Abstract

RODRIGUEZ C., MARTHA LILIANA  and  GONGORA B., CARMENZA E. Transformación de Beauveria bassiana Bb9205 con genes pr1A, pr1J y ste1 de Metarhizium anisopliae y evaluación de su patogenicidad sobre la broca del café. Rev. Colomb. Entomol. [online]. 2005, vol.31, n.1, pp.51-58. ISSN 0120-0488.

Beauveria bassiana cepa Bb92O5 fue transformada con genes de proteasas tipo subtilinas (pr1A, pr1J) y esterasa (ste 1) aislados de Metarhizium anisopUae que están involucrados en la patogenicidad contra insectos. El objetivo del experimento fue aumentar la patogenicidad de la cepa contra la broca del caté, flypotheriemus hampei. Para esto, se donaron los genes en el plásmido pl3arOPEl que confiere resistencia al herbicida glufosinato de amonio. Se obtuvo un cultivo monoespórico de la cepa bb9205, cuya patogenicidad fue riel 78% de mortalidad contra ti. ¡lampe), usando 1 x 10⁶ esporas/ml. Con este monoespórico se produjeron protoplastos. Con respecto a la producción de protoplastos se optimizó la metodología obteniendo una concentración de 3 x l0 protoplastos/mi después del pre-tratamiento enzimático, durante 4 horas en agitación lenta a 37°C. Se realizó la transformación con los plásrnidos pbarof’El-pr 1A, pBarOE’El-pr1J y p8arOPE1-ste mediante los métodos de PEO y electroporación. Dos transformantes con el gen pr1A y uno con el gen ste 1 resistentes a 25 µ/ml del herbicida glufosinato de amonio exhibieron incremento de actividad proteolítica y esterolítica, respectivamente. Se evaluó, en pruebas de laboratorio, la patogenicidad de las cepas de . bassiana transformadas comparándolas con la cepa 13b9205 no transformada monoespórica. La expresión constitutiva de la proteasa en la cepa transgénica Bb9205-pr 1A mejoró su actividad insecticida al demostrar un incremento de mortalidad del 21,7% y una disminución del 14,3% en el tiempo de mortalidad sobre la broca del café. El transformante Bb9205-ste 1 disminuyó en un 9,5% el tiempo de mortalidad sobre broca al compararse con Bb9205 sin transformar. Los resultados indican que con el mejoramiento de cepas de &auveria, por medio de transformación genética, se puede lograr un control biológico mejor.

Keywords : Patogenicidad; Proteasas; Esterasas; Control biológico; Hypotherzemus hampei.

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