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<article-title xml:lang="es"><![CDATA[Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae) en un foco suburbano de leishmaniosis visceral en el Cañón del Chicamocha en Santander, Colombia]]></article-title>
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<abstract abstract-type="short" xml:lang="en"><p><![CDATA[Introduction. Between 1998 and 2000, the occurrence of 8 cases of American visceral leishmaniasis in children from a recently established human settlement in Guatiguará, in the municipality of Piedecuesta (Santander, Colombia) indicated the possible presence of Leishmania transmission in this locality. This observation motivated the current entomological investigation. Objectives. To determine the relative frequency of Lutzomyia longipalpis inside houses and outdoors, and the natural infection of this vector with Leishmania spp. Materials and methods. CDC light traps were used for sampling inside houses and outdoors, and sand flies were collected on human volunteers and domestic animals, and in resting places, during the period from May 1999 through September 2000. Natural infection was determined by PCR, in pools of female Lutzomyia longipalpis. Results: A total of 7,391 phlebotomine sand flies were collected. The predominant species was Lutzomyia longipalpis (Lutz & Neiva), representing 99.5% of captures. In the sand flies collected with CDC light traps, L. longipalpis was more frequently collected indoors than outdoors ( p=0.0001). The total rate of natural infection was 1.93% and a positive correlation was observed between months with higher abundance and the number of infected females entering human dwellings. Conclusions: The results indicate that in Guatiguará Lutzomyia longipalpis, shows marked tendency for the indoors, which has important implications for leishmaniasis transmission. Furthermore, transmission risk is increased during the months of higher abundance due to the entry of a higher number of infected females. From the standpoint of control, this behaviour permits the design of strategies to reduce indoor transmission.]]></p></abstract>
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</front><body><![CDATA[   <B><I><FONT FACE="Arial" SIZE=4>    <P ALIGN="CENTER">Lutzomyia longipalpis</I> (Diptera: Psychodidae) en un foco suburbano de leishmaniosis visceral en el Ca&ntilde;&oacute;n del Chicamocha en Santander, Colombia</B>.</P> </FONT><FONT FACE="Arial">    <P ALIGN="CENTER">M&oacute;nica Fl&oacute;rez <SUP>1</SUP>, Junny Patricia Mart&iacute;nez <SUP>1</SUP>, Reinaldo Guti&eacute;rrez <SUP>3</SUP>, Katherine Paola Luna <SUP>3</SUP>, V&iacute;ctor Hugo Serrano <SUP>1</SUP>, Cristina Ferro <SUP>4</SUP>, V&iacute;ctor Manuel Angulo <SUP>3</SUP>, Claudia Magaly Sandoval <SUP>2</SUP>,<SUP> 3</P>     <P>1</SUP> Escuela de Biolog&iacute;a, Universidad Industrial de Santander, Bucaramanga, Colombia.</P> <SUP>    <P>2</SUP> Secretar&iacute;a de Salud de Santander, Unidad de Entomolog&iacute;a, Laboratorio Departamental de Salud P&uacute;blica, Bucaramanga, Colombia.</P> <SUP>    <P>3</SUP> Centro de Investigaciones en Enfermedades Tropicales, CINTROP, Universidad Industrial de Santander, Piedecuesta, Colombia.</P> <SUP>    <P>4</SUP> Laboratorio de Entomolog&iacute;a, Instituto Nacional de Salud, Bogot&aacute;, D.C., Colombia</P> </FONT><FONT FACE="Arial" SIZE=2>    <P>Recibido: 10/08/05; aceptado: 01/02/06</P> </FONT><B><FONT FACE="Arial">    <P>Introducci&oacute;n. </B>Entre los a&ntilde;os 1998-2000 la aparici&oacute;n de 8 casos de leishmaniosis visceral americana en ni&ntilde;os de un asentamiento humano de reciente establecimiento en la localidad de Guatiguar&aacute; del municipio de Piedecuesta (Santander Colombia), se&ntilde;al&oacute; la posible presencia de un ciclo de transmisi&oacute;n de <I>Leishmania</I> en dicho lugar que motiv&oacute; el presente estudio entomol&oacute;gico.</P> <B>    <P>Objetivos. </B>Determinar frecuencia relativa en el intra y peridomicilio de <I>Lutzomyia longipalpis</I> y la infecci&oacute;n natural de este vector con <I>Leishmania </I>spp.</P> <B>    ]]></body>
<body><![CDATA[<P>Materiales y m&eacute;todos. </B>Se utilizaron para el muestreo trampas CDC intra y peridomiciliares, capturas sobre cebo humano, cebo animal y en sitios de reposo, en el periodo de mayo de 1999 a septiembre del 2000. La infecci&oacute;n natural se determin&oacute; mediante la t&eacute;cnica de PCR, en pooles de hembras de <I>Lutzomyia longipalpis</I>.</P> <B>    <P>Resultados. </B>Se capturaron 7.391 fleb&oacute;tomos. La especie predominante fue <I>Lutzomyia longipalpis</I> (Lutz &amp; Neiva), con un 99,5% de las capturas. En las recolecciones con trampas de luz CDC, <I>L. longipalpis</I> tuvo una mayor frecuencia en el intradomicilio que en el peridomicilio (p=0,0001). La tasa total de infecci&oacute;n natural fue del 1,93% y se observ&oacute; una correlaci&oacute;n positiva entre los meses de mayor abundancia y el n&uacute;mero de hembras infectadas que ingresan al domicilio.</P> <B>    <P>Conclusiones. </B>Los resultados indican que en la localidad de Guatiguar&aacute; <I>Lutzomyia longipalpis</I>, presenta tendencias marcadas hacia el intradomicilio, lo cual tiene serias implicaciones en la transmisi&oacute;n por cuanto el riesgo de transmisi&oacute;n se ve aumentado durante los meses de mayor abundancia por el ingreso de un mayor n&uacute;mero de hembras infectadas. Desde el punto de vista de control este comportamiento permite dise&ntilde;ar estrategias que disminuyan la transmisi&oacute;n del par&aacute;sito en el interior del domicilio.</P> <B>    <P>Palabras clave: </B>leishmaniasis visceral, <I>Lutzomyia</I>, infecci&oacute;n, PCR.</P> <B><I>    <P>Lutzomyia longipalpis</I> (Diptera: Psychodidae) at a suburban focus of visceral leishmaniasis in the Chicamocha Canyon, Santander, Colombia.</P>     <P>Introduction. </B>Between 1998 and 2000, the occurrence of 8 cases of American visceral leishmaniasis in children from a recently established human settlement in Guatiguar&aacute;, in the municipality of Piedecuesta (Santander, Colombia) indicated the possible presence of Leishmania transmission in this locality. This observation motivated the current entomological investigation.</P> <B>    <P>Objectives. </B>To determine the relative frequency of <I>Lutzomyia longipalpis</I> inside houses and outdoors, and the natural infection of this vector with <I>Leishmania</I> spp.</P> <B>    <P>Materials and methods. </B>CDC light traps were used for sampling inside houses and outdoors, and sand flies were collected on human volunteers and domestic animals, and in resting places, during the period from May 1999 through September 2000. Natural infection was determined by PCR, in pools of female <I>Lutzomyia longipalpis</I>.