Induced breeding and production of fingerlings of Sabaleta Brycon henni: Determining the time of latency using Carp Pituitary Extract

Reprodução induzida e produção de alevinos da Sabaleta Brycon henni: determinação do tempo de latência utilizando Extrato de Hipófise de Carpa

Gustavo A Lenis^1*, Biólogo, cMSc; Luis F Restrepo¹, Estadístico Esp; Juan C Rivera J, Ing Acuícola; Fabián Monsalve, Ing Acuícola; Pablo E Cruz-Casallas², MVZ, MSc, PhD.

¹ Grupo de Investigación GRICA. Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad de Antioquia, AA 1226, Medellín, Colombia. ² Grupo de Reproducción y Toxicología GRITOX, Instituto de Acuicultura, Facultad de Ciencias Agropecuarias y Recursos Naturales, Universidad de los Llanos, A.A 110, Villavicencio, Meta - Colombia.

(Recibido: 29 octubre, 2008; aceptado: 26 abril, 2009)

Resumen

Esta investigación fue realizada en la estación piscícola de San José del Nus (Antioquia). Fue iniciada en el año 2002 con la captura y adaptación de un lote de 100 reproductores silvestres, provenientes de tres microcuencas cercanas a la estación piscícola y fue continuada en el año 2003 con la captura de otros 80 ejemplares, con los cuales se hicieron los primeros ensayos de inducción hormonal estimulando la maduración final y la ovulación con dos dosis de Extracto Pituitario de Carpa (EPC) (0.5 + 5.0 mg/kg de peso corporal). Para la obtención de los gametos se utilizó extrusión en seco en los tres grupos de peces. La maduración final y la ovulación se indujo en 20 hembras y la espermiación en 20 machos. El resultado más relevante fue la ovulación y desove de ocho hembras, de las cuales sólo dos fueron completamente exitosas, con un tiempo de latencia de 13 y 11 h, respectivamente. De la primera hembra con un peso de 136.2 g, se extrajeron 1421 huevos, los cuales fueron fertilizados, mostrando una sobrevivencia de embrión a larva de 28% y de larva a alevino de 35.7%. La segunda hembra, de 90 g de peso corporal, desovó 1348 huevos mostrando un porcentaje de fertilidad de 74%, sobrevivencia larval del 40% y sobrevivencia hasta alevino comercial de 25%. En cada uno de los desoves se obtuvo un número de alevinos netos de 141 y 101, respectivamente. La temperatura de incubación fue de 24.5 ºC y de 25.3 ºC. Cabe destacar que el en mismo año se encontró una hembra ya desovada que presentó nuevamente madurez gonadal tres meses más tarde.

Summary

This research was conducted in the San José del Nus fish farm, located in the Municipality of San Roque (department of Antioquia). This study began in 2002 with the capture and suitability of 100 wild breeding fish batches coming from three sub-basins near to San José del Nus fish farm. In 2003, another 80 specimens were captured and utilized for first hormonal induction trials by stimulating final maturation and ovulation with two doses of Carp pituitary extract (CPE) (0.5 + 5.0 mg/kg B.W.). Dry extrusion was used in the three groups of fish to obtain gametes. Spermiation and final maturation plus ovulation were induced in twenty males and females, respectively. The most relevant result was ovulation and spawning in 8 cases. Two of them were completely successful; their latency period was 13 and 11 h, respectively. From the first previously fertilized female (136.2 g. B.W.) 1421 eggs were extracted, with a survival of 28% from embryo to larva; and 35.7% from larva to alevin. The second female (90 g B.W.) spawned 1348 eggs, resulting in a fertilization rate of 74%, larval survival of 40% and survival until alevin for commercial use of 25%. In both cases, spawning resulted in an alevin net number of 141 and 101, respectively. Water incubation temperature was 24.5 ºC and 25.3 ºC. It is important to emphasize that in the same year a previously spawned female was found, and three months later this female presented gonadal maturity once again.

Key words: fertilization, hatching, hormonal induction, latency, spawning, viability.

