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<article-title xml:lang="es"><![CDATA[EFICIENCIA ANÉSTESICA DE 2-FENOXIETANOL, BENZOCAINA, QUINALDINA Y METASULFONATO DE TRICAINA EN ALEVINOS Y JUVENILES DE CACHAMA BLANCA (Piaractus brachypomus)]]></article-title>
<article-title xml:lang="en"><![CDATA[EFFICIENCY OF 2-PHENOXYETHANOL, BENZOCAINE, QUINALDINE AND TRICAINE METHASULPHONATE AS AN ANESTHESIA FOR Pirapitinga (Piaractus brachypomus) FINGERLINGS AND JUVENILE FISHES]]></article-title>
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<abstract abstract-type="short" xml:lang="en"><p><![CDATA[Objective. To evaluate the efficiency of 2-phenoxyethanol, benzocaine, quinaldine and tricaine methasulphonate (MS-222) as an anesthesia for pirapitinga (Piaractus brachypomus) fingerlings and juvenile fishes. Materials and methods. Fingerlings (7.3 ± 6.8 g) and juveniles (49.6 ± 28.4 g) were exposed to 2-phenoxyethanol (200, 400 and 600 ppm), benzocaine (50, 100 y 150 ppm), quinaldine (7.5, 15 y 30 ppm) or MS-222 (100, 150 y 200 ppm) (n=12) in order to evaluate the induction and recovery time, opercular frequency and post-anesthesia survival. Results. Induction time was longer in juveniles than in fingerlings (p<0.05) and decreased in proportion to the increase in the concentration of anesthesia. However, induction time in fingerlings exposed to MS-222 was longer than in juveniles. Fingerlings exposed to 2-phenoxyethanol had similar induction times at the three concentrations (p>0.05), whereas the juveniles exposed to the low MS-222 concentration had lower induction time (p<0.05). The recovery time was less than 2 min. using 2- phenoxyethanol, MS-222, quinaldine and 50 ppm of benzocaine, but was longer with higher benzocaine concentrations. No variation in opercular frequency or mortality was observed during or after anesthesia. Conclusions. In fingerlings and juveniles, 2-phenoxyethanol (400 ppm) and MS-222 (100 ppm), respectively, are considered the anesthetics of choice for short procedures. Higher concentrations of benzocaine should be used for longer procedures.]]></p></abstract>
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</front><body><![CDATA[ <p><font size=2 face=verdana><b>ORIGINAL</b></font></p>      <p>    <center><font size=4 face="verdana"><b>EFICIENCIA AN&Eacute;STESICA DE 2-FENOXIETANOL, BENZOCAINA, QUINALDINA Y METASULFONATO DE TRICAINA EN ALEVINOS Y JUVENILES DE CACHAMA BLANCA (<i>Piaractus brachypomus</i>)</b></font></p>      <p><font size=4 face="verdana"><b>EFFICIENCY OF 2-PHENOXYETHANOL, BENZOCAINE, QUINALDINE AND TRICAINE METHASULPHONATE AS AN ANESTHESIA FOR Pirapitinga (<i>Piaractus brachypomus</i>) FINGERLINGS AND JUVENILE FISHES</font></b></p>      <p><font size=2 face=verdana>    <p>Yohana Velasco-Santamar&iacute;a,<sup>*1,4</sup> Ph.D.(C), Camilo Palacios-Ruiz<sup>2</sup>, MVZ, Pablo Cruz-Casallas,<sup>3,4</sup> Ph.D.</center></p>      <p><sup>1</sup> University of Southern Denmark Campusvej, Institute of Biology, Odense M, Dinamarca.    <br> <sup>2</sup> Ejercicio particular.    <br> <sup>3</sup> Universidad de los Llanos, Facultad de Ciencias Agropecuarias y Recursos Naturales, Instituto de Acuicultura, Villavicencio - Meta, Colombia.    <br> <sup>4</sup> Universidad de los Llanos, Facultad de Ciencias Agropecuarias y Recursos Naturales, Instituto de Acuicultura, Grupo de Investigaci&oacute;n sobre Reproducci&oacute;n y Toxicolog&iacute;a de Organismos Acu&aacute;ticos - GRITOX, Villavicencio - Meta, Colombia.    ]]></body>
