INTRODUCCIÓN

La caprinocultura en México ha ido en aumento desde 2001, gracias a la capacidad de adaptación, rusticidad, tamaño y características reproductivas de la especie. Asimismo, ha habido un incremento sostenible en la producción de leche y sus derivados con lo cual se han ido intensificando y tecnificando los sistemas productivos. (^{Ducoing 2006}).

El abordaje médico apropiado de los padecimientos requiere eficacia y precisión para reducir las pérdidas económicas. Esto se puede optimizar con el apoyo de pruebas de laboratorio que brinden mayor información sobre la condición específica de un animal o de todo el rebaño incluyendo información sobre el diagnóstico más exacto, pronóstico y la gravedad del problema y con ello apoyar su resolución (^{Meyer y Harvey 2004}).

El empleo del laboratorio clínico como herramienta diagnóstica en medicina veterinaria requiere contar con límites de referencia obtenidos bajo las condiciones específicas para las poblaciones de estudio y así hacer una adecuada interpretación del los resultados obtenidos. Los intervalos de referencia se establecen mediante el estudio de una población clínicamente sana que se encuentren bajo ciertos criterios de selección (^{Stockham y Scott 2008}). Es de suma importancia conocer las variaciones biológicas de los analitos y establecer los criterios para definir quienes serán los individuos de referencia (^{Kjelgaard-Hansen y Lundorff 2010}). Estos intervalos de referencia sirven para poder tener una comparación y así definir si algún animal presenta alguna patología (^{Mahaffey 2003}).

Algunas enfermedades producen alteraciones en los valores hematológicos, por esta razón es necesario contar con límites de referencia de los parámetros sanguíneos (^{Coles 1980}; ^{Davison y Henry 1969}; ^{Grilli etal. 2007}; ^{Terán 1986}). Además, el análisis de los componentes sanguíneos brinda información de las alteraciones generales, de algún órgano o sistema (^{Pastor 2000}).

Existen pocos estudios en México para establecer límites de referencia en esta especie y ya que en la actualidad ha ido en aumento el interés hacia esta actividad productiva y por consecuencia, el aumento de su población y su tecnificación, los caprinocultores y los médicos veterinarios zootecnistas requieren efectuar diagnósticos precisos y realizar el tratamiento correcto; por esta razón, los análisis de laboratorio son de mayor demanda. Esto último requiere establecer límites de referencia hematológicos de cabras en las diferentes regiones del país para que los laboratorios de diagnóstico clínico realicen interpretaciones apropiadas.

MATERIALES Y MÉTODOS

El estudio se realizó en una unidad lechera caprina del municipio de Tequisquiapan, Querétaro, a una altitud de 1880 msnm con una temperatura promedio anual de 17.5° C y una precipitación promedio anual de 388,42 mm, el régimen de humedad de los suelos corresponde al tropústico arídico y tropústico údico (^{FMVZ-UNAM 2009}; ^{INEGI 2011}).

En la unidad lechera del estudio la alimentación se basa en un sistema intensivo mixto con pradera de gramíneas y alfalfa; este sistema consiste en el pastoreo rotativo de las praderas y la alimentación suplementaria en corral de los diferentes lotes de cabras que a su vez están divididos de acuerdo con su estado productivo, edad y sexo. De otra parte, se lleva un programa de prevención mediante la administración de desparasitantes cada 6 meses con un sistema rotativo de los mismos en cada ocasión, así como rotación de potreros. Durante la realización del proyecto los animales se mantuvieron bajo observación y con ayuda de los registros se llevó el control clínico para verificar que ninguna de las cabras de referencia padeciera alguna enfermedad en las siguientes dos semanas.

Se tomaron 70 muestras sanguíneas entre las 9:00 y 10:00 horas del día, de cabras de las razas Alpina Francesa, Toggenburg y Saanen, de 2 a 8 años de edad, no gestantes, en lactación tardía o en tercer tercio de gestación y con un peso entre los 45 y 60 kg, en periodo seco, luego de lo cual, se les realizó un análisis coproparasitoscopico. Cargas parasitarias iguales o menores a 500 huevos por gramo de heces se consideraron no significativas clínicamente. 5 días antes y después de la toma de muestra de sangre, se determinaron las constantes fisiológicas de cada cabra (frecuencia cardiaca y respiratoria, auscultación de campos pulmonares, movimientos ruminales y temperatura).

Durante la toma de muestras, solo se realizó contención manual restrictiva de movimiento sobre los animales, sin aplicar ningún tipo de fármaco. Para la obtención de la sangre se emplearon tubos de vacío con EDTA K₂ (Ácido etilendiaminotetraacético dipotásico) realizando una punción en la vena yugular con aguja de calibre 21G x 1.5". Los tubos se llenaron hasta que perdieran el vacío y dejara de salir la sangre; inmediatamente después las muestras sanguíneas se agitaron con suavidad para promover la homogeneización del anticoagulante con la sangre.

