Abstract

GONGORA B, CARMENZA E. Transformación de Beauveria bassiana cepa Bb9112 con los genes de la proteína verde fluorescente y la proteasa pr1A de Metarhizium anisopliae. Rev. Colomb. Entomol. [online]. 2004, vol.30, n.1, pp.15-21. ISSN 0120-0488.

Con el propósito, en un futuro, de producir cepas mejoradas del hongo entomopatógeno Beauveria bassiana, se desarrolló un sistema de transformación del hongo basado en la resistencia al herbicida glufosinato de amonio, conferida por el gen bar. Se transformó la cepa B. bassiana Bb9112, caracterizada por su resistencia a luz UV, con el plásmido pBarGPEl, en el cual se clonó previamente el gen marcador que codifica la proteína verde fluorescente (QFF). La selección de las colonias transformantes se hizo en medio mínimo conteniendo 25 µgml del herbicida glufosinato de amonio. La expresión de la proteína OFP se confirmó por observaciones al microscopio de luz UV en los protoplastos transformados y el micelio regenerado de estos protoplastos luego de la transformación. Pruebas de patogenicidad indicaron que no existen diferencias significativas con respecto al porcentaje de patogenicidad de la cepa no transformada y las cepas transformadas con estos genes. Con el fin de aumentar la patogenicidad de la cepa Bb9112 contra la broca del café, se realizó la transformación de ésta con el plásmido pBarGPE1-pr1A, que contiene un gen de proteasa tipo subtilisina (pr1A) aislado de Metarhizium anisopliae. En la cepa transgénica la presencia del gen pr1A se identificó por PCR. La expresión de la proteína se confirmó por isoelectroenfoque y actividad enzimática.

Keywords : Entomopatógeno; Gen marcador; Gen de selección; Patogenicidad; Broca del café.