</P> <B>    <P>Results: </B>A total of 7,391 phlebotomine sand flies were collected. The predominant species was <I>Lutzomyia longipalpis</I> (Lutz &amp; Neiva), representing 99.5% of captures. In the sand flies collected with CDC light traps, <I>L. longipalpis</I> was more frequently collected indoors than outdoors ( p=0.0001). The total rate of natural infection was 1.93% and a positive correlation was observed between months with higher abundance and the number of infected females entering human dwellings.</P> <B>    <P>Conclusions: </B>The results indicate that in Guatiguar&aacute; <I>Lutzomyia longipalpis</I>, shows marked tendency for the indoors, which has important implications for leishmaniasis transmission.</P>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P>Furthermore, transmission risk is increased during the months of higher abundance due to the entry of a higher number of infected females. From the standpoint of control, this behaviour permits the design of strategies to reduce indoor transmission.</P> <B>    <P>Key words: </B>leishmaniasis, visceral; <I>Lutzomyia</I>, infection, PCR.</P>     <P>En Am&eacute;rica, <I>Lutzomyia longipalpis</I> (Lutz &amp; Neiva, 1912) es el principal vector de <I>Leishmania infantum</I>, par&aacute;sito causal de la leishmaniosis visceral americana (1-3). Sin embargo, los estudios realizados en Colombia y Venezuela en 1990 y 1993, respectivamente, han comprobado que <I>Lutzomyia evansi</I> (Nu&ntilde;ez-Tovar, 1924) juega un papel importante en la transmisi&oacute;n de esta enfermedad en algunas &aacute;reas end&eacute;micas (4- 6).</P> <I>    <P>L. longipalpis</I> se halla principalmente en &aacute;reas de bosque seco tropical (bs-T), muy seco tropical (bms-T), &aacute;ridas y semi&aacute;ridas; tambi&eacute;n, se ha encontrado en zonas muy h&uacute;medas y boscosas como en la ribera del r&iacute;o Amazonas (7). Su distribuci&oacute;n geogr&aacute;fica va desde los 20° N en M&eacute;xico hasta los 28° S en Argentina, incluyendo pa&iacute;ses como Guatemala, Costa Rica, Honduras, Colombia, Venezuela, Brasil, Paraguay y Bolivia. En Suram&eacute;rica, la mayor&iacute;a de los casos de leishmaniosis visceral americana proceden del noreste del Brasil y Venezuela en &aacute;reas de bosque seco tropical (bs-T) (6). El vector est&aacute; aparentemente ausente en Ecuador, Per&uacute; y Chile en donde no se conocen casos de la enfermedad (2,8,9). </P>     <P>En Colombia , <I>L. longipalpis </I>se ha reportado en &aacute;reas rurales con bosque seco tropical en el valle del r&iacute;o Magdalena en los departamentos de Santander, Cundinamarca, Tolima y Huila y tambi&eacute;n en la Costa Caribe en los departamentos de C&oacute;rdoba, Sucre y Bol&iacute;var, donde comparte su distribuci&oacute;n con <I>L. evansi</I>, vector secundario de leishmaniasis visceral americana. Tambi&eacute;n, se ha reportado en bosque h&uacute;medo tropical en &aacute;reas de leishmaniasis cut&aacute;nea (8,10,11).</P>     <P>En la vereda Guatiguar&aacute; (Piedecuesta, Santander), localizada en un valle situado entre dos mesetas con elevaciones entre 930 y 1.300 msnm, a partir de 1997 se dio un r&aacute;pido incremento en el n&uacute;mero de habitantes por la agregaci&oacute;n de familias provenientes de zonas en conflicto o de escasos recursos econ&oacute;micos; en el lugar se registraron ocho casos de leishmaniasis visceral americana diagnosticados en el Hospital Universitario Ram&oacute;n Gonz&aacute;lez Valencia (Unidad de Oncolog&iacute;a Pedi&aacute;trica) en ni&ntilde;os menores de siete a&ntilde;os, en un periodo de tres a&ntilde;os. El par&aacute;sito se aisl&oacute; en 6 de los 8 casos y se identific&oacute; como <I>Leishmania donovani</I> por medio de PCR m&uacute;ltiplex (12) (CINTROP, datos sin publicar).</P>     <P>Como vector se considera a <I>L. longipalpis</I>, especie ampliamente distribuida en esta zona y, como antecedente importante, se encuentra la descripci&oacute;n de un antiguo foco de leishmaniasis visceral americana rural de baja prevalencia, establecido en este valle, perteneciente a la jurisdicci&oacute;n del municipio de Gir&oacute;n (Palogordo) a pocos kil&oacute;metros del &aacute;rea de estudio y descrito en 1986 (Angulo V, Tovar E, Casas M, Cort&eacute;s J. Estudio cl&iacute;nico-epidemiol&oacute;gico de la leishmaniasis visceral en Santander. Bucaramanga: UIS, 1986. p.62).</P>     <P>La necesidad de estudios entomol&oacute;gicos que permitieran ampliar el conocimiento de la ecolog&iacute;a y el comportamiento de las poblaciones de <I>L. longipalpis</I> en el asentamiento suburbano de Piedecuesta, Santander, con el fin de proponer estrategias de control de la transmisi&oacute;n de la enfermedad, motivaron la realizaci&oacute;n de este estudio que tuvo como objetivos determinar la frecuencia relativa en el intradomicilio y peridomicilio de <I>L. longipalpis</I> y la tasa de infecci&oacute;n natural con <I>Leishmania</I> spp. de este vector .</P> <B>    <P>Materiales y m&eacute;todos</P>     <P>&Aacute;rea de estudio</P> </B>    ]]></body>
<body><![CDATA[<P>Est&aacute; localizada en el valle de Guatiguar&aacute; sobre las laderas que lo limitan, con variaciones altitudinales entre los 930 y los 1.300 msnm. Est&aacute; situado a una latitud 07°00’00" N y longitud 73°05’20" W; por el este limita con el casco urbano del municipio de Piedecuesta (Santander), aproximadamente a 4 km; por el oeste, con la ciudad de Gir&oacute;n a 16 km, y por el noroeste, con Floridablanca a 9 km, aproximadamente.</P>     <P>La zona est&aacute; clasificada como bosque seco tropical (bs-T) (13) con humedad relativa del 85%, pluviosidad media anual de 1.700 mm, temperatura media anual de 22,6°C (Base de datos. Instituto de Estudios Ambientales Metereol&oacute;gicos. Bucaramanga: IDEAM; 2000). Las viviendas de la vereda de Guatiguar&aacute; se encuentran concentradas en un &aacute;rea de aproximadamente 4-5 km2, con parcelas en las que sus habitantes cultivan en mayor o menor grado pi&ntilde;a, yuca y maracuy&aacute;; se mantienen en algunos sectores fragmentos de vegetaci&oacute;n nativa.