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INTRODUCCIÓN
La finalidad de la terapia endodóntica consiste en eliminar los microorganismos presentes en el interior del sistema de conductos radiculares durante la preparación, y de esta manera disminuir el riesgo de posibles fallas endodónticas 1)-(3, las cuales generan muchas limitaciones en el paciente. Las lesiones periapicales producto de las fallas endodónticas contienen gran cantidad de formas bacterianas, entre las cuales se encuentran bacilos anaerobios Gram negativos, cocos anaerobios Gram positivos y anaerobios facultativos 4.
Se destaca el E. faecalis, el cual es un coco Gram positivo, anaerobio facultativo, inmóvil y no es-porulado 5, perteneciente a la flora bacteriana del tracto gastrointestinal, aunque puede sobrevivir en otras zonas del cuerpo 6. Este microorganismo tiene la capacidad de crecer en ambientes con nutrientes limitados, temperaturas extremas y zonas con altas concentraciones de sales, lo cual se relaciona con su capacidad de supervivencia en los conductos radiculares de dientes sometidos a tratamiento endodóntico, en los cuales los nutrientes son limitados 2),(3), (5), (7)-(9.
Para eliminar la infección del sistema de conductos radiculares es necesario limpiarlos, conformarlos y sellar tridimensionalmente, lo cual disminuye la posibilidad de microfiltración bacteriana 8- (10. El cemento sellador es importante en la terapia endodóntica, debido a que logra llegar a esos espacios donde no es posible llegar con la irrigación y la gutapercha; además su fórmula posee componentes con propiedades antimicrobianas, los cuales le permiten actuar contra las bacterias que persisten luego de la preparación químico - mecánica del sistema de conductos radiculares 4),(11) - (12) (4), (11)-(13.
Existen diversos tipos de cementos obturadores de canales radiculares, entre los cuales se encuentran los cementos a base de óxido de zinc - eugenol, como el cemento de Grossman, el cual tiene propiedades antibacterianas debido a la presencia de zinc; además de estos existen los cementos a base de hidróxido de calcio, como el Apexit, los cuales son bien conocidos por sus propiedades alcalinas, a base de ionómeros de vidrio (Ketacendo), a base de resinas (AH26), selladores con base de silicona (RoekoSeal) y selladores que contienen materiales farmacéuticos (Endomethasone) 2), (3), (8), (11.
Actualmente los selladores basados en resina epoxi son ampliamente utilizados por sus propiedades mecánicas y compatibilidad con los materiales de restauración. Así mismo, por sus características favorables, como la adhesión a la estructura dentaria, largo tiempo de trabajo, facilidad de manipulación y buen sellado 10), (13.
El cemento MTA Fillapex® es un sellador de resina a base de MTA en su composición, además de salicilato de resina, resinas naturales y diluidas, resina de nanopartículas, trióxido de bismuto, na-nopartículas de silicato y pigmentos. Tiene baja solubilidad y es de fácil manejo; entre sus propiedades se destaca su PH alcalino y su efecto antimicrobiano, además es bioactivo y similar al MTA por su capacidad para integrarse al tejido dentinario con el que entra en contacto 3), (9), (10), (13) (14. Los resultados relacionados con su respuesta biológica son contradictorios. Varias investigaciones revelaron que este material mostró alta citotoxicidad y genotoxicidad, incluso después de 90 días; otros estudios indican que la citotoxicidad de MTA Fillapex disminuye con el tiempo 15) (17.
Es importante determinar la efectividad antimicrobiana de los cementos obturadores de canales, ya que el éxito clínico y radiográico del tratamiento se relaciona con la ausencia de microorganismos.
El propósito de este estudio fue evaluar la actividad antimicrobiana del cemento sellador de canales MTA Fillapex® frente al E. faecalis.
MATERIALES Y MÉTODOS
Estudio experimental in vitro. La muestra estuvo constituida por cepa de referencia de E. faecalis (ATCC 29212), la cual fue sembrada en una caja de Petri que contenía agar rico en nutrientes mediante la técnica de siembra por agotamiento y llevado a la incubadora durante 24 horas a 37°C para que creciera. Luego se tomaron de 5 a 10 muestras de colonias de las bacterias sembradas y con ayuda de un aza se inocularon en un tubo falcón, el cual contenían 100 |iL de caldo Mueller Hinton; se rotuló y se procedió a vibrar en un vórtex el falcón con el contenido del caldo inoculado; se depositaron las muestras en una placa de 96 pozos por triplicado para su posterior lectura en un lector MultiScan Ex (Thermo Sceintific) a una escala 0,08 - 0,1 ABS y una longitud de onda de 620 nm (macfarlán 0,5), para observar la curva de crecimiento del E. faecalis, tomándose lecturas cada hora; la primera se llamó hora cero, hasta alcanzar el máximo crecimiento de la bacteria y su posterior estado estacionario y deceso (gráfico 1)
Para el desarrollo del ensayo de sensibilidad antimicrobiana por el método de microdilución en caldo fue necesaria la preparación de controles de esterilidad, como control de agua, control de medio o caldo, control positivo para la inhibición del crecimiento (control de Gentamicína) y el inóculo bacteriano; todos estos fueron montados por triplicado en un volumen de 100 μL por pozo, con excepción del control de Gentamicína, el cual estaba conformado por 50 μL del antibiótico y 50 μL del inóculo bacteriano.
