Introducción
Vizcaína Curimata mivartii (Curimatidae), también conocida como cachaca, sardina o vizcaíno, crece hasta los 35 cm de longitud total; es endémica de Colombia y se registra en las ciénagas del bajo Magdalena (Mojica et al., 2012). Se le considera una especie que realiza migraciones locales cortas (Usma et al., 2009); aunque su patrón migratorio no ha sido plenamente establecido, se conoce que difiere de la generalidad de las especies migratorias de la cuenca magdalénica, al no hacer parte de la migración de principio de año conocida como subienda, sino que permanece en las ciénagas durante todo el periodo seco (Mojica et al., 2012).
De las 1494 especies de peces de agua dulce que existen en Colombia (DoNascimento et al., 2017), 81 se encuentran con algún grado de vulnerabilidad (Mojica et al., 2012) y la reproducción en cautiverio es una herramienta de conservación ex situ; pero solo algunas tienen tecnologías de reproducción en cautiverio como cachama negra Colossoma macropomum, bocachico Prochilodus magdalenae, dorada Brycon moorei, charúa Brycon sinuensis, yamú Brycon amazonicus, comelón Megaleporinus muyscorum, capaz Pimelodus grosskopfii, blanquillo Sorubim cuspicaudus y bagre rayado Pseudoplatystoma magdaleniatum. Sin embargo, especies como vizcaína Curimata mivartii, la cual se encuentra reportada como vulnerable según el libro rojo de peces dulce acuícolas de Colombia (Mojica y Usma, 2012), es de las menos estudiada, tanto así que su talla mínima de capturas aún no ha sido reglamentada. Ante la reducción en las capturas de bocachico y bagres (Mojica y Usma, 2012), el interés por otras especies nativas como recurso pesquero ha aumentado, como el caso de la vizcaína, lo que ha generado una disminución en el número de individuos de esta especie en las ciénagas y tributarios del río magdalena.
La reproducción es un proceso controlado por factores ambientales iniciales y finales tanto de tipo biótico (depredación, competición, proporción de sexo, densidad de población, entre otros) como abióticos (caudal, fotoperíodo, temperatura, pH, oxígeno disuelto, conductividad eléctrica, entre otros) actúan en diferentes momentos del ciclo reproductivo (Avendaño-Ibarra et al., 2004; Macedo-Soares et al., 2009; Atencio-García y Kerguelén-Durango, 2015). Los factores finales estimulan el apareamiento y desove y proporcionan condiciones favorables para la viabilidad de las crías (Baumgartner et al., 2008; Atencio-García y Kerguelén-Durango, 2015). Sin embargo el cautiverio ocasiona disfunción reproductiva y la más común en los peces nativos migratorios, caso vizcaína, es la inhibición de la ovulación y el desove por la ausencia de estos estímulos; por lo que es necesario inducciones hormonales para incrementar el volumen seminal en machos y la ovulación y desove en las hembras (Mylonas et al., 2010).
Ante la ausencia de estímulos ambientales finales en cautiverio para la ovulación y el desove en los peces, uno de los métodos para superar esta disfunción reproductiva es la hipofización (Atencio, 2001), siendo el extracto pituitario de carpa (EPC) uno de los inductores más utilizados (Yaron et al., 2009). Existen registros de reproducción de otros Characiformes con importancia comercial con EPC como bocachico (Atencio-García et al., 2013), cachama blanca (Díaz-Olarte et al., 2010; Castillo-Losada et al., 2016), cachama negra (Arias Acuña y Hernández Rangel, 2009), dorada (Atencio-García et al., 2017), charúa (Atencio-García et al., 2006; Montes y Salgado 2014), comelón (Atencio-García et al., 2001), picuda Salminus affinis (Weingartner y Zaniboni-Filho, 2010; Zanandrea et al., 2016), sábalo Prochilodus lineatus (Botta et al., 2010); lo que señala la efectividad del EPC al permitir la reproducción inducida de especies nativas migratorias que no desovan en cautiverio. Son escasos los reportes en la literatura evaluando la reproducción inducida en especies de la familia Curimatidae; por lo que el objetivo del presente estudio fue evaluar la reproducción inducida de vizcaína Curimata mivartii con EPC.
