INTRODUCCIÓN

El caballo desde tiempos inmemorables se utiliza por parte del hombre para la ejecución de muchas tareas, aunque en las últimas décadas demostró ser útil para contrarrestar discapacidades psicomotoras y como atenuante en niños con parálisis cerebral ^1,2.

Los parámetros hematológicos, enzimáticos o bioquímicos son muy variables en los caballos alrededor del mundo; ya sea por la edad, raza, sexo, tipo de trabajo, temperatura o algunas patologías. En el caso de caballos de resistencia con alto rendimiento, los niveles de potasio y lactato son mayores comparados con los de bajo rendimiento ³. De igual manera que los valores de hemoglobina, hierro y cobre son más bajos en los caballos que padecen "pica" ⁴. En equinos adultos mayores de 15 años, las concentraciones de proteínas plasmáticas, leucocitos, neutrófilos, hemoglobina y hematocrito son mayores en comparación con aquellos de menor edad y expuestos al ejercicio constante ^5,6, pudiendo presentar algunas hembras cambios en su perfil hematológico después del ejercicio ⁷. Asimismo, el ambiente pudiera influir en los parámetros bioquímicos del suero, sobre todo en analitos como AST (Aspartato aminotransferasa) y CK (creatinina cinasa); en caballos criados en el trópico ⁸.

Los valores hematológicos son una importante herramienta para calificar el estado físico-general de los caballos y establecer un posible pronóstico ante una determinada patología ^9,10. Pero hasta la hecha, no existen evidencias de estos valores para la evaluación del caballo Peruano de Paso según su estado reproductivo; que se aplique como referencia en la práctica clínica. Ello ha sido una de las grandes barreras a las que han tenido que enfrentarse aquellos médicos veterinarios dedicados a la clínica médica equina.

El presente estudio tuvo como objetivo; determinar los parámetros hematológicos del Caballo Peruano de Paso, debido a la escasa información respecto a los parámetros hematológicos en los diferentes estados reproductivos.

MATERIALES Y MÉTODOS

Ubicación del estudio. Este estudio de tipo transversal observacional fue realizado entre los meses de enero a febrero del 2019; en diferentes criaderos pertenecientes a la Asociación de Criadores y Propietarios de Caballos Peruanos de Paso de la Provincia de Lambayeque - Perú. La zona se ubica al norte del país y cuenta con una temperatura promedio de 22.5°C, humedad relativa del 48% y 18 m.s.n.m. ubicándose entre las coordenadas 6°42'17"S 79°54'25"O.

Selección de los animales. Se seleccionaron 60 equinos con buena condición corporal, mayores de 4 años (con una media de 8.8±3.9 años) y con libre acceso a agua y con igual proporción entre machos y hembras, discriminados por su estado reproductivo en cuatro grupos de investigación de 15 ejemplares cada uno: hembra vacía (G1), hembra gestante (G2); macho castrado (G3) y macho entero (G4). El régimen alimentario estuvo constituido por alfalfa (Medicago sativa), sorgo forrajero (Sorghum sp.) y maralfalfa (Pennisetum sp.), principalmente; en una proporción del 2% de su peso corporal, conjuntamente con balanceado (Omolin® de Purina).

Manejo de los animales previo a la toma de muestra y criterios de exclusión. Los ejemplares estuvieron en ayuno previo a la toma de las muestras sanguíneas y con un reposo de 30 minutos, se les practicó un examen clínico general con el fin de corroborar su correcto estado de salud y edad promedio mediante cronometría dentaria. No se incluyeron en el estudio caballos con tratamiento farmacológico dentro de los tres meses previos a la toma de muestras sanguíneas o con presencia de alguna patología.

