1 Mvz. Esp. Facultad de Ciencias Agropecuarias Programa Ingeniería Agropecuaria, Grupo SISINPRO, Grupo de Fisiología Animal, Grupo CEMPA Universidad del Cauca
2 Enf. Esp. Grupo CEMPA Universidad del Cauca, Fundación Animalotes
3 Bact. Esp. Msc, Laboratorio de Microbiología y Parasitología - Departamento de Medicina Interna - Facultad de Ciencias de la Salud. Universidad del Cauca
]]> 4 Agrozootecnistas Facultad de Ciencias Agropecuarias Universidad del CaucaCorrespondencia: Diego Vergara. e_mail: dvergara@unicauca.edu.co
Recibido para evaluación: abril 7 de 2008. Aprobado para publicación: Julio 10 de 2008
RESUMEN
La Brucelosis bovina es una zoonosis de declaración obligatoria y la de mayor difusión en el mundo según la Organización Mundial de la Salud OMS. Esta enfermedad ocasiona pérdidas importantes en la producción, reproducción del ganado lechero y en humanos afecta la salud, productividad y calidad de vida. El propósito de este trabajo es determinar la prevalencia de Brucelosis en la leche cruda que se expende en el Municipio de Popayán e identificar factores asociados con la presencia de brucelosis en los diferentes hatos proveedores de leche cruda. Se realizó un estudio descriptivo de corte transversal, se evaluaron 247 muestras de leche cruda comercializadas en el Municipio de Popayán a través de 11 rutas, provenientes de los municipios de Sotará, Puracé y Coconuco, principales proveedores de leche cruda al Municipio de Popayán, mediante la técnica de Ring Test para detectar anticuerpos específicos antibrucella y se aplicó una encuesta estructurada a los dueños de los hatos. La Prevalencia encontrada en este estudio fue del 15% (37/247). Los factores que se asociaron significativamente (p < 0.05) con la presencia de brucelosis en la leche cruda expendida en el Municipio de Popayán fueron: leche proveniente del Municipio de Sotará 25%(21/84), leche comercializada a través de la ruta 3 con 58.3% (7/11), nutrición solo con pasto 40% (4/10), convivencia con especies menores 23.2% (13/56), vacunador inadecuado 27.8% (10/36) y retención de placenta 26.1% (6 /23). La Prevalencia encontrada en el estudio con la Técnica Ring Test (15 %) es mayor que la reportada en estudios anteriores con la Técnica Elisa Indirecta (5%) para el Departamento del Cauca. La presencia de brucelosis podría asociarse con la procedencia de la leche cruda, la nutrición de los animales, convivencia con especies menores, vacunación y retención de placenta; factores condicionantes y predisponentes que hacen parte del proceso productivo de leche, los cuales pueden prevenirse y controlarse mediante el establecimiento de medidas sanitarias pertinentes.
PALABRAS CLAVE:
Prevalencia, brucelosis, ganado, leche cruda
ABSTRACT
The Cattle Brucellosis is a highly contagious zoonosis and it is greatly released in the world according to World Health Organization (WHO). This disease causes important looses in the production, reproduction of dayri cattle. In humans it affects the health, productivity and human quality. This article aims at determining the prevalence of Brucellosis in raw milk that is expended in the city of Popayán and identificate the factors associated with the presence of Brucellosis in the different raw milk provider herds. At descriptive study of cross-cutting was carried out. There were evaluated 247 marketed samples of raw milk in the city of Popayan by 11 routes, originating from the municipalities of Sotará, Puracé and Coconuco, principal providers of raw milk in the city of Popayan. The Ring Test Technique was used for detecting specific antibrucella antibodies and a survey was applied to the owners of herds. The prevalence found in this study was of 15 percent (37/247). The factors associated significantly (p < 0.05) with the presence of Brucellosis in raw milk expended in the city of Popayán were: milk originated from the municipality of Sotará 25%(21/84), marketed milk by the third route with 58.3% (7/11), only fed with grass 40% (4/10), coexistence with minor species 23.2% (13/56), inappropriate vaccinated 27.8% (10/36) and retained placenta 26.1% (6 /23). The prevalence found in the study with the Ring Test Technique (15%) is greater than the reported in previous studies with Indirect Elisa Technique (5%) for Cauca Department. The presence of Brucellosis may be associated with the origin of raw milk, nutrition of the animals, coexistence with minor species, vaccination and retention of the placenta; conditioning and predisposing factors that make part of the production process of milk which can be prevented and controled by the stablishing of relevant sanitary measures.