Materiales y métodos
Localización
El estudio se realizó en la Estación Piscícola San Silvestre S.A, entre septiembre - octubre de 2018, ubicada a 7° 06’41.8 “N y 73° 51’23.0” O (Barrancabermeja, Col), a una altitud de 92 msnm, con temperatura media anual fue de 28°C y humedad relativa del 75%.
Selección de reproductores e inducción hormonal
Ejemplares de dos años de edad (n=54) mantenidos en estanques en tierra a densidad de 0,1 pez/m2 fueron trasladados a piletas circulares (3 m3) con flujo constante de (5 L/min), donde permanecieron durante 24 horas, con el propósito de habituarlos a las condiciones experimentales y reducir el estrés generado por la manipulación y cambio de ambiente.
Las hembras para inducción fueron seleccionadas, luego de verificar la presencia de ovocitos en maduración final, para lo cual se tomó una muestra de biopsia ovárica con una sonda naso-gástrica de Levin, calibre 6, de PVC grado médico (Medex, Colombia). La muestra de ovocitos fue tratada con solución Serra (Chemí, Colombia) y después de tres minutos, leídas con la ayuda de un estereoscopio de luz, (Leica, EZ4 W, Alemania) en objetivo de 4x, para determinar la posición de la vesícula germinal (céntrico, migrando, periférico, sin núcleos) y los ovocitos atrésicos (inviables) atendiendo los criterios sugeridos por Yaron et al., (2009). Los machos inducidos se encontraron en fase de espermiación; los cuales a ligera presión abdominal liberaron líquido seminal.
Las hembras fueron inducidas con EPC a una dosis de 6mg/Kg en dos aplicaciones (10 y 90% con 12 horas de diferencia); los machos fueron inducidos con una dosis única equivalente al 80% de la dosis de las hembras.
Los procedimientos empleados en la manipulación de los animales se realizaron atendiendo las normas y procedimientos para el uso de animales en laboratorio, señaladas por el Committe on Care and Use of Laboratory Animal Resources (National Research Council, USA 2010).
Desempeño reproductivo
El desempeño reproductivo se determinó mediante el índice de ovulación, fecundidad (absoluta y relativa) y porcentaje de fertilidad y eclosión.
Índice de ovulación. Se consideró como el número de hembras ovuladas sobre el total de las hembras tratadas. La obtención de los productos sexuales se realizó mediante masaje en sentido cráneo caudal en la región abdominal.
Fecundidad absoluta. Para cada hembra se pesó el desove en una balanza digital (OHAUS, EC, USA). Luego se tomó una pequeña muestra entre 0,5 y 1,0 g, se preservaron en formol 1% buferado para su conteo. La fecundidad absoluta (Fa), número de huevos desovados por hembra, se estimó con la fórmula: Fa = n x G/g; donde, n es el número de ovocitos en la submuestra, G el peso en gramo de los ovocitos desovados por hembra y g el peso de la submuestra.
Con los valores de Fa, se estimó la fecundidad relativa (Fr) dividiendo el peso total de ovocitos (g) sobre el peso de las hembras expresado en Kg.
Para la determinación del diámetro de los ovocitos recién desovados, por lo menos 50 ovocitos del desove de cada hembra fueron medidos con la ayuda de un estereoscopio óptico (Leica, DM750, Suiza) y un analizador de imagen (Carl Zeiss, Axion visión 4.3, Alemania).
Fertilidad y eclosión
La incubación de los huevos se realizó en incubadoras cilindro-cónicas de 60 L de capacidad, con un flujo de 3,0 L/min. A las cuatro horas post-fertilización (hpf) se midió la tasa de fertilidad, tomando una muestra de 100 ovocitos (gastrulación final). Se consideraron como huevos viables aquellos que presentaron aspecto traslúcido y divisiones simétricas en la zona germinal; los no viables presentaron coloración blancuzca. El porcentaje de eclosión se evaluó entre las 10 y 12 hpf y se expresó como el porcentaje de embriones vivos y móviles (faringulación) en una muestra de aproximadamente 100 huevos.
El oxígeno disuelto (mg/L), temperatura (°C), pH fueron medidos con la ayuda de una sonda multiparamétrica (YSI Incorporated, Yellow Springs, OH, USA). Se determinó la dureza (mg/L CaCO3) y la alcalinidad (mg/L CaCO3) con un fotómetro digital (YSI, 9500, USA.)
Análisis estadístico
Se realizó estadística descriptiva y los resultados fueron expresados como promedio ± desviación estándar.
Resultados
La tabla 1 registra los valores de la calidad del agua en la incubación de la vizcaína. El oxígeno disuelto se mantuvo por encima de 4,5 mg/L y la dureza y alcalinidad mostraron valores por encima de 25 mg/L.
La tabla 2 registra las características de los reproductores inducidos hormonalmente con EPC. Las hembras inducidas presentaron peso promedio de 280,5±16,6 g y longitud total (Lt) de 26,4±0,9 cm (n=18); mientras que los machos pesaron 171,2±13,8 g y midieron 24,8±0,8 cm (n=36). Aunque no se observó dimorfismo sexual; cuando los ejemplares están maduros las hembras se observan con el abdomen abultado y la papila genital dilatada y enrojecida; mientras que en los machos el abdomen es anguloso (afilado).
La tabla 3 muestra los resultados de las biopsias ováricas de las hembras inducidas; en las cuales se observó que más del 60% de los ovocitos presentaron vesícula germinal descentrada (migrando, periféricas y sin núcleo); lo cual corresponde a ovocitos en maduración final y por tanto las hembras inducidas se encontraron en estado de maduración final. Además se registró un bajo porcentaje de ovocitos atrésicos (<8.0%).
La evaluación del desempeño reproductivo de la vizcaína inducida con EPC indica que la ovulación ocurrió entre las 5 a 6 horas post-inducción (28,0±1°C), con un índice de ovulación del 90%. La fecundidad relativa fue de 137,7±19,6 g ovocitos/kg de hembra y la fecundidad absoluta estuvo alrededor de 178,331±28,773 g de ovocitos/hembra. La tasa de fertilidad y eclosión fue de 90,7±1,4 y 85,3±1,5% respectivamente (tabla 4).
Durante el proceso de incubación de los huevos se observó que los ovocitos recién desovados de vizcaína registraron diámetro de 687,2±42,8 µm, con abundante vitelo (telolecítico), a las 0,20 hpf el diámetro aumentó 2,6 veces (1808 µm), obteniéndose la máxima hidratación a las 0,60 hpf con un valor de 1923,9±112,8 µm y un incrementó del diámetro 2.8 veces (figura 1).
Discusión
El agua del sistema de incubación se encontró dentro del rango adecuado para la incubación de peces neotropicales (Atencio-García et al., 2013; Mira et al., 2010; Valbuena-Villarreal et al., 2010); lo cual sugiere que el desempeño reproductivo (tasas de fertilidad y eclosión) no fueron afectados por la calidad del agua.
La vizcaína respondió adecuadamente al protocolo de inducción con EPC, registrando alto índice de ovulación (90%), altas fecundidades y tasas de fertilización y eclosión (> 80%). Uno de los aspectos cruciales en el éxito de la reproducción en cautiverio es la selección adecuada de los reproductores; lo cual es posible con una adecuada lectura de la biopsia ovárica. Las hembras de vizcaína inducidas se caracterizaron por presentar más del 60% de los ovocitos en maduración final (sumatorias de ovocitos migrando, periféricos y sin núcleo). Algunos autores han sugerido que el éxito de una sustancia inductora depende en gran medida del porcentaje de ovocitos en maduración final que se determine en la biopsia ovárica; es así como en carpa común Cyprinus carpio, se sugirió inducir solo hembras con EPC cuando la presencia de ovocitos en maduración final (migrando, periféricos y sin núcleos), por los menos alcanzarán 66% (Yaron et al., 2009); en bocachico Prochilodus magdalenae se ha establecido como mínimo el 70% de ovocitos en maduración final para obtener desoves exitosos (Montes-Petro, 2018). Lo resultados del presente estudio sugieren que para inducir la vizcaína con altas tasas de fertilidad y eclosión se deben seleccionar hembras con ovocitos con diámetro entre 650 y 750 µm y por lo menos, con 60% de ovocitos en maduración final.
La alta fecundidad registrada por la vizcaína, indica que el 14% de su peso lo transforma en ovocitos, los cuales se caracterizan por presentar pequeño tamaño (menor de 700 µm), lo que corresponde a una especie con estrategia reproductiva r2 (Jiménez-Segura et al., 2009), tal particularidad ha sido observada en otras especies de carácidos como bocachico (Atencio et al., 2013), cachama negra (Arias-Acuña y Hernández-Rangel, 2009), cachama blanca (Chaves-Moreno et al., 2011), comelón (Atencio-García et al., 2001; Segura-Guevara et al., 2017).
En otras especies de la familia Curimatidae se han reportado diámetros de ovocitos maduros similares a los observados en el presente estudio. Andrade et al., (2010) en Curimatella lepidura registró diámetro de 711±44 µm. En carácidos de otras familias como Leporinus obtusidens (Anastomidae) el diámetro del ovocito maduro se estimó entre 515,2 a 963,0 µm (Andrade et al., 2013); mientras que Peressin et al., (2012) trabajando con Cyphocharax nagelii e Steindachnerina insculpta reportaron diámetro de ovocitos maduros de 1025 µm y 975 µm respectivamente. En Megaleporinus muyscorum el diámetro del ovocito maduro se estimó en 929±19 µm, con una fecundidad absoluta entre 31009 y 63900 ovocitos/hembra y 5171±865 ovocitos por gramos (Atencio-García et al., 2001).
Atencio-García et al., (2013) reportaron para bocachico Prochilodus magdalenae, un pez reofílico con un alto valor comercial, una fecundidad absoluta de 192058 ovocitos/hembra y una fecundidad relativa de 160,5 ± 51,0 g ovocitos/kg de hembra; mientras que Arias-Acuña y Hernández-Rangel (2009), para cachama negra Colossoma macropomum reportaron una fecundidad relativa entre 67,5 y 155,6 g ovocitos/kg de hembra. Estos resultados muestran que el diámetro de ovocito maduro y la fecundidad de la vizcaína, estimados en el presente estudio, se encuentra dentro del rango reportado para otros peces migratorios de los ríos suramericanos.
Durante el proceso de incubación de los huevos, la fase de hidratación es crítica, ya incrementa la flotabilidad de los huevos y la viabilidad del embrión; y luego de esta fase los huevos son más resistente a la manipulación y manejo. En la presente investigación se estableció que los huevos de vizcaína Curimata mivartii, registran su máximo diámetro de hidratación a las 0,60 HPF con un valor de 1923,9±112,8 µm. Valores muy similares a los obtenidos por diversos autores en especies reofílicas como en Prochilodus magdalenae (2230 µm) (Arias-Gallo et al., 2010); en Piaractus brachypomus (1680± 34 µm) (Díaz- Olarte et al., 2010). En Siluriformes, también se han reportado sobre el diámetro máximo de hidratación de los huevos, como en capaz Pimelodus grosskopfii el diámetro de máxima hidratación es de 2700 µm (Valbuena-Villarreal et al., 2012); en Pseudoplatystoma sp el diámetro máximo se estimó en 1930±40 µm (Díaz-Olarte et al., 2010) y en Steindachneridion parahybae este diámetro se registró en 1900±60 µm (Honji et al., 2012). La fuerte hidratación del huevo es una característica de los huevos de los peces reofílicos, por su condición de huevos semi-pelágicos (huevos de flotabilidad neutra) que requieren de un medio lótico para viabilizar el embrión. La vizcaína registra una fuerte hidratación en menos de una hora post-eclosión (0.6 hpe) y su diámetro total se incrementó 2,8 veces y el espacio perivitelínico se estimó en un 24% del tamaño total del huevo. Según Nakatani et al., (2001), los peces reofílicos del neotrópico se caracterizan por presentar una fuerte hidratación que le permite un amplio espacio perivitelínico (mayor al 20%).
Conclusiones
Bajo condiciones de cautiverio la vizcaína Curimata mivartii puede ser inducida con EPC a razón de 6 mg/Kg de peso, aplicado en dos dosis en las hembras (10 y 90%) y una dosis única en los machos correspondiente al 80% de la dosis total de la hembra. Las hembras deben presenta huevos entre 650 y 750 µm y el porcentaje de ovocitos en maduración final debe ser por lo menos del 60%.