Section Medica

Virulencia de Beauveria bassiana y Triflumuron sobre Rhodnius prolixus y R. pallescens (Hemiptera: Reduviidae)

Virulence of Beauveria bassiana and Triflumuron on Rhodnius prolixus and R. pallescens (Hemiptera: Reduviidae)

YAMILLE SALDARRIAGA O.¹ CARMEN A. VASQUEZ P.², JAIME DE JESUS CALLE O³

¹Autora para correspondencia: Licenciada en Biologia y Quimica. M.Sc. Instituto de Biologia. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Corporacion de Patologias Tropicales. Universidad de Antioquia. A.A. 1226. Medellin, Colombia. FAX: 2330120. E-mail:_ysaldar@matematicas.udea.edu.co

² Biologa, aspirante atitulo de Master en ciencias. Investigador Asociado al Grupo de Micologia. Instituto de Biologia. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Corporacion de Patologias Tropicales. Universidad de Antioquia. E-mail: avasquez@matematicas.udea.edu.co

³Biologo. M.Sc. PhD. Instituto de Biologia. Facultad de Ciencias Exaclas y Naturales. Corporacion de Patologias Tropicales. Universidad de Antioquia. A A 1226. Medellin. Colombia. Fax 2330120. E-mail: jcalle@matematicas.udea.edu.co

Resumen. Se evaluo la virulencia de la mezcla de Beauveria bassiana y Triflumuron sobre R. prolixus y R. pallescens. Los bioensayos consistieron en la aspersion de suspensiones de conidios de B. bassiana a concentraciones de 3x10⁵ 1x10⁷, y 3x10⁸ conidios/ml, aspersiones con el insecticida Triflumuron a 0,05; 0,025 y 0,0125 mg/ml y una mezcla de Triflumuron y B. bassiana sobre los insectos. Se comparo la respuesta de mortandad y conidiacion del hongo sobre los trialominos en funcion del tiempo y la concentration. Los resultados fueron variables: tanto R. prolixus como R. pallescens presentaron diferencias significativas entre todos los tratamientos con B. bassiana a las concentraciones de 3x10⁸ (X²= 148.4), 1 x 10⁷ CX-= 1 1 1.6) y 3x 10⁵ conidios/ml (X²= 195.5); 3x10s (X²= 174.0). 1 x 107 (X²=14.35) y 3x 10⁵ conidios/ ml (X²=1 8.85), respectivamente. R. prolixus mostro tiempos mas cortos de supervivencia en las concentraciones de 3x10⁸ y lx 10⁷ conidios/ml de B. bassiana. La conidiacion de B. bassiana sobre los insectos presento diferencias significativas en cada tratamiento y especie de insecto, con R. prolixus mostro un menor tiempo a conidiacion. A 3x 10⁸conidios/ml de B. bassiana utilizando tanto el hongo solo como con el insecticida produjo un menor tiempo de conidiacion en las dos especies. Se resalta la importancia de estos resultados al enmarcarlos dentro de uno de los lineamientos que lidera el programa de manejo integrado de plagas establecido inicialmente por Hurpin en 1966 quien afirma que al tratar los insectos con concentraciones altas de conidias y bajas concentraciones del insecticida los hacen mas susceptibles a la conidiacion.

Palabras clave: Insecticida. Triatomino. Control Integrado. Entomopatogeno. Combinacion.

