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INTRODUCCÍON
Los primeros aislamientos de especies de Arcobacter fueron hechos a partir de fetos bovinos en 1997 y 1978, siendo descritos inicialmente como Vibrio/Spirillum. Más tarde fueron conocidos como microorganismos semejantes a Campylobacter y, finalmente, clasificados en el género Arcobacter en 1991 1,2.
A través de los años, el género Arcobacter ha experimentado una gran expansión, estando constituido actualmente por 27 especies. De ellas, 11 especies han sido aisladas de muestras ambientales, siete de mariscos o moluscos y nueve de animales o alimentos de origen animal 4. Dentro de estas nueve últimas especies, solamente cuatro -A. butzleri, A. cryaerophilus, A. skirrowii y A. thereius- son consideradas bacterias zoonóticas emergentes y de transmisión alimentaria, capaces de producir diarrea y otros procesos infecciosos en seres humanos 2,3,4.
Estas cuatro especies de Arcobacter han sido reportadas produciendo aborto, mastitis y diarrea en mamíferos domésticos. Sin embargo, han sido aisladas frecuentemente de materia fecal de animales sanos, los cuales pueden ser reservorios y fuentes de contaminación de estas bacterias para el hombre y el medio ambiente 1,5,6. De entre los animales utilizados para producir alimentos para consumo humano, los cerdos son un reservorio importante de diferentes especies de Arcobacter y fuente de contaminación para la carne de consumo 1,5,6,7,8.
Considerando que, en América Latina, particularmente en Ecuador, la información disponible sobre Arcobacter en cerdos es limitada y que una proporción significativa de la población ecuatoriana consume carne de cerdo con frecuencia 9, el objetivo de este trabajo fue determinar la prevalencia, la diversidad y el comportamiento antimicrobiano de las especies de Arcobacter spp. aisladas de materia fecal obtenida de cerdos sanos a nivel de matadero.
MATERIALES Y MÉTOD0S
Aspectos éticos. La ejecución de este estudio fue aprobada por el Comité de Ética de la Universidad Técnica Particular de Loja y la toma de muestras fecales fue realizada por un médico veterinario, respetando el bienestar animal.
Recolección de muestras. Fueron tomados aleatoriamente (muestreo no probabilístico por conveniencia), mediante hisopado rectal, 50 muestras fecales a partir de cerdos sanos, antes del comienzo de la faena de matanza en el matadero de la ciudad de Loja (sur de Ecuador).
Métodos de laboratorio. Para el aislamiento de Arcobacter spp., cada muestra fue sembrada en caldo de enriquecimiento CAT (cefoperazona, anfotericina B y teicoplanina) e incubada a 30°C durante 72 h en aerobiosis 10. Luego, alícuotas de 200 uL de cada caldo de enriquecimiento fueron sometidas a filtración pasiva a través de membranas filtrantes estériles de 0,45 um de poro, sobre placas de agar sangre. Después de 30 min, los filtros fueron retirados asépticamente y las placas fueron incubadas bajo las mismas condiciones descritas anteriormente 6,10. Los aislamientos fueron identificados preliminarmente por sus características fenotípicas [bacilos Gram negativos curvos, móviles, oxidasa y catalasa positivos] 6. La identificación de especie fue realizada mediante la prueba multiplex PCR (mPCR) descrita por Douidah et al, la cual caracteriza las cinco especies de Arcobacter asociadas más frecuentemente al ser humano y animales [A. butzleri, A. cibarius, A. cryaerophilus, A. skirrowii y A. thereius]11.
Considerando que los puntos de corte específicos para definir la resistencia en Arcobacter no están disponibles, la resistencia a los cinco antibióticos estudiados (ciprofloxacina, eritromicina, gentamicina, amoxicilina y tetraciclina) fue evaluada utilizando el método de difusión en disco recomendado para Campylobacter por EUCAST 12.
RESULTADOS
De las 50 muestras fecales de cerdo estudiadas, 20 (40%) fueron positivas, siendo identificadas las cuatro especies zoonóticas de Arcobacter. En dos de las muestras positivas fueron aisladas simultáneamente dos especies de Arcobacter (A. butzleri + A. thereius y A. skirrowii + A. thereius). En cada una de las 18 muestras restantes fue aislada solo una especie de Arcobacter. Las especies aisladas en estas muestras fueron A. butzleri (2.0%), A. cryaerophilus (6.0%), A. skirrowii (18.0%) y A. thereius (18.0%).
Como se muestra en la Tabla 1, fue encontrada resistencia a la ciprofloxacina y la tetraciclina en las cuatro especies aisladas, siendo la resistencia a ciprofloxacina la de mayor frecuencia.
