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Agronomía Colombiana

versão impressa ISSN 0120-9965

Resumo

VEGA-VELA, Nelson Enrique  e  CHACON SANCHEZ, María Isabel. Aislamiento de DNA de alta calidad en 16 especies aromáticas y medicinales Colombianas utilizando columnas de extracción de sílica. Agron. colomb. [online]. 2011, vol.29, n.3, pp.349-357. ISSN 0120-9965.

Las especies vegetales aromáticas y medicinales son un recurso valioso para la investigación y el desarrollo de agentes farmacéuticos, agrícolas y de alimentos, debido a la alta cantidad de fitoquímicos bioactivos que contienen. Sin embargo, estos compuestos son un obstáculo en el aislamiento de ADN de alta calidad adecuado para análisis genéticos. En el presente artículo reportamos un protocolo que optimiza el uso del detergente catiónico CTAB y el agente reductor β-mercaptoetanol en la lisis celular. La eliminación de metabolitos secundarios como polisacáridos y polifenoles que típicamente co-aíslan con el ADN, se logró utilizando las propiedades químicas desnaturalizantes del catión guanidinio que junto con la especificidad química adsorbente de la sílica, resultó en la purificación de ADN de alta calidad adecuado para la digestión por enzimas de restricción y óptimo para la amplificación por PCR de marcadores moleculares tipo AFLPs. Este protocolo se evaluó en 16 especies vegetales aromáticas y medicinales colombianas promisorias por sus aceites esenciales. Los resultados obtenidos permiten sugerir que este procedimiento podría ser apropiado para su aplicación en otras especies, tejidos y tipos de muestras recalcitrantes a la extracción de ADN

Palavras-chave : agente caotrópico; catión guanidinio; columnas de extracción de sílica; kit de extracción de ácidos nucleicos; sales de guanidinio; marcadores moleculares.

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