Resumo

Esta pesquisa foi realizada na estação de piscicultura de São José del Nus (Antioquia). Foi iniciada no ano 2002 com a captura e adaptação de um lote de 100 reprodutores selvagens provenientes de três córregos perto da estação piscicola e foi continuada no ano 2003 com a captura de outros 80 exemplares, com os quais foram feitos os primeiros ensaios de indução hormonal estimulando a maduração final e a ovulação com duas doses de extrato de hipófise de carpa (0.5 + 5.0 mg / kg de peso corporal). Para a obtenção dos gametas se utilizo extrusão em seco para os três grupos de peixes. A maduração final e a ovulação foi induzida em 20 fêmeas e a espermiação em 20 machos. O resultado mais relevante foi a ovulação e desova de oito fêmeas, das quais apenas duas foram completamente bem sucedidas, o período de latência foi de 13 e 11 h, respectivamente.. Da primeira fêmea, com 136.2 g de peso corporal, obtiveram-se 1421, os quais foram fertilizados, com uma sobrevivência desde embrião a larva de 28% e de larva até alevin de 35.7%. A segunda fêmea de 90 g de peso corporal, desovou 1348 ovos mostrando uma percentagem de fertilidade de 74%, sobrevivência larval de 40% e sobrevivência desde larva a alevin comercial de 25%. Em cada uma das desovas foram obtidos 141 e 101 alevines, respectivamente. A temperatura da água de incubação foi de 24.5 ºC e 25.3 ºC, respectivamente. Outra observação importante foi que, durante o mesmo período encontrouse uma fêmea desovada que apresentou de novo maturação gonadal 3 meses mais tarde.

Palavras chave: desova, eclosão, fertilização, indução hormonal, latência, viabilidade.

* Para citar este artículo: Lenis GA, Restrepo LF, Rivera JC, Monsalve F, Cruz-Casallas PE. Reproducción inducida y producción de alevinos de sabaleta Brycon henni: determinación del tiempo de latencia utilizando extracto de hipófisis de carpa. Rev Colomb Cienc Pecu 2009; 22:143-155

Introducción

La reproducción inducida en peces consiste en administrar a los reproductores, hormonas de origen natural o sintético para provocar la maduración final de sus gónadas y la ovulación o espermiación, cuando bajo las condiciones de cautiverio no experimentan los estímulos ambientales necesarios para desencadenar las respuestas endocrinas que gobiernan el proceso reproductivo. Estos estímulos inciden sobre el hipotálamo provocando la liberación de la hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH) (46), la cual estimula las células gonadotropas de la hipófisis, induciendo la producción de las hormona FSH, encargada de la formación de vitelo y de la hormona LH, responsable de la maduración final de los ovocitos (67). En este proceso también participan otras hormonas de origen gonadal, tales como testosterona, 17β estradiol (65), 17α-20β dihidroxi-progesterona (29), 17α, 20β-dihydroxi-4-pregnen-3-ona (17α, 20βP) y 17-20β-21 trihidroxi-4 pregnen-3 ona (1, 21, 28).

El uso de diferentes sustancias para inducir la vitelogénesis, maduración, ovulación y, finalmente el desove en las diferentes especies de peces en cautiverio ha sido evaluado por varios autores (8, 18, 19) y actualmente vienen empleándose con éxito en varias especies de peces marinos y estuarinos, tales como los lenguados Paralichthys tropicus con gonadotropina coriónica humana (hCG) (56) y el mero Epinephelus marginatus (38), entre muchas otras. Se han obtenido también resultados exitosos en especies de peces dulceacuícolas como Brycon cephalus (55) y Brycon insignis (3), B.amazonicus (34), utilizando en las dos especies Extracto de Hipófisis de Carpa (EHC) (66), y en Brycon opalinus (48) usando Extracto de Hipófisis de Salmón (EHS). En siluriformes, como Pseudoplatystoma fasciatum (35) también se ha reportado el uso exitoso de EHC, solo o combinado con hCG.

