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Revista Colombiana de Química

versión impresa ISSN 0120-2804

Rev.Colomb.Quim. vol.41 no.3 Bogotá sep./dic. 2012

 

Densidades y propiedades volumétricas de la glicina en soluciones acuosas de tiosulfato de sodio pentahidratado (Na2S2O3.5H2O) a diferentes temperaturas.

Densities and volumetric properties of glycine in aqueous solutions of sodium thiosulfate pentahydrate (Na2S2O3.5H2O) at different temperatures.

Densidades e propriedades volumétricas da glicina em soluções aquosas de tiossulfato de sódio penta-hidratado (Na2S2O3.5H2O) em diferentes temperaturas.

Manuel S. Páez a, bPlinio D. Canteroa Elfrin J. Marzolaa

a Universidad de Córdoba, Departamento de Química, Facultad de Ciencias Básicas. Cra. 6 nro. 76-103 km 3, vía Cereté, Montería, Córdoba, Colombia.

b mspaezm@unal.edu.co, mspaezm@gmail.com


RESUMEN

Se determinaron las densidades de la glicina en soluciones acuosas de tiosulfato de sodio pentahidratado (0,01-2,0 mol kg-1) usando un densímetro de tubo vibrador DMA 5000 a las temperaturas de (283,15; 288,15; 293,15; 298,15; 303,15; 308,15; 313,15 y 318,15) K y 101,1 Kpa. Se calcularon los volúmenes molares aparentes ( ), los volúmenes molares aparentes a dilución infinita (Vø ), la pendiente experimental (S*v), los volúmenes estándares de transferencia (Δ trV°2,m), las expansibilidades molares parciales a dilución infinita (VE ), la segunda derivada del volumen molar aparente a dilución infinita con respecto a la temperatura (δ² Vø / δT²)p y los números de hidratación (nH ). Los valores obtenidos para estos parámetros se analizaron en términos de las interacciones que ocurren a nivel de la solución. Adicionalmente, los valores de ΔtrV°2m,se interpretaron en función de las interacciones soluto-cosoluto de acuerdo al modelo de la coesfera y calculándose a partir de estos los los parámetros de interacción volumétricos dobles VAB y triples VABB,, usando la teoría de McMillan-Mayer. Los valores de ΔtrV°2m, son positivos y aumentan con el aumento de la molalidad del Na2S2O3.5H2O, mientras que los valores de (2Vø/∂T2)P son negativos en todas las concentraciones de solvente mixto; lo que sugiere que a nivel de la solución se favorecen las interacciones soluto-solvente y que la glicina actúa como un disruptor de la estructura de las soluciones acuosas de tiosulfato de sodio pentahidratado.

Palabras clave: densidad, glicina, interacciones soluto-solvente, modelo de la coesfera, parámetros de interacción volumétricos.

ABSTRACT

Densities of glycine in aqueous solutions sodium thiosulfate pentahydrate (0,01- 2,0 mol kg-1) were determined using a vibrating-tube densimeter DMA 5000, at temperatures of (283,15; 288,15; 293,15; 298,15; 303,15; 308,15; 313,15 and 318,15) K and 101,1 Kpa. Apparent molar volumes (), apparent molar volumes at infinite dilution (Vø ), experimental slope (S*v), standard partial molar volumes of transfer (Δ trV°2,m), partial molar expansivities at infinite dilution (VE ), second derivative apparent molar volume at infinite dilution with respect to temperature (δ² Vø / δT²)p and hydration numbers (nH ) were calculated. The values obtained for these parameters were discussed in terms of the interactions present in solution. Additionally, values of ΔtrV°2m,, have been interpreted in terms of solute-cosolute interactions on the basis of a cosphere overlap model and calculated from these parameters the double of VAB and triple VABB, volumetric interaction,using the McMillan-Mayer theory. The values of ΔtrV°2m, are positive and increase with the increase of Na2S2O3.5H2O molality, while negative values of (2Vø/∂T2)P are all mixed solvent concentrations, suggesting that the level of solution are favored and solutesolvent interactions that glycine acts as a disruptor of the structure of the aqueous solutions of sodium thiosulfate pentahydrate.

Key words: density, glycine, solutesolvent interactions, the model of cosphere volumetric interaction parameters.