Luego se realizó la preparación de los cementos (Grossman y MTA Fillapex® (Eufar y Angelus Dental) según las indicaciones de los fabricantes, y de esta manera se realizó microdilución de los cementos con DMSO(dimetil sulfóxido) al 1 % en diferentes concentraciones. Se tomaron 5mg de cada cemento y se depositaron en un tubo eppendorf de 1,5 ml, seguidamente se adicionó 1ml de DMSO con ayuda de una pipeta, se mezcló y se vibró en el Vortex, y así sucesivamente para la elaboración de cinco diluciones:
La dilución 1 contenía 10 mg de cemento y 1 ml de DMSO. 10000 μg/ml (DMSO 100 %).
La dilución 2 contenía 100 μl de stock 1 y 900 μl de agua destilada. 1000 μg/ml (DMSO 10 %).
La dilución 3 contenía 50 μl de stock 2 y 950 μl de agua destilada. 50 μg/ml (DMSO 0,5 %).
La dilución 4 contenía 75 μl de stock 2 y 925 μl de agua destilada. 75 μg/ml (DMSO 0,75 %).
La dilución 5 contenía 130 μl de stock 2 y 870 μl de agua destilada. 130 μg/ml (DMSO 1,3 %).
Se rotularon los tubos eppendorf con las concentraciones y contenidos así:
C1 (GROSS 0,5 μl), C2 (GROSS 1 μl), C3 (GROSS 2 μl), C4 (GROSS 4 μl), C5 (GROSS 8 μl), C6 (GROSS 16 μl), C7 (GROSS 32 μl), C8 (GROSS 64 μl), C9 (GROSS 128 μl), C10 (MTA 0,5 μl), C11 (MTA 1 μl), C12 (MTA 2 μl), C13 (MTA 4 μl), C14 (MTA 8 μl), C15 (MTA 16 μl), C16 (MTA 32 μl), C17 (MTA 64 μl), C18 (MTA 128 μl).
Luego se depositaron las muestras en la placa de 96 pozos por sextuplicado, con ayuda de una micro pipeta. Posteriormente se llevó la placa hasta el espectrofotómetro para medir la absorbancia a las 7 horas y determinar así la capacidad antimicrobiana de los cementos.
Los datos arrojados en la lectura se organizaron y se depuraron en el software Microsoft Excel 2013 para Windows; analizados e interpretados en el programa estadístico SPSS v.23 IBM. Luego se aplicó el test Shapiro Wilks, en el cual todas las muestras rechazaron el supuesto de normalidad; igualmente, el test de Levene rechazó la igualdad de varianzas; en consecuencia los datos se analizaron por intermedio de la prueba no paramétrica de Mann-Whitney para dos muestras independientes y la prueba de Kruskal Wallis para muestras independientes con un nivel de confianza de p < 0,05.
RESULTADOS
El análisis comparativo de los datos mostró que al comparar de dos en dos los cementos Grossman y MTA Fillapex® en las diferentes concentraciones por intermedio de la prueba de Mann-Whitney, ninguna de estas comparaciones resultó estadísticamente significativa (tabla 1).
Al comparar el cemento Grossman en todas sus concentraciones por intermedio de la prueba de Kruskal Wallis (p=0,004), el resultado muestra que existe diferencia estadísticamente significativa, siendo la más significante el cemento Grossman al 2 %, por tener mayor mediana, 0,093. Al utilizar la misma prueba para comparar el cemento MTA Fillapex® en sus diferentes concentraciones, el resultado no fue estadísticamente signiicativo (p=0,713) (tabla 2).
DISCUSIÓN
Este estudio comparó la actividad antimicrobiana de dos cementos obturadores de canales radiculares (MTA Fillapex® y Cemento de Grossman), a diferentes concentraciones, frente al E. faecalis por medio de la espectrofotometría. En el análisis de los datos que arroja el espectrofotómetro se obtuvo que no hay diferencia signiicativa en la actividad antimicrobiana al comparar ambos cementos en diferentes concentraciones, debido a que las pruebas estadísticas arrojaron unos valores de P superiores a 0.05, pero al comparar el mismo cemento a diferentes concentraciones se observó que el cemento de Grossman sí presenta signiicancia estadística en todas sus concentraciones. Se determinó además, que el cemento de Grossman al 2 % presenta mayor actividad antimicrobiana en comparación con las demás concentraciones, pero al comparar el MTA Fillapex® en sus diferentes concentraciones no hay diferencia signiicativa.
