Utilización de macrófagos esplénicos humanos como modelo para el estudio de la interacción micobacteria-macrófago

 

 

Julieta Henao Pérez¹; Luis F. García²; Mauricio Rojas²; Luis Fernando Barrera²

 

Grupo de Inmunología Celular e Inmunogenética, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

1 Estudiante de maestría, Posgrado en Ciencias Básicas Biomédicas. jhp264@yahoo.com

2 Profesor, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

 

 

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INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS

La mayor parte de la aproximación experimental para el estudio de la interacción in vitro entre Mycobacterium tuberculosis (Mtb) y macrófagos humanos, se ha realizado utilizando macrófagos derivados de monocitos (MDMs); sin embargo, muy pocos estudios han utilizado macrófagos tisulares. Nosotros estamos utilizando macrófagos esplénicos obtenidos de donantes cadavéricos con el fin de evaluar la interacción Mtb-macrófago. El objetivo de este estudio es caracterizar fenotípica y funcionalmente la población de células adherentes del bazo y su respuesta a la infección con Mtb.

METODOLOGÍA

La expresión ex vivo de los marcadores de superficie (CD3, CD14, CD19, CD36 HLA-DR, CR1, CR3, TLR-2) en esplenocitos y en células esplénicas adherentes cultivadas por 96 horas, se ha caracterizado por citometría de flujo. La fagocitosis de perlas de látex y Mtb fue determinada por microscopia de luz. La tinción para esterasas no específicas (NSE) se realizó utilizando un estuche comercial.

RESULTADOS

Hasta el momento se han podido analizar 15 bazos (2 de mujeres y 13 de hombres). La caracterización de los esplenocitos ha arrojado los siguientes resultados: 39.2% ± 16.7 corresponden a células B (HLA-DR⁺ y DR-), el 23.3% ± 8.8 a células T (CD3⁺HLADR⁺ y DR-), el 19.3% ± 10.9 son CD14⁺ (HLA-DR⁺ (monocito/ macrófago); dentro de esta última población celular, el 11.7% ± 8.5 corresponden a células CD14⁺TLR2⁺. El resto de la población celular (aproximadamente 25%) posee un fenotipo no caracterizado. Para la obtención de células adherentes, se han considerado variables tales como tiempo de cultivo (4-96h), tipo de plástico, concentración y densidad celular, porcentaje de suero (PSH) y método de debridación. Los resultados indican que ninguna de estas variables tiene un mayor peso sobre el porcentaje de células adherentes recuperadas (0.1- 2.1%), aunque el tiempo de cultivo parece jugar un papel más importante que otras variables. El 100% de las células adherentes son NSE⁺ y exhiben una capacidad fagocítica modesta, la cual varió dependiendo de la razón partícula:célula adherente (17.9 % ± 4.27 partículas de latex; 31.9% ± 9.0 Mtb). Las células adherentes presentan el siguiente fenotipo: 95% son HLA-DR⁺, 97.5% CR3⁺; son negativas para CD3, CD19, y CR1. La expresión de CD14 y TLR-2 es baja y se observa en algunos individuos.

PALABRAS CLAVE

MACRÓFAGOS ESPLÉNICOS, MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS