Abstract

ZABALETA VANEGAS, Milet; YAYA LANCHEROS, Mary Luz  and  CHAPARRO GIRALDO, Alejandro. Comparación de dos kits de RT-PCR en la detección de ARNm de dos genes endógenos de papa (Solanum tuberosum spp. Andígena) . Rev. colomb. biotecnol [online]. 2008, vol.10, n.2, pp.104-110. ISSN 0123-3475.

RT-PCR es una técnica en la que usando ARN mensajero como molde, se obtiene complementario o cADN por transcripción inversa, y luego se amplifica uno de los cADN por PCR, mediante el uso de primers específicos. Esta técnica permite realizar estudios de expresión, a nivel de ARN mensajero. Con el propósito de implementar la técnica en papa (Solanum tuberosum spp. Andígena), se utilizaron plántulas cultivadas in vitri de la variedad Pastusa Suprema. Inicialmente se establecieron las condiciones para la extracción de ARN total usando el kit TRizol® Reagent de Invitrogen™, con el que se obtuvieron excelentes resultados. Este ARN se usó como molde para evaluar dos kits: "ONE Step superScript™" y "SuperScript™ First Strand Syntesis For RT-PCR SS™ II RT", de Invitrogen™. Se usaron primers específicos para dos genes endógenos: cox y actina. El primero es un gen mitocondrial y el segundo es un gen nuclear. Se observaron señales claras y diferenciables de amplificación para cox, utilizando el kit "ONE Step superScript™", con un tamaño esperado de 96 pb. Para actina, se observó una señal clara de amplificación de 300 pb, con el kit "SuperScript™ First Strand Syntesis For RT-PCR SS™ II RT".

Keywords : Solanum tuberosum; cox; actina; RT-PCR; papa.

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