RESUMO

As densidades foram determinados doglicina em soluções aquosas pentahydrate tiossulfato de sódio (0,01-2,0 mol kg-1) em temperaturas de (283,15; 288,15; 293,15; 298,15; 303,15; 308,15; 313,15 and 318,15) K 101,1 Kpa, usando um tubo vibrando densímetro DMA 5000. Foram calculados volumes molares aparentes (), volume aparente molar a diluição infinita (Vø ),inclinaçõ experimentais ((S*v),transferir volume padrão (Δ trV°2,m), expansividades molaresparciais à  diluição infinita (VE ), segundo volume aparente derivado molar a diluição infinita em relação à  temperatura (δ² Vø / δT²)pe números de hidratação (nH). Os valores obtidos para os parmetros foram analisados em termos das interacções que ocorrem na solução de. Além disso, os valores de ΔtrV°2m, foram interpretados de acordo com as interacções soluto-cosoluto de acordo com o modelo de coesfera e calcular a partir destes parâmetros dos duplos VAB e triplos VABB, interacção volumétricas, utilizando a teoria da McMillan- Mayer.ΔtrV°2m, valores são positivos e aumenta com o aumento da molalidade Na2S2O3.5H2O enquanto (2Vø/∂T2)P são valores negativos em todas as concentrações de solvente misto, sugerindo que o nível da solução é de interacções favoráveis soluto-solvente e que a glicina actua como um disruptor da estrutura das soluções aquosas de tiossulfato de sódio penta-hidratado.

Palavras-chave: densidade, glycine, interações soluto-solvente, o modelo de coesfera volumétrico parmetros interacção.

Recibido: 20/10/12 - Aceptado: 13/12/12


INTRODUCCIÓN

Las proteínas y sus unidades estructurales (aminoácidos) son uno de los sistemas que más han fascinado a la comunidad científica debido al papel que desempeñan en los procesos biológicos, a su alta especificidad catalítica, su estructura tridimensional y a su auto-organización en dicha estructura (1). Es por ello, que propiedades como la estabilidad conformacional, solubilidad, actividad enzimática, disociación en subunidades, desnaturalización, separación y purificación de estas macromoléculas son claramente influidas por diversas interacciones moleculares entre los grupos funcionales presentes que son direccionados por factores como la temperatura, presencia de sustancias de baja masa molar como sustratos, coenzimas, inhibidores y activadores que específicamente ligan a la estructura nativa y el medio en el cual se encuentran disueltas (2, 3).

Uno de los medios que tiene grandes efectos sobre las propiedades anteriormente mencionadas son las soluciones salinas; sin embargo, el estudio del comportamiento termodinámico de las proteínas en medios salinos resulta fundamentalmente complejo, debido a que se rige por muchas interacciones entre ellas las fuerzas electrostáticas inducidas por sales, donde la naturaleza de estas interacciones depende de la magnitud relativa de la electrostricción causada por el extremo de los grupos polares, estabilidad de la estructura debida a la influencia de la hidrofobicidad de los grupos alquilos y la magnitud de interacciones entre los grupos hidrófobos presentes en los aminoácidos (2, 4). Se ha encontrado, por ejemplo que los electrolitos cuando son disueltos en agua perturban el orden de las moléculas de agua por el fuerte campo eléctrico de los iones constituyentes. Así mismo, se ha demostrado experimentalmente que las soluciones salinas tienen un efecto negativo sobre las propiedades y la estabilidad estructural de las proteínas, por ejemplo una alta concentración de sulfato de sodio (Na2SO4), acetato de sodio (CH3COONa) y sulfato de magnesio (MgSO4) estabilizan las proteínas, mientras que sales tales como MgCl2, CaCl2 y KSCN desnaturalizan las proteínas generando así cambios de volumen en el sistema (5, 6). Es por ello que muchos investigadores (5-10) se han interesado en indagar el papel que juegan las sustancias electrolíticas sobre las unidades más pequeñas de estas macromoléculas biológicas como es el caso de los aminoácidos y así determinar el efecto que causa la adición de electrolitos sobre la estabilidad conformacional, solubilidad, actividad enzimática, disociación en subunidades y desnaturalización, entre otras propiedades de las proteínas. En este sentido, las propiedades volumétricas son útiles para determinar el efecto que causa la adición de una sal sobre el comportamiento de los aminoácidos; siendo esta información de gran importancia para el estudio de la hidratación de péptidos y proteínas en medios salinos (11, 12). Por tal motivo, en este trabajo se reportan las densidades (ρ) de glicina en diferentes molalidades de tiosulfato de sodio pentahidratado (Na2S2O3.5H2O) a una presión atmosférica de 101,1 Kpa a las temperaturas de (283,15; 288,15; 293,15; 298,15; 303,15; 308,15; 313,15 y 318,15) K. Los valores experimentales de ρ se usaron para calcular los volúmenes molares aparentes ( Vø ), los volúmenes molares aparentes a dilución infinita (Vø), la pendiente experimental, (S*V),los volúmenes estándares de transferencia (Δtr°2,m,) las expansibilidades molares parciales a dilución infinita ( VE), la segunda derivada del volumen molar aparente a dilución infinita con respecto a la temperatura (∂² Vø / ∂T²)p y los números de hidratación (nH). El comportamiento de estos parámetros con la concentración y la temperatura se analizaron en términos de las interacciones que ocurren en la solución.