Examen clínico. Se realizaron los métodos de exploración clínica, que se basaba en la inspección, palpación, percusión y auscultación. Los animales se observaron de frente, por ambos lados y desde atrás para tener una mejor valoración de la apariencia general del cuerpo, postura, temperamento, signos de dolor, debilidades, estado de la piel y pelaje. Asimismo, se analizaron la frecuencia y profundidad de la respiración, existencia de heridas, inflamaciones, asimetrías en el desarrollo muscular y posibles exudados presentes en los orificios naturales. Se prestó atención en las mucosas orales y oculares, en búsqueda de anormalidades en el color, textura y conformación dentaria. Se palparon las extremidades anteriores en las regiones preescapular y pectoral, en búsqueda de la existencia de zonas con calor, dolor o inflamación, así como anomalías de conformación. Se calcularon la frecuencia cardiaca (FC) y respiratoria (FR), el pulso digital y la temperatura corporal. Se tomaron como referencia los rangos fisiológicos normales para esta especie: FC=28-40 latidos/min, FR= 8-20 respiraciones/min y Temperatura corporal = 37.5-38.5°C. Se realizó el examen del abdomen, mediante auscultación de la fosa paralumbar y las regiones ventrales del flanco para evaluar los movimientos peristálticos y sonidos provenientes de la válvula ileocecal. Este procedimiento también permitió evaluar las características de los ruidos intestinales (normales, aumentados, disminuidos o ausentes). En la región ventral derecha se auscultó el colon ventral derecho; en la fosa paralumbar izquierda, el intestino delgado y en la región ventral izquierda, el colon ventral izquierdo. En el caso de yeguas se examinó la vulva (conformación, tono y color de la mucosa) en búsqueda de posibles descargas anormales. En contraste se palparon en lo machos el prepucio, pene y testículos para verificar la existencia o no de neoplasias ¹¹.

Toma de muestras de sangre. Previo a la toma de muestra se realizó la antisepsia de la zona del surco yugular con alcohol al 90%. De cada animal se tomó 3 ml de sangre, con ayuda de un Holder y una aguja (21x 1^1/2), en un tubo de colecta con anticoagulante EDTA (ácido etilendiaminotetraacético). Se homogenizó y rotuló la muestra indicando la edad, sexo y procedencia del animal. Las muestras se transportaron refrigeradas (2-5°C) en recipiente hermético (Cooler) con gel refrigerante hasta el Laboratorio de Patología Clínica de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo. El tiempo trascurrido entre la obtención de muestras sanguíneas y análisis de laboratorio fue de 45 minutos en promedio.

Análisis de muestras de sangre. Para la determinación del hematocrito (Ht) se utilizó tubos capilares heparinizados, que fueron selladas en un extremo con plastilina; que luego se centrifugaron durante tres minutos a 30 000 rpm en una microcentrífuga. Los resultados se interpretaron de acuerdo a la tabla de hematocrito del 0-100 expresándose en porcentaje ¹².

La hemoglobina (Hb) se calculó a través de la homogenización de 2.5 ml de reactivo Drabkin más 10 μL de sangre que fueron dejadas en reposo por un lapso de tres minutos. Los tubos de ensayo fueron leídos en el fotocolorímetro a una longitud de onda de 550 nm, utilizando también un tubo blanco con la solución Drabkin que sirvió como calibrador ¹²

El conteo de Eritrocitos Totales (ET) fue por medio de la cámara de Neubauer. Para ello se diluyó 1 ml de reactivo Gower con 5 μL de sangre con anticoagulante. Invirtiendo cuidadosamente los tubos varias veces con el fin de lograr una mejor mezcla y dejándolo reposar 3 minutos. Se introdujo entre la cámara de Neubauer y el cubreobjetos 10 μL de la solución para que fluyera por medio de la capilaridad para luego dejarla reposar otros 3 minutos. El conteo se realizó bajo microscopio óptico a 40X, empleándose la siguiente fórmula: células contadas x 10 000 ¹².

Las constantes corpusculares se dedujeron por medio de las siguientes fórmulas:

VCM = Ht x 10/ET; HCM = Hb x 10/ET y CMHC = Hb x 100/Ht ^12,13

Para contabilizar el Total Leucocitario (TL), se mezcló 0.96 ml del reactivo de Turk y 50 μL de sangre, dejando reposar 3 minutos. Luego se introdujo por capilaridad 10 μL de la solución entre la cámara de Neubauer y cubreobjetos, reposando otros tres minutos para su posterior conteo. Se siguió la siguiente fórmula TL=células contadas x 50 ¹².