Estos resultados se asemejan a los obtenidos por Ustun y et al. en 2013, quienes afirman que el MTA Fillapex® a los 20 minutos no presenta actividad antimicrobiana contra el E faecalis; el primer día era bacteriostático y a los 7 y 30 días era bactericida 16. El MTA Fillapex® contiene óxido de calcio, que forma hidróxido de calcio en contacto con el agua, lo cual le confiere la propiedad antibacteriana; además contiene silicato de calcio, el cual con la humedad de la dentina genera el inicio de una reacción de hidratación de los silicatos de calcio; el hidrogel de silicato de calcio e hidróxido de calcio existente generan el alto pH y la subsiguiente propiedad antibacteriana (1917).
En nuestro estudio, la ausencia de actividad antimicrobiana del MTA Fillapex fue determinada por el espacio de tiempo reducido para generar la reacción de hidratación.
Igualmente, Ghasemi y cols. en 2015 evaluaron la actividad antibacteriana de los cementos obturadores de canales MTA Fillapex®, ApexitPlus, Dorifill y Epiphany frente al E. faecalis, y concluyeron que el MTA Fillapex presenta mayor actividad antimicrobiana a los 3, 5 y 7 días. Dichos resultados se contraponen a los de este estudio 3, por haber sido realizado en un tiempo reducido y específico.
La evaluación de la actividad antimicrobiana de los cementos obturadores de canales se ha realizado mayoritariamente por el método de difusión en agar, mediante el cual se determina en forma cualitativa el efecto antimicrobiano.
Kuga y cols. en 2013 afirmaron que aunque todos los cementos generan zonas de inhibición bacteriana, no hay diferencia significativa entre la actividad antimicrobiana del MTA Fillapex®, Sealapex y AH Plus contra el E. faecalis y S. aureus (1921). Por su parte Melek Gürel y cols. en 2016 comparan la actividad antimicrobiana del Smartpaste Bio, MTA Fillapex y AH Plus y concluyeron que el Smartpaste Bio tiene mayor actividad antimicrobiana frente al E. faecalis.
Los estudios anteriores presentan la desventaja de la prueba de difusión en agar, en la cual el resultado de este método no depende únicamente de la toxicidad del material para el microorganismo en particular, sino que también está altamente influenciado por la difusión del material a través del medio 12.
En nuestro estudio, a diferencia de los anteriores, se empleó el método de dilución, apropiado para determinar en forma cuantitativa la actividad antimicrobiana de los cementos mediante la técnica de concentración mínima inhibitoria (CMI), con la cual se define la concentración mínima capaz de inhibir el crecimiento visible del microorganismo 13.
Por otra parte, los estudios reportados sobre efectividad antimicrobiana de cementos biocerá-micos contra el E. faecalis utilizando esta metodología son muy pocos; estudios como el de Fa-ria-Junior y cols. en 2013 evaluaron el efecto antimicrobiano del AH Plus, Sealer 26, Epiphany SE, Sealapex, Activ GP, MTA Fillapex® contra el E. faecalis, utilizando la prueba modificada de contacto (DTC), a las 5, 10 y 15 horas, en la cual el sealapex y el MTA Fillapex® se asociaron a la reducción del número de bacterias (2022).
Poggio, Trovati y cols. en 2017 evaluaron la actividad antimicrobiana de varios cementos obturadores de canales (BioRoot™RCS, TotalFill BC Sealer, MTA Fillapex, Sealapex Root Canal Sealer, AH Plus, EasySeal, Pulp Canal Sealer™, N2.) frente al E. faecalis mediante dos métodos diferentes: test de difusión en agar (ADT) y test de contacto directo (DTC), y concluyeron que al utilizar ADT los cementos a base de óxido de zinc tienen mayor actividad antimicrobiana contra el E. faecalis, atribuible a la presencia de óxido de zinc y paraformaldehído en su composición (8, 1820).
En lo que respecta al MTA Fillapex®, los estudios lo evidencian como un cemento biocerámico que se presenta como una alternativa eficiente en la obturación de conductos radiculares debido a su capacidad de sellado de canales laterales, con un efecto antimicrobiano atribuible a su hidrofilicidad, liberación de hidróxido de calcio activo y alto pH 13. Por el contrario, selladores a base de óxido de zinc - eugenol, como el cemento de Grossman, fueron investigados extensivamente y se utilizaron como controles positivos en ensayos de actividad de antimicrobianos (14, 2116, 23).