KEYWORDS:
]]> Prevalence, brucellosis, cattle, raw milkINTRODUCCIÓN
La Brucelosis es una enfermedad infectocontagiosa, aguda o crónica, que afecta tanto a los animales como al hombre, causada por bacterias del género Brucilla. El género comprende actualmente 7 especies; Brucella melitensis (tres biotipos), abortus (8 biotipos), suis (4 biotipos), neotomae, ovis, canis y maris. Los biotipos se distinguen por diferentes características bioquímicas y/o comportamiento frente a sueros monoespecíficos y además permiten determinar las fuentes de infección. [1].
Se reconocen tres especies clásicas responsables de la brucelosis humana, con especificidad de especie animal, distribución geográfica y peculiaridades patógenas. Brucella melitensis afecta fundamentalmente a cabras y ovejas, pero puede afectar a bóvidos y cerdos. Es la responsable de la gran mayoría de los casos en el hombre, ocasionando además los de mayor gravedad. Brucella abortus es el microorganismo implicado con mayor frecuencia en la brucelosi sbovina. Brucella suis afecta primariamente al ganado porcino. Las cuatro especies menores (Brucella neotomae, Brucella ovis, Brucella canis y Brucella maris), no revisten importancia en patología humana [2].
La infección en forma directa, por Brucella abortus, "ocurre a través de las mucosas orales y respiratorias, [3] y por vías intrauterina y cutánea.
La transmisión de B. abortus ocurre principalmente por vía oral porque las vacas tienden a lamer los fetos y las descargas genitales que se producen durante el aborto. La exposición a la bacteria también puede ocurrir en el útero o cuando los terneros nacidos de vacas sanas, son alimentados con calostro o leche de vacas infectadas [4].
La bacteria también se ingiere por la alimentación de pastos o agua contaminados". [5]
El período de incubación es difícil de calcular porque no se puede establecer el momento de la infección. Puede ser variable y es inversamente proporcional al desarrollo del feto. Cuando más adelantada está la preñez, más corto será el período de incubación que puede fluctuar entre los 200 días si la hembra se infecta por vía digestiva en la época del servicio y unos 60 días si se infecta seis meses después de la monta. [6]
Una masiva excreción de Brucella comienza después del aborto y puede continuar por 15 días. Una vez que las membranas fetales son expulsadas, la descarga uterina disminuye y el número de microorganismos excretados desciende rápidamente. Aunque la descarga del tracto genital usualmente se libera de microorganismos después de 2-3 meses de la infección, algunas vacas pueden quedar como portadoras y excretar bacterias de manera intermitente y por muchos años [4], infectando el agua y los pastos que los animales consumen.
]]> La transmisión de la B. abortus por vía intrauterina ocurre al realizar inseminación artificial cuando se deposita semen contaminado en el útero [5]. Los toros fértiles y funcionalmente activos contaminados por la bacteria logran esparcirla en la "fase aguda de la enfermedad la que puede cesar o volverse intermitente. [4]El contagio por vía cutánea es de igual importancia al producirse infecciones en las camas, cuando haya lesiones en las tetillas o en los extremos de los miembros o en el espacio interdigital que faciliten la penetración del agente patógeno en capas profundas de la piel; al ordeñar, quizás puedan introducir Brucella en la piel de los pezones las manos humedecidas con leche infectada". [7]
Los datos reales de la prevalencia de Brucelosis en diferentes países, son muy difíciles de establecer, por no ser notificada la enfermedad debidamente; "la infección por Brucella abortus es del 10 al 30% en muchos países europeos, y resultados similares se han obtenido también en algunos países de América del Sur". [7]
En Colombia existen antecedentes de la enfermedad en 25 de los 32 departamentos del país, entre los que aparecen con más registros de diagnósticos positivos están áreas de Arauca, Bolívar, Boyacá, Córdoba, Cundinamarca, Magdalena, Nariño y Sucre.