<body><![CDATA[<br> *Correspondencia: Correo electr&oacute;nico: <a href="mailto:ymvelasco@yahoo.com">ymvelasco@yahoo.com</a>      <p><font face="verdana" size="2">Recibido: Mayo 6 de 2008 Aceptado: Diciembre 5 de 2008</font></p>  <hr>  <font size=3 face="verdana">      <p><b>RESUMEN</b></p>      <p><b>Objetivo</b>. Evaluar la efectividad anest&eacute;sica de 2-fenoxietanol, benzocaina, quinaldina y metanosulfonato de tricaina (MS-222) en alevinos y juveniles de cachama blanca (<i>Piaractus brachypomus</i>). <b>Materiales y m&eacute;todos</b>. Alevinos (7.3 &plusmn; 6.8 g) y juveniles (49.6 &plusmn; 28.4 g) fueron expuestos a 2-fenoxietanol (200, 400 y 600 ppm), benzocaina (50, 100 y 150 ppm), quinaldina (7.5, 15 y 30 ppm) o MS-222 (100, 150 y 200 ppm) (n=12), para evaluar la duraci&oacute;n de la inducci&oacute;n y recuperaci&oacute;n, frecuencia opercular y la sobrevivencia postanestesia. <b>Resultados</b>. El desarrollo corporal y la concentraci&oacute;n afectaron el periodo de inducci&oacute;n, siendo mayor en juveniles que en alevinos (p&lt;0.05) y menor a medida que aument&oacute; la concentraci&oacute;n de anest&eacute;sico; sin embargo, alevinos expuestos a MS-222 mostraron per&iacute;odos de inducci&oacute;n m&aacute;s largos que los juveniles; y alevinos expuestos a 2-fenoxietanol mostraron per&iacute;odos de inducci&oacute;n iguales con las tres concentraciones (p&gt;0.05), mientras que juveniles expuestos a MS-222 mostraron el menor tiempo de inducci&oacute;n con la menor concentraci&oacute;n (p&lt;0.05). El tiempo de recuperaci&oacute;n fue inferior a 2 min, con 2-fenoxietanol, MS-222, quinaldina y 50 ppm de benzocaina; pero altas concentraciones de benzocaina mostraron largos per&iacute;odos de recuperaci&oacute;n. No se observ&oacute; tendencia en la variaci&oacute;n de la frecuencia opercular ni mortalidad durante o despu&eacute;s de la exposici&oacute;n a los anest&eacute;sicos. <b>Conclusiones</b>. En alevinos el 2- fenoxietanol (400 ppm) y en juveniles el MS-222 (100 ppm), ser&iacute;an las sustancias de elecci&oacute;n para procedimientos cortos, pero deber&aacute; recurrirse a altas concentraciones de benzocaina cuando el prop&oacute;sito de la anestesia sea un procedimiento prolongado.</p>      <p><b>Palabras clave</b>: Anest&eacute;sia, <i>Piaractus brachypomus</i>, frecuencia opercular.</p>  <hr>     <p><b>ABSTRACT</b></p>      <p><b>Objective</b>. To evaluate the efficiency of 2-phenoxyethanol, benzocaine, quinaldine and tricaine methasulphonate (MS-222) as an anesthesia for pirapitinga (<i>Piaractus brachypomus</i>) fingerlings and juvenile fishes. <b>Materials and methods</b>. Fingerlings (7.3 &plusmn; 6.8 g) and juveniles (49.6 &plusmn; 28.4 g) were exposed to 2-phenoxyethanol (200, 400 and 600 ppm), benzocaine (50, 100 y 150 ppm), quinaldine (7.5, 15 y 30 ppm) or MS-222 (100, 150 y 200 ppm) (n=12) in order to evaluate the induction and recovery time, opercular frequency and post-anesthesia survival. <b>Results</b>. Induction time was longer in juveniles than in fingerlings (p&lt;0.05) and decreased in proportion to the increase in the concentration of anesthesia. However, induction time in fingerlings exposed to MS-222 was longer than in juveniles. Fingerlings exposed to 2-phenoxyethanol had similar induction times at the three concentrations (p>0.05), whereas the juveniles exposed to the low MS-222 concentration had lower induction time (p&lt;0.05). The recovery time was less than 2 min. using 2- phenoxyethanol, MS-222, quinaldine and 50 ppm of benzocaine, but was longer with higher benzocaine concentrations. No variation in opercular frequency or mortality was observed during or after anesthesia. <b>Conclusions</b>. In fingerlings and juveniles, 2-phenoxyethanol (400 ppm) and MS-222 (100 ppm), respectively, are considered the anesthetics of choice for short procedures. Higher concentrations of benzocaine should be used for longer procedures.