Introducción

Los mulares producto del cruzamiento entre Equus caballus (yegua) y Equus asinus (jumento o burro), son animales de gran popularidad en el medio rural y urbano, debido a su rusticidad y vigor físico, con una gran capacidad de adaptación a diferentes tipos de climas; además de ser considerados animales de trabajo, son utilizados en recreación o tiempo libre ¹. En Colombia, se usan con frecuencia en las regiones del trópico alto, no solo por las características anteriormente descritas, sino también porque desempeñan labores que no pueden ser realizadas por otro animal e incluso por personas; las principales faenas que realizan en estas zonas son el transporte de comida y de diferentes cultivos que son producidos en regiones montañosas de difícil acceso ².

En la evaluación del bienestar animal es común el uso de indicadores fisiológicos: dentro de estos, los valores hematológicos han sido una importante herramienta para establecer condiciones de salud en los animales ³. La medición de leucocitos, plaquetas y proteínas plasmáticas constituye uno de los exámenes más solicitados en laboratorio clínico, y es una prueba que acompaña a casi todos los métodos para llegar a un diagnóstico ⁴.

El uso creciente de los mulares en el país ha demandado una mayor atención veterinaria de estos animales, sin embargo, la escasa información de valores hematológicos ha obligado en ocasiones a hacer uso de comparaciones con valores de referencia en equinos y asnos ^5,6. Aunque existe extensa literatura sobre equinos y rangos sanguíneos normales ^7,8,9, así como en asnales ^11,12,13, no se sabe aún, si es adecuado o no la extrapolación de estos valores a los mulares, ya que como se señaló anteriormente son escasos los trabajos sobre todo en condiciones tropicales ⁵.

En un estudio comparativo sobre rangos de referencia hematológicos entre burros y equinos se encontró que los valores podrían ser similares ¹⁰, mientras que otros han indicado que la comparación de valores hematológicos de asnos y mulares con valores de referencia descritos para equinos es inválida ¹⁴. Los escasos trabajos que existen en mulares en el país son en su mayoría en mulares criollos adultos, haciendo referencia al cruce entre burro y yegua criolla ^2,6 se desconoce si hay diferencias o similitudes con estos valores para los mulares utilizados por la policía, producto del cruce entre un burro catalán y yeguas mestizas o silla argentina.

El desconocimiento de parámetros físicos o fisiológicos o uso de rangos de referencia inadecuados incrementa el riesgo de alcanzar conclusiones erróneas en el diagnóstico por parte del clínico ³. Esto es especialmente un problema para mulares, ya que el concepto del comportamiento de estos híbridos, por ejemplo, ante el dolor debido a su estoicismo, puede confundir la interpretación clínica de los valores existentes al evaluar sus condiciones de salud: al ser la mula un animal fuerte y rústico, se puede pensar equívocamente que es un animal resistente a sufrir ciertas patologías cómo síndrome de abdomen agudo, laminitis o trastornos metabólicos, sin embargo, al igual que el caballo puede padecerlas ¹⁵.

Veterinarios, propietarios y cuidadores familiarizados con el comportamiento de los mulares y el entendimiento en la variabilidad de los parámetros físicos y fisiológicos de estos animales podría convertirse en un rápido instrumento de diagnóstico del dolor o enfermedad y ayudar con la salud y bienestar de esta especie ¹⁶. Por otro lado, se ha señalado, que las implicaciones en la variación genética a través de las especies equinas e híbridos, hace que los datos generados para específicamente los equinos (rangos de referencia, dosis de medicamentos, prácticas de manejo) no sean aplicables para todos los équidos, de ahí la importancia de establecer diferencias a nivel molecular, ya que el conocimiento no se basa solo en el fenotipo ¹⁷.

En este caso, el objetivo del estudio fue determinar los valores de leucocitos, proteínas totales, fibrinógeno, albúmina y globulina en mulares sanos de 1 a 4 años, pertenecientes a la Policía Nacional de Colombia, como herramienta diagnóstica y de entendimiento sobre parámetros hematológicos en los mulares de esta raza.