MATERIALES Y MÉTODOS

Los reactivos empleados son los siguientes: glicina (99% de pureza, Alfa Aesar), tiosulfato de sodio pentahidratado (99% de pureza, Merck), la glicina fue doblemente recristalizada desde soluciones acuosas de etanol y secada al vacío sobre P2O5. El agua usada fue desgasificada, doblemente destilada y desionizada garantizando una conductividad menor de 2µS cm-1.

Las soluciones se prepararon por el método gravimétrico usando una balanza (OHAUS, modelo Explorer) con una sensibilidad de ± 1x10-4 g en botellas herméticamente cerradas para evitar pérdida por evaporación de alguno de los componentes. Las densidades de los líquidos puros y/o mezclas se determinaron usando un densímetro de tubo vibratorio (Anton Paar, DMA 5000, Austria). La densidad del líquido puro y/o la solución problema (ρ) está dada por la ecuación [1].

[1]

donde A y B son constantes internas del densímetro que dependen de la geometría de la celda que contiene la muestra y τ, es el periodo de oscilación del líquido y/o la solución problema. La incertidumbre experimental en la determinación de las densidades es del orden de ± 1x10-6 g/cm3. El densímetro fue calibrado con aire seco y agua bidestilada y desgasificada como líquido puro de referencia. Esta calibración se verificó mediante la determinación de las densidades de soluciones acuosas de glicina, las cuales se presentan en la Tabla 1 junto con los valores reportados por otros investigadores, observándose que estas se encuentran en buen acuerdo con los valores reportados en la literatura; lo que garantiza la confiabilidad de las mediciones experimentales.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Las densidades (ρ) obtenidas en este trabajo desde 283,15K hasta 318,15K para las diferentes concentraciones de glicina y tiosulfato de sodio pentahidratado se muestran en la Tabla 1.

Los volúmenes molares aparentes fueron calculados usando la ecuación [2]

[2]

donde M2,ρ, m, ρ0 son la masa molar del soluto (g mol-1), la densidad de la solución (g cm-3), la molalidad de la solución(mol kg-1), y la densidad del solvente respectivamente. Los valores obtenidos de los volúmenes molares aparentes (Vø) en el intervalo de temperaturas de estudio a las distintas concentraciones de aminoácido y la sal se reportan en la Tabla 2. Las incertidumbres en los valores de(Vø)en el sistema binario así como en el sistema pseudobinario son del orden de ±0,01cm3 mol-1.

En la Tabla 2 se puede observar que las densidades del sistema pseudobinario (glicina + soluciones acuosas de tiosulfato de sodio pentahidratado) disminuyen con el aumento de la temperatura y se incrementan con el aumento de la concentración del aminoácido y del solvente mixto. Los valores de ( Vø )incrementan con el aumento de la concentración de las soluciones de Na2S2O3.5H2O y disminuyen con el aumento de la concentración de glicina; este comportamiento podría indicar un favorecimiento de las interacciones soluto-solvente con el aumento de la composición del solvente mixto (8).