</P>     <P>A partir de 1997 se inici&oacute; una migraci&oacute;n masiva de familias a la zona, cuya poblaci&oacute;n total ha ido aumentado hasta reportar en el &uacute;ltimo censo realizado en el 2000, 2.019 personas distribuidas en 622 viviendas, de las cuales, 24,2% son ni&ntilde;os menores de siete a&ntilde;os. Tambi&eacute;n, se registr&oacute; una poblaci&oacute;n canina de 392 perros, aproximadamente (Secretar&iacute;a de Salud de Santander. Base de datos, censo de la vereda Guatiguar&aacute;, Piedecuesta, Santander, 2000). Las viviendas de la zona est&aacute;n construidas con diversos materiales como pl&aacute;stico, metal y madera y, en menor proporci&oacute;n, de ladrillo, tejas de zinc o eternit; la mayor&iacute;a de las viviendas no cuentan con servicios sanitarios b&aacute;sicos.</P>     <P>La edad de los pacientes diagnosticados como positivos para leishmaniosis visceral americana fluctu&oacute; entre los 5 meses y los 7 a&ntilde;os de edad. M&aacute;rquez (14) encontr&oacute; en esta localidad una prevalencia de infecci&oacute;n por <I>Leishmania donovani</I> en perros del 47% (47/100). No se han reportado casos de leishmaniosis cut&aacute;nea o mucocut&aacute;nea en el &aacute;rea de estudio.</P> <B>    <P>M&eacute;todos de captura</P> </B>    <P>Se seleccionaron cuatro viviendas para las capturas de fleb&oacute;tomos, por antecedentes de casos de leishmaniasis visceral americana, por positividad para fleb&oacute;tomos seg&uacute;n muestreo preliminar, alta abundancia que permitir&iacute;a el muestreo en ambas laderas del valle, y consentimiento de la familia para la instalaci&oacute;n y cuidado de las trampas. Los fleb&oacute;tomos se recolectaron dos veces al mes en el per&iacute;odo comprendido entre mayo de 1999 y mayo del 2000, extendi&eacute;ndose a dos viviendas m&aacute;s de junio a septiembre del 2000.</P>     <P>Las capturas se realizaron a nivel intra y peridomiciliario (5 -7 m fuera de la vivienda) con trampas de luz tipo CDC miniatura de las 19:00 a las 05:00 horas, en el peridomicilo con aspiraci&oacute;n manual sobre cebo humano entre las 19:00 y las 20:30 horas, sobre cebo animal durante los primeros cuatro meses en gallinero y durante once meses sobre perro en el horario de las 18:30 a 21:00 horas. Tambi&eacute;n se realizaron capturas en sitios de reposo como grietas de rocas, alrededor de las viviendas seleccionadas para el muestreo durante dos meses.</P> <B>    <P>Determinaci&oacute;n taxon&oacute;mica</P> </B>    <P>Parte de la muestra se utiliz&oacute; para la identificaci&oacute;n de las especies; despu&eacute;s de la captura los fleb&oacute;tomos se preservaron en alcohol de 70°, se aclararon con hidr&oacute;xido de potasio al 10% y fenol l&iacute;quido; a las hembras se les aplic&oacute; la t&eacute;cnica de disecci&oacute;n de genitalia descrita por Marcondes (15) y se utiliz&oacute; la clave de Young y Duncan para su identificaci&oacute;n (16).</P> <B>    <P>Infecci&oacute;n natural</P> </B>    ]]></body>
<body><![CDATA[<P>Para el estudio de infecci&oacute;n natural se seleccionaron hembras de <I>L. longipalpis</I> que a&uacute;n se encontraron vivas al llegar al laboratorio, las cuales se identificaron por caracteres morfol&oacute;gicos de cabeza y t&oacute;rax y la confirmaci&oacute;n de la especie se realiz&oacute; mediante la extracci&oacute;n de la espermateca, con ayuda de alfileres entomol&oacute;gicos y observaci&oacute;n al microscopio (40X) sobre una l&aacute;mina portaobjeto con una gota de soluci&oacute;n tamp&oacute;n, Tris 10mM, pH 8,0 y EDTA 1 mM, pH 8,0 inmediatamente se confirmaba la especie, se almacenaban en un vial, con 20 µl de la misma soluci&oacute;n tamp&oacute;n y se conservaron a –20°C.</P>     <P>Se conformaron grupos, cada uno con 5 hembras, en promedio, organizadas por mes y por m&eacute;todo de captura. La extracci&oacute;n de ADN se realiz&oacute; mediante el uso de la resina Cheelex 100 al 5% y se utilizaron un par de oligonucle&oacute;tidos que se unen al origen de la replicaci&oacute;n de ambas hebras de las mol&eacute;culas del minic&iacute;rculo del AND mitocondrial amplificando una regi&oacute;n conservada de</FONT><FONT FACE=Symbol> </FONT><FONT FACE="Arial">120 pares de bases para todas las especies de <I>Leishmania</I> del nuevo mundo: OL1 GGG GAG GGG CGT TCT GCG AA y OL2 CCG CCC CTA TTT TAC ACC AAC CCC (17-20, Sandoval CM, Guti&eacute;rrez R, C&aacute;rdenas R, Cabrera OL, Ferro C. Estandarizaci&oacute;n de la t&eacute;cnica de reacci&oacute;n en cadena de la polimerasa para estudios de infecci&oacute;n natural de <I>Lutzomyia</I> (Diptera: Psychodidae). Biom&eacute;dica 1999;19:122). La reacci&oacute;n de amplificaci&oacute;n se llev&oacute; a cabo en un volumen final de 25 µl que conten&iacute;a 200 ng de oligonucle&oacute;tidos, 1X soluci&oacute;n tamp&oacute;n de la Taq polimerasa (Perkin Elmer), 0,2 mM dNTP, 0,5 U Taq polimerasa (Promega), 2mM MgCl<SUB>2</SUB> y 2 µl ADN. La mezcla fue puesta en un termociclador (Minicycler TM PTC-150 MJ Research) con un paso inicial de denaturaci&oacute;n del ADN a 94°C por 4 minutos, seguido de 30 ciclos as&iacute;: a 94°C (30 s), 55°C (30s), 72°C (30 s). El control positivo fueron espec&iacute;menes obtenidos de la infecci&oacute;n experimental de <I>L. longipalpis</I> y como control negativo, machos de la misma especie. Para la visualizaci&oacute;n de los productos de amplificaci&oacute;n se utilizaron geles de poliacrilamida al 6% coloreados con nitrato de plata.</P> <B>    <P>Preparaci&oacute;n de controles positivos para la PCR, infecci&oacute;n experimental</P> </B>    <P>Ciento ochenta hembras de <I>L. longipalpis</I>, procedentes de una colonia mantenida en el Instituto Nacional de Salud, se alimentaron a trav&eacute;s de una membrana de pollo con una suspensi&oacute;n 1:1 de par&aacute;sitos y eritrocitos. Los par&aacute;sitos, promastigotes de <I>Leishmania infantum</I> en una concentraci&oacute;n 1x10<SUP>6</SUP>, cultivados en medio SBF+LIT a 30°C, proven&iacute;an de un aislamiento de un caso cl&iacute;nico comprobado de leishmaniosis visceral proveniente del foco de estudio, caracterizado por PCR multiplex.</P>     <P>La mezcla de par&aacute;sitos y sangre se coloc&oacute; en un frasco pl&aacute;stico con una membrana de pollo en uno de sus extremos. Luego, este frasco se coloc&oacute; en la jaula de una malla muy fina (muselina) que conten&iacute;a las hembras de <I>L. longipalpis</I> durante una hora para que se alimentaran. La mitad de la jaula se cubri&oacute; con una tela color negro y el frasco se mantuvo rodeado con la mano, fuera del alcance de los insectos, durante el tiempo que se alimentaban las hembras (1 hora) (21). Las hembras alimentadas se dejaron en la jaula de tul, con un algod&oacute;n h&uacute;medo y otro con az&uacute;car, en un insectario con una temperatura de 28°C y una humedad relativa del 90%. Siete d&iacute;as despu&eacute;s de la comida infectiva, las hembras sobrevivientes se agruparon en parejas, resuspendidas en 20 µl de TE y a –20°C hasta la realizaci&oacute;n de la t&eacute;cnica de PCR.