Abstract

JUTINICO SHUBACH, Laura Marcela; CONTRERAS RODRIGUEZ, Luis Ernesto; GARCIA CASTANEDA, Javier Eduardo  and  RAMIREZ HERNANDEZ, María Helena. Identificação funcional e localização subcelular da NAD quinase no parasita protozoário Giardia intestinalis. Rev.Colomb.Quim. [online]. 2019, vol.48, n.1, pp.16-25. ISSN 0120-2804.  https://doi.org/10.15446/rev.colomb.quim.v48n1.75273.

A nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (NADP) é uma biomolécula essencial que participa na homeostase redox e na síntese de importantes compostos de sinalização. A NAD quinase (NADK) (EC 2.7.1.23 / 2.7.1.86) é a única enzima capaz de sintetizar o NADP. Este estudo apresenta uma abordagem do metabolismo do NADP no parasita Giardia intestinalis que causa giardíase, uma doença de alta prevalência na América, Ásia e África. Através de ferramentas de bioinformática, um candidato a enzima NADK foi identificado no parasita, cuja modelagem de estrutura terciária, demonstra motivos distintos e universais de NADKs caracterizadas. A correspondente proteína recombinante (His-GINADK) foi expressa em Escherichia coli BL21 (DE3) e a sua purificação parcial foi conseguida por cromatografia de afinidade com níquel. A identificação funcional, que mostrou a síntese de NADP, foi completada através de ensaios enzimáticos avaliados por RP-HPLC. Uma localização citosólica da enzima GINADK endógena foi observada em trofozoítos ao longo da análise de imunofluorescência indireta, utilizando anticorpos policlonais produzidos em camundongos, imunizados com a proteína His-GINADK purificada de corpos de inclusão. Em conjunto, nossos resultados contribuem para a compreensão do metabolismo do NADP e da importância fisiológica do NADK no modelo de Giardia.

Keywords : localização citosólica; síntese de NADP; proteína recombinante.

        · abstract in English | Spanish     · text in English     · English ( pdf )