Cinética de producción deH₂O₂ y su efecto sobre la actividad mitocondrial en embriones bovinos producidos in vitro

 

 

César Serrano; Carlos Vélez; Marlene Jiménez; Martha Olivera-Ángel

 

Fisiología y Biotecnología de la Reproducción, Neurociencias. Universidad de Antioquia A.A. 1226, Medellín, Colombia cserranon@agronica.udea.edu.co

 

 

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OBJETIVOS

Durante la producción de embriones in vitro, una gran proporción (70-80%) detiene su ciclo celular durante un período determinado para cada especie coincidiendo con la activación del genoma embrionario, lo cual en bovinos ocurre en el paso de 8 a 16 células (1). Con el ánimo de aportar al estudio de este fenómeno, se determinaron la cinética de producción deH₂O₂y la función mitocondrial, aspectos relacionados con el mismo (2), en embriones bovinos producidos in vitro (EBPIV) con alto y bajo potencial de desarrollo.

METODOLOGÍA

EBPIV que completaron su primer ciclo celular antes o después de 32 horas post-inseminación (hpi) fueron clasificados como competentes y no-competentes respectivamente. De cada grupo se tomaron embriones a las 32, 40, 50, 72 y 100 HPI para evaluación deH₂O₂ y función mitocondrial mediante epifluorescencia, incubando con dihidrorrodamina 123 (DHR) (1mM) por 15 minutos y con JC-1 (5mM) por 30 minutos respectivamente. La fluorescencia para DHR se consideró como positiva paraH₂O₂. La función mitocondrial se determinó como la proporción de fluorescencia con respecto al control positivo (oocito maduro). Un total de 362/290 embriones competentes y 345/310 no-competentes fueron evaluados para DHR y JC-1 respectivamente durante tres cohortes. Los datos (promedio/ proporción +/- D.E) entre puntos de corte y entre grupos se compararon mediante pruebas de hipótesis.

RESULTADOS

Se observó un aumento progresivo en la frecuencia de eventos positivos a DHR en ambos grupos a partir de las 32 HPI, relacionado más con el estado de desarrollo que con el tiempo postinseminación; esta tendencia disminuyó a partir del momento en que una mayor proporción de embriones alcanzó el estadio de 8 células. Sin embargo, estos eventos fueron mayores en el grupo nocompetente. Se evidenció muy poca actividad mitocondrial durante el desarrollo embrionario temprano en ambos grupos de estudio.

CONCLUSIONES

La mayor proporción de embriones no-competentes que presentan elevación en los niveles deH₂O₂, podría estar relacionada con el bloqueo en el ciclo celular observado en condiciones in vitro. Dichas elevaciones no parecen relacionarse con la actividad mitocondrial, ni ésta con la generación delH₂O₂ .De otro lado, la actividad mitocondrial no parece ser un factor de competencia para superar la detención en el ciclo celular y su depresión estaría relacionada con algunos arreglos metabólicos observados por otros investigadores (3).

PALABRAS CLAVE

H₂O₂, IVF, BOVINO, EMBRIÓN, MITOCONDRIA

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BIBLIOGRAFÍA

1. BETTERIDGE KJ. Phylogeny, ontogeny and embryo transfer. Theriogenology 1995; 44: 1.061-1.098.         [ Links ]

2. CAMARGO O, RAMÍREZ JL, OLIVERA-ÁNGEL M. Radicales libres y desarrollo embrionario. Rev Col Cienc Pec 1999; 12: 108-118.         [ Links ]

3. THOMPSON JG, MCNAUGHTON C, GASPARRINI B, MCGOWAN LT, TERVIT HR. Effect of inhibitors and uncouplers of oxidative phosphorylation during compaction and blastulation of bovine embryos cultured in vitro. J Reprod Fertil 2000; 118: 47-55.         [ Links ]