercambio catiónico seguida de HPLC en fase reversa para purificar la proteína. La masa molecular fue determinada por espectrometría de masas. La caracterización bioquímica fue llevada a cabo usando un sustrato sintético (ácido 4-nitro-3-octanoyloxi-benzoico). La actividad miotóxica y edematizante fue ensayada en ratones, al medir la actividad de la creatina kinasa en plasma y el aumento del diámetro de la almohadilla plantar, respectivamente. Además, la actividad citotóxica fue examinada en mioblastos y miotubos murinos C2C12. Resultados: Fue purificada una fosfolipasa A₂ básica (BaspCol-PLA₂) del veneno de Bothrops asper de Colombia. Su masa molecular fue 13974,6 Da. La enzima hidrolizó un sustrato sintético con un K_M de 3,11 mM y un V_Max de 4,47 nmol/ min, mostrando actividad máxima a 40 °C y pH 8,0. La PLA₂ requirió Ca²⁺ para su actividad. La adición de Mg²⁺, Cd²⁺, Mn²⁺ y Zn²⁺ (10mM) en presencia de una baja concentración de Ca²⁺ (1mM) disminuyó la actividad enzimática. La sustitución de Ca²⁺ por otros cationes divalentes también redujo la actividad a niveles similares a aquellos presentados en ausencia de Ca²⁺. Tres péptidos internos (CCFVHDCCYGK, AAAI/LCFRDNI/LNTYNDKK, DAAI/LCFR) identificados por espectrometría de masas mostraron similitud con otras fosfolipasas A₂ de B. asper previamente descritas. Cuando BaspCol-PLA₂ fue inyectada en ratones indujo una miotoxicidad local considerable y un edema moderado. In vitro, esta enzima provocó efecto citotóxico sobre mioblastos y miotubos. Adicionalmente, esta proteína fue débilmente anticoagulante, mostrando este efecto sobre plasma humano en concentraciones entre 3 y 10 μg/mL. Conclusiones: Una PLA₂ fue purificada y llamada BaspCol-PLA₂, esta enzima presentó actividad catalítica y una masa molecular de 13974,6 Da. La toxina mostró actividad miotóxica, edematizante, anticoagulante y citotóxica.

Keywords : Venenos de serpiente; mordeduras de serpiente; Bothrops asper; fosfolipasas A₂; necrosis; Colombia.

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