Materiales y Métodos

Resultados

La media y DE de las constantes fisiológicas de los mulares evaluados fueron temperatura 37,98 ± 0,21 ˚C, frecuencia cardiaca: 42,6 ± 1,57 lpm y frecuencia respiratoria 19,56 ± 1,57 rpm. Se presentan los resultados de m, DE, cuartiles, IQR y DQ, intervalos de confianza al 95% y DA excluidos de 15 parámetros hematológicos y bioquímicos en 50 mulares (Tabla 1). Por la presencia de datos atípicos no todas las variables tienen el mismo tamaño de muestra. Los parámetros que contenían ceros y en otros individuos conteos altos, mostraron desviaciones altas.

Tabla 1 Estadística descriptiva, intervalos de confianza (95%) y datos atípicos para valores leucocitarios y proteínas en mulares de la policía. 

De igual manera, se revisaron los datos obtenidos con los datos publicados para otros équidos con la prueba de T student para los valore leucocitarios, a excepción de los valores de monocitos y eosinófilos absolutos que al no cumplir con la prueba de supuestos fueron comparados con la prueba no paramétrica de Wilcoxon W (Tabla 2). Los valores de monocitos y eosinófilos absolutos al no cumplir con la prueba de supuestos fueron comparados con otros valores utilizando la prueba no paramétrica de Wilcoxon.

Tabla 2 Comparación de valores medios de leucocitos totales y absolutos de mulares de la policía con mulares criollos colombianos, brasileros, chilenos, burros catalanes y equinos de trabajo (p>0.05). 

Los valores de albúmina, globulina, R A/G, proteínas totales y fibrinógeno fueron comparados con algunos valores publicados disponibles utilizando la prueba de T student también (Tabla 3). Aquellos valores en los cuales se encontraron diferencias estadísticas significativas fueron resaltados y marcados con un asterisco.

Tabla 3 Comparación de valores medios de albumina, globulina, R A/G, fibrinógeno y proteínas totales de mulares de la policía con mulares brasileros, burros catalanes, mulares chilenos, mulares criollos y equinos de trabajo (p>0,05). 

MP: Mulares policía, MB: Mulares brasileros < 3 años ²⁴, BC1: Burro catalán< 3 años ¹⁰, BC2: Burro catalán< 3 años ¹¹, MCH: Mulares Chilenos ¹⁶, MCR: Mulares criollos ², ETCH: Equinos Trabajo de Chile³

Discusión

En este estudio se establecieron los valores leucocitarios, proteínas totales, albúmina, globulina y fibrinógeno de mulares jóvenes de 1 a 4 años, sin evidenciarse diferencias por sexo: los valores medios, fueron comparados con la media hallada en otros mulares, asnales y equinos, encontrando diferencias significativas entre todos los équidos para los parámetros evaluados. Esto coincide con lo señalado en estudios anteriores, donde se reportaron diferencias de rangos hematológicos relacionadas con los leucocitos en mulas saludables al compararlos con los de equinos, e incluso, se mostraron diferencias en algunos parámetros hematológicos y bioquímicos entre mulas y burdéganos (cruce de equino macho con hembra asnal) de origen español y portugués, sugiriendo diferencias también entre los dos cruces de híbridos ¹⁸.

A pesar de que cada ejemplar, fue examinado clínicamente sin evidencia de ningún signo clínico asociado a enfermedad, y sus constantes fisiológicas estuvieron dentro de los rangos normales, los valores de leucocitos totales y diferenciales absolutos se encontraron por encima del límite superior reportado en equinos ^3,19. Estos hallazgos pueden ser compatibles con una leucocitosis de tipo fisiológico, la cual es moderada casi siempre transitoria (20-30 minutos), y puede incrementar el conteo total alcanzando de 12.000 a 25.000 células/μL, una modesta neutrofilia con ausencia de desviación a la izquierda y cambios tóxicos, linfocitosis (6.000 a 14.000 linfocitos/μL) y en algunos casos se reporta también la observación de eosinofilia y monocitosis ²⁰.

Esta respuesta fisiológica mediada por catecolaminas ocurre en caballos que son fácilmente excitables, especialmente animales jóvenes de sangre “caliente” que están poco acostumbrados a ser manipulados ²¹. A menudo, los procedimientos rutinarios con mulas requieren de mayor paciencia y trabajo que con los equinos, además de la experiencia de personal familiarizado con la mula y su comportamiento, ya que en la práctica no es raro que muestren signos de evasión o temor cuando una persona desconocida hace intentos repetidos de acercarse para ciertos procedimientos (inyecciones, toma de temperatura rectal o sujeción de cascos) ¹⁵. Aunque la colecta de las muestras se realizó luego de un tiempo de reposo y de manera fácil, por el temperamento dócil de este grupo de mulares gracias a la doma que se les realiza, no se descarta que algunos animales hayan sido más excitables que otros.