Summary. The virulence of a combination of Beauveria bassiana and Triflumuron on R. prolixus and R. pallescens was evaluated. The bioassays consisted of spraying the insects with conidial suspensions of B. bassiana in concentrations of 3X10⁵, 1X10⁷, and 3X10⁸conidia/ml, with Triflumuron insecticide at 0,05; 0,025; and 0,0125 ug/ul and with a mixture of Triflumuron and B. bassiana. The mortality response and conidiation of the fungi on the triatomine were compared as a function of time and the concentration applied. The results were variable: both R. proxilus and R. pallescens differed significantly between all B. bassiana treatments at concentrations of 3x10⁸ (X²= 148.4), 1 x 10⁷ CX-= 1 1 1.6) y 3x 10⁵ and 3X10⁵ conidia/ml (X²= 195.5); 3x10⁵ (X²= 174.0). 1 x 107 (X²=l4.35) and 3x 10⁵conidia/ml (X²= 18.85), respectively. R. prolixus exhibited shorter survival limes than R. pallescens at concentrations of 3X10⁸ and 1X10⁷ conidia/ml of B. bassiana. The conidiation of B. bassiana on the insect differed significantly among treatments and species of insect, with R. prolixus showing shorter times to conidiation. At 3X10⁸ conidia/ml concentration of B. bassiana, either alone or with the insecticide, there was a lower time to conidiation in both species. The importance of these results is highlighted within one of the tenants put forward in integrated pest management programs initially established by Hurpin in 1966, which affirms that treating insects with high concentrations of conidia and low insecticide concentrations makes them more susceptible to conidiation.

Key words: Insecticide. Triatomine. Integrated control. Entomopathogen. Combination.

Introduccion

Los insectos hemipteros hematofagos de la familia Reduviidae, R. pallescens Barber y R. prolixus (Stahl) son dos de los vectores de mayor imporlancia para Colombia como transmisores de la enfermedad de Chagas a nivel silvestre y domiciliar (Lent y Wygodzinsky 1979; Angulo y Sandoval 2001). Se encuentran distribuidos principalmente en el norte, centro y oriente del pais (Guhl y Nicholls 2001). La enfermedad de Chagas o tripanosomiasis americana es un problema de salud publica en la zona oriental del territorio colombiano situado por debajo de los 2.000 msnm. Afecta el 1% de la poblacion y ocasiona, en el pais, costos economicos altos en el tratamiento de la cardiopatia chagasica cronica, una de las anomalfas de esta enfermedad (Guhl y Nicholls 2001). En America latina se estima que 100 millones de personas se encuentran en zonas de alto riesgo, 18 millones de personas estan infectadas con el parasito Tripanosoma cruzi, y anualmente aparecen 500.000 casos (Schofield 1997). En Colombia aproximadamente 1,3 millones de personas estan infectadas, 3,6 millones viven en zonas de alto riesgo y anualmente aparecen 40.000 casos (Moncayo 1997). A nivel social y economico, esta enfermedad parasitaria se considera como la mas importante del continente americano (World Bank 1993).

En ausencia de vacuna o de tratamiento eficaz contra la enfermedad el control antiveclorial se ha basado en interrumpir la transmision del parasito en el domicilio y el peridomicilio, utilizando insecticidas quimicos como piretroides, organoclorados, organofosforados y carbamatos (Diaz y Schofield 1999). Este control ha sido empleado en Colombia en el area domiciliar avalado por el Ministerio de Salud (Schmunis et al. 1996; Guhl y Nicholls 2001), a pesar de la resistencia adquirida por parte del vector y de la contaminacion ambienlal ocasionada (OMS 1991). Entre las alternativas de lucha antivectorial se encuentra el uso de los hongos entomopalogenos como Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. y Metarhizium anisopliae (Anderson et al. 1989; Romafia y Fargues 1992; Fargues y Luz 2000; Lecuona et al. 2001; Pineda et al. 2002).

Una de las orientaciones de la lucha integrada contra insectos de importancia para el hombre consiste en aplicar simultaneamente germenes entomopatogenos con un agente plaguicida. Este metodo de lucha biologica fue explorado en Rusia (Ferron 1970) sobre la hipotesis de que dosis variables de insecticidas alteran el estado fisiologico del insecto y establecen consecutivarnente una intoxicacion que sensibiliza al establecimiento de la enfermedad por el agente biologico (Telenga et al. 1968).