Es una enfermedad de declaración obligatoria que produce pérdidas importantes en las especies afectadas, expresadas principalmente en menor producción de leche y carne, pérdida de terneros (abortos) y trastornos en la disminución de la fertilidad; pérdidas por incapacidades obligatorias de los trabajadores afectados. Es la zoonosis de mayor difusión en el mundo y según la organización Mundial de la Salud OMS es la enfermedad que cobra más víctimas humanas en la actualidad y por lo tanto los programas de prevención, control y erradicación tienen un marcado efecto sobre la incidencia de la infección en la especie humana. [6]
Existen diferentes métodos para diagnosticar brucelosis que se basan en un diagnóstico epizootiológico o en un examen bacteriológico o serológico.
El diagnóstico epizootiológico permite confirmar la presencia de la enfermedad, en hatos donde no se conoce si existe realmente o cuando los resultados de laboratorio no sean suficientes.
El diagnóstico serológico, se basa en la realización de una prueba de aglutinación con el objetivo de descubrir anticuerpos contra la Brucella en la leche, suero de la leche, plasma seminal y suero sanguíneo.
El Diagnóstico bacteriológico, se basa en el aislamiento y el cultivo de bacterias a partir de órganos y/o materiales que son afectados por la bacteria, como feto abortado, placenta, bazo, estómago, leche, secreciones de la ubre no lactante etc.
Existen otras pruebas para determinar la presencia de Brucella: Prueba de anillo en leche o Ring test (RT).
]]> Esta técnica logra identificar Brucella en estanques de leche como en suero, con el fin de buscar anticuerpos específicos; "la Seroaglutinación Rápida en Placa (S.A.R.) que permite su uso masivo en la defensa preliminar". [4] Reacción de fijación del complemento (R.F.C.).altamente específica, sin embargo necesita de personal experto por tener un procedimiento laborioso. [4]Prueba de rosa de bengala (R.B.) utilizada como un método rápido de Screening. [1]
Prueba del 2-mercaptoetanol (2-ME), "utilizada para diferenciar animales infectados de vacunados" [4]. Prueba de coombs (Prueba antiglobulínica) sensible para la detección de anticuerpos bloqueadores e incompletos que reaccionan con el antígeno, pero no causan aglutinación visible [1], Prueba de rivanol. Prueba de inmunoensayo enzimático (ELISA), la prueba demuestra ser tan específica y sensible como la R.T. y S.A.L. para la búsqueda de anticuerpos en la leche y suero. En sitios donde la brucelosis es endémica, solo la vacunación puede controlar la enfermedad, ya que es la única que puede reducir el número de animales afectados permitiendo su control. La vacuna de mayor uso en Colombia es la cepa 19 de Brucellas vivas y en la última década se ha producido una nueva vacuna contra brucelosis denominada cepa RB51 [4]
En la brucelosis humana "el período de incubación de la enfermedad es muy variable, oscilando entre siete y treinta días aunque puede llegar a ser superior". [8]
La transmisión ocurre por dos mecanismos: "por contagio directo, mediante contacto, inoculación o inhalación, o por vía indirecta, a través de la ingestión de productos lácteos contaminados. El mecanismo principal de transmisión en nuestro país es por la ingestión de leche o productos lácteos no pasteurizados y por contacto directo con materiales infectados como abortos, placentas, estiércol [9]. La enfermedad puede ser asintomática. Está causada por la inoculación accidental de material vacunal, siendo el agente más frecuente Brucella abortus.[8]
Forma aguda. Después de la incubación se expresan síntomas generales inespecíficos como malestar, debilidad física, pérdida de apetito, sudoración abundante y fiebre alta en casos de infección por B. melitensis [10].