</P> <B>    <P>An&aacute;lisis estad&iacute;stico</P> </B>    <P>Se us&oacute; la prueba T de Student para comparar la frecuencia de <I>L. longipalpis</I> capturados con los tres diferentes cebos. Para establecer alguna asociaci&oacute;n entre la abundancia estacional de hembras de <I>L. longipapis</I> Vs. la abundancia de hembras infectadas en el intradomicilio y peridomicilio, capturadas con trampas de luz CDC, se utiliz&oacute; el m&eacute;todo de correlaci&oacute;n, empleando el programa Statistica for Windows, release 6.0 (Statsoft, Inc., 1997).</P> <B>    <P>Aspectos &eacute;ticos</P> </B>    <P>En esta investigaci&oacute;n no se manipularon muestras biol&oacute;gicas de origen humano y las personas que participaron como cebos utilizaron pantal&oacute;n y camisa de manga larga, y los fleb&oacute;tomos se capturaron sobre las ropas. Para el muestreo de fleb&oacute;tomos en la vivienda se solicit&oacute; el consentimiento verbal de las familias y &eacute;stas fueron protegidas por toldillos sin insecticida, para evitar sesgo en el tiempo de muestreo.</P>     <P>Una vez terminado el estudio a todas las familias de la localidad que ten&iacute;an ni&ntilde;os menores de 7 a&ntilde;o les fueron entregados toldillos impregnados con insecticida, donados por el Programa Enfermedades Transmitidas por Vectores de la Secretar&iacute;a de Salud de Santander.</P>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P>En todos los procedimientos de laboratorio se tuvo en cuenta la Resoluci&oacute;n No. 008430 de 1993 del Ministerio de Salud de la Rep&uacute;blica de Colombia T&iacute;tulo IV, en su Cap&iacute;tulo I, sobre la bioseguridad de la investigaci&oacute;n y el manejo de material biol&oacute;gico que pueda contener microorganismos pat&oacute;genos en los art&iacute;culos 63 a 67 (literal c) y 69.</P> <B>    <P>Resultados</P>     <P>Composici&oacute;n de especies</P> </B>    <P>Se realizaron 58 muestreos en los que se capturaron 7.391 fleb&oacute;tomos. Las especies de fleb&oacute;tomos registradas fueron: <I>Lutzomyia longipalpis</I>, <I>Lutzomyia gomezi</I> (Nitzulescu, 1931), <I>Lutzomyia ovallesi</I> (Ortiz, 1952), <I>Lutzomyia dubitans</I> (Sherlock, 1962), <I>Lutzomyia camposi</I> (Rodr&iacute;guez, 1952) y un ejemplar del g&eacute;nero <I>Brumptomyia</I>. <I>L. longipalpis</I>, con 99,5%, fue la especie predominante; la proporci&oacute;n de sexos fue de 4,5 a 1 (81,8%</FONT>&#9794;<FONT FACE="TTE21386E8T00"> </FONT><FONT FACE="Arial">y 18,2%</FONT>&#9792;<FONT FACE="TTE21386E8T00">_ </FONT><FONT FACE="Arial">), seguida de <I>L. gomezi</I> (0,43%); las otras especies se encontraron en menor proporci&oacute;n (</FONT><A HREF="#cuadro1">cuadro 1</A><FONT FACE="Arial">).</P>     <P><A NAME="cuadro1"></A></P> </FONT>    <P ALIGN="CENTER"><IMG SRC="/img/revistas/bio/v26s1/1sa13t1.gif"></P> <B><FONT FACE="Arial">    <P>Frecuencia relativa de especies seg&uacute;n los m&eacute;todos de captura</P> </B>    <P>Capturas con trampas de CDC. De 3.174 ejemplares, 2.216 (69,82%) se capturaron en el intradomicilio y 958 (30,18%) en el peridomicilio. Del total de ejemplares capturados, <I>L. longipalpis</I> fue la especie predominante (99,31%); se encontr&oacute; con mayor frecuencia en el intradomicilio (69,28%) que en el peridomicilio (30,18%) (p=0,0001). En el intradomicilio, 28,34% de los individuos de <I>L. longipalpis</I> capturados con este m&eacute;todo fueron hembras y en el peridomicilio, 35,18%. La proporci&oacute;n de &#9794;: &#9792;</FONT><FONT FACE="TTE21386E8T00"> </FONT><FONT FACE="Arial">de <I>L. longipalpis</I> en el intradomicilio fue de 2,5 a 1, mayor que la encontrada en el peridomicilio (1,8 a 1). Todas las especies registradas en la zona ingresaron al ambiente intradomiciliario, a excepci&oacute;n de <I>L. camposi</I>, la cual se encontr&oacute; s&oacute;lo en el peridomicilio (</FONT><A HREF="#cuadro2"><FONT FACE="Arial">cuadro 2</FONT></A><FONT FACE="Arial">).</P>     <P><A NAME="cuadro2"></A></P> </FONT>    <P ALIGN="CENTER"><IMG SRC="/img/revistas/bio/v26s1/1sa13t2.gif"></P> <B><FONT FACE="Arial">    ]]></body>
<body><![CDATA[<P>Capturas con cebo humano</P> </B>    <P>De 2.374 individuos capturados con este m&eacute;todo, 99,45% eran <I>L. longipalpis</I> (7,54%</FONT><FONT FACE="TTE21386E8T00">_ </FONT><FONT FACE="Arial">) y los dem&aacute;s correspondieron a <I>L. gomezi</I> (0,55%). La proporci&oacute;n de &#9794;: &#9792;</FONT><FONT FACE="TTE21386E8T00"> </FONT><FONT FACE="Arial">de <I>L. longipalpis</I> fue de 12 a 1 (</FONT><A HREF="#cuadro2"><FONT FACE="Arial">cuadro 2</FONT></A><FONT FACE="Arial">).</P> <B>    <P>Capturas con cebo animal</P> </B>    <P>Se recolectaron sobre gallina 1.458 ejemplares, todos pertenecientes a <I>L. longipalpis</I> (9,81%). Sobre perro se capturaron 376 fleb&oacute;tomos, de los cuales, 99,4 % correspond&iacute;an a <I>L. longipalpis</I> (12,5%) y 2 (0,53%) correspondieron a <I>L. gomezi</I>. La proporci&oacute;n de &#9794;: &#9792;</FONT><FONT FACE="TTE21386E8T00"> </FONT><FONT FACE="Arial">de <I>L. longipalpis</I> sobre gallina fue de 9,2:1 y sobre perro, de 6,96: 1 (</FONT><A HREF="#cuadro2"><FONT FACE="Arial">cuadro 2</FONT></A><FONT FACE="Arial">). Al comparar la frecuencia de <I>L. longipalpis</I> capturada sobre perro, cebo humano y gallina durante cuatro meses de muestreo, se observ&oacute; que sobre gallina, la frecuencia era significativamente mayor que sobre perro (p=0,003), en contraste a lo obtenido con cebo humano, en el que la diferencia no era significativa (p=0,26).</P> <B>    <P>Capturas en reposo</P> </B>    <P>Se recolectaron 9 individuos de <I>L. longipalpis</I>, de los cuales, 3 eran hembras.</P> <B>    <P>Infecci&oacute;n natural</P> </B>    <P>Se procesaron 1.138 hembras de <I>L. longipalpis</I>, que correspondieron al 85% de las capturadas durante todo el a&ntilde;o de muestreo. Con estas hembras se conformaron 240 grupos. En total, 22 grupos resultaron positivos para <I>Leishmania</I> spp. , para una tasa de infecci&oacute;n natural del foco de 1,93%, asumiendo una hembra infectada con <I>Leishmania</I> spp. en cada grupo positivo. El porcentaje de infecci&oacute;n natural, seg&uacute;n el tipo de muestreo, se describe en el </FONT><A HREF="#cuadro3">cuadro 3</A><FONT FACE="Arial">. En la </FONT><A HREF="#figura1"><FONT FACE="Arial">figura 1</FONT></A><FONT FACE="Arial"> se muestra el producto esperado en 120 pares de bases, despu&eacute;s de la amplificaci&oacute;n con los iniciadores OL1-OL2.