Uno de los agentes microbianos mas utilizados en el control de plagas ha sido el hongo entomopatogeno B. bassiana. En Colombia su efecto ha sido evaluado especialmente sobre la broca del cafe, Hypothenemus hampei (Ferrari) (Coleoptera: Scolytidae), y asi mismo su compatibilidad con insecticidas, herbicidas y funguicidas, encontrandose un efecto fungistatico con la mayoia de los insecticidas evaluados y solo en unos pocos un efecto deletereo (Rivera et al. 1994; Ibarra y Varela 2002; Vasquez et al. 2004).

En estudios realizados por Pristavko (1966) se demostro la alta eficiencia del hongo B. bassiana en concentraciones de 5 x 10⁴ conidios/ml en asociacion con pequeñas dosis de DDT (0,00016 mg i.a.) en el control de Leptinotarsa decemlineata (Say) (Coleoptera: Chrysomelidae). El resultado de esta accion conjunta del insecticida (DDT), el hongo, la microbiota intestinal en el insecto y la variacion del pH de la hemolinfa contribuyen en el proceso patologico del desarrollo de la enfermedad (Rivera et al. 1994). B. bassiana tambien ha sido evaluado sobre vectores de importancia en salud humana como vectores del parasito que produce la enfermedad de Chagas (Romana 1992; Vasquez et al. 2004).

El Triflumuron 2 cloro-N-[[4-(Trifluoro-metoxy) fenil ]amino]Carbonil]benzamida es un insecticida del grupo de las benzoilfenilurea (BFU) que se comporta como un inhibidor de la sintesis de quitina de los insectos. Ha sido evaluado en combinacion con hongos entomopatogenos como B. bassiana, demostrando compatibilidad siendo esta dependiente del tipo de quimico y concentracion utilizada (Fargues 1973; Anderson et al. 1989; Rivera et al. 1994; Soltani et al. 1996; Vasquez et al. 2004).

El insecticida Triflumuron ha sido evaluado sobre diferentes especies de insectos (ninfas o larvas) de importancia economica, encontrandose que la supervivencia de los insectos varia dependiendo de la concentracion del insecticida. Triflumuron dificulta la formacion de quitina en los insectos holometabolos y hemimelabolos. Utilizado a concentraciones altas tiene propiedades ovicidas y es mas efectivo a medida que aumenta la edad de los huevos (Chang 1979; Hammann y Sirrenberg 1980; Mohsen y Medhi 1989; Smith y Grigarick 1989).

Partiendo de la compatibilidad existente entre el Triflumuron y el hongo entomopatogeno B. bassiana se planteo como objetivo evaluar el efecto de esta mezcla sobre la supervivencia de ninfas de R. prolixus y R. pallescens de V estado de desarrollo, en comparacion con el hongo solo y el Triflumuron solo, sobre los mismos vectores. Como hipotesis se planted que la supervivencia y conidiacion de R. prolixus y R. pallescens se realiza en un tiempo menor a lo esperado que cuando se aplica el entomopatogeno solo.

Materiales y Metodos

El estudio se realizo en el laboratorio de Micologia y Control Biologico del Instituto de Biologia de la Universidad de Antioquia durante el 2003.

Insectos

Las colonias de triatominos (R. prolixus y R. pallescens) procedieron del laboratorio de Control Biologico del Instituto de Biologia de la Universidad de Antioquia, criados y mantenidos en condiciones de humedad relativa y temperatura optimos para su crecimiento y desarrollo (80% HR y 27°C) en camara climatizada (WTBbinder 78532 Tuttlingen/Germany). Para el estudio se seleccionaron 4 lotes de insectos, cada uno con 15 ninfas de V estado de desarrollo. Los insectos se alimentaron dos veces por semana sobre gallina (Gallus gallus) durante una hora y veinticuatro horas antes de cada ensayo para estimular la production de la hormona de muda.