Formas localizadas. Se puede localizar en cualquier parte del organismo, principalmente en el sistema esquelético (columna vertebral) y en menor proporción y con mayor frecuencia afecta rodillas, cadera, artritis y/o bursitis, infecciones del tracto genitourinario y endocarditis, siendo esta última la mayor causa de muertes de los pacientes que la padecen [10]. La forma crónica resulta cuando la enfermedad permanece por un tiempo prolongado desde una forma asintomática, presencia de síntomas leves, recaídas hasta signos de infección activa [10]. El mayor factor de riesgo se encuentra en el contacto con animales, productos y subproductos infectados como "fetos, envolturas fetales, secreciones vaginales y la ingestión de productos lácteos no higienizados. Otro factor resulta por "inhalación que se produce con mayor frecuencia en apriscos, industrias lácteas, en los sitios de acopio de leche cruda" [10]
La distribución promedio de leche cruda en la ciudad de Popayán es de 19.000 litros diarios (información suministrada por la asociación de expendedores de leche cruda de Popayán) sin el control sanitario adecuado, implicando riesgo a los consumidores.
La leche cruda distribuida en la ciudad de Popayán para el consumo de su población proviene de diferentes Municipios y Departamentos. Se desconoce la presencia de la bacteria Brucella sp. en la leche cruda consumida, la cual puede provocar repercusiones en la salud de los seres humanos y de los animales.
"En el mundo la infección animal por Brucella abortus sigue siendo la más frecuente a pesar de la vacunación masiva. Las zonas de mayor prevalencia animal corresponden a la región del Mediterráneo, Asia Occidental, y algunas partes de África y América Latina, principalmente en México, Brasil y Colombia. [7]
]]> La exposición de la enfermedad en el hombre, está limitada a la prevalencia de la misma en los animales, por lo tanto cualquier estrategia de control que se realice en salud pública, debe intervenir al mismo tiempo, en el control y erradicación de la enfermedad en los animales.De acuerdo a los antecedentes expuestos anteriormente el propósito de este trabajo fue determinar la presencia de anticuerpos antibrucelosis en la leche cruda que se expende en el Municipio de Popayán y factores asociados con la enfermedad.
MATERIALES Y MÉTODOS
Estudio descriptivo de corte transversal para medir la prevalencia de anticuerpos antibrucella (variable dependiente) en la leche cruda expendida en el Municipio de Popayán mediante la técnica de Ring Test.
El total de proveedores (967) de los Municipios de Puracé y Sotará, que distribuyen leche cruda en la ciudad de Popayán, estaban conformados de la siguiente manera: Puracé Zona rural con un total de 740 proveedores. Puracé Zona urbana (Coconuco) con un total de 44 proveedores. Sotará con un total de 183 proveedores.
El tamaño de la muestra se estimó considerando la prevalencia conocida por el Instituto Colombiano Agropecuario (ICA) del 5%, mediante la prueba de ELISA indirecta, el número de muestras (247) seleccionadas del universo arrojadas por el análisis estadístico y escogidas completamente al azar, teniendo en cuenta los criterios de inclusión: ser proveedor de leche cruda en las 11 rutas seleccionadas para el estudio y firmar el consentimiento informado, y se aplicó una encuesta estructurada, para conocer variables sociodemográficas, indica los datos de ubicación, identificación y propiedad de las unidades de producción de la leche cruda.
Datos técnicos: Hace referencia a la metodología, grado de tecnificación y manejo del proceso de producción de leche. Signos o Manifestaciones: Determina la presencia de características relacionadas con la brucelosis.
Medición de anticuerpos antibrucelosis por la técnica Ring Test. [11]
Las muestras de leche y el antígeno se mantienen a temperatura ambiente al momento de realizar la prueba. Figura 1.
]]>Se mezcla la leche del tubo o frasco de muestra para dispersar la crema, se transfiere 1 ml de la leche sospechosa a un tubo de 13 x 100 mm, se agrega una gota de 0.03 ml (30 microlitros) del antígeno al tubo, se tapa el tubo y se agita suavemente invirtiendo el tubo varias veces. Se incuba a 37°C por una hora ya sea en Baño María o en estufa bacteriológico. Figura 2.
La lectura se realizó por observación directa del color del anillo de crema en el tubo de leche.
Una reacción altamente segura es demostrada por la formación de un anillo azul violeta encima de una columna de leche blanca. Cualquier capa azul en la interfaz de la leche y la nata debe ser considerada como positiva. Figura 3.
La prueba es considerada negativa si el color de la leche inferior excede la capa de nata.
