Resumen

GRANADOS-RAMIREZ, Carmen Giovana; CONTRERAS-RODRIGUEZ, Luis Ernesto  y  RAMIREZ-HERNANDEZ, María Helena. Optimización del ensayo de inhibición de la nicotinamida/nicotinato mononucleótido adenililtransferasa de Leishmania braziliensis. Rev. acad. colomb. cienc. exact. fis. nat. [online]. 2021, vol.45, n.176, pp.721-730.  Epub 31-Ene-2022. ISSN 0370-3908.  https://doi.org/10.18257/raccefyn.1272.

La nicotinamida/nicotinato mononucleótido adenililtransferasa (NMNAT, EC 2.7.7.1/18) desempeña una función central en la síntesis del dinucleótido de adenina y nicotinamida (NAD) debido a que en esta enzima confluyen las rutas de síntesis de novo y de reciclaje. El NAD es una molécula trascendental en el metabolismo de todos los seres vivos, principalmente en el metabolismo redox. En este estudio se presenta una nueva estrategia metodológica para la evaluación de posibles inhibidores de la NMNAT de Leishmania braziliensis (LbNMNAT). El método suprime la actividad inhibitoria cruzada con la enzima acoplada al ensayo de detección, la alcohol dehidrogenasa (ADH, EC 1.1.1.1). Experimentalmente se introdujo un paso intermedio de extracción en fase sólida de los inhibidores antes de la ejecución del sistema enzimático de detección. La implementación del paso de extracción posibilitó la evaluación específica de la enzima de interés, la LbNMNAT, sin afectar la enzima acoplada ADH. El nuevo método permitió estudiar el efecto inhibitorio de la galotanina, producto natural de especies del género Rhus (Rhus chinensis), en la actividad de la LbNMNAT.

Palabras clave : Ensayo de actividad; Nicotinamida/nicotinato mononucleótido adenilil transferasa (NMNAT); Inhibidores enzimáticos; Leishmania; Galotanina.

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