Hongo entomopatogeno

El aislamiento del hongo entomopatogeno B. bassiana UdeA₁₃ se obtuvo a partir del cadaver de un triatomino R. pallescens colectado en la region de San Onofre (Departamento de Sucre, Colombia). El aislamiento se mantuvo en Agar Saboraud Dextrosa(Oxoid Ltda., Basinastoke, Hampshire) a 25°C durante 10 dias para obtener los conidios. Los conidios se cosecharon utilizando una barra de vidrio y una solucion acuosa esteril de 0,5% de Tween 80 (Sigma, St. Louis, MO, USA) como diluyente para dispersar y mantener su uniformidad. Las suspensiones fueron diluidas en agua destilada esteril y homogenizadas en un vortex Heidolph Reax Control a 2500 rpm (Germany 09441 /707-124) y se contaron en la camara de Neubauer (Boeco-Germany). Con base en los resultados obtenidos por Romaña y Fargues (1992) y Pineda et al. (2002) se prepararon trcs concentraciones del hongo 3 x 10⁸, 1 x lO⁷ y 3 x l0 ⁵conidios/ml.

Insecticida

El Triflumuron (Starycide^R S.C. 480, Bayer), conocido tambien como SIR 8514, sintetizado en Alemania por el laboratorio de investigaciones quimicas de Bayer en 1975, fue obtenido en la casa comercial (IVANAGRO) en la ciudad de Medellin (Colombia). El producto se presenta como una suspension concenlrada (480g/l), a partir de la cual se prepararon las concentraciones de 0,05; 0,025 y 0,0125 ug/u1, que se definieron con base en los resultados de trabajos anteriores (Vasquez et al. 2002). La empresa Bayer recomienda para el control de insectos, especialmente larvas, utilizar Slarycide^R 100 ml en 100 l de agua, con la que se pueden fumigar alrededor de 20 casas (Hammann y Sirrenberg 1980).

Aplicacion de la combinacion de B. bassiana y Triflumuron sobre insectos

Bioensayos

Para el ensayo se tomaron lotes de 15 ninfas con cuatro repeticiones de cada concentracion evaluada. El hongo B. bassiana y el insecticida se utilizaron como testigos positivos y el agua destilada esteril como testigo negativo. Los insectos tratados fueron mantenidos dentro de cristalizadores plastieos de 288 cm³ cubicrtos con muselina, a cada uno de los cuales se les introdujo una lamina de carton paja para facilitar el desplazamiento y la alimentacion de los insectos (Pineda et al. 2002).

La aplicacion de los tratamientos se realizo mediante el metodo de aspersion utilizando un sistema emulador de la Torre de Pulverizacion de Burgerjon (1956), con un ajuste de presion de 6 psi, un volumen de 30 ml y un tiempo de 1 a 2 minutos por aspersion para todos los ensayos. Los lotes de Insectos Tratamiento se colocaron sobre un pequeño platon incorporado hermeticamente a la base de la torre de pulverizacion, girando mientras se hizo la aspersion para garantizar homogenidad en la aplicacion de la solucion. Despues de ser asperjada la solucion se continuo el platon siguio girando por uno o dos minutos mas para permitir la caida de la nube sobre los insectos tratados. Diariamente, durante un mes, se controlo la supervivcncia de los insectos y/o la aparicion de la muda y posible presencia de malformaciones de los insectos supervivientes al tratamiento.

Analisis estadistico

Para tener una buena comprension de las respuestas obtenidas en la investigacion tanto de supervivencia como de conidiacion se codifico como grupo cada tratamiento a saber: como grupo 1 la solucion fungica sola (3x 10⁸, l xlO⁷ y 3x 10⁵ conidios/ml), como grupos 2, 3, 4 la combinacion de cada concentracion del hongo y el Triflumuron y como grupos 5, 6y 7 el Triflumuron solo (0,0125; 0,0250 y 0,050 ug/pl).

El analisis de supervivencia para R. prolixus y R. pallescens se realizo utilizando la curva del analisis de supervivencia de Kaplan y Meier y la prueba de Gehan generalizada para todos los tratamientos, con el paquete estadistico Statistica 98 (Statsoft Inc., Tulsa, USA). Para la comparacion esladistica de las diferentes curvas de supervivencia se aplico la correccion de Bonferroni suponiendo un nivel de significancia de &alpha=0,05. Para cada cspecie primero se analizaron todos los tratamientos entre si, luego cada grupo y finalmente se compararon los grupos mas relevantes segun los resultados encontrados. La base de comparacion se hizo partiendo de la concentracion de la solucion conidial de B. bassiana (3x10⁸ 1 x 10⁷ y 3x10⁵ conidios/ml).