]]> Se obtuvieron muestras de 50 ml de leche, en cada una de las fincas seleccionadas, las cuales se analizaron en el laboratorio de Microbiología y parasitología de la Universidad del Cauca, para determinar la prevalencia de anticuerpos antibrucelosis en la leche cruda, mediante la prueba Ring Test.RESULTADOS
Los programas estadísticos EXCEL y SPSS (SPSS Institute, Chicago, Il) fueron utilizados para el análisis estadístico, determinando frecuencias, chi cuadrado, para evaluar la asociación entre los resultados de la prueba y los datos sociodemográficos, técnicos y manifestaciones. El total de muestras de leche analizadas fue de 247. Las rutas que aportaron el mayor número de muestras fueron la ruta 10 con 42 (17%), la ruta 5 con 41 (16.6%), la ruta 9 con 32 (13%), la ruta 4 con 26 (10.5%). La zona rural de Puracé aportó el mayor número de muestras con 129 (52.2%). La frecuencia más alta por raza de vaca fue la Normando con 119 muestras (48.2%). Seguido por Criollo 102 muestras, Holstein 12 muestras, cruces de Cebú 8 y cruce Holstein 6.
La Prevalencia encontrada en este estudio fue del 15% (37/247), según la prueba de Ring Test (Grafico 1).
El municipio de Sotará presentó la mayor prevalencia 25% (21/84), seguido por la zona urbana de Puracé (Coconuco) con 20.7% (7/34), (p<0.05). (Ver Gráfico 2)
Las variables asociadas a mayor prevalencia de brucelosis fueron: las razas cruzadas con Holstein (33.3 %) 2/6; la leche almacenada en tinas 16.1% (36/224); los predios con animales alimentados con pasto, con un valor de 40% (4/10), (p<0.05). Los predios cuyos animales conviven con especies menores 23.2% (13/56) (p<0.05); los predios con vacunadores inadecuados 27.8% (10/36) (p<0.05); y retención de placenta 26.1% (6/23) (p<0.05) (Tabla 1.)
DISCUSIÓN
Para el diagnóstico de la Brucelosis existen diversas pruebas, las cuales presentan limitaciones en cuanto a sensibilidad, especificidad, costos, disponibilidad y acceso, debiendo aplicarse más de una prueba para obtener un diagnóstico acertado.
Por su carácter infeccioso se requiere de la intervención en todas las fases de la historia natural de la enfermedad siendo importantes tanto la prevención activa y pasiva como el control y tratamiento.
Utilizando la prueba de Ring test se encontró una prevalencia del 15%, obtenida de las 247 muestras del estudio. siendo mayor a los valores existentes en el Departamento del Cauca y acorde con los datos nacionales e internacionales "cuyo rango está entre el 10% y 30% y en estudios en el estado de Guerrero en México notifican una prevalencia por hato mediante la prueba de anillo en leche de 52.38% con un rango de 42.84-75% [7].
Estos valores son mayores que los antecedentes epidemiológicos obtenidos en el Cauca, utilizando otras pruebas de diagnóstico (Elisa indirecta), lo cual podría indicar la necesidad de plantear nuevos estudios con pruebas de mayor sensibilidad y especificidad que nos ayuden a acercarnos a la situación real de la enfermedad en el Departamento.
El Municipio de Sotará presentó la más alta prevalencia (25%) lo cual podría relacionarse con su ambiente físico como topografía, por ser un territorio montañoso, con deficientes vías afectando el acceso; y socioeconómico por los bajos recursos de la mayoría de los productores de leche. Igualmente la más alta prevalencia por ruta (58.3%), se encontró en la número 3, cuyos proveedores pertenecen también al Municipio de Sotará.
]]> Según los datos técnicos la raza Normando aportó el mayor número de muestras debido a la utilidad que ofrecen en cuanto a posibilidades de explotación, pero la mayor prevalencia por raza para cruces con Holstein fue 33.3%, posiblemente debido a que su hábitat y manejo técnico es igual al de las otras razas que se mantienen en el mismo hato; sin embargo esta raza, debido a sus características raciales exige un elevado nivel de manejo nutricional para su mantenimiento, producción y reproducción, e higiénico por su alta susceptibilidad a enfermedades.La mayor prevalencia fue para el almacenamiento en tina con un valor de 16.1% indicando que a pesar de ser el recipiente más adecuado se podría estar incurriendo en deficiencias del manejo sanitario, debido al tipo de diseño y material de ésta que no permiten realizar un correcto lavado quedando partículas y residuos en las paredes y en las roscas de la tapa.