Los valores de(Vø )se representados adecuadamente por la ecuación [3]

[3]

donde (Vø) es el volumen molar aparente a dilución infinita, m es la molalidad de la solución,S*V es la pendiente experimental y representa el cambio en el volumen molar aparente con la molalidad a temperatura y presión constantes. Los valores de Vø )y (S*V)se obtuvieron a través del método de los mínimos cuadrados y se registraron en la Tabla 3 junto con sus respectivas incertidumbres. La gráfica de (Vø)contra m manifiesta un comportamiento lineal en todos los casos aproximadamente a partir de 0,2000 m de glicina, excepto en la composición de solvente mixto de 2,0000 m donde ocurre a partir de 0,1007 m de glicina. Una ilustración del comportamiento de ( Vø)contra m a diferentes concentraciones de glicina y 0,2000 m de Na2S2O3.5H2O se muestra en la Figura 1.

A concentraciones inferiores a 0,2000 m de glicina aproximadamente ocurre un comportamiento abrupto del volumen molar aparente en función de la molalidad, manifestándose tendencias muy bien definidas a alta dilución primando otro tipo de interacciones y son las debidas a interacciones entre la cadena apolar de la glicina y el agua; conocidas como interacciones de tipo hidrofóbico bastante importantes en los procesos de estabilidad de macromoléculas de interés biológico (15).

En la Tabla 3, se observa que los valores de(Vø) son positivos y aumentan con el incremento de la molalidad del Na2S2O3.5H2O; este comportamiento se asocia con al favorecimiento de interacciones fuertes soluto-solvente en ausencia de las interacciones ion-ion en el estado de dilución infinita (16,17). De esta forma a pH neutro (como es el caso de nuestros sistema de estudio) los aminoácidos existen como zwiterions y por ello la presencia de Na2S2O3.5H2O puede afectar las esferas de hidratación de los grupos terminales cargados de los zwiterions, dando como resultado interacciones Na+-COO-, S2O32-,-NH3+, que son el producto del solapamiento de las coesferas de hidratación de estas especies y que a su vez origina un relajamiento de las regiones electrostrisadas (15,17,18).

De otra parte, el incremento de los volúmenes molares aparentes a dilución infinita con el aumento de la temperatura podría ser atribuido a una expansión del volumen de los zwiterions hidratados o a una reducción en la electrostricción (17). Se observa en la Tabla 2 que los valores de(S*V)son negativos y pequeños, hecho que indica en la solución existen débiles interacciones soluto-soluto y que son menos complejas que cuando la formación de iones tiene lugar (8,17).

Los volúmenes estándares de transferencia ΔtrV°2,m, desde el agua hasta las soluciones acuosas de Na2S2O3.5H2O se obtuvieron mediante la expresión [4]

[4]

Los resultados obtenidos de ΔtrV°2,m se muestran en la Tabla 4. En esta tabla es notorio que los volúmenes estándares de transferencia son positivos e incrementan con el aumento de la temperatura y la concentración del solvente mixto. Un comportamiento similar también ha sido observado en otros sistemas de aminoácidos en medios electrolíticos (14, 19, 20, 21, 22, 23).

Los valores positivos de ΔtrV°2,m fueron interpretados de acuerdo con el modelo de la co-esfera desarrollado por Friedman y Krishnan (24,25). Según este modelo las propiedades de hidratación de las moléculas de agua dependen de la naturaleza del soluto. De esta forma las interacciones que podrían ocurrir se pueden clasificar de la siguiente forma (26, 27):

1. Interacciones ion-ion entre el ión Na+ del solvente mixto y el grupo COO- de la glicina.

2. Interacciones ion-ion entre el ion S2O3 2- y el grupo NH3+ de la glicina.

3. Interacción ion-hidrofóbica que ocurren entre los iones del solvente mixto y las partes no polares del aminoácido.

De acuerdo con el modelo de la coesfera las interacciones tipo 1 y 2 dan como resultado valores positivos para ΔtrV°2,m; mientras que las de tipo 3 originan contribuciones negativas del volumen estándar de transferencia. En este trabajo los valores positivos de ΔtrV°2,msugieren que en la solución se presentan las interacciones de tipo 1 y 2.En este sentido la tendencia observada para los volúmenes estándares de transferencia puede ser también explicada utilizando la ecuación modificada por Shahidi y Farrell (28) para el volumen molar aparente a dilución infinita como lo muestra la ecuación [ 5]

[5]