Realizando un análisis de los estudios previos publicados por otros autores (Tabla 2) y los resultados obtenidos en este, se encontró que la media de los recuentos de leucocitos, linfocitos, monocitos y eosinófilos para los burros catalanes ^10,11 estuvo por encima de la de los otros équidos, seguido por los mulares de la policía, los brasileros ²⁴, otros mulares chilenos ^6,16, burro criollo ¹³ y equinos ³. Estos resultados con respecto a los mulares objetos de estudio pueden sugerir que existe una tendencia a acercarse hacia los valores relacionados a la raza de origen, en este caso el burro catalán. Adicionalmente, se ha evidenciado que esta raza de asnales junto con la andaluza ha mostrado elevados recuentos leucocitarios totales mayores a otras razas españolas en diferentes edades ¹⁰.

En cuanto el recuento absoluto de neutrófilos, el valor de los mulares criollos fue más alto, seguido de los valores de los mulares de la policía, los burros catalanes, mulares brasileros y equinos, mientras que los valores más bajos fueron reportados para los mulares chilenos y el burro criollo colombiano.

Al comparar el estudio actual con otro realizado en mulares brasileros con un grupo etario similar, tampoco fueron evidentes diferencias significativas en la media de leucocitos, neutrófilos y linfocitos: estos dos grupos tenían además de ser híbridos, la particularidad que ambas poblaciones era jóvenes (entre 1 y 3 años mulares brasileros y de 1 a 4 años los mulares de la policía). En equinos, el número de neutrófilos disminuye desde el nacimiento a los diez meses de edad, y luego se incrementa a los intervalos de referencia en adultos hasta los 18 meses de edad y de allí se mantiene hasta adulto, mientras que el número de linfocitos es bajo al nacimiento (promedio 1440/ μL), e incrementa a los 3 meses de vida (cerca de 5,000/ μL) llegando a valores de adulto al año, esto hace que la relación N/L disminuya de 2,89 al nacimiento a 1 al año de edad, siendo una tendencia similar la observada en burros ²¹. Es probable que por el rango de edad de los animales (1 a 4 años), haya existido variación en el número de linfocitos, encontrándose altos en algunos animales y en otros normales, ya que se ha señalado que el número de linfocitos declina durante la edad adulta al tiempo que el número de neutrófilos sigue siendo el mismo.

En cuanto a la relación Neutrófilo/Linfocito N/L, no se realizó una evaluación comparativa con otros équidos por la poca información que hay para este parámetro, sin embargo, se pueden observar medias similares entre los mulares de la policía en donde se obtuvo una media de 1,03 (mínimo 0,6 Máximo 2,85) y el estudio de mulares chilenos ¹⁶, en donde se reportó una media de 1,5 (mínimo 0,6, máximo 2,5). En caballos de trabajo chilenos ³ se habla de rangos máximos de hasta 4,74 y se ha señalado que la relación N/L puede ser un indicador de estrés igual de confiable que la medición de cortisol sólo con una fluctuación normal de 1,5 a 2,5, lo cual podría ser de valor en estos équidos para evaluar su aumento y relacionarlo con sobrecargas de trabajo.

Los monocitos y eosinófilos son células que en condiciones normales son poco frecuentes en sangre periférica, el hecho de encontrarlos en unos animales y en otros si, da una variabilidad errónea por lo que su significancia no es representativa ¹⁰. La eosinofilia es sutil cuando se presenta y en equinos está relacionada con presencia de parásitos o alergenos ²¹. Con relación a estas células se observaron diferencias significativas con todos los grupos y en general fueron variables entre los grupos de équidos, tendiendo a estar en un nivel bajo en este estudio. Lo cual puede estar relacionado con los protocolos periódicos de desparasitación que se llevan a cabo en la población.

En relación a las proteínas totales, albúmina y fibrinógeno al comparar varios grupos de équidos, encontraron que algunos parámetros eran similares ¹⁸, sin embargo son pocos los estudios y algunos han incluido pequeños tamaños de muestra (n=20) proporcionando información limitada sobre valores normales hematológicos y bioquímicos, ya que no cumplen con las recomendaciones internacionales (lineamientos de la American Society of Veterinary Clinical Pathology ASVCP), que plantean que los estudios, donde se generan nuevos rangos de referencia deben tener unas características específicas, principalmente en cuanto al número de animales ²².

