Modulación de la muerte de monocitos infectados con Mycobacterium tuberculosis: papel del Ca²⁺, IL-10 y de PLA2 y correlación con el crecimiento intracelular de la micobacteria

 

 

Dulfary Sánchez¹; Mauricio Rojas²; Luis Fernando García²

 

1 Estudiante de Maestría en Inmunología, Corporación de Ciencias Básicas Biomédicas. d_sanchez02@hotmail.com

2 Profesor, Universidad de Antioquia, Facultad de Medicina.

 

 

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INTRODUCCIÓN

En macrófagos murinos infectados con Mycobacterium tuberculosis (Mtb) el balance entre TNFa e IL-10 modula la apoptosis (1,2). Además, la infección activa flujos de calcio responsables del daño mitocondrial y la regulación dependiente de cAMP (3). En nuestro laboratorio se ha observado que el PPD y el Mtb inducen apoptosis y necrosis en monocitos de pacientes tuberculosos, mientras que en monocitos de controles sólo apoptosis, indicando que los mecanismos de muerte podrían asociarse con la patogénesis de la enfermedad y con el control de la infección. Ensayos de bloqueo muestran que ambos tipos de muerte celular pueden ser modulados por TNFa e IL-10; el anti-TNFa inhibe la apoptosis y la anti-IL-10 la aumenta disminuyendo la necrosis; sin embargo, los mecanismos moduladores de la necrosis son desconocidos. En este proyecto hemos postulado que en presencia de las señales antiapoptóticas de la IL-10, un segundo factor, probablemente el calcio, podría activar otras vías como lipasas y proteasas diferentes a caspasas, que llevan a la muerte celular independiente de la apoptosis.

METODOLOGÍA

Promonocitos U937 se han infectado con Mtb, han sido tratados con compuestos para remover calcio, inhibir cAMP y PLA2. La apoptosis y la necrosis han sido evaluadas mediante la estabilidad mitocondrial y las alteraciones en la membrana celular con DIOC6/BE; las células productoras de IL-10 y TNFamediante citometría de flujo y el crecimiento intracelular de Mtb con ³H-UdR.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Mtb induce tanto apoptosis como necrosis en U937. La remoción del calcio con BAPTA/AM y el bloqueo del AMPc disminuyeron tanto la apoptosis como la necrosis. El bloqueo de PLA2 inhibió principalmente la necrosis. El cAMP y la pentoxifilina aumentaron las células necróticas pero no las apoptóticas. La remoción del calcio y el bloqueo del cAMP no afectaron las células TNFa⁺ pero sí las IL-10⁺. El tratamiento con pentoxifilina incrementó las células IL-10⁺ y bloqueó las TNFa⁺. En células infectadas la IL-10 aumentó la necrosis y disminuyó la apoptosis. Finalmente, observamos que el bloqueo de la necrosis pero no de la apoptosis correlaciona con la inhibición del crecimiento intracelular de la Mtb.

PALBRAS CLAVE

APOPTOSIS, NECROSIS, IL-10, CALCIO, FOSFOLIPASAS

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BIBLIOGRAFÍA

1. ROJAS M, OLIVER M, GROS P, BARRERA LF, GARCÍA LG. TNF-a and IL-10 modulate the induction of apoptosis by virulent Mycobacterium tuberculosis in murine macrophages. Journal Immunol, 1999; 162: 6.122-6.131.         [ Links ]

2. ROJAS M, BARRERA L, PUZO G, GARCÍA L. Differential induction of apoptosis by virulent Mycobacterium tuberculosis in resistant and susceptible murine macrophages. Role of nitric oxide and mycobacterial products. J Immunol 1997; 159: 1352-1361.         [ Links ]

3. ROJAS M, GARCÍA LF, NIGOU J, PUZO G, OLIVER M. Mannosylated lipoarabinomannan antagonizes Mycobacterium tuberculosisinduced macrophage apoptosis by altering Ca+2-dependent cell signaling. J Infect Dis 2000; 182: 240-251.         [ Links ]