Donde VV,W,VV y VC son el volumen de Van der Waals, el volumen asociado a los espacios vacíos o nulos y el volumen de contracción que es causado por la electrostricción del disolvente. Asumiendo que los valores de VV,W y VV no son afectados significativamente por la presencia de Na2S2O3.5H2O, los valores positivos de ΔtrV°2,m pueden ser atribuidos a una disminución del volumen de contracción debido a la presencia de Na2S2O3.5H2O, lo cual, podría ser producto de fuertes interacciones entre los grupos zwiteriónicos de la glicina (COO-,NH3+)y los iones del cosoluto (Na+,S2 O32-),donde probablemente se formen pares de iones no covalentes causando que la electrostricción de las moléculas de agua cercanas a estos centros cargados se reduzca y ocasione una disminución del volumen de contracción(14).

La variación de (Vø) con la temperatura se puede expresar de la siguiente forma:

[6]

donde a, b, y c son constantes y T es la temperatura en Kelvin.

Las expansibilidades molares parciales a dilución infinita( VE) se evaluaron a través de la diferenciación de la ecuación (6) con respecto a la temperatura, obteniendo la ecuación [7]

Los valores de (VE) ∞ obtenidos a las diferentes temperaturas se reportan en la Tabla 5. En la Tabla 4 se observa que los valores de (VE) disminuyen con el incremento de la temperatura en todas las composiciones de solvente mixto; este comportamiento podría considerarse que se debe a que la estructura del solvente mixto se debilita con el incremento de la temperatura, es decir, algunas moléculas del disolvente pueden ser liberadas de las capas de solvatación del soluto (29). Los valores de (VE) aumentan con el aumento de la concentración de Na2S2O3.5H2O (excepto en 0.1000 m y 0.6000 m de Na2S2O3.5H2O), lo que podría indicar que la glicina actúa como un disruptor de la estructura del solvente; favoreciéndose de esta manera las interacciones solutosolvente (10, 30). De acuerdo a Hepler (28, 31) el mejor criterio para caracterizar la habilidad de un soluto para comportarse como disruptor o formador de la estructura del solvente lo constituye la segunda derivada del volumen molar aparente a dilución infinita con respecto a la temperatura ( 2Vø/∂T2)P ; así de esta forma si: ( 2Vø/∂T2)P>0 el soluto actúa como un formador de la estructura del solvente, un comportamiento opuesto indica que el soluto actúa como un disruptor de la estructura del solvente. Los resultados obtenidos para ( 2VE/∂T)P) = (2Vø/∂T2)P se muestran en la Tabla 5.

Los valores de (2VE/∂T)P mostrados en la Tabla 5 son negativos a todas las concentraciones de solvente mixto; lo que podría indicar que la glicina actúa como un disruptor de la estructura de las soluciones acuosas de tiosulfato de sodio pentahidratado.

Los números de hidratación (nH ) para la glicina a cada temperatura se calcularon usando el método reportado por Millero (31) a partir de los volúmenes molares parciales ,los cuales se pueden expresar mediante la ecuación [8]

[8]

Donde son elvolumen molar parcial intrínseco del aminoácido y el volumen molar parcial de electrostricción debido a la hidratación de cada aminoácido. El volumen molar parcial intrínseco del aminoácido depende de la contribución de dos términos: 1) el volumen de Van der Waals y 2) el volumen debido a los efectos de empaquetamiento. Los valores calcularon utilizando la siguiente ecuación (32, 33)

[9]

donde 0.7 es la densidad de empaquetamiento para el aminoácido en un cristal orgánico,0.634 es la densidad para una esfera con un empaquetamiento aleatorio. se calcula mediante la división del masa molar de la glicina entre su densidad. Para la aplicación de la ecuación [9] se asume que tanto la densidad como el volumen del cristal permanecen constantes a lo largo de todo el intervalo de temperaturas de estudio. Millero (34) reporta la relación entre el volumen molar parcial de electrostricción y los números de hidratación a través de la ecuación [10]

[10]

Donde Ve0 es el volumen de agua electrostrictada y Vb0 es el volumen de agua voluminosa. Este modelo asume que por cada molécula de agua tomada de la fase voluminosa a la región acuosa que rodea a los aminoácidos, el volumen se reduce en (Ve0 - Vb0).Usando (Ve0 - Vb0) -2.9, -3,3, -4,0 cm3 mol-1 a 288,15; 298,15 y 308,15 K respectivamente (6,14) y obteniendo (Ve0 - Vb0)-2,7; -3,1; -3,6 y -4,6cm3 mol-1 a 283,15; 293,15; 303,15 y 313,15 K de los datos reportados por Yan y Lark (35, 36) desde 278,15 a 313,15K. Los números de hidratación (nH ) calculados para la Glicina son reportados en la Tabla 6.