</P>     <P><FONT FACE="Arial"><A NAME="figura1"></A></P> </FONT>    <P ALIGN="CENTER"><IMG SRC="/img/revistas/bio/v26s1/1sa13i1.jpg"></P> <FONT FACE="Arial" SIZE=2>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P><A NAME="cuadro3"></A></P> </FONT>    <P ALIGN="CENTER"><IMG SRC="/img/revistas/bio/v26s1/1sa13t3.gif"></P> </FONT><B><FONT FACE="Arial">    <P>Din&aacute;mica de la infecci&oacute;n natural a lo largo del a&ntilde;o</P> </B>    <P>Se encontr&oacute;, en 10/13 meses de muestreo con todos los m&eacute;todos de captura, por lo menos, un grupo positivo tanto en el intra como en el peridomicilio. En general, los meses con mayor n&uacute;mero de grupos positivos fueron junio, julio y septiembre.</P>     <P>En las capturas realizadas en el intradomicilio con trampas de luz CDC, se detectaron hembras infectadas durante los meses de mayo, junio, julio, septiembre y octubre del 1999 que, en su mayor&iacute;a, correspondieron a meses secos, excepto septiembre. Los meses con mayor abundancia de <I>L. longipalpis</I> se correlacionaron positiva y significativamente con los picos de hembras infectadas (r=0,645741, p=0,017); en este ambiente, el n&uacute;mero de hembras/trampa/ noche fluctu&oacute; entre 0,5 y 18,17 y el n&uacute;mero de hembras infectadas/trampa/noche entre 0,66 y 1 (</FONT><A HREF="#figura2"><FONT FACE="Arial">figura 2</FONT></A><FONT FACE="Arial">A).</P>     <P><A NAME="figura2"></A></P> </FONT>    <P ALIGN="CENTER"><IMG SRC="/img/revistas/bio/v26s1/1sa13g1.jpg"></P>     <P><FONT FACE="Arial">En el peridomicilio se detectaron hembras infectadas durante los meses de junio, julio y septiembre de 1999, enero y abril de 2000. El n&uacute;mero de hembras/trampa/noche para este ambiente oscil&oacute; entre 0,75 y 14 y el n&uacute;mero de hembras infectadas/trampa/noche entre 0,5 y 1. Los meses de mayor abundancia no estuvieron correlacionados con los picos de hembras infectadas (r=0,262375, p=0,3865) (<A HREF="#figura2"><FONT FACE="Arial">figura 2B</FONT></A><FONT FACE="Arial">). En los meses de noviembre, diciembre y febrero no se detect&oacute; infecci&oacute;n natural. Los valores mensuales de precipitaci&oacute;n de la zona oscilaron entre 57 y 274 mm y se graficaron divididos en 10.</P> <B>    <P>Discusi&oacute;n</P> </B>    <P>La notable predominancia de <I>L. longipalpis</I> (99,5%) en la zona concuerda con la de otros focos de leishmaniosis visceral en Am&eacute;rica: 96% de abundancia relativa reportado en Los Yungas (Bolivia); 75,12% en la isla de Maraj&oacute; (Brasil); 86,1% en El Callej&oacute;n (Cundinamarca, Colombia), y en Las Mar&iacute;as Pavana (Choluteca, Honduras); 88,32%, en Nisia Floresta (Brasil); 90,96%, en Brasilito (Costa Rica); 69,6% al nordeste del estado de Maranhao (Brasil) y 92,6% en Jacobina (Bah&iacute;a, Brasil) (3,9,22-27). Sin embargo, se han descrito ciertos focos end&eacute;micos para la enfermedad donde esta especie no es la predominante, sustentado con el hallazgo de otras especies del g&eacute;nero <I>Lutzomyia</I> infectadas naturalmente con <I>L. infantum</I>, lo que sugiere la participaci&oacute;n de &eacute;stas en la din&aacute;mica de la transmisi&oacute;n, como <I>L. evansi </I>en Colombia (San Andr&eacute;s de Sotavento, C&oacute;rdoba) (4), Venezuela (Aragua y Trujillo) (5,28), <I>Lutzomyia antunesi</I> (29) y <I>Lutzomyia cruzi</I> en Brasil (30).</P>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P>La fauna acompa&ntilde;ante de <I>L. longipalpis</I> en este foco de Guatiguar&aacute; difiere en frecuencia y composici&oacute;n respecto a los dem&aacute;s focos en los que la leishmaniasis visceral americana es end&eacute;mica; aunque comparte algunas especies con los focos colombianos de El Callej&oacute;n, Cundinamarca, y de Gir&oacute;n, Santander, y con el foco venezolano de Guayabita, Aragua (3,5) en los cuales <I>L. gomezi</I> se presenta en muy bajas proporciones junto con altas proporciones de <I>L. longipalpis</I>. Esta asociaci&oacute;n tambi&eacute;n se ha observado en otros focos como el de Las Mar&iacute;as Pavana en Choluteca, Honduras, y el de Brasilito en Costa Rica (9,25).</P>     <P>De acuerdo con las observaciones realizadas por otros autores, la proporci&oacute;n de machos respecto a la de hembras de <I>L. longipalpis</I> en la localidad de estudio fue mayor con todos los m&eacute;todos de captura (27,31); sin embargo, esta proporci&oacute;n fue menor que la observada en el intradomicilio por Sherlock y Guitton (27) lo que indica una presencia m&aacute;s representativa de las hembras en este lugar. En las capturas sobre cebo humano, gallina y perro, encontramos una mayor proporci&oacute;n de machos que de hembras. Similares resultados fueron hallados por Sherlock en el estado de Bah&iacute;a, Brasil, utilizando como cebos cerdos, cabras y gallinas, difiriendo s&oacute;lo en los resultados obtenidos sobre cebo humano, con el cual capturaron una mayor proporci&oacute;n de hembras (32).</P>     <P>Es bien conocido que el comportamiento alimentario de <I>L. longipalpis</I> es de car&aacute;cter ecl&eacute;ctico, con un amplio rango de hospederos, que va desde animales silvestres y dom&eacute;sticos, hasta el hombre, pero mantiene un acentuado car&aacute;cter zoof&iacute;lico (33). En las capturas realizadas con aspiraci&oacute;n directa sobre gallinas, perros y humanos se obtuvo un mayor n&uacute;mero de <I>L. longipalpis</I> en el gallinero, lo cual sugiere tendencias por este tipo de cebo animal, que ya han sido observadas por otros autores (34); sin embargo, este hecho no se pudo evaluar por las caracter&iacute;sticas del foco de estudio, donde la presencia de gallineros no es generalizada.</P> <I>    <P>L. longipalpis</I> es capturada con frecuencia en grandes cantidades en el peridomicilio, probablemente, atra&iacute;da por la presencia de animales dom&eacute;sticos, especialmente mam&iacute;feros grandes que, cuando escasean o est&aacute;n ausentes, le dan paso a las aves como los hospederos de elecci&oacute;n (24,33,35). Este comportamiento se observ&oacute; en la localidad de estudio donde, debido a la ausencia de este tipo de animales, se observaron grandes cantidades de <I>L. longipalpis</I> en gallineros, pero contrastando con los otros focos, en los que mantiene tambi&eacute;n una alta presencia domiciliaria.</P>     <P>Algunos estudios sugieren que la entrada de <I>L. longipalpis</I> al domicilio humano ocurre cuando las condiciones clim&aacute;ticas o la falta de oportunidad del encuentro con hospederos para la ingesti&oacute;n de sangre en su h&aacute;bitat natural son dif&iacute;ciles, oblig&aacute;ndolas a incursionar dentro de las casas. Este comportamiento se observ&oacute; al sur de Honduras donde se menciona la presencia de perros, pollos, cerdos y personas dentro de las viviendas durante el tiempo de recolecci&oacute;n (9,27), siendo &eacute;sta una condici&oacute;n favorable para <I>L. longipalpis</I>.