</p>      <p><b>Key words</b>: Anaesthetic, <i>Piaractus brachypomus</i>, opercular frequency.</p>  <hr>      <p><b>INTRODUCCI&Oacute;N</b></p>      <p>Para su reproducci&oacute;n en cautiverio y cultivo comercial, la mayor&iacute;a de especies &iacute;cticas, son sometidas a condiciones de estr&eacute;s como la pesca, manipulaci&oacute;n y transporte, lo cual puede afectar su sistema inmune e incrementar la susceptibilidad a pat&oacute;genos, causando morbilidad o mortalidad (1). Una gran variedad de compuestos han sido utilizados para anestesiar peces en pr&aacute;cticas de acuicultura, investigaci&oacute;n y salud animal (2,3). Dentro de los compuestos m&aacute;s usados se encuentran, entre otros, 2-fenoxietanol, aceite de clavo, sulfato de quinaldina, benzocaina y metasulfonato de tricaina (MS- 222) (4-6). Sin embargo, algunos anest&eacute;sicos son clasificados como t&oacute;xicos para varias especies acu&aacute;ticas, lo que implica realizar una rigurosa evaluaci&oacute;n de sus efectos antes de recomendar su uso como alternativa para reducir el estr&eacute;s durante la manipulaci&oacute;n (3). No obstante, la eficiencia de determinado anest&eacute;sico depender&aacute; del desarrollo corporal del individuo y de las condiciones ambientales (5).</p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p>Actualmente, MS-222 es el &uacute;nico anest&eacute;sico aprobado por la FDA (<i>Food and Drug Administration</i>) y EPA (<i>Environmental Protection Agency</i>) para ser usado en peces de consumo (2). No obstante, otros anest&eacute;sicos como el Aqui-S&reg; est&aacute;n bajo revisi&oacute;n farmacol&oacute;gica por la FDA (3). Dentro de los par&aacute;metros que deben tenerse en cuenta para determinar la eficacia anest&eacute;sica de una sustancia se encuentran: inducci&oacute;n de la anestesia en un periodo inferior a 3 min., tiempo de recuperaci&oacute;n no mayor a 5 min., sin toxicidad para los peces ni para las personas que lo manipulan, no generar efectos fisiol&oacute;gicos prolongados ni residualidad en los tejidos, no causar mortalidad en el per&iacute;odo post-anest&eacute;sico, poseer alta solubilidad tanto en agua dulce como salada y finalmente ser econ&oacute;micamente asequible (5,7). En especies nativas colombianas de agua dulce no se conocen estudios de la efectividad ni de toxicidad de anest&eacute;sicos y el uso de &eacute;stos se ha basado fundamentalmente en la extrapolaci&oacute;n de estudios en otras especies.</p>      <p>El objetivo del presente estudio fue determinar la efectividad anest&eacute;sica de cuatro anest&eacute;sicos en dos etapas de desarrollo corporal (alevinos y juveniles) de la cachama blanca (<i><i>Piaractus brachypomus</i></i>), una de las especies &iacute;cticas nativas de la Orinoquia Colombiana, de gran importancia para la acuicultura nacional.</p>      <p><b>MATERIALES Y M&Eacute;TODOS</b></p>      <p><b>Sitio de Estudio</b>. Estaci&oacute;n Pisc&iacute;cola del Instituto de Acuicultura de la Universidad de los Llanos (IALL), localizado en la ciudad de Villavicencio - Meta, Colombia.