Resultados y Discusion

La respuesta de supervivencia de ninfas de V estado de desarrollo de R. prolixus y R. pallescens al ser sometidas a los tratamientos presentaron diferencias significativas en cada especie asi:

Para R. prolixus, en la concentracion 3x10⁸ se presentaron diferencias significativas entre los tratamientos 1, 2-4 y 5- 7 (X²= 148.4 y P<0.05). El menor tiempo de supervivencia lo presento el tratamiento 1 (B. bassiana), mientras que los tratamientos del 2-4 y 5-7 presentaron TL₅₀ mayores: entre 6,0-7,5 y 29 dias, respectivamente (Tabla 1).

Para la concentracion de 1 x 10⁷conidios/ ml igualmente se encontraron diferencias significativas entre todos los tratamientos 1-7 (x²=] 11.6 y P<0.05). En la concentracion 1 x 10⁷ conidios/ml hubo diferencias estadisticas entre los tratamientos 1-4 y 5-7, con un TL₅₀ que vario entre 6,5-8,0 y 29 dias respectivamente (Tabla 1).

Para la concentracion de 3x10⁵ conidios/ ml la comparacion entre todos los tratamientos mostro diferencias significativas (X²=195.5 y P<0.05). Los tratamientos 1 y 3 mostraron diferencias con respecto a los tratamientos 5 y 6 (x²=263 y P<0.05) (Tabla 1). Los tratamientos 2,4 y 7 tuvieron diferencias estadisticas con cl tratamiento 1 (X² =l95.5 y P<0.05).Asi mismo estos tratamientos presentaron diferencias significativas con el 5 y 6 (x²=56.3 y P<0.05) (Tabla 1). El TL₅₀ mayor lo presento el tratamiento 5 y 6 (29 dias) mientras el menor lo presentaron los tratamientos 4 y 7.

En R. pallescens para la concentracion de 3x10⁸ conidios/ml se encontraron igualmente diferencias significativas entre todos los tratamientos (X² = 14.35 y P<0.05). No se encontraron diferencias significativas al comparar los tratamientos 5-7, con una TL₅₀ entre 10-11 dias, ni entre los tratamientos 2-4 eon TL₅₀ entre 6-7 dias (Tabla 1).

Para la concentracion de 1 x 10⁷ conidios/ ml se encontraron diferencias estadisticas entre los siete tratamientos (X²=1435 y P<0.05). Entre los tratamientos 2-7 no se encontraron diferencias significativas, en donde los TL₅₀oscilaron entre 6,5 y 8 dias. B. bassiana presento un TL₅₀ de 9 dias (Tabla 1).

La conccnlracion de 3x10⁵ conidios/ml presento diferencias signiticativas entre los siete tratamientos (x²= 18.85 y P<0.05). B. bassiana solo tuvo un TL₅₀ de 9 dias. Al comparar cste resultado con los demas tratamientos se encontro que no hubo diferencia estadistica entre los tratamientos 1, 5, 6 y 7 con TL₅₀ que oscilaron entre 7 y 9 dias. No se encontraron diferencias estadfsticas entre los tralainientos 2. 3 y 4 mostrando TL₅₀ entre 8-9 dias (Tabla 1).

Respecto a la conidiacion en R. prolixus sc encontraron diferencias significativas en las concentraciones 3x10⁸ y 3x10⁵ conidios/ml (X²= 15.94 y P<0.05 y AT'=22.67 y P<0.05) respectivamente. En la concentracion de 1x10⁷ conidios/ml no se hallaron diferencias entre el tratamiento 1 y los tratamientos 2-4, arrojando un TC₅₀ (tiempo de conidiacion) entre 7,5 y 9 dias (Tabla 2).

Para R. pallescens se encontraron diferencias significativas en las tres concentraciones (X²= 174.0 y P<0.05). Para la concentracion de 3x10⁸ y 1x10⁷ conidios/ml se encontraron diferencias entre el tratamiento 1 y los tratamientos 2-4 con TC₅₀ entre 7,5 y 10 dias. En la concentracion 3x10⁵ conidios/ml se observe diferencia estadistica entre los cuatro tratamientos, asi: hubo diferencia entre el tratamiento 1 y 2, entre el tratamiento 2 y 4. y se encontro similitud entre los tratamientos 2-4 y 3-4. Los tratamientos 2 y 3 presentaron el mismo TC₅₀ de 9 dias, y los tratamientos 1 y 4 teso de 10 dias (Tabla 2).

Al comparar la respuesta entre ambas especies frente a la aplicacion de la mezcla se encontro que para R. prolixus, la conidiacion del hongo sobre el insecto se demoro mas para expresarse a una menor concentracion de B. bassiana.

Los investigadores Pineda et al. (2002) evaluaron a R. ecuadoriensis con B. bassiana encontrando un TL₅₀de 6 dias para la concentracion de 3x10⁸ conidios/ml frente a R. prolixus, el cual presento en este estudio un TL₅₀ de 5 dias bajo la misma concentracion y para el mismo aislamiento. Esta similitud en los resultados podria explicarse por la pertenencia de las dos especies a un mismo genero y con caracteristicas de habitat parecidas ya que R. prolixus esta adaptado a ambientes domiciliares y R. ecuadoriensis tanto al silvestre como al domiciliar (Pineda et al. 2002).

La respuesta de los insectos (supervivencia) a la aplicacion de la mezcla comparandola con la aplicacion del hongo solo fue muy variable teniendo en cuenta que se presentan diferencias entre uno y cuatro dias para todas las concentraciones evaluadas y en las dos especies de triatominos. Esta respuesta de similitud en el comportamiento de la mezcla frente al hongo solo, podria deberse al daño que ocasiona Triflumuron sobre la cuticula del insecto facilitando deesta forma la entrada del tubo germinal de la espora en el cuerpo del triatomino (Castellanos 1997).

Este resultado es relevante cuando se piensa en los principios del manejo integrado de plagas (MIP) que parten de la utilizacion de dos componentes como es un insecticida a dosis subletales y un microorganismo, en este caso un hongo entomopatogeno a dosis altas que igualmente no son dañinas al medio ambiente. Se espera que con la utilizacion de los dos componentes que se complementen en el MIP, asociado al trabajo con la comunidad implicada en el problema, se reduzcan los daños ocasionados por los insectos de importancia y no se afecte en gran medida a los ecosistemas.

El hecho de que la germinacion del hongo sobre el cadaver del triatomino fue en algunas concentraciones inhibida ligeramente (datos no mostrados) cuando se realizo el tratamiento con el insecticida, podria deberse a una accion fungistatica de Triflumuron sobre B. bassiana. Esto teniendo en cuenta que los hongos entomopatogenos tienen en su pared quitina, de forma que pasado algiin tiempo de adaptacion y resistencia del hongo a la accion del quimico, continua con su proceso de germinacion y crecimiento micelial (Castellanos 1997). de esta manera finalmente lograria sobrepasar el porcentaje de germinacion y conidiacion del tratamiento con el hongo solo sobre los triatominos, como se observo en el presente estudio.

Anderson et al. (1989) en el estudio realizado sobre el escarabajo de la papa encontraron que B. bassiana asociado a Triflumuron, Abamectin, y Turingiensis no fue inhibido y su accion conjunta sobre el insecto blanco no mostro gran diferencia en la mortalidad entre B. bassiana solo y la combinacion con los agentes quimicos. Adicionalmente la incidencia de la conidiacion tampoco difirio entre los dos tratamientos; sin embargo, la accion conjunta del hongo y el agente quimico introducen multiples factores de mortalidad, lo que puede represcntar una ventaja en el manejo de plagas y retrasar alguna expresion de resistencia a nuevos insecticidas. Estos resultados fueron similares con los hallados en este estudio cuando se encontro que la expresion de la conidiacion en R. prolixus y R. pallescens no difirio entre los dos tratamientos; sin embargo nuestros resultados de mortalidad en los insectos tratados presentaron diferencias con respecto a los encontrados por Anderson et al. (1989) sobre el coleoptero.