En carpas Cyprinus carpio, Hypophthalmichthys molitrix, Ctenopharyngodon idella y en el Bleak o mento Chalcalburnus calcoides (33), se ha reportado el uso de GnRHa sola o combinada con EHC (12). En Colombia hay reportes de resultados satisfactorios con hCG en bocachico Prochilodus magdalenae (57), EHC en cachama blanca y negra Piaractus brachypomus y Colossoma macropomum (53, 63, 66), blanquillo Sorubim cuspicaudus (8), yaque Leiarius marmoratus (15), curimbatá Prochilodus scrofa (42), yamú Brycon amazonicus (5, 6, 7), barbilla Rhamdia sebae (22) entre otras especies tropicales. Con Ovaprim, un producto comercial que incluye GnRHa combinado con un bloqueador de los receptores de dopamina (Domperidone) se tienen reportes de su uso exitoso en Sorubim cuspicaudus (9), barbilla Rhamdia sebae Cf. (22), moneda Methinnis spp (17) y tigrito Pimelodus pictus (Aya E., comunicación personal). Con Ovopel, una combinación de GnRHa y el antidopaminérgico Metoclopramide, se tienen reportes en las especies barbilla Rhamdia sebae Cf. y yamú Brycon amazonicus (5).

Las variables para medir la respuesta a la administración de las hormonas son especialmente la progresión de la maduración del ovocito, la ovulación y el desove, acompañado o no de cortejo entre los reproductores, así como la medición de varios parámetros de desempeño reproductivo como el tiempo de latencia, el número y el tamaño de los ovocitos pre y post desove, el porcentaje de fertilización, la sobrevivencia embrionaria y larval y finalmente el número de alevinos obtenido.

La sabaleta Brycon henni, una especie nativa de las quebradas de la zona cafetera colombiana, parece ser un importante bioindicador con relación a la calidad de las aguas corrientes y el decrecimiento de esta especie reofílica, al parecer, es producto de la fragmentación de las corrientes, por la construcción y operación de represas. Sin embargo, una de las dificultades para trabajar con esta especie, con potencial para la acuicultura nacional, es obtener cantidades comerciales de huevos viables y predecir con cierto grado de exactitud el tiempo de latencia, después de que los huevos por tratamiento hormonal, son ovulados y expulsados hacia la cavidad ovárica del pez, para proceder con el extrujamiento y la seminación artificial. Algunos problemas todavía persisten como la incertidumbre de las hembras para que respondan positivamente al tratamiento hormonal y parcialmente a la ovulación, lo cual hace prácticamente imposible la obtención de los huevos por una simple extrusión (68). En Brycon henni, se han realizado estudios de biología (36, 50, 52), ecología (20, 49, 51) y pesquerías, reportados por varios autores (20, 36, 50). En reproducción inducida y desarrollo gonadal, además de los trabajos preliminares a partir de protehormonas (54), de Builes y Uran (13) Zapata y Vanegas (71) y de Perdomo (50), se reportan algunos trabajos sobre desempeño reproductivo de la especie (10, 26, 41) y una revisión bibliográfica sobre el tema (43).

En cuanto a cultivo, únicamente se han reportado los trabajos de Álvarez y Duque (2), Arboleda et a. (4), Greco y Granda (27) y de Isaza con Brycon fowleri (30). En aspectos relacionados con la caracterización seminal y métodos de crioconservación y descripción de la gónada masculina, también se han reportado recientemente varios trabajos (60, 61, 62) y un trabajo comparado sobre conservación de semen para tres especies del género Brycon, incluyendo a B. henni (11).

Aunque la biología reproductiva es el tópico más estudiado sobre la especie, sin embargo se necesitan investigaciones que esclarezcan preguntas relacionadas con parámetros medioambientales que desencadenan diversas respuestas reproductivas, protocolos efectivos de inducción hormonal con diversas sustancias inductoras y descripción del desarrollo embrionario y larval (45). Realizando una descripción anatómica e histológica de las gónadas, haciendo énfasis en aspectos de su biología reproductiva como la gametogénesis y su relación con algunas variables ambientales a lo largo del año, según los resultados encontrados en este trabajo, B. henni desovaría en los meses de menor pluviosidad (44).