</P>     <P>En Guatiguar&aacute;, los humanos y los perros representan la mayor proporci&oacute;n de la biomasa total de vertebrados que atraen a las hembras, debido a la escasa disponibilidad de otros hospederos extradomiciliarios; esto se comprob&oacute; con los resultados obtenidos en las capturas con trampas de luz CDC; se observ&oacute; una acentuada tendencia por el domicilio, estad&iacute;sticamente significativa. Esto nos permite suponer que aunque, en general, <I>L. longipalpis</I> no es una especie particularmente antropof&iacute;lica, en el caso particular de Guatiguar&aacute;, el humano est&aacute; entre sus principales hospederos.</P>     <P>As&iacute; mismo, los resultados de la din&aacute;mica de la infecci&oacute;n natural en este ambiente permiten se&ntilde;alar que durante los meses de mayor abundancia (mayo a junio y septiembre a octubre), existe una correlaci&oacute;n positiva con el ingreso de hembras infectadas al intradomicilo, lo cual sugiere que en esta &eacute;poca del a&ntilde;o hay un mayor riesgo de transmisi&oacute;n de leishmaniosis visceral americana y que puede ocurrir en el ambiente domiciliario. Aunado a esto la alta tasa de infecci&oacute;n natural registrada en las hembras capturadas sobre perro (5,28%), se&ntilde;alan la importancia epidemiol&oacute;gica de este animal como una de las posibles fuentes de infecci&oacute;n para <I>L. longipalpis</I>, como ha sido indicado en otras &aacute;reas de transmisi&oacute;n de leishmaniosis visceral (36) y comprobado en esta localidad por M&aacute;rquez (14).</P>     <P>Por otro lado, la tasa total de infecci&oacute;n natural de <I>L. longipalpis</I> obtenida a trav&eacute;s de la t&eacute;cnica de PCR (1,93%) se mantuvo en el rango registrado para &aacute;reas end&eacute;micas de leishmaniasis visceral de diversas regiones de Latinoam&eacute;rica (0,3% a 7,14%), la mayor&iacute;a de ellas obtenidas a trav&eacute;s de examen directo (3,5,7,22,29,35,37). Solamente el trabajo de Ryan y Brazil (35) present&oacute; una tasa similar (1,8%) a la encontrada en Guatiguar&aacute;.</P>     <P>Diversos trabajos vienen utilizando la PCR como herramienta para la b&uacute;squeda de infecci&oacute;n natural en focos de leishmaniasis cut&aacute;nea (38-40); sin embargo, pocos estudios han aplicado esta t&eacute;cnica en &aacute;reas de leishmaniasis visceral, donde el principal vector es <I>L. longipalpis</I>, de manera tal que se puedan comparar las tasas mensuales de infecci&oacute;n y su correlaci&oacute;n con la din&aacute;mica poblacional de <I>L. longipalpis</I>, que permita confrontar los resultados obtenidos en Guatiguar&aacute;.</P>     <P>La infecci&oacute;n humana en la localidad de estudio, probablemente, ocurri&oacute; por la focalizaci&oacute;n y concentraci&oacute;n de nuevos hospederos susceptibles en un ambiente enzo&oacute;tico rural que, debido a las grandes modificaciones antr&oacute;picas, ocasionadas por la masiva migraci&oacute;n humana, lo llev&oacute; a una situaci&oacute;n de suburbanizaci&oacute;n y de transmisi&oacute;n de la leishmaniasis visceral en estas condiciones, en un &aacute;rea relativamente peque&ntilde;a (4 km2).</P>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P>La cercan&iacute;a de esta localidad al &aacute;rea metropolitana de Bucaramanga, en especial al casco urbano del municipio de Piedecuesta, permite suponer un potencial riesgo de expansi&oacute;n de la leishmaniasis visceral a zonas cercanas de esta cabecera municipal que mantengan situaciones condicionantes que permitan el establecimiento de la leishmaniasis visceral. Las alteraciones en el ambiente rural y los constantes movimientos migratorios de la poblaci&oacute;n hacia la periferia de las ciudades han demostrado que facilita el proceso de urbanizaci&oacute;n de la leishmaniasis visceral; en los &uacute;ltimos a&ntilde;os se ha convertido en un creciente problema de salud p&uacute;blica (32,41-44).</P>     <P>Este estudio permiti&oacute; demostrar que en Guatiguar&aacute; se estableci&oacute; un foco de leishmaniasis visceral con caracter&iacute;sticas suburbanas donde <I>L. longipalpis</I> est&aacute; presente y es la especie m&aacute;s abundante. Esta especie presenta una tendencia acentuada hacia el intradomicilio, y es abundante en los meses secos como junio y octubre, cuando tambi&eacute;n se detectaron con frecuencia hembras de <I>L. longipalpis</I> infectadas naturalmente por <I>Leishmania</I> spp.</P>     <P>Teniendo en cuenta que el comportamiento de <I>L. longipalpis</I> es nocturno, que todos los casos se presentaron en ni&ntilde;os menores de 7 a&ntilde;os y que esta poblaci&oacute;n, generalmente, est&aacute; dentro de la casa en ese horario, el lugar de mayor riesgo de infecci&oacute;n (microfoco) es el intradomicilio, por lo cual debe ser el sitio a donde se deben enfocar las medidas de prevenci&oacute;n y control que permitan disminuir el contacto de los habitantes con el vector para as&iacute; tener un impacto sobre la transmisi&oacute;n (45,46).</P> <B>    <P>Agradecimientos</P> </B>    <P>A la Secretar&iacute;a de Salud de Santander (funcionarios y t&eacute;cnicos del Programa de Enfermedades Transmitidas por Vectores); a las personas y a la comunidad de las viviendas del estudio por su colaboraci&oacute;n durante las capturas de los fleb&oacute;tomos.</P> <B>    <P>Conflicto de intereses</P> </B>    <P>Los autores declaramos que no existe conflicto de inter&eacute;s.</P> <B>    <P>Financiaci&oacute;n</P> </B>    <P>El presente estudio fue financiado por el Centro de Investigaciones en Enfermedades Tropicales, CINTROP-UIS, el Instituto Nacional de Salud, la Secretar&iacute;a de Salud de Santander y la Alcald&iacute;a Municipal de Piedecuesta.</P>     <P>Correspondencia:     ]]></body>