El conteo diferencial de leucocitos se realizó en frotis de sangre con la tinción de Wright. Se contaron 100 células en total y se expresaron las cantidades observadas en porcentaje. Se agruparon los precursores mieloide y linfoide para facilitar la separación en la fórmula leucocitaria y poder establecer la comparación con los rangos fisiológicos de referencia ^12,13.

En el cálculo de las plaquetas totales (PT) se mezcló 2 ml de oxalato de amonio y 20 μL de sangre. Posteriormente, se colocó 10 μL de la solución en la cámara de Neubauer, que se dejó incubar en una cámara húmeda por un lapso de 15 minutos. Las PT = células contadas X 1 000 ¹².

Análisis estadístico. Se aplicaron las pruebas de homogeneidad de varianza de Levene y Kruskal Wallis. Las posibles diferencias entre los grupos de estudio (estado reproductivo y sexo), se aplicó la prueba post hoc de Tukey. Considerándose estadísticamente diferente cada grupo cuando el valor p<0.05. Se obtuvieron los estadígrafos de cada variable de la serie roja, blanca y trombocítica como la desviación estándar, media y rangos. Todo ello trabajado en el paquete estadístico SPSS Statistics v25.0.

Aspectos éticos. Todos los procedimientos llevados a cabo, durante la recolección de muestras y examen físico general; estuvieron dentro de los límites permitidos en el reglamento del Comité Institucional de Ética en Investigación con Animales y Biodiversidad de la Universidad Científica del Sur, aprobado en el 2017. En este estudio se salvaguardó la integridad y salud de los animales evaluados.

RESULTADOS

El hematocrito, hemoglobina y recuento eritrocitario fueron mayores; pero no estadísticamente significativos en machos enteros como se muestra en la tabla 1. Además, no se encontraron diferencias significativas en la serie roja en relación al estado reproductivo de los caballos.

Tabla 1 Valores hematológicos de la serie roja entre grupos de investigación de equinos de la raza Caballo Peruano de Paso criados en Lambayeque. 

G1=hembra vacía; G2=hembra gestante; G3=macho castrado; G4=macho entero; Mín=Mínimo; Máx=Máximo; GR= Glóbulos rojos; Hb= Hemoglobina; Hto= Hematocrito; HCM= Hemoglobina corpuscular media; VCM= Volumen corpuscular medio; CHCM= Concentración de hemoglobina corpuscular media; *p<0.05 en relación con el estado reproductivo (Kruskal-Wallis)

En los valores de la serie blanca (Tabla 2), los valores de leucocitos y neutrófilos segmentados fueron menores en machos, pero mayores en neutrófilos abastonados. Además, existe significancia estadística entre los grupos; siendo favorecido los machos enteros; encontrándose mayor número de basófilos.

DISCUSIÓN

Los exámenes hematológicos en la medicina veterinaria son las más solicitadas por los profesionales; debido a su rapidez y sencillez. Donde los resultados dan un panorama general del estado de salud del animal, la cual se complementa con el examen físico general e historia clínica. Los valores hematológicos son muy variables, pudiendo ser las causas de estas variaciones la nutrición, edad, raza entre otros. Sin embargo, los hallazgos encontrados en este estudio se ubican dentro de los parámetros que reporta la literatura especializada y laboratorios peruanos de prestigio que ejecutan análisis clínicos en esta especie. Reportándose que el número de linfocitos se encuentran por debajo del reportado por los laboratorios ^13,14.

