Detección de la proteína core del virus de la hepatitis C y nivel de expresión de la proteína p 53 en casos de carcinoma hepatocelular

 

 

Claudia M. Alvarez F¹; Juan C. Arango²; Gonzalo Correa³; Juan C. Restrepo⁴; Maria C. Navas⁵

 

Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

1 Estudiante de Maestría. Posgrado Ciencias Básicas Biomédicas. cmalvarez2001@hotmail.com

2 MSc, PhD, Departamento de patología

3 MD, Grupo de Gastrohepatología

4 MD, MSc, Dr.Sc. Grupo de Gastrohepatología

5 MSc, Dr. Sc., Grupo de Gastrohepatología

 

 

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INTRODUCCIÓN

El principal factor de riesgo en más del 80% de los casos de carcinoma hepatocelular, es la infección por el Virus de la hepatitis B (HB) o el de la hepatitis C (VHC). Algunos estudios sugieren que la proteína Core del VHC estaría implicada en el mecanismo oncogénico del VHC, debido a la capacidad de transformación celular en cooperación con H-ras (1), la capacidad de regulación o de interacción proteína-proteína con p53 (2) y al desarrollo de HCC en ratones transgénicos para la proteína Core (3).

OBJETIVO

Mediante un estudio descriptivo, se pretende establecer si existe correlación entre la expresión de la proteína Core y el nivel de expresión de p53 en casos de HCC asociado a la infección por el VHC. Adicionalmente se determinará el estado replicativo viral.

METODOLOGÍA

Se estudió un total de 105 muestras de tejido hepático tumoral, incluido en parafina, de casos de carcinoma hepatocelular de 3 hospitales de las ciudades de Medellín y Cali durante el período 1995 - 2003. La proteína Core del VHC se detectará mediante inmunohistoquímica en cortes de tejido hepático incluido en parafina, con el anticuerpo monoclonal humano anti-Core B12.F8. La deteccion el ARN genómico y antigenómico se realizará utilizando la enzima rTth y la extracción del ARN total obtenido de cortes de tejido utilizando un kit comercial (kit OPTIMUM Ambion). El nivel de expresion de mARN de p53 se determinará por RT-PCR semicuantitativa. Como control se amplificará el mRNA de D-globina.

CONCLUSIONES

Un total de 42 casos de HCC fue diagnosticado en el Hospital Universitario San Vicente de Paúl y el Hospital Pablo Tobón Uribe en Medellín, durante el período 1995 – 2003. La detección de la proteína Core del VHC se logró inicialmente en células HepG2 transducidas con el rSFV-Core; posteriormente se detectó la proteína Core en tejido hepático proveniente de pacientes con diagnóstico de HCC asociado al VHC, mediante recuperación antigénica con buffer citrato pH 2.5 y vaporizador por 30 minutos, incluyendo como control negativo, tejido hepático sano.

PERSPECTIVAS

Se iniciarán las extracciones de ARN usando el Kit OPTIMUM para detectar el genoma viral y la determinación semicuantitativa del mRNA para p53 usando los primers 5'ttgccgtcccaagcaatggatg3 y 5'cagccaagtctgtgacttgcacg3' correspondientes al exòn 4.

PALABRAS CLAVE

VIRUS HEPATITIS C, CARCINOMA HEPATOCELULAR, P53, PROTEÍNA CORE

 

BIBLIOGRAFÍA

1 . RAY RB, LAGGIN LM, MEYER K, RAY R. Hepatitis C Virus core protein cooperates with ras and transforms primary rat embryo fibroblasts to tumorigenic phenotype. J Virol, 1996; 70: 4438-4443.

2. LU W, LO S, CHEN M, WU K, FUNG T, OU J. Activation of p53 Tumor supressor by Hepatitis C Core protein. Virology, 1999; 264: 134-141.

3. MORIYA K, FUJIE H, SHINTANI Y, YOTSUYANAGI H, TSUTSUMI T, ISHIBASHI K, et al. The core protein of hepatitis C virus induce hepatocellular carcinoma in transgenic mice. Nature Med, 1998; 4(9): 1065-1067.