<body><![CDATA[<BR>M&oacute;nica Fl&oacute;rez, Centro de Investigaciones en Enfermedades Tropicales, CINTROP, km 2 v&iacute;a El Refugio, sede UISGuatiguar&aacute;, Piedecuesta, Santander, Colombia.     <BR>Tel&eacute;fono: 655 0800, extensi&oacute;n 4026; fax: (7) 654 0177 </FONT>    <BR><A HREF="mailto:monicaflorezm@hotmail.com"><FONT FACE="Arial">monicaflorezm@hotmail.com</FONT></A><FONT FACE="Arial">, </FONT><A HREF="mailto:cintrop@hotmail.com"><FONT FACE="Arial">cintrop@hotmail.com</FONT></A></P> <B><FONT FACE="Arial">    <P>Referencias</P> </B>    <!-- ref --><P>1. <B>Wilson ME, Streit JA. </B>Visceral leishmaniasis. Gastroenterol Clin North Am 1996;25:535-51. &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000107&pid=S0120-4157200600050001300001&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>2. <B>Casas M, Angulo VM, Fajardo E. </B>Kala-Azar en Colombia. Acta Med Colomb 1983;8:302-9.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000108&pid=S0120-4157200600050001300002&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>3. <B>Ferro C, Morrison AC, Torres M, Pardo R, Wilson M, Tesh RB. </B>Species composition and relative abundance of sand flies of the genus <I>Lutzomyia</I> (D&iacute;ptera: Psychodidae) at an endemic focus of visceral Leishmaniasis in Colombia. J Med Entomol 1995;32:527-37.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000109&pid=S0120-4157200600050001300003&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>4. <B>Travi BL, Montoya J, Gallego J, Jaramillo C, Llano R, Velez ID. </B>Bionomics of <I>Lutzomyia evansi</I> (Diptera:Psychodidae) vector of visceral leishmaniasis in northern Colombia. J Med Entomol 1996;33:278-85.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000110&pid=S0120-4157200600050001300004&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>5. <B>Feliciangeli MD, Rodriguez N, De Guglielmo Z, Rodriguez A. </B>The re-emergence of american visceral leishmaniasis in an old focus in Venezuela. II. Vectors and parasites. Parasite 1999;6:113-20.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000111&pid=S0120-4157200600050001300005&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>6. <B>Ferro C, Morales A. </B>Fleb&oacute;tomos de Colombia: estudios realizados por el Laboratorio de Entomolog&iacute;a 1965-1997. En: Toro G, Hern&aacute;ndez CA, Raad J, editores. Instituto Nacional de Salud 1917-1997. Una historia, un compromiso. Santaf&eacute; de Bogot&aacute;: Instituto Nacional de Salud; 1998. p.219-33.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000112&pid=S0120-4157200600050001300006&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>7. <B>Lainson R, Shaw JJ, Ryan L, Ribeiro RS, Silveira FT. </B>Leishmaniasis in Brazil. XXI. Visceral leishmaniasis in the Amazon Region and further observations on the role of <I>Lutzomyia longipalpis</I> (Lutz &amp; Neiva, 1912) as the X&gt;Z&gt; visceral, sugiere la existencia de un complejo de especies. Biom&eacute;dica 1999;19:56-66.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000113&pid=S0120-4157200600050001300007&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>9. <B>Carrasco J, Morrison A, Ponce C. </B>Behaviour of <I>Lutzomyia longipalpis</I> in an area of southern Honduras endemic for visceral/ atypical cutaneous leishmaniasis. Ann Trop Med Parasitol 1998;92:869-76.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000114&pid=S0120-4157200600050001300008&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>10. <B>L&oacute;pez Y, Osorio L, &Aacute;lvarez G, Rojas J, Jim&eacute;nez F, G&oacute;mez C et al. </B>Sandfly <I>Lutzomyia longipalpis</I> in a cutaneous leishmaniasis focus in Central Colombia. Mem Inst Oswaldo Cruz 1996;91:415-9.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000115&pid=S0120-4157200600050001300009&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>11. <B>Ministerio de Salud. </B>Gu&iacute;a integral de manejo de las enfermedades transmitidas por vectores malaria, dengue y leishmaniasis. M&oacute;dulo 4. Santa Fe de Bogot&aacute;: Imprenta Nacional de Colombia; 1996.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000116&pid=S0120-4157200600050001300010&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>12. <B>Harris E, Kropp G, Belli A, Rodriguez B, Agabian N. </B>Single step multiplex PCR assay for characterization of new world <I>Leishmania</I> complexes. J Clin Microbiol 1998;36:1989-95.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000117&pid=S0120-4157200600050001300011&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>13. <B>Espinal LS. </B>Zonas de vida o formaciones vegetales de Colombia. Memoria explicativa sobre el mapa ecol&oacute;gico. Bogot&aacute;: Instituto Geogr&aacute;fico Agust&iacute;n Codazzi; 1978. p.238.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000118&pid=S0120-4157200600050001300012&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>14. <B>M&aacute;rquez LL. </B>Prevalencia de infecci&oacute;n por <I>Leishmania chagasi</I> en la poblaci&oacute;n canina (LVC) de la vereda Guatiguar&aacute; de Piedecuesta, Santander (tesis). Bucaramanga: Universidad Industrial de Santander; 2004.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000119&pid=S0120-4157200600050001300013&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>15. <B>Marcondes CB. </B>An improved technique for the dissection of female genitalia of phlebotomine sandflies (Diptera: Psychodidae), with an improvement in the handling of insects. Mem Inst Oswaldo Cruz 1998;93:109.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000120&pid=S0120-4157200600050001300014&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>16. <B>Young DG, Duncan MA. </B>Guide to the identification and geographic distribution of <I>Lutzomyia</I> sand flies in Mexico, The West Indies, Central and South America (Diptera: Psychodidae) . Mem Am Entomol Inst 1994; 54:1-881.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000121&pid=S0120-4157200600050001300015&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>17. <B>Belli A, Rodr&iacute;guez B, Aviles H, Harris E. </B>Simplified polymerase reaction chain detection of New World <I>Leishmania</I> in clinical specimens of cutaneous leishmaniasis. Am J Trop Med Hyg 1998;58:102-9.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000122&pid=S0120-4157200600050001300016&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>18. <B>Pirmez C, Da Silva Trajano V, Paes-Oliveira M, da- Cruz AM, Goncalves-da-Costa CS, Catanho M et al. </B>Use of PCR in diagnosis of human american tegumentary leishmaniasis in Rio de Janeiro, Brazil. J Clin Microbiol 1999;37:1819-23.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000123&pid=S0120-4157200600050001300017&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>19. <B>Michalsky E, Fortes-Dias CL, Pimenta PF, Secundino NF, Dias ES. </B>Assessment of PCR in the detection of <I>Leishmania</I> spp in experimentally infected individual phlebotomine sandflies (Diptera: Psychodidae: Phlebotominae). Rev Inst Med Trop Sao Paulo 2002;44:255-9.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000124&pid=S0120-4157200600050001300018&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>20. <B>Cabrera OL, Munstermann L, C&aacute;rdenas R, Guti&eacute;rrez R, Ferro C. </B>Definici&oacute;n de las condiciones de temperatura y almacenamiento adecuadas en la detecci&oacute;n de AND de <I>Leishmania</I> por PCR en flebotominos. Biom&eacute;dica 2002; 22:296-302.