Tabla 1 Ocurrencia, diversidad y resistencia antimicrobiana de especies de Arcobacter en muestras fecales de cerdos (50) a nivel de matadero.
| Especies | N°. de aislamientos | % | Resistencia Antimicrobiana | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Cipro | Eritro | Genta | Ampi | Tetra | |||
| A. butzleri | 3* | 6.0 | 1/3a | 0/3 | 1/3 | 3/3 | 1/3 |
| A. cryaeophilus | 1 | 2.0 | 1/1 | 0/1 | 1/1 | 0/1 | 1/1 |
| A. skirrowii | 9* | 18.0 | 3/9 | 0/9 | 0/9 | 1/9 | 1/9 |
| A. thereius | 9 | 18.0 | 6/9 | 1/9 | 0/11 | 2/9 | 2/9 |
*Una cepa de A. butzleri y una de A. skirrowii fueron aisladas simultáneamente con A. thereius a N° de cepas resistentes /N° de cepas estudiadas
Cipro= ciprofloxacina; Eritro= ertromicina; Genta= gentamicina; Ampi= ampicilina; Tetra= tetraciclina
Una cepa de cada una de las cuatro especies aisladas (A. butzleri, A. cryaerophilus, A. skirrowii y A. thereius) mostró multirresistencia. No fueron aisladas cepas resistentes para i) eritromicina en A. butzleri, A. cryaerophilus y A. skirrowii; ii) gentamicina en A. skirrowii y A. thereius y iii) para ampicilina en A. cryaerophilus.
DISCUSIÓN
La prevalencia de especies de Arcobacter en cerdos que ha sido informada en diferentes países fluctúa entre 4,0% en Brasil 8 y 59.3% en Chile 6, aunque datos de prevalencias intermedias han sido comunicadas en Bélgica (11.3-50%), Perú (29.2%) e India (23.3%) 13,14,15. La frecuencia de aislamiento verificada en nuestro trabajo parece ser relativamente alta, aunque cae dentro de los rangos descrito en la literatura. Estos datos sugieren que el cerdo debe ser considerado un reservorio significativo de Arcobacter spp. en diferentes latitudes.
Concordando con los hallazgos de Smet et al. en cuatro granjas porcinas de Bélgica 13, también aislamos las cuatro especies zoonóticas de Arcobacter. Sin embargo, otros autores aislaron principalmente A. butzleri, A. skirrowii y A. cryaerophilus, lo cual podría deberse a que los métodos moleculares que utilizaron no cubren la identificación de todas las especies zoonóticas 6,8,15. Incluso, en algunos trabajos, solo han sido utilizados métodos fenotípicos como lo fue en la experiencia peruana 14. Estas diferencias dejan de manifiesto la falta de métodos estandarizados, universalmente aceptados, tanto para aislar como para identificar con precisión las diferentes especies de Arcobacter.
A. butzleri es la especie que se encuentra con mayor frecuencia en muestras clínicas, ambientales y animales 1. Sin embargo, en este estudio, A. thereius y A. skirrowii fueron las más frecuentes (18% cada una), seguidas por A. cryaerophilus (6%) y A. butzleri (2%). Tasas de aislamiento más bajas de A. skirrowii han sido reportadas 1,14 pero, Ho et al 7 y de Smet et al 13 han informado frecuencias más altas de esta bacteria 7,13. Por otra parte, Ho et al 7 demostraron que la transmisión de Arcobacter spp. de las cerdas a sus crías pueden ser tanto por vía vertical como horizontal, ocurriendo esto último a través de fuentes ambientales 7. A. thereius fue aislado originalmente de cerdos y de patos 16 y con relativa frecuencia de muestras fecales de cerdos sanos y también de algunos pacientes hospitalizados con enteritis 4,16. Actualmente, estas cuatro especies son consideradas agentes zoonóticos emergentes transmitidos por los alimentos que tienen a los cerdos como uno de sus principales reservorios 4,5. Otras especies del género como A. throphiarum, A. suis y A. lanthieri han sido aisladas de cerdos 17. Recientemente, Figueras et al. describieron la nueva especie A. porcinus, estrechamente relacionada con A. thereius (18). Sin embargo, hasta ahora, ninguna de estas especies, excepto A. thereius, ha demostrado ser zoonótica. Teniendo en cuenta que los cerdos son reservorios de especies de Arcobacter que aún no han sido descritas como zoonóticas, los microbiólogos clínicos deben estar conscientes de la posibilidad de que algunas de ellas puedan infectar a seres humanos. Por lo tanto, deben estar preparados para poder identificarlas correctamente.
Con respecto al comportamiento frente a los antimicrobiano, se encontró resistencia a ciprofloxacina y a tetraciclina en las cuatro especies aisladas, llamando la atención la alta resistencia a la ciprofloxacina diagnosticada en A. thereius (6/9) y en A. skirrowii (3/9).
No se observó resistencia a eritromicina en A. butzleri, A. cryaerophilus y A. skirrowii; a gentamicina en A. skirrowii y A. thereius y ampicilina en A. cryaerophilus. Se encontraron cepas multirresistentes, una cepa en cada una de las cuatro especies aisladas. La resistencia a ciprofloxacina y a otros antibióticos, así como la resistencia múltiple, han sido informado anteriormente 19. El pequeño número de cepas estudiadas no nos permite proponer conclusiones sólidas, pero señala la necesidad de realizar estudios de largo plazo para definir la situación epidemiológica de Arcobacter y su comportamiento antimicrobiano en Ecuador.
Los resultados obtenidos demuestran que los cerdos, a nivel de matadero en Ecuador, podrían ser reservorios de las cuatro especies zoonóticas de Arcobacter, las que pueden mostrar resistencia a varios antibióticos, destacándose la resistencia a ciprofloxacina como también el aislamiento de cepas multirresistentes. Se necesitan estudios adicionales de largo alcance para proporcionar información sobre la situación epidemiológica de Arcobacter y su comportamiento antimicrobiano en Ecuador