La supervivencia de los insectos tratados con Triflumuron solo, vario para cada especie evaluada. A mayor concentracion del insecticida aplicado la supervivencia sc redujo. Fue cuestionable la respuesta que presento Triflumuron solo sobre R. prolixus frente a la supervivencia. Este resultado no se podria explicar de forma certera y se puede suponer una falla humana en la preparacion de las diferentes diluciones del insecticida antes de su aplicacion. Sin embargo, la respuesta de R. pallescens fue mas homogenea y podria dar bases para comprender el efecto de este insecticida sobre los triatominos.

Las concentraciones de Triflumuron evaluadas en el presente estudio son muy bajas; diez veces por debajo de la dosificacion rccomendada por la casa fabricante (Bayer) para el control de insectos (0,48 ug/ul en 100 l para rociar 20 casas), lo que podria explicar la reduccion del efecto letal de Triflumuron sobre los triatominos (Hammann y Sirrenberg 1980), tanto en su aplicacion solo como en combinacion con el hongo. Este efecto deletereo y letal se evidencio en la morfologia de los insectos que pasaron al estado adulto o murieron en su intento o aquellos que sobrevivieron no mas de 30 dias postratamiento. Chang (1979), Hammann y Sirrenberg (1980), Picollo de Villar et al. (1987), Soltani et al. (1996) y Vasquez et al. (2002) evaluaron Triflumuron sobre diferentes especies de insectos reportando un alto porcentaje de adultos o ninfas con daños morfologicos antes y despues de mudar totalmente. Los daños morfologicos encontrados en los insectos en el presente trabajo se vieron especialmente en escutelo, proboscide, genitalia, tejido conectivo, y en mayor proporcion en las alas, concordando estos resultados con los obtenidos por los investigadores anteriores, teniendo en cuenta que Triflumuron es larvicida por excelencia.

Para R. prolixus la solucion fungica sola ejercio un efecto mayor de mortalidad en las dos primeras concentraciones 3x10⁸ y 1x10⁷ conidios/ml, seguido por el efecto letal de la mezcla en estas dos mismas concentraciones y por ultimo el insecticida que produjo una mayor supervivencia de las ninfas tratadas. La gran diferencia en los TL₅₀entre los tratamientos 1 -4 con respecto a los tratamientos 5-7 (Triflumuron) se podria explicar primero porque como se dijo antes, las concentraciones de Triflumuron utilizadas en este estudio son bajas con respecto a las concentraciones recomendadas para que actue como un insecticida. Adicionalmente el efecto de un regulador de crecimiento depende del momento (en su metamorfosis) y la concentracion aplicada, puesto que son insecticidas mas especificos que los hasta ahora utilizados para control de insectos de importancia para el hombre (Hammann y Sirrenberg 1980). Los investigadores Romaña y Fargues (1992), Arroyave (1995) y Pineda et al. (2002) realizaron estudios en ninfas de I y V estado de desarrollo de Rhodnius utilizando las tres concentraciones de B. bassiana evaluadas en este trabajo, encontrando TL₅₀desde 4,63 a 7 dias y una conidiacion del 100%. Los resultados de tiempos de conidiacion de este estudio no coinciden totalmente con los anteriores trabajos, ya que la aplicacion de la mezcla y el hongo solo presentaron tiempos medios de conidiacion despues de los siete dias. Las especies de triatominos evaluadas en todos los anteriores estudios fueron diferentes, pero del mismo genero. Adicionalmente la forma de aplicacion del inoculo fungico vario en este estudio, en donde se realizo por aspersion y en los anteriores trabajos fueron realizadas de forma indirecta a traves de lonas de algodon inoculadas con el hongo para depositar alli los insectos tratamiento.