En un lapso no mayor a 40 minutos después de la toma de sangre, las muestras se llevaron al laboratorio hematológico, para la realización del hemograma. Se determinaron los analitos hematocrito, cuenta de eritrocitos, volumen globular medio (VGM), sólidos totales, fibrinógeno, estimación plaquetaria, cuenta de leucocitos, neutrófilos segmentados, neutrófilos banda, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos.

Para la determinación de hematocrito se empleó la técnica de microhematocrito; para la cuenta de eritrocitos y leucocitos se emplearon el hemocitómetro y pipetas de Thoma con los reactivos de Hayem y Türk, respectivamente; la determinación de sólidos totales se efectuó utilizando un refractómetro clínico y para determinar el fibrinógeno, se empleó desnaturalización con calor (56°C por 3 minutos) y refractometría. La estimación plaquetaria y la cuenta diferencial de leucocitos se realizaron evaluando un frotis sanguíneo teñido con colorante de Wright. El VGM fue calculado con base en el valor del hematocrito multiplicado por mil y el resultado dividido entre el valor de la cuenta de eritrocitos. Todas las determinaciones se realizaron por duplicado por control de calidad y los análisis siguieron la metodología descrita por la FMVZ-UNAM (2010).

Los resultados obtenidos de cada analito hematológico determinado se evaluaron utilizando el programa de cómputo Analise-it©, con el cual se hizo la estadística descriptiva. Se empleó un nivel de confianza del 95% y la prueba de normalidad Kolmogorov-Smirnov. Igualmente, se determinó un intervalo de confianza al 95% para cada parámetro analizado. Los límites de referencia de los analitos con distribución normal se determinaron para-métricamente, mientras que aquellos con distribución no normal se determinaron en forma no paramétrica.

RESULTADOS

Las cargas parasitarias medias determinadas en los grupos de cabras examinados se muestran en la Tabla 1, donde cargas < 500 ooquistes o huevos por gramo de heces se consideraron clínicamente aceptables. De igual manera, se muestran los valores de las constantes fisiológicas medias determinadas 5 días antes y 5 días después del muestreo en la Tabla 2. En las Tablas 3 y 4 se describe la distribución por raza y etapa productiva, así como edad respectivamente de las cabras muestreadas.

De las 70 muestras sanguíneas obtenidas para realizar el hemograma, 62 fueron incluidas para la determinación de los límites de referencia; las ocho restantes fueron descartadas por presentar resultados extremos de uno o varios analitos. Se encontraron alteraciones en el leucograma, posiblemente debido al estrés asociado a la toma de muestras o a que algunos de los animales padecía inicios de alguna afección patológica; otras de las alteraciones que se manifestaron fueron hiperproteinemia y hemoconcentración, lo cual puede deberse a que algunos animales estaban en un grado subclínico de deshidratación cuando se les tomó la muestra.

La distribución de hematocrito, eritrocitos, VGM, sólidos totales, leucocitos, neutrófilos segmentados y linfocitos fue normal y sus límites de referencia se establecieron considerando ±2 desviaciones estandar. Los analitos cuya distribución fue anormal fueron plaquetas, fibrinógeno, neutrófilos en banda, monocitos, eosinófilos y basófilos; y sus límites de referencia se establecieron con los percentiles 2,5% y 97,5%. En la Tabla 5 se exhiben los intervalos determinados indicando cuales tuvieron distribución normal y cuales distribución anormal.

TABLA 5 Límites de referencia de cabra adulta de tipo lechero > 2 años de edad. 

†Distribución normal; ❖Distribución anormal; *Media de los resultados; ◊Percentil 2,5% y 97,5%.

Por último, se determinó la media porcentual de los diferentes leucocitos a fin de compararlos con otros estudios publicados.

DISCUSIÓN

Se tomaron muestras de animales en diferentes estados productivos a fin de que su condición no causara un sesgo y el resultado fuera representativo de la población caprina lechera adulta, considerando además que los laboratorios comerciales no ofrecen límites de referencia diferenciados de acuerdo al estadio productivo de los individuos en estudio. De las 62 muestras que fueron analizadas con el programa de cómputo se obtuvieron los límites de referencia de 13 analitos hematológicos. Los resultados de este estudio se compararon con los obtenidos por ^{Arraga de Alvarado (1991)}, ^{Bezerra et al. (2008)}, ^{Jain (1993)}, ^{Mbassa y Poulsen (1993)}; ^{McDougall et al. (1991)}, en los cuales se puede observar cómo son afectados los analitos por las características en las que se encuentran los individuos de referencia.