En un estudio comparativo entre caballos y mulares, se utilizaron 19 mulares y aunque no se especifica la edad, se logró evidenciar que los valores de proteínas totales para los machos se ubicaron por encima de los reportados en la literatura como normales para equinos (5,6 a 7,6 g/dl) mientras que las hembras estaban dentro de este rango ², sugiriendo con ello una influencia del sexo sobre la cantidad de proteína; para el presente estudio sin embargo, no se observaron diferencias significativas entre machos y hembras para ninguno de los parámetros evaluados, como se mencionó anteriormente.

En este estudio los valores medios de proteínas plasmáticas estuvieron por encima de los reportados para el burro catalán, y muy cercanos a los reportados en equinos y mulares criollos. Se ha reportado una tendencia general al incremento de las proteínas plasmáticas con la edad en asnos, caballos y llamas ¹⁰, esto quizás al incremento de las gammaglobulinas con la edad, resultado probable de una mayor experiencia inmunológica ¹¹. El hecho de que los mulares de este estudio sean animales jóvenes, puede relacionarse con sus niveles de globulina un poco más bajo que los reportados para otros.

En el caso de la albúmina, son escasos los reportes que muestra la literatura sobre datos en esta especie para realizar una comparación ². Las comparaciones posibles mostraron un valor medio más alto de la albúmina que para otros équidos. La albúmina es una proteína sintetizada en el hígado, siendo la más importante en el mantenimiento de la presión oncótica: se pueden observar cambios en sus niveles, según efectos de la dieta y en aquellos équidos con malnutrición o con enfermedades, haciendo que sus valores se encuentren más bajos ¹⁶. Los niveles altos de albumina en este caso podrán relacionarse a la dieta suministrada y la buena condición corporal de los animales que están destinados para el trabajo. La relación A/G en estos mulares se aumenta tanto por los mayores niveles de albúmina, como por los bajos niveles de globulina.

El valor del fibrinógeno se encuentra dentro del rango normal reportado para equinos, de 200 a 400 mg/dl ²³: aunque sólo se comparó con los valores de burro catalán y mulares brasileros jóvenes, este valor se acercó más al del primero y fue más bajo comparado con el de los mulares brasileros. En este sentido, los hallazgos de este estudio coincidirían con lo expuesto anteriormente en un estudio ²⁴, donde se ha señalado que hematológicamente los mulares, están más próximos a los asnales que a los equinos.

Adicionalmente, se ha indicado que existen grandes diferencias, por ejemplo, a nivel molecular entre el proteoma sérico del burro con el del caballo, sugiriendo que el de las mulas se acercaría más al del burro ¹⁷. Es conveniente además analizar en próximos estudios, la relación entre la cantidad de monocitos y la concentración de fibrinógeno, ya que se ha reportado que las interleuquinas producidas por los monocitos, estimulan su producción ²⁵.

Los resultados aquí encontrados resaltan la importancia de generar rangos de referencia para mulas, de acuerdo con su edad y raza y condiciones de manejo. La interpretación de los datos de patología clínica o parámetros hematológicos requiere conocimiento o una evaluación de lo que es considerado normal o asociado a salud, en el animal de interés, para evitar una mala interpretación del diagnóstico con parámetros que no corresponden al paciente objeto de estudio ²⁶.

Las diferencias en los valores de parámetros sanguíneos encontradas podrían ser producto de diferencias el análisis de laboratorio, edad, diversidad genética, prácticas de manejo, estado reproductivo, estado emocional y físico, condiciones geoclimáticas y adaptación al trabajo desarrollado por los individuos evaluados ^21,27). Como se ha demostrado en equinos, algunos conteos celulares pueden variar dependiendo del analizador automático utilizado o entre analizadores automáticos y el método manual ²⁶. En este caso, aunque el método fue manual, en caso de validación de resultados se requiere que las técnicas de laboratorio sean las mismas ²².

Se requiere continuar investigando en esta población estos parámetros hematológicos incluyendo diferentes grupos etarios y si es posible sus razas formadoras, para un entendimiento total de las diferencias fisiológicas entre mulares y otros équidos como un instrumento indicador de dolor, estrés y enfermedad y ayudar con la salud y bienestar de estos animales.