</p>      <p><b>Espec&iacute;menes y fase pre-experimental</b>. Fueron empleados alevinos (7.3 &plusmn; 6.8 g) y juveniles (49.6 &plusmn; 28.4 g) (n=144) de cachama blanca (<i>Piaractus brachypomus</i>), cl&iacute;nicamente sanos, provenientes de un mismo desove. Alevinos (n = 12) y juveniles (n = 12) fueron sometidos a un per&iacute;odo de aclimataci&oacute;n de 10 d&iacute;as en acuarios de vidrio (45 L) con aireaci&oacute;n constante, cubiertos externamente con el fin de reducir el estr&eacute;s. Durante la fase de aclimataci&oacute;n los individuos fueron alimentados con concentrado comercial dos veces al d&iacute;a a una proporci&oacute;n del 3% del peso vivo; sin embargo, 24 h previo a la fase de experimentaci&oacute;n el alimento fue suspendido. Se emple&oacute; un sistema semi-est&aacute;tico con recambio de agua del 50% cada tercer d&iacute;a y diariamente, para las fases de aclimataci&oacute;n y de experimentaci&oacute;n, respectivamente. En los dos grupos se utilizaron acuarios de vidrio para el periodo de anestesia y de recuperaci&oacute;n, manteniendo las caracter&iacute;sticas f&iacute;sico qu&iacute;micas del agua similares a la usada en la fase de aclimataci&oacute;n. El agua del acuario de recuperaci&oacute;n se mantuvo libre de sustancias anest&eacute;sicas.</p>      <p><b>Anest&eacute;sicos utilizados</b>. Como sustancias anest&eacute;sicas se emplearon 2-fenoxietanol (100% de pureza), benzocaina (100% de pureza), metanosulfonato de tricaina (MS- 222, 100% de pureza) y quinaldina (90% de pureza) (Sigma-Aldrich, Steinheim, Alemania) evaluando en cada grupo et&aacute;reo tres concentraciones diferentes de cada anest&eacute;sico, as&iacute;: 2-fenoxietanol (200, 400 y 600 ppm), benzocaina (50, 100 y 150 ppm), MS-222 (100, 150 y 200 ppm) y quinaldina (7.5, 15 y 30 ppm). Para facilitar una mayor absorci&oacute;n branquial de los anest&eacute;sicos, se emple&oacute; el m&eacute;todo de anestesia por inmersi&oacute;n.</p>      <p>La benzocaina se disolvi&oacute; en etanol de 98% de pureza (Sigma-Aldrich, Steinheim, Alemania) y el MS-222 se disolvi&oacute; en agua con el fin de preparar una soluci&oacute;n stock al 10%. Por su parte, el 2-fenoxietanol y la quinaldina se adicionaron directamente al agua del acuario de anestesia sin previa diluci&oacute;n. Las diferentes concentraciones de anest&eacute;sicos evaluados fueron adicionadas al agua de los acuarios experimentales antes de la inmersi&oacute;n de los peces, con el fin de garantizar la completa diluci&oacute;n de los anest&eacute;sicos.</p>      <p>Con el fin de determinar si el etanol (solvente de la benzocaina) generaba efectos anest&eacute;sicos, se prepar&oacute; una soluci&oacute;n al 10% en agua destilada y se evalu&oacute; en alevinos y juveniles (n=5), diferentes a los que se emplearon en la fase experimental, teniendo en cuenta las misma variables de respuesta estudiadas para los anest&eacute;sicos.</p>      <p><b>Variables consideradas</b>. En este estudio, las variables de respuesta evaluadas fueron el tiempo de inducci&oacute;n, tiempo de recuperaci&oacute;n, frecuencia opercular (FO) y la sobrevivencia post-anestesia. Con el fin de establecer con exactitud el tiempo de inducci&oacute;n y de recuperaci&oacute;n, as&iacute; como la frecuencia opercular (FO), estos procedimientos se registraron con una videoc&aacute;mara. Posteriormente, los videos fueron observados en c&aacute;mara lenta y los datos fueron registrados con un contador digital propio de la videograbaci&oacute;n (Sony Slx500 VHS&trade;).</p>      <p><b>Definici&oacute;n de variables</b>. El tiempo de inducci&oacute;n fue definido como el per&iacute;odo transcurrido desde el momento en que el pez fue puesto en contacto con la soluci&oacute;n anest&eacute;sica hasta que sus movimientos operculares disminuyeron y se present&oacute; p&eacute;rdida del eje de nado (caracter&iacute;stico de un plano 3 de anestesia) (8). Con el fin de determinar el anest&eacute;sico y la concentraci&oacute;n &oacute;ptima de anestesia se defini&oacute; un tiempo de inducci&oacute;n inferior a 3.30 min (1, 9).