Lecuona et al. (2001) evaluo B. bassiana a concentracion de 1x10⁸ conidios/ml sobre T. infestans principal vector de la enfermedad de Chagas para Argentina encontrando tiempos de mortalidad entre 6,5 y 7,3 dias con un 100% de mortalidad. Estos resultados fueron similares a los del presente estudio en los tiempos de mortalidad, pero difiriendo con R. pallescens donde los tiempos de mortalidad fueron superiores a 8 dias.

En cuanto a las respuestas de conidiacion sobre los cadaveres de los insectos de ambas especies la muscardina de B. bassiana aparecio al segundo dia de estar los insectos en camara humeda. Sin embargo, en esta conidiacion podria decirse que aumento gradualmente el desarrollo del micelio sobre el insecto. Se observaron ademas diferencias desde el punto de vista cualitativo (datos no presentados); asi la muscardina blanca aparecio mas rapido sobre el cadaver del insecto con la aplicacion de la mezcla que con el hongo solo; su textura fue mas tupida con un area de invasion mas extensa, empezando por las areas intersegmentales principalmente patas, proboscide, escutelo y finalmente abdomen y tejido conectivo, segun lo descrito por Tanada y Kaya (1993); en contraste con el comportamiento del tratamiento con el hongo solo, donde su invasion aparecio en igual orden pero en las areas intersegmentales, la muscardina aparecio con menos densidad y mas polvoso. Estos resultados fueron similares con los de Vasquez et al. (2005), cuando se evaluo el comportamiento de B. bassiana UdeA₁₃ sobre R. prolixus de V estado de desarrollo a las mismas concentraciones evaluadas en este trabajo.

La mortalidad de R. prolixus y R. pallescens asociada a la aplicacion de B. bassiana en combinacion con Triflumuron dependio en gran medida de la alta concentracion del hongo y baja del insecticida aplicado. R. pallescens tuvo mayor susceptibilidad al efecto de la mezcla del insecticida y el hongo, especialmente en las concentraciones 3x10⁸sup y 1x10⁷ conidios/ml. La concentracion 3x10⁸ conidios/ml de B. bassiana utilizado solo o en combinacion produjo en menor tiempo la conidiacion en ambas especies de triatominos.

Aunque dentro de la hipotesis planteada al inicio de este trabajo se esperaba que el efecto de la mezcla del insecticida a concentraciones subletales y el hongo entomopatogeno a concentraciones altas fuera mayor al efecto causado por la aplicacion del hongo o el insecticida solos, se encontro que el efecto de la aplicacion de la mezcla sobre la supervivencia de los insectos fue levemente mayor sobre los otros dos parametros evaluados; lo que sugiere realizar otras pruebas en laboratorio y en campo para evaluar que otros factores pueden aumentar o disminuir la respuesta de los agentes involucrados en este estudio.

En la literatura revisada se encontraron estudios relacionados con el efecto de insecticidas sobre insectos plaga de importancia economica y la patogenicidad de hongos entomopatogenos sobre estos. Hay pocos estudios relacionados con el efecto causado por la utilizacion conjunta de insecticidas y hongos entomopatogenos sobre insectos. Dentro del manejo integrado de plagas, la utilizacion de ambos (el insecticida y el microorganismo), como el modelo evaluado en este estudio, podrian servir como una base para futuras investigaciones constituyendose en una alternativa menos costosa.

Agradecimientos

Los autores agradecen a los profesores Fabio Pineda G., Ana Isabel Gutierrez y Nadya Cardona por el aporte en la redaccion del articulo y Abel Diaz Cadavid por el analisis estadistico de la investigacion. A la Corporacion Academica para el Estudio de Patologias Tropicales, al CODI y a los investigadores del Grupo de Micologia y de Control Biologico del Instituto de Biologia de la Universidad de Antioquia por el apoyo logistico y la financiacion de esta investisacion.

Literatura citada

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Recibido: 30-mar-04 - Aceptado: 12-jun-05