En cuanto al manejo nutricional, los predios que se alimentan únicamente con pasto presentaron la mayor prevalencia (40%), siendo este tipo de alimentación una de las principales vías de transmisión de la enfermedad por la contaminación que sufren los pastos por desechos de otros animales infectados.
En los predios cuyos animales conviven con especies menores se dio la mayor prevalencia (23.2%), pudiendo relacionarse con la tenencia artesanal de diversas especies que diseminen la infección. Se carece de antecedentes que determinen la asociación entre tenencia de especies menores y Brucelosis.
Los predios que no vacunaron presentaron la mayor prevalencia (21.5%), comprobando la necesidad de vacunación.
Entre quienes dijeron haber utilizado vacunas con adecuada refrigeración se encontró la mayor prevalencia (12.8 %), mientras que entre quienes afirmaron lo contrario no hubo ningún caso de Brucelosis, esta situación puede relacionarse con el desconocimiento del cumplimiento de la cadena de frío y el concepto erróneo que se maneja sobre el término vacuna, al denominar vacuna a otro tipo de aplicación de medicamentos.
Según el tipo de vacunador el dato más alto fue para los predios en los que los animales fueron vacunados por un técnico (27.8%), término aplicado a personas de la región con un grado mínimo de instrucción, a quienes convendría ofrecer capacitación para mejorar sus intervenciones. El dato más bajo correspondió a los predios cuyo vacunador pertenece al Comité de Ganaderos del Cauca (6.3%).
En cuanto a los síntomas: los predios en los que se presentaron abortos tuvieron la mayor prevalencia (44.4%); siendo muy alta la prevalencia (80%) para las que abortaron en el último tercio de gestación, igualmente las que sufrieron retención de placenta arrojaron alta prevalencia (26.1%); signos altamente relacionados con la presencia de brucelosis.
La prevalencia para la disposición inadecuada de placenta fue del (27.3%), debido a la contaminación y diseminación por contacto con residuos de membranas y secreciones.
Las descargas vaginales son un signo que se presenta en infección por Brucelosis; se presentó una prevalencia del 12% para predios en los cuales se dijo no haber presentado descargas vaginales, siendo un dato contradictorio que podría indicar falta de supervisión y control; o desconocimiento respecto al concepto, ya que en los predios en los que se dice haber presentado descargas vaginales no se encontró ningún caso positivo.
]]> La prevalencia para los predios que presentaron muerte de la cría (16.7%) fue muy similar a la de los que no presentaron muerte de la cría (14.8%), lo cual es indicador de la existencia de múltiples causas para la pérdida del ternero; el total de casos de muertes de cría antes de los tres meses fue positivo para la prueba Ring test, confirmando lo expuesto por el servicio nacional de sanidad y calidad agroalimentaria, el cual dice que los efectos de la enfermedad en los bovinos está acompañado por el nacimiento de terneros débiles que mueren a los pocos días.RECOMENDACIONES
Realizar seguimiento a los casos positivos del estudio para determinar intervenciones pertinentes, tales como aplicación de otras pruebas para confirmar un diagnóstico.
Se requiere generar estudios epidemiológicos relacionados con la Brucelosis tanto en animales como en humanos para dimensionar la situación real de esta infección local y regionalmente.
Se recomienda realizar actividades de promoción y prevención (pasiva y activa) en los diferentes grupos de personas relacionadas con el proceso productivo, enfatizando la educación en aspectos técnicos sanitarios y para controlar los factores de riesgo relacionados con la presencia de brucelosis.
Incrementar el control y cumplimiento de normas técnico-sanitarias dentro de cada unidad de explotación.
Generar conciencia de la importancia de la vacunación de terneras entre los 3 y 8 meses de vida.
Exigir el estricto cumplimiento de la notificación obligatoria de los casos de Brucelosis.
Realizar estudios en otras especies que podrían ser portadoras de Brucelosis.
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