</p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p>El tiempo de recuperaci&oacute;n se defini&oacute; como el per&iacute;odo transcurrido entre el retiro del pez de la soluci&oacute;n anest&eacute;sica y la recuperaci&oacute;n total del eje de nado (8). Durante este per&iacute;odo los peces fueron manipulados para determinar su peso y la longitud furcal. Siguiendo los criterios definidos por Soto y Burhanuddin (10) se seleccion&oacute; el anest&eacute;sico y su concentraci&oacute;n anest&eacute;sica que produjo un tiempo de recuperaci&oacute;n inferior a 5 min. Para determinar la variaci&oacute;n de la FO durante el per&iacute;odo de inducci&oacute;n, se analizaron tres periodos seguidos de filmaci&oacute;n de un minuto cada uno, registrados a partir de los 30 seg despu&eacute;s de entrar el pez en contacto con el anest&eacute;sico. Lo anterior con el fin de reducir el error experimental debido a la excitaci&oacute;n generada por la inmersi&oacute;n del pez en el acuario de anestesia. Debido al reducido tama&ntilde;o de los alevinos, esta variable s&oacute;lo fue posible determinarse en individuos juveniles.</p>      <p>Posterior al per&iacute;odo de recuperaci&oacute;n los peces fueron transferidos a acuarios de vidrio con agua libre de anest&eacute;sicos, con aireaci&oacute;n constante y mantenidos all&iacute; durante 5 d&iacute;as con el fin de determinar la sobrevivencia post-anestesia.</p>      <p><b>An&aacute;lisis estad&iacute;stico</b>. Se emple&oacute; un dise&ntilde;o factorial 2x4x3, donde el factor 1 correspondi&oacute; a los dos grupos et&aacute;reos (alevinos y juveniles), el factor 2 a las cuatro sustancias anest&eacute;sicas (2-fenoxietanol, benzoca&iacute;na, MS-222 y quinaldina) y el factor 3 a las tres concentraciones de cada anest&eacute;sico. Para cada concentraci&oacute;n anest&eacute;sica, se llevaron a cabo 12 repeticiones (n=12) en alevinos y juveniles, siendo el pez la unidad experimental.</p>      <p>Los datos obtenidos fueron sometidos inicialmente a estad&iacute;stica descriptiva y expresados como media (&plusmn;) error est&aacute;ndar (SEM). Para verificar la normalidad de los datos, se realiz&oacute; la prueba de Bonferroni. Con el fin de detectar diferencias significativas entre tratamientos, se realiz&oacute; la prueba de Scheff&eacute;. Todos los procedimientos estad&iacute;sticos fueron realizados mediante el software <i>Instat</i> v.3.06 para Windows y en todos los casos p<0.05, fue suficiente para revelar diferencias significativas.</p>      <p><b>RESULTADOS</b></p>      <p>En los dos grupos et&aacute;reos, no se present&oacute; mortalidad antes, durante, ni despu&eacute;s de los experimentos de inducci&oacute;n y recuperaci&oacute;n anest&eacute;sica. Por su parte, a excepci&oacute;n del pH, los par&aacute;metros de calidad del agua utilizada en la fase experimental se mantuvieron estables, registr&aacute;ndose una temperatura del agua de 26.1 &plusmn; 1.3&deg;C y concentraci&oacute;n de ox&iacute;geno disuelto de 5.2 &plusmn; 1.0 mg.L<sup>-1</sup>; sin embargo, el pH vari&oacute; considerablemente entre las cuatro soluciones de anest&eacute;sicos evaluados, siendo las sustancias que provocaron mayor acidez del agua el MS-222 (3.6 &plusmn; 0.1) y la benzocaina (5.8 &plusmn; 0.3). A diferencia, en las soluciones de 2-fenoxietanol y de quinaldina, el pH del agua estuvo cercano a la neutralidad (6.2 &plusmn; 0.08 y 6.6 &plusmn; 0.07, respectivamente).</p>      <p>En los peces control que fueron expuestos al solvente de los anest&eacute;sicos (etanol) no se observaron efectos anest&eacute;sicos ni alteraci&oacute;n de la reactividad a los est&iacute;mulos aplicados. En los alevinos sometidos a las menores concentraciones de 2-fenoxietanol y quinaldina, no fue posible determinar el tiempo de inducci&oacute;n ni de recuperaci&oacute;n, debido a la ausencia de efectos anest&eacute;sicos observables.