El trabajo de ^{Arraga de Alvarado (1991)} se realizó en Venezuela con 175 cabras, las cuales fueron agrupadas por edad, sexo y estado fisiológico. Se utilizaron hembras jóvenes (8 a 10 meses de edad), hembras gestantes y lactantes, machos jóvenes (de 8 a 18 meses de edad), machos castrados (1,5 a 2 años) y sementales; los animales pastoreaban por las mañanas y en las tardes se mantenían en estabulación sin agua y sin alimento. Los valores de las medias obtenidos en dicha investigación (hematocrito 0,34 L/L, eritrocitos 17,1 x 10¹²/L, leucocitos 11,3 x 10⁹/L, neutrófilos segmentados 46,8%, eosinófilos 5,3% y basófilos 0%) son mayores a los del presente estudio con excepción de los resultados de linfocitos (45,4%) y VGM (17,7 fL), los cuales fueron menores. Las diferencias pueden estar asociadas a la inclusión de una mayor diversidad de edades y etapas productivas.

^{Bezerra et al. (2008)} realizaron su estudio en cabras sanas entre 1 y 12 años de edad, criadas en un clima semiárido y bajo un régimen de alimentación semiextensivo. La media del VGM de los resultados de dicho estudio (19 fL) es menor al valor aquí obtenido, mientras que las medias de los leucocitos y neutrófilos segmentados (11.417 x 10⁹/L y 5.731 x 10⁹/L) son mayores. Por su parte, los valores de las medias de los demás analitos son similares en los dos estudios. Las diferencias observadas son matemáticas y pequeñas; sin embargo, no hay constancia de una diferencia estadística.

De otra parte, los valores obtenidos en el presente trabajo para los analitos hematocrito, eritrocitos, VGM, fibrinógeno, leucocitos, bandas, monocitos, eosinófilos y basófilos, son similares a los reportados por ^{Jain (1993)}. En tal estudio (no se describieron las características de la población utilizada para determinar los intervalos referidos) los valores informados para estimación plaquetaria (300-600 x 10⁹/L) y sólidos totales (60-80 g/L) fueron menores a los obtenidos en esta investigación; por el contrario, los valores respectivos a la cuenta absoluta de neutrófilos segmentados (1,2 - 7,2 x 10⁹/L) y linfocitos (2,0 - 9,0 x 10⁹/L) fueron mayores.

A su vez, ^{Mbassa y Poulsen (1993)} realizaron sus estudios en cabras Landrace de diferentes edades en estabulación y obtuvieron medias de los valores mayores a los de este estudio para los analitos hematocrito (0,31 L/L), VGM (27,1fL), leucocitos (14,10 x 10⁹/L), neutrófilos segmentados (6,89 x 10⁹/L) y neutrófilos en banda (1,15%), pero la media de la cuenta de eritrocitos (11,4 x 10¹²/L) fue menor. El resto de los analitos muestran diferencias marginales.

Por su parte, McDougall et al. (1991) realizaron estudios en cabras adultas de raza Saanen en pastoreo. Para la cuenta de leucocitos utilizaron un contador Coulter. En contraste, los resultados de los percentiles 2,5% y 97,5% obtenidos en este estudio para hematocrito son mayores a los informados por McDougall y cols. (0,19 y 0,33 L/L), mientras que los valores para leucocitos y sólidos totales (6 y 15 x 10⁹/L y 68 y 88g/L, respectivamente) son menores a los de estos. Los resultados de los demás analitos son similares en los dos estudios. Las diferencias pueden deberse a las técnicas empleadas en ambos estudios.

Los analitos hematológicos que presentaron con mayor frecuencia alguna diferencia con respecto a las otras referencias son hematocrito, eritrocitos, VGM, estimación plaquetaria, leucocitos y linfocitos. Esto puede deberse a las diferentes condiciones en las que se realizaron los estudios: ubicación geográfica y el medio al que están expuestas.

Finalmente, es de destacar el límite máximo tan alto de plaquetas determinado. Este resultado se repitió por triplicado en las muestras y se comparó en dos microscopios de modelo diferente para verificar consistencia respecto al campo visual. Además, cabe señalar que en las estimaciones plaquetarias de rumiantes domésticos en el laboratorio de referencia, las muestras manifiestan trombocitosis con respecto a cualquier referencia consultada aun en casos donde los animales no manifiestan alteraciones clínicas asociadas a una afectación plaquetaria. Este resultado da pie a una investigación posterior para responder a la razón de esta presencia tan alta de plaquetas circulantes en la población de estudio.

CONCLUSIÓN

A pesar de que algunos valores son similares a los de la literatura científica, se encontraron algunas diferencias con ciertos analitos, mayoritariamente en hematocrito, eritrocitos, VGM, plaquetas, leucocitos y linfocitos. Esto puede deberse a las diferentes condiciones en las que se encontraban los animales de los estudios comparados, como pueden ser el medio ambiente, la alimentación, ubicación geográfica, manejo de los animales durante el estudio, edad y etapa productiva. Es de importancia clínica tener los límites de referencia indicados para la especie y zona en la que se esté trabajando, para realizar interpretaciones adecuadas de los resultados de laboratorio y con ello, diagnósticos, tratamientos y pronósticos más precisos. A su vez, esto significará poder minimizar las posibles pérdidas económicas que se pueden presentar en caso de alguna patología.