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000125&pid=S0120-4157200600050001300019&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>21. <B>Santamar&iacute;a E, Castillo M, Cardenas R, Bello F, Ayala M, Ferro C. </B>Transmisi&oacute;n experimental de <I>Leishmania braziliensis</I> a h&aacute;mster por picadura de <I>Lutzomyia longiflocosa</I> (Diptera: Psychodidae) provenientes de un foco end&eacute;mico en la zona cafetera colombiana. Medicas UIS 1998;12:279-84.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000126&pid=S0120-4157200600050001300020&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>22. <B>Le Pont F, Desjeux P. </B>Leishmaniasis in Bolivia. I. <I>Lutzomyia longipalpis</I> (Lutz &amp; Neiva, 1912) as the vector of visceral leishmaniasis in Los Yungas. Trans R Soc Trop Med Hyg 1985;79:227-31.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000127&pid=S0120-4157200600050001300021&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>23. <B>Lainson R, Shaw J, Silveira FT, Fraiha H. </B>Leishmaniasis in Brazil. XIX: visceral leishmaniasis in the Amazon Region, and the presence of <I>Lutzomyia longipalpis</I> on the Island of Maraj&oacute;, Par&aacute; State. Trans R Soc Trop Med Hyg 1983;77:323-30.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000128&pid=S0120-4157200600050001300022&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>24. <B>Ximenes MF, De Souza M, Castellon E. </B>Density of sand flies (Diptera:Psychodidae) in domestic and wild animal shelters in an area of visceral leishmaniasis in the state of Rio Grande do Norte, Brazil. Mem Inst Oswaldo Cruz 1999;94:427-32.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000129&pid=S0120-4157200600050001300023&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>25. <B>Zeled&oacute;n R, Murillo J, Guti&eacute;rrez H. </B>Observaciones sobre la ecolog&iacute;a de <I>Lutzomyia longipalpis</I> (Lutz &amp; Neiva, 1912) y posibilidades de existencia de leishmaniasis visceral en Costa Rica. Mem Inst Oswaldo Cruz 1984;79:455-9.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000130&pid=S0120-4157200600050001300024&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>26. <B>Rebelo JM, Leonardo FS, Costa JM, Pereira YN, Silva FS . </B>Sandflies (Diptera, Psychodidae) from an endemic leishmaniasis area in the cerrado region of the State of Maranh&atilde;o, Brazil. Cad Saude Publica 1999;15:623-30.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000131&pid=S0120-4157200600050001300025&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>27. <B>Sherlock I</B>, <B>Guitton N. </B>Observacoes sobre calazar em Jacobina, Bahia-III- Algunos dados sobre o <I>Phlebotomus longipalpis</I>, o principal transmissor. Rev Bras Malariol Doencas Trop 1969;21:541-8.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000132&pid=S0120-4157200600050001300026&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>28. <B>Moreno G, Oviedo M. </B>Bionomy of vector of American Visceral Leishmaniasis in Trujillo, State, Venezuela. II Longitudinal study of <I>Lutzomyia evansi</I> in endemic situation. Bol Dir Malariol Saneam Amb 1995;35:359-70.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000133&pid=S0120-4157200600050001300027&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>29. <B>Ryan l, Silveira FT, Lainson R, Shaw JJ. </B>Leishmanial infections in <I>L. longipalpis</I> and <I>L. antunesi</I> (Diptera: Psychodidae) on the island of Maraj&oacute;, Par&aacute; State, Brazil. Trans R Soc Trop Med Hyg 1984;78:547-8.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000134&pid=S0120-4157200600050001300028&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>30. <B>Santos SO, Arias J, Ribeiro AA, Paiva H, Freitas M, Malacco RA. </B>Incrimination of <I>Lutzomyia cruzi</I> as a vector of american visceral leishmaniasis. Med Vet Entomol 1998;12:315-7.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000135&pid=S0120-4157200600050001300029&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>31. <B>Morrison A, Ferro C, Pardo R, Torres M, Wilson M, Tesh RB. </B>Nocturnal activity patterns of <I>Lutzomyia longipalpis</I> (Diptera: Psychodidae) at an endemic focus of visceral leishmaniasis in Colombia. J Med Entomol 1995;32:605-17.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000136&pid=S0120-4157200600050001300030&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>32. <B>Sherlock I. </B>Ecological interactions of visceral leishmaniasis in the state of Bahia, Brazil. Mem Inst Oswaldo Cruz 1996;91:671-83.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000137&pid=S0120-4157200600050001300031&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>33. <B>Morrison AC, Ferro C, Tesh RB. </B>Host preferences of the sand fly <I>Lutzomyia longipalpis</I> at an endemic focus of american visceral leishmaniasis in Colombia. Am J Trop Med Hyg 1993;49:68-75.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000138&pid=S0120-4157200600050001300032&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>34. <B>Dias Fde O, Lorosa ES, Reb&ecirc;lo JM</B>. Blood feeding sources and peridomiciliation of <I>Lutzomyia longipalpis</I> (Lutz &amp; Neiva, 1912) (Psychodidae, Phlebotominae). Cad Saude Publica 2003;19:1373-80.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000139&pid=S0120-4157200600050001300033&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>35. <B>Ryan L, Brazil RP. </B><I>Leishmania</I> infections in <I>Lutzomyia longipalpis</I> (Diptera:Psychodidae) on the island of Sao Luis, Maranhao State, Brazil. Mem Inst Oswaldo Cruz 1984;79:383-4.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000140&pid=S0120-4157200600050001300034&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>36. <B>Marzochi MC, M arzochi KB, Carvalho RW. </B>Visceral leishmaniasis in Rio de Janeiro. Parasitol Today 1994;10:37-40.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000141&pid=S0120-4157200600050001300035&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>37. <B>Corredor A, Gallego JF, Tesh RB, Morales A, De Carrasquilla FC, Young DG et al. </B>Epidemiology of visceral leishmaniasis in Colombia. Am J Trop Med Hyg 1989;40:480-6.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000142&pid=S0120-4157200600050001300036&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P>38. <B>P&eacute;rez E, Ogusuku E, Inga R, Lopez M, Moje J, Paz L et al. </B>Natural <I>leishmania</I> infection of <I>Lutzomyia</I> spp in Peru. 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