En la Tabla 6 se observa que los números de hidratación (nH) de la glicina en soluciones acuosas de Na2S2O3.5H2O son menores que los obtenidos en agua pura y disminuyen con el aumento de la temperatura y de la concentración del solvente mixto. Este hecho sugiere que las interacciones que involucran a los iones presentes en el solvente mixto (Na+,S2 O3 2-) con los centros cargados de la glicina (COO-,NH3+)son fuertes; debilitando el efecto de electrostricción que existe alrededor de estos, originando a su vez un efecto de deshidratación y por consiguiente un favorecimiento de las interacciones soluto-solvente (14,33). Resultados similares también han sido observados en sistemas de aminoácidos en soluciones acuosas de cloruro de zinc(ZnCl2), hidrocloruro de metformina (C4H11N5), cloruro de calcio (CaCl2), sulfato de salbutamol (C13H21NO3) y sulfato de sodio (Na2SO4) (14, 33, 35, 36).

La teoría de soluciones de McMillan- Mayer (37) fue propuesta inicialmente por Kozak (38) y posteriormente discutida por Friedman, Krishnan y Frank (25, 39, 40) en orden de aplicarla al estudio de las interacciones soluto-cosoluto en las esferas de solvatación del soluto. De acuerdo a este tratamiento los volúmenes estándares de transferencia se pueden expresar mediante la ecuación [11]

[11]

Aquí A simboliza el subíndice que representa a la glicina y B el subíndice para el Na2S2O3.5H2O, y son los parámetros de interacción volumétricos dobles y triples respectivamente. Estos parámetros se calculan usando el método de los mínimos cuadrados y son presentados en la tabla 7.

Los valores de VAB son positivos, mientras que los valores de son negativos a todas las temperaturas de estudio. Los valores positivos de VAB sugieren que las interacciones entre el soluto y el cosoluto ocurren debido al solapamiento de sus esferas de hidratación. Esta observación está en correspondencia con las conclusiones deducidas para el modelo de la coesfera (8, 14, 33, 40).

CONCLUSIONES

En este trabajo se reportan los datos experimentales para las densidades del sistema glicina en soluciones acuosas de tiosulfato de sodio pentahidratado (0,01-2,0 mol kg-1) a las temperaturas de (283,15; 288,15; 293,15; 298,15; 303,15; 308,15; 313,15 y 318,15) K y 101,1 Kpa.

Los resultados para los volúmenes estándar de transferencia ΔtrV°2,m son positivos y se incrementan con el aumento de la temperatura y la concentración del solvente mixto, lo que podría indicar que en la solución se favorecen las interacciones soluto-solvente, que de acuerdo con el modelo de la coesfera podrían ser asociadas a dos tipos de interacciones: 1) Interacciones ion -ion entre el ión Na+ del solvente mixto y el grupo COO- de la glicina y 2) Interacciones ion- ion entre el ion S2O32- y el grupo NH3+ de la glicina. Los valores de la segunda derivada del volumen molar aparente a dilución infinita con respecto a la temperatura (∂² Vø / ∂T²)p son negativos en todas las concentraciones de solvente mixto, hecho que sugiere que la glicina actúa como un disruptor de la estructura de las soluciones acuosas de tiosulfato de sodio pentahidratado. Los números de hidratación (nH) de la glicina en soluciones acuosas de Na2S2O3.5H2O son menores que los obtenidos en agua pura y disminuyen con el aumento de la temperatura y de la concentración del solvente mixto. Este hecho sugiere que las interacciones que involucran a los iones presentes en el solvente mixto (Na+, S2 O32- con los centros cargados de la glicina (COO-,NH3 +) son fuertes; debilitando así el efecto de electrostricción que existe alrededor de estos.

Finalmente el signo positivo de podría ser asociado a que las interacciones entre el soluto y el cosoluto ocurren debido al solapamiento de sus esferas de hidratación.


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