El recuento total de eritrocitos encontrados está por debajo del hallado en caballos de paso del valle de Lurín con una media de 8.3x10⁶/μL ¹⁵. El hematocrito, se halló en el límite inferior de caballos criollos en Brasil, con una media de 37.4% ¹⁶; pero por encima del encontrado en caballos frisones de América del Norte (34%) y de la raza Noma de Japón (35.5±7.1%). Además, este último presenta niveles elevados de eosinófilos (383±529/μl) y bajo en monocitos (74±123/μul) ^17,18. Posiblemente los contrastes antes mencionados, se deba a diferencias en protocolos de sanidad, exposición a enfermedades, altitud de la región y alimentación. Siendo este último, probablemente el causante de cambios hematológicos en equinos ¹⁹.

Los picos de hemoglobina pueden diferir en un mismo animal, de acuerdo al tiempo de ejercicio que este realiza. Ello explica que los valores de hemoglobina del caballo peruano de paso son muy similares a los encontrados en caballos de raza Jeju mayores de 4 años en estado de reposo ²⁰.

El nivel de basófilos en machos enteros (82±57/μl) fue el más elevado dentro de los grupos estudiados. Este valor se encuentra por encima de los encontrados en machos de 10 años de la raza Barb en Argelia; con una media de 53±47.51/μl, donde también se evidenció que el número de basófilos fue mayor en machos ²¹. Aunque es común que la especie equina demuestre basofilia ¹².

Independientemente de que en este estudio no hubo diferencias significativas entre sexos, se corroboró que las hembras tienen mayor variabilidad en los parámetros hematológicos después del ejercicio ⁷, aunque en algunas razas (Lipizzano) esto puede tener un efecto contrario ²². Lo mismo pudiera ocurrir con el VCM, donde en ocasiones este es mayor en machos castrados mayores a 25 meses de edad ²³, sin embargo, no se observaron diferencias entre los grupos estudiados.

El VCM es muy similar al de los caballos árabes sanos; pero se ubica por debajo de los niveles de HCM y CHCM con una media de 17.5 pg y 36.64 gr/dl, respectivamente. Además, los niveles de plaquetas fueron mucho más altas en comparación con la raza antes mencionada ²⁴

Asimismo, las hembras gestantes en periparto pueden tener valores hematológicos diferentes al resto del grupo; debido a deshidratación en el parto; causando hemoconcentración, estrés y desbalance energético ^25,26. En contraste, todo lo opuesto puede ocurrir en hembras vacías que poseen valores más altos en hemoglobina y recuento de eritrocitos, en comparación con yeguas gestantes andaluza y pura sangre ²⁷. Por otro lado, las yeguas gestantes pesadas de tiro de Japón, clínicamente sanas; poseen valores linfocitarios menores (2490/μl) pero alto en número de neutrófilos segmentados (5730/μl), en comparación de la yegua gestante peruana de Paso ²⁸. A diferencia de estos resultados, en este estudio no se observaron diferencias en las mismas variables.

En otro sentido, la toma de muestras del presente estudio se realizó en temporada de verano; época en la que algunos autores han comprobado la existencia de cambios hematológicos ocasionado por la temperatura ambiental, humedad relativa y precipitaciones donde la HCM es más alta en verano y los eosinófilos, en invierno ²⁹. Por ello deben tenerse en cuenta los factores antes mencionados, para definir la extracción de muestras sanguíneas.

Como es de conocimiento, el caballo peruano de paso no es usado exclusivamente para el trabajo, sino más bien para exhibiciones y concursos. Durante el tiempo previo a dichos eventos, los caballos son sometidos a entrenamientos durante largos periodos; pudiendo denotar cambios hematológicos y bioquímicos en relación con aquellos que no son forzados a estas prácticas y ejercicios intensos ^30,31,32. Esto pudiera ser un factor condicionante, de cambios en los valores hematológicos en el Caballo Peruano de Paso.

Como se había señalado, no existen parámetros hematológicos de referencia en caballos peruanos de paso según su estado reproductivo. Los resultados obtenidos servirán como punto de partida para la elaboración de un tratamiento integral y a su vez, establecer un pronóstico sobre la salud general de los equinos de Lambayeque.

Se concluye que los parámetros hematológicos estudiados en los caballos peruanos de paso de la provincia Lambayeque, se mantienen en el rango fisiológico de referencia y son similares en los diferentes estados reproductivos