Resumo

ESPINEL, Esperanza  e  LOPEZ, Elizabeth. PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE a-AMILASA DE PENICILLIUM COMMUNE PRODUCIDA MEDIANTE FERMENTACIÓN EN FASE SÓLIDA. Rev.Colomb.Quim. [online]. 2009, vol.38, n.2, pp.191-208. ISSN 0120-2804.

Este estudio reporta la purificación y caracterización parcial de una a-amilasa producida por Penicillium commune mediante fermentación en fase sólida, empleando yuca blanca colombiana (Manihot esculenta Crantz) como soporte. La enzima fue purificada por precipitación fraccionada con sulfato de amonio, cromatografía de intercambio aniónico (DEAE-Sephadex A-50), cromatografía de filtración por gel (Sephadex G-75) y cromatografía de intercambio catiónico (CM-Sephadex C-50) obteniendo una actividad específica final de 314,82 U/mg, un grado de purificación del orden de 62 y un rendimiento de 9%. La purificación hasta la homogeneidad fue confirmada por SDS-PAGE. El peso molecular estimado fue 35 kDa. La enzima mostró máxima actividad de hidrólisis de almidón soluble con pH 6,0, y estabilidad en un intervalo de pH de 5,0-7,0. La estabilidad térmica de la enzima se presentó en el intervalo de temperatura 0-50 °C y su temperatura óptima fue 70 °C. Los iones Ca²⁺,Ba²⁺ y Ag⁺ aumentaron significativamente la actividad de la enzima, siendo el ión Ca²⁺ el que tuvo el más alto poder activador. Cu²⁺ no alteró significativamente la actividad de la enzima, mientras que Li⁺ yFe³⁺ la disminuyeron ligeramente (13%), y Co²⁺ y Hg²⁺ la disminuyeron 25% y 40% respectivamente. Los valores de Km y Vmáx fueron calculados usando la linealización de Lineweaver-Burk, con el resultado K_m = 0,48 mg/mL y V_máx = 5,85 µmol glucosa/min. Entre los principales productos de hidrólisis del almidón de yuca se encuentran la maltosa y la glucosa, este resultado proporciona evidencia de que la enzima es capaz de romper los enlaces glicosídicos a-1,4 del almidón, comportamiento característico de una a-amilasa.

Palavras-chave : a-amilasa; Penicillium commune; fermentación en fase sólida; yuca blanca colombiana.

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