Introducción.

En el mundo, las angiostrongilosis de mayor impacto en salud humana y animal son ocasionadas por Angiostrongylus cantonensis, A. costaricensis y A. vasorum. En las personas, las formas clínicas son la meningitis eosinofílica y la angiostrongilosis abdominal, y, en los mamíferos cánidos, el daño cardiopulmonar. Se las consideran enfermedades emergentes debido a la propagación mundial del caracol africano Lissachatina fulica, un huésped intermediario de los parásitos.

Los escasos métodos de identificación de Angiostrongylus spp. no son muy específicos ni sensibles y son costosos. Se necesita urgentemente una herramienta diagnóstica asequible, sensible y específica para el manejo de las angiostrongilosis humana y la animal.

Objetivo.

Desarrollar una prueba de PCR múltiple en tiempo real (qPCR) para identificar las tres especies patógenas de Angiostrongylus.

Materiales y métodos.

Mediante un análisis bioinformático se seleccionó una secuencia del genoma ITS-2 de Angiostrongylus para garantizar la especificidad del cebador y las sondas. El ADN de los parásitos adultos (control positivo) y de las larvas se extrajo con el estuche DNeasyBlood & Tissue®.

Las reacciones de la PCR cuantitativa se ejecutaron en un termociclador Smartcycler Cepheid®, usando el estuche de mezcla maestra QuantiTect®. Como control negativo, se utilizó ADN humano, de otros parásitos y del caracol africano.

Resultados.

Los valores del ciclo umbral para los controles positivos de ADN fueron: 21 para Angiostrongylus cantonensis, 22 para A. costaricensis y 31 para A. vasorum. En los controles negativos, el ciclo umbral fue cero. La qPCR mostró una eficiencia de amplificación de 2 (100 %).

Conclusiones.

En el laboratorio se estandarizó una qPCR múltiple para tres especies clínicamente significativas de Angiostrongylus.

        · abstract in English     · text in Spanish     · Spanish ( pdf )