No se conoce el mecanismo utilizado por los rotavirus para infectar la célula, ni se conocen con exactitud las moléculas receptoras de la célula que los rotavirus utilizan para infectarla. Nuestro gran objetivo es conocer las interacciones iniciales rotaviruscélula hospedera, que conducen a una infección productiva, específicamente aquellas relacionadas con la unión a proteínas celulares de superficie que los rotavirus utilizan como receptores para infectar. Estudios realizados por el autor utilizando inhibidores metabólicos sugieren que los receptores para rotavirus en células epiteliales MA104 (derivadas de riñón de mono), involucran a una o varias glicoproteínas Nglicosiladas, cuya función de receptor depende de esfingolípidos y de la presencia de colesterol. Estos componentes forman parte de lo que se conoce como microdominios lipídicos de baja densidad (rafts). Mediante técnicas de separación por electroforesis se aislaron cinco bandas que contenían proteínas de la membrana citoplasmática de la línea celular MA104, con capacidad inhibitoria de la infección de los rotavirus RRV, Wa y nar. En dos de estás bandas encontramos la proteína integrina b3 y la proteína de choque térmico HSC70 (heat shock cognate 70). Utilizando anticuerpos específicos, proteínas recombinantes, ligandos naturales y células transfectadas se demostró que estas proteínas están implicadas en el proceso de entrada del rotavirus a la célula. Otros investigadores han confirmado estos hallazgos. En la actualidad hemos determinado que la proteína HSC70 y la integrina b3 se encuentran presentes en la membrana citoplasmática del enterocito de ratón lactante, ratón adulto, bovino, porcino y del humano, detectada mediante la técnicas inmunológicas. Igualmente, mediante centrifugación en gradientes de sacarosa demostramos que las dos proteínas están ubicadas en los microdominios lipídicos denominados ≤rafts≤y además, mediante coinmunoprecipitación y ELISA de captura encontramos que HSC70 y la integrina b3 están asociadas formando un complejo, dado que la unión se mantiene al disgregar los lípidos en cada una de las fracciones del gradiente de sacarosa (datos no publicados). Adicionalmente, mediante inmunoprecipitación determinamos que las proteínas VP6 y VP4 de la cápside de Rotavirus se unen a HSC70 a partir de lisados de células MA104 infectadas con rotavirus, sugiriendo que HSC70 se une con varias proteínas virales. Igualmente, encontramos que tanto las DLPs como los péptidos sintéticos (280297) de VP6 y (531554) de VP4, al adicionarlos a la célula MA104 y Caco2, compiten con el rotavirus RRV, YM y WA. Igualmente los anticuerpos policlonales en conejos generados contra los péptidos sintéticos bloquean la infección de los rotavirus sugiriendo que las regiones (280297) de VP6 y (531554) de VP4 están implicadas en el proceso infeccioso. Del mismo modo, las células MA104 infectadas con rotavirus aumentan la expresión del mensajero y de la proteína HSC70 al analizarla mediante RTPCR y técnicas inmunológicas (citoquímica, fluorescencia, ELISA y Western blot), respectivamente. Otra proteína encontrada en una tercera banda separada mediante técnicas de electroforesis fue la Proteína Disulfuro Isomerasa (PDI). Los resultados hasta ahora obtenidos en nuestro laboratorio sugieren que las proteínas disulfuro isomerasa están implicadas en las reacciones tiol(SH)/disufuro(SS) en los eventos iniciales de entrada del rotavirus a la célula. Este trabajo permitió el inicio de búsqueda de fármacos capaces de inhibir esta actividad con miras a tratamientos farmacológicos de la infección rotaviral. Al analizar diferentes AINES en las células MA104 y enterocitos humanos CCL6, con rotavirus de origen humano (Wa, Wi, M69) encontramos que se aumenta la infección y en cambio inhibe en su totalidad la infección del rotavirus de origen animal RRV. Este hallazgo sugiere que los fármacos tienen efectos diferentes dependiendo del virus y quizá de la célula. Con base en estos resultados nos proponemos a futuro utilizar un modelo in vivo para determinar el efecto inhibitorio de fármacos AINEs y con grupos sulfhidrilo en la infección de rotavirus en células del intestino delgado de ratón lactante. Los trabajos que se están realizados actualmente en el laboratorio bajo mi dirección y co dirección de Orlando Acosta son ejecutados por estudiantes de pregrado, maestría y doctorado vinculados al laboratorio. Palabras clave: rotavirus, receptor, HSC70, integrina b3, PDI, fármacos.