Materiales y métodos

El trabajo se realizó en la estación piscícola de San José del Nus, de la Universidad de Antioquia, localizada en el municipio de San Roque Departamento de Antioquia, Colombia, a una latitud de 6º 2’ N, longitud de 74º 50’ 0, altura promedio de 830 msnm, precipitación promedio anual de 2200 mm, ubicada en una zona de bosque muy húmedo premontano (bmh - PM). Se utilizaron tres grupos de reproductores capturados entre septiembre de 2002 y abril de 2003 en las microcuencas La Clara (municipio de Gómez Plata) y las quebradas Quivocá y Ahumareda, localizadas en el Municipio de Puerto Berrío, en el corregimiento de Virginias. Se hicieron muestreos preliminares en los tres sitios con el objeto de comprobar la presencia de peces de la especie sabaleta, utilizando métodos artesanales de captura, especialmente una atarraya de ojo de malla de una pulgada y 2.5 m de diámetro, procurando capturar únicamente animales en edad reproductiva. Para las labores de reproducción se utilizaron las instalaciones del Laboratorio de la Estación Piscícola, con dos piletas circulares de 2.5 m de diámetro y una altura de 1.1 m y seis piletas para incubación con dimensiones de 6m de largo por 1m de ancho y 1.10 m de alto.

Peces Experimentales

Para la selección y muestreo de los reproductores, se realizó un arrastre con chinchorro de nylon de ojo de malla de 1 cm, sin nudo, de 2 m de altura. Se preseleccionaron hembras por sus características externas como vientre abultado y papila genital ligeramente dilatada y enrojecida; los machos por salida de semen al ejercer suave presión sobre el vientre. Se transportaron dentro de bolsas plásticas con agua hacia las piletas circulares de concreto, aprovisionadas con agua limpia. Se pesaron utilizando balanza Ohaus con capacidad de 500 g y se identificaron en la aleta dorsal. Para la biopsia ovárica se utilizó una cánula nasofaríngea pediátrica Nº 6; las muestras de ovocitos se fijaron en suero fisiológico al 0.5% NaCl para contar el número de ovocitos por gramo, utilizando un estereomicroscopio marca Nikon. Luego se retiró el suero fisiológico y se adicionó solución Serra (85% alcohol etílico al 90% de pureza, 10% formol y 5% ácido acético glacial); Cinco minutos después se procedió a contar los ovocitos con núcleo central, en migración y atrésicos.

Inducción Hormonal

Para las inducciones se prepararon las dosis de extracto de hipófisis de carpa (EHC) para macho (3 mg/kg P.V.) y hembra (0.5 -5 mg/kg P.V.), con ayuda de una balanza analítica marca Ohaus de 0.0001 g. de precisión; la hormona liofilizada fue macerada en un vidrio de reloj adicionándole 0.5 ml de suero fisiológico. Cuando la solución se homogenizó se agregó 0.5 ml más de suero para lavar el vidrio y completar la dosis de 1 ml de dilución por cada aplicación. Las hembras se inyectaron con intervalos de 10 h entre la primera y la segunda dosis. Los machos se inyectaron simultáneamente con la segunda dosis de las hembras. Posteriormente se inició la medición de temperatura con un termómetro de máximas y mínimas, cada hora, con el objeto de determinar el “tiempo de latencia” al desove. También se registró la temperatura y la concentración de oxígeno disuelto en el agua de la pileta con un oxímetro digital marca WTW, desde el momento de la captura de los reproductores y durante todo el proceso de aplicación de hormona, para relacionarlos con el comportamiento de los reproductores.

Obtención de los Gametos

Seis horas después de la última dosis, se inició la observación del comportamiento reproductivo de los peces como acompañamiento y cortejo, de acuerdo con experiencias de otros Brycon (B. moorei y B. amazonicus). Entre las 8 y las 13 h pos inducción, las hembras fueron sacadas cada hora de la pileta, se hacía una suave presión abdominal hasta el momento en el cual se obtenían huevos y se procedía a sedarlos con 2-fenoxietanol (6 gotas en 10 L de agua) por tres minutos y se estrujaron, recogiendo los huevos en un plato plástico previamente tarado para pesarlos. Se contó en un gramo el número de unidades y los huevos obtenidos fueron repartidos en dos platos. El semen se colectó directamente por estrujamiento del macho, seminando los dos grupos de huevos, agregando agua fresca para activar la movilidad de los espermatozoides y mezclando cada grupo con una pluma por dos minutos. Se realizaron siete recambios de agua para retirar impurezas.

Los huevos seminados se depositaron en una incubadora tipo californiana o de bandeja. A las seis horas postseminación se determinó el porcentaje de fertilización, para lo cual se tomaron tres muestras y se observaron cuales estaban fertilizados. A las 30 h posfertilización, se calculó el porcentaje de sobrevivencia embrionaria, contando los huevos con larvas a punto de eclosionar y en proceso de desarrollo en la incubadora. Después de la eclosión que ocurrió entre las 40 y 60 h postfertiización, se procedió a recolectar las larvas, retirando la cubierta de la incubadora californiana con los restos de huevos y capturándolas con un recipiente plástico tipo beaker de 1000 ml;, se contaron, se sembraron en una pecera de vidrio y se le suministró nauplios de Artemia salina durante una semana, luego se trasladaron a un estanque en tierra de 40 m², similar al que se utiliza para la adaptación de reproductores, previamente abonado con un bulto de 50 kg de bovinaza bien disuelta y filtrada. También utilizando plancton, colectado con malla de 300 µm de otros estanques abonados.

A los quince días de sembradas las larvas, se inició la alimentación exógena en las horas de la mañana (entre 5:00 y 6:00 am) y en las horas de la tarde (entre 17:00 y 18:00 pm) con alimento balanceado molido de 45% de proteína. Treinta días después se cosecharon los alevinos utilizando un chinchorro de 5 m de longitud, 1.20 m de altura y ojo de malla de 1/4 de pulgada y se cambiaron de estanque para dar mejores condiciones en cuanto a suministro de agua y alimentación. Cada hora se registró la temperatura y la concentración de oxígeno disuelto.

Análisis Estadístico

Se empleó el modelo lineal general (GLM) con el objetivo de probar si existía diferencia estadística en el efecto de la Latencia, entre los tres grupos de peces inducidos hormonalmente, durante las temporadas febrero-marzo, octubre-noviembre de 2003 y febrero de 2004, convalidándose los supuestos de normalidad, aleatoriedad e independencia de los errores experimentales y, adicionalmente, la homogeneidad de varianzas entre grupos de peces inducidos. Con el objetivo de comparar el efecto promedio, se empleó la prueba de Tukey, con un nivel de confiabilidad de 95%. De igual forma se llevó a cabo análisis descriptivo exploratorio de tipo unidimensional, con el objetivo de establecer la media aritmética, la desviación típica y el coeficiente de variación. Para todos los análisis se empleó el software de estadística SAS, versión 8.2.

Resultados

Luego de haber inducido 20 hembras y 20 machos, distribuidos en tres grupos de acuerdo con la temporada reproductiva por año (véase Tabla 1), se presentó respuesta en uno de los desoves realizados en los meses de febrero y marzo de 2003 (n=4) del grupo uno, con un tiempo de latencia de 11 h después de aplicada la dosis resolutoria, pero no se observó fertilidad. En el grupo dos, inducido durante la segunda temporada reproductiva (octubre-noviembre de 2003), se presentó respuesta positiva en el 50% de hembras inducidas (n=12), observándose un período de latencia de 13h, fertilidad de 89% y sobrevivencia larval de 28% (véase Tabla 1), de los cuáles se lograron obtener 141 alevinos en talla comercial (3 cm). En el tercer grupo, correspondiente a la primera temporada reproductiva de 2004 (febrero), 25% hembras presentaron diferentes tonos de color de las hembras ovularon (n=4) con un período de de sus ovocitos: Blancos, traslúcidos y de color latencia de 11 h, 74% de huevos fecundados, 40% de pardo. Los huevos de las hembras que presentaron sobrevivencia larval (véase Tabla 1), de las cuáles se color pardo fueron aquellos los que presentaron obtuvieron 101 alevinos de talla comercial. mejores tasas de fertilidad. Se logró la secuencia del desarrollo embrionario tomando fotografía digital El promedio de huevos por gramo fue de 375 en periodos de 30 minutos y durante 40 horas hasta (véase Tabla 2) y una particularidad es que algunas que eclosionaron las primeras larvas.

Discusión

De las 20 inducciones que se realizaron con la especie Brycon henni, ocho hembras (40%) respondieron bien a la inducción y ovularon con 0.5 y 5 mg por kg de peso vivo de EHC, seis de ellas con huevos fecundados, pero sólo dos tuvieron un desempeño reproductivo completo hasta la fase de alevino, lo que representa un porcentaje muy bajo para concluir que se ha establecido un protocolo de reproducción de la especie. Dosis similares han sido aplicadas en Brycon cephalus por Romagosa (55) con un intervalo de aplicación entre dosis también de 10 h y una única dosis en los machos de 2.5 mg por kg de peso corporal, con respuesta positiva del 45% ( 10 de 22 hembras). Andrade-Talmelli et al (3), en un tratamiento hormonal similar con la especie Brycon insignis, de 77 hembras seleccionadas por características externas, 43 (56%) respondieron positivamente a los tratamientos hormonales. Narahara et al (48), en reproducción inducida de Brycon opalinus con extracto de hipófisis de salmón, de 29 hembras tratadas, 14 (48%) respondieron positivamente al tratamiento hormonal. La respuesta al inductor en estas tres especies del género Brycon fue ligeramente superior a B. henni.

El tiempo de latencia entre la aplicación de la segunda dosis y la ovulación fue calculado en 13 h para el grupo 2 de hembras tratadas, durante la segunda temporada reproductiva (noviembre) de 2003 (n=12) y en 11 h para el grupo 3, tratado durante la primera temporada reproductiva (febrero) de 2004 (n=4) (véase Tabla 1). No se encontraron diferencias estadísticas entre los tres grupos con respecto a la variable latencia (p>0.05). El tiempo de latencia para la sabaleta fue mayor que para otros Brycon, tales como el yamú Brycon amazonicus y la dorada Brycon moorei, que normalmente es de 7 h (18, 40, 64). Arboleda 2006, resultados no publicados, reporta para la especie sabaleta Brycon henni un tiempo de latencia de 10.5 h bajo las condiciones de la estación piscícola del municipio de San Jerónimo, con temperatura promedio del agua de 22 ºC. Debería esperarse bajo estas condiciones, un incremento en el tiempo de latencia muy similar a lo encontrado en el grupo tres, pero con temperaturas superiores.

En Brycon cephalus (55), el momento de la liberación de los huevos y la extrusión ocurrió a las 12 h, en uno de los grupos tratados, en B.opalinus (48) y en B.insignis a las 10 h (3), muy similar a los resultados encontrados en este experimento con B. henni. Yaron en (67), sugiere que la latencia fue siempre más corta en peces tratados con EHC que en peces tratados con otras hormonas, lo cual no coincide con los resultados obtenidos en B. opalinus, B. insignis, B. cephalus y, en B .henni, pero si lo fue para B. amazonicus y para B, moorei. Esto puede ser explicado por el hecho de que la liberación de GnRH de la hipófisis y su respuesta en el ovario es un proceso secuencial, mientras que en los peces inyectados con EHC, la respuesta del ovario a la LH exógena es un proceso simple (31).

El porcentaje de huevos fecundados en B. henni fue alto en el Grupo 2, correspondiente a la segunda temporada reproductiva de 2003 (Octubre-Noviembre) con un promedio de 89% y sobrevivencia larval del 28% (véase Tabla 1), que correspondió con una de las hembras que tuvo un desempeño reproductivo completo hasta alevino. 50% de las hembras de este grupo respondieron positivamente al tratamiento con EHC, mientras que en los Grupos uno y tres correspondiente a la primera temporada reproductiva de 2003 y 2004, solamente el 25% de las hembras respondieron al tratamiento hormonal, con un desempeño reproductivo completo hasta la fase de alevino en el Grupo tres. Las tasas de fertilización y eclosión reportadas en Brycon cephalus (55) fueron del 95% y 85%, en B. insignis (3) de 76% y 42% y con B. opalinus (48) del 90% y del 40%, respectivamente. Desoves experimentales en el ciprínido Chondrostoma nasus, que recibieron inyecciones de extracto de hipófisis de carpa en dosis de 6 mg/kg, tuvieron índices de ovulación altos (86%) y el índice de fertilización fue 74.7% y 83.5%, respectivamente (59).

El porcentaje de respuesta ovulatoria, tiempo de latencia, porcentaje de fertilización y de sobrevivencia embrionaria en barbilla Rhamdia sebae cf, utilizando 5.5 mg.kg^-1 de EHC en dosis de 10 y 90%, en intervalo de 12 h, fue 9/12, 7.00 ± 0.04 h, 60 ± 24% y 44 ± 35% respectivamente (22). En cachama blanca Piaractus brachypomus, utilizando una dosis similar, la sobrevivencia embrionaria fue de 89 ± 7.3 (53) y en yamú Brycon amazonicus con una dosis de 5.75 mg/ kg fue de 81 ± 3.1 (18). En este bricónido existen también reportes de sobrevivencia embrionaria de 65 ± 4 (40) y de 83 ± 1 (64). El porcentaje de sobrevivencia embrionaria para B. henni (eclosión), fue bajo de 28% y 40% (véase Tabla 1), para dos de los desoves con respuesta positiva completa. Según los parámetros aplicados a especies de aguas cálidas, este debe ser de 75% (16) y se encuentra por debajo del rango (43 ± 42 a 69 ± 5%) en dos investigaciones realizadas con la especie Brycon amazonicus (60.2 ± 6 y 65.9 ± 5.8) (7).

La mayor dificultad que presenta el proceso de reproducción inducida para la especie Brycon henni, reside en la determinación del punto óptimo de madurez de las hembras, ya que por su pequeño tamaño resulta difícil observar el abultamiento abdominal producido por crecimiento de ovocitos en el saco ovárico. Las hembras se seleccionaron a partir de la biopsia ovárica y posición de vesícula germinal, que correspondían a los estados dos y tres, de acuerdo con la clasificación de Kucharczyk et al (32), de vesícula germinal en migración desde menos de la mitad y más de la mitad del radio, respectivamente, pero no fue registrado el diámetro de los ovocitos. En condiciones de confinamiento, similares a las que se emplearon con B. henni, se recomienda la caracterización de las hembras seleccionadas para inducción a la reproducción, basados en la morfología externa y el diámetro de los ovocitos (55) ; como resultado de ello, fueron registrados diámetros promedio en B. cephalus de 1001.6 µm (55), en B. insignis de 1250 µm (3), en B. opalinus de 1900 µm (48), y también se reportó con esta última , una talla de maduración ovocitaria de 1346.4 µm, alcanzando un máximo de 2570.4µm (24, 25). Marino et al (38), recomiendan la evaluación periódica de la progresión de la maduración gonadal con base en los promedios de distribución del diámetro de los ovocitos de cada hembra, después de la estimulación con EHC en el pez Teleósteo Epinephelus marginatus, con el fin de determinar si ovocitos en diferente estado de desarrollo madurarán simultáneamente en el ovario. Esto sugiere precisar el tipo de ovario que presenta la especie y que probablemente sea asincrónico (metacrónico) o que contiene ovocitos en todos los estadios de desarrollo (63, 69, 70). Lo anterior se sustenta en la observación de una hembra de sabaleta B. henni que presentó madurez gonadal tres meses después de ser desovada, lo que sugiere también la posibilidad de que exista un lote de reserva, similar a lo reportado en B. opalinus (24). Sin embargo, en B. cephalus es reportado un tipo de ovario sincrónico con desove total (55), en B. insignis sincrónico en grupos con desove total (3) y en B. opalinus sincrónico en dos grupos con desove total (24).

Algunos autores al estudiar los procesos de maduración final ovocitaria (FOM) y espermiación en teleósteos del género Morone (47), determinaron que la falla para alcanzar la FOM son los bajos niveles de hormona luteinizante (LH) en el plasma durante la estación de desove. Como resultado, los cambios esperados en los esteroides inductores de maduración no se observan. Para estas especies, la FOM fue separada en una fase temprana (vesícula germinal en migración) y en una fase tardía (ruptura de vesícula germinal). Para la sabaleta Brycon henni, fue tenido en cuenta el criterio de migración ovocitaria de más del 50% de los ovocitos (16), pero no fueron determinados los perfiles hormonales en el plasma después de la inducción. Probablemente las hembras completaron vitelogénesis pero fallaron en la fase tardía de FOM, por lo que ésta debe ser predicha con un alto grado de exactitud, con el fin de colectar huevos ovulados y proceder exitosamente con la seminación artificial (72, 73). Esto solamente se puede precisar si, adicionalmente al criterio de migración de vesícula germinal, se determinan los niveles de esteroides en plasma. Lo anterior probablemente explica el bajo desempeño reproductivo que presentó la especie después de seleccionar peces en proceso de FOM, con aparentemente buenos resultados en los porcentajes de fertilización pero bajos porcentajes de eclosión (véase Tabla 1). Por ejemplo, los niveles de gonadotropina maduracional o del tipo LH no han sido determinados en peces en el ambiente natural ni en animales sometidos a procesos de domesticación en cautiverio. En Brycon henni, que se adapta fácilmente a temperaturas entre 18 ºC y 28 ºC, no se ha precisado si utiliza los límites inferiores o superiores del amplio rango en que esta especie se mantiene en el medio y pueda alcanzar la FOM. Es probable que utilice, similar a los salmónidos, un estrecho rango de adaptación para la maduración final y el desove durante la época reproductiva y que este factor afecta el desarrollo gonadal. Probablemente los reproductores de la especie, cuando son mantenidos en el rango entre 24-26 ºC de la estación de piscicultura del Nus, experimentan vitelogénesis y alcanzan la fase temprana de FOM (vesícula germinal en migración), como ha sido demostrado para otros teleósteos (72) y como se observó en el momento de realizar las biopsias en las hembras maduras y cuyo efecto más notable es el bajo desempeño reproductivo observado en el porcentaje de eclosión y sobrevivencia larval (véase Tabla 1). En B. henni, cuatro desoves fueron obtenidos con temperaturas inferiores a 24 ºC (véase Tabla 3) y dos por encima de 24 ºC; sin embargo, la temperatura, al parecer, no es un factor limitante en la reproducción dentro de los rangos de confort establecidos para la de B. opalinus (24), puesto que individuos maduros especie (13, 14) y coincidieron con los valores de las fueron capturados en primavera y verano (altas cuencas y microcuencas de donde fueron capturados temperaturas) como en otoño (bajas temperaturas). los reproductores (datos no mostrados) y fueron los La temperatura y el oxígeno disuelto (véase Tabla 3) mismos empleados tanto en incubación, como en en los contenedores del laboratorio, se encontraron larvicultura y alevinaje.

Este experimento de reproducción inducida de sabaleta ha tenido éxito con respecto a otros reportados por la literatura en el país, en términos de obtención de alevinos, pero todavía no establece un protocolo efectivo para reproducir masivamente la especie, por los cual este trabajo sugiere una falencia que debe estandarizarse mejor, con verificación de parámetros plasmáticos y cuantitativos que permitan continuar las investigaciones y ser exitosas. Otros factores hormonales tienen que estar influyendo en la especie para que se presente disrupción endocrina y disfunción reproductiva, representada en la baja respuesta a la inducción, a pesar de presentar características externas e internas aparentemente favorables. No se conoce con exactitud el comportamiento social en cautiverio y la relación idónea de hembras y machos para esta especie, puesto que se observó en uno de los desoves, al ser utilizadas simultáneamente dos hembras, una de ellas agredió a la otra hasta causarle la muerte.

La temporada reproductiva de la especie se presenta en los meses de noviembre, diciembre, enero y febrero, coincidiendo con algunos autores en lo que respecta a los picos de máxima madurez de los machos y/o de las hembras, lo que refleja probablemente asincronismo en la especie. Sin embargo, se observaron hembras y machos maduros prácticamente durante todo el año en condiciones de cautiverio, lo que sugiere que posiblemente tenga varias temporadas reproductivas o haya maduración por cohortes. Se puede pensar que probablemente otros factores estén influyendo en el comportamiento reproductivo de la especie.

Agradecimientos

A la Corporación para el Desarrollo Sostenible de las Cuencas Rionegro-Nare, CORNARE e ISAGEN, por la financiación de las investigaciones que se llevan a cabo con esta especie en la región del Oriente Medio Antioqueño, quienes con el acompañamiento de la Universidad de Antioquia, a través del Centro de Investigaciones Agrarias y el CODI, hicieron posible la realización de esta investigación.

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