</p>      <p>Tanto en alevinos como en juveniles, el tiempo de inducci&oacute;n de los cuatro anest&eacute;sicos evaluados dependi&oacute; de la concentraci&oacute;n utilizada. En los juveniles expuestos a las dos concentraciones m&aacute;s altas de 2-fenoxietanol (400 y 600 ppm), benzocaina (100 y 150 ppm) y quinaldina (15 y 30 ppm), el tiempo de inducci&oacute;n fue significativamente mayor (<i>c.a</i>. 60 y 39 seg, 46 y 42 seg, 72 y 49 seg, respectivamente), cuando comparado con alevinos bajo las mismas condiciones experimentales (p&lt;0.05, <a href="#fig1">Figura 1A</a>, <a href="#fig1">1B</a> y <a href="#fig2">2B</a>). Sin embargo, el tiempo de inducci&oacute;n de los alevinos expuestos a las tres concentraciones evaluadas de MS-222 fue significativamente mayor al ser comparado con el de los juveniles (p&lt;0.05) (<a href="#fig2">Figura 2A</a>).</p>      <p>    <center><a name="fig1"><img src="img/revistas/mvz/v13n3/v13n3a02f1.jpg"></center></p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p>    <center><a name="fig2"><img src="img/revistas/mvz/v13n3/v13n3a02f2.jpg"></center></p>      <p>En los alevinos de cachama blanca expuestos a benzocaina, MS-222 y quinaldina se observ&oacute; que a medida que la concentraci&oacute;n anest&eacute;sica se increment&oacute;, el tiempo de inducci&oacute;n fue significativamente menor (p&lt;0.05). Dicho hallazgo no fue observado en alevinos expuestos a 2-fenoxietanol, en el cual los tiempos de inducci&oacute;n no mostraron diferencias significativas en todas las concentraciones evaluadas (<a href="#fig1">Figura 1B</a>). Por su parte, los juveniles expuestos a 2-fenoxietanol, benzocaina y quinaldina mostraron el mismo comportamiento que los alevinos, en el cual el menor tiempo de inducci&oacute;n fue observado con la mayor concentraci&oacute;n (p&lt;0.05).</p>      <p>Finalmente, en juveniles expuestos a MS-222, el menor tiempo de inducci&oacute;n fue observado con la menor concentraci&oacute;n (p<0.05).</p>      <p>Al comparar tiempos de inducci&oacute;n todas las soluciones anest&eacute;sicas en un mismo grupo et&aacute;reo, se observ&oacute; que los alevinos expuestos a una soluci&oacute;n de 150 ppm de benzocaina presentaron el menor tiempo de inducci&oacute;n 19 seg, (p&lt;0.05) al ser comparado con los dem&aacute;s tratamientos (<a href="#tab1">Tabla 1</a>). Las siguientes tres concentraciones que mostraron bajos tiempos de inducci&oacute;n (p<0.05) correspondieron a 400 y 600 ppm de 2-fenoxietanol (25 y 26 seg, respectivamente) y 100 ppm de benzocaina (24 seg.). Por su parte, juveniles expuestos a soluciones de 100 y 150 ppm de MS-222, 600 ppm de 2-fenoxietanol y 150 ppm de benzocaina mostraron los menores tiempos de inducci&oacute;n cuando comparados con las dem&aacute;s concentraciones anest&eacute;sicas (entre 36 y 43 seg., <i>p</i> &lt; 0.05). Por otro lado, los mayores tiempos de inducci&oacute;n en alevinos fueron observados con las concentraciones de 100 ppm de MS-222 (1.8 min) y 7.5 ppm de quinaldina (1.4 min). En los juveniles, el mayor tiempo de inducci&oacute;n fue observado en la concentraci&oacute;n de 15 ppm de quinaldina (1.2 min).    <p>      <p>    <center><a name="tab1"><img src="img/revistas/mvz/v13n3/v13n3a02t1.jpg"></center></p>      <p>Al comparar tiempos de recuperaci&oacute;n para todas las soluciones anest&eacute;sicas, en alevinos y juveniles fue observado un tiempo de recuperaci&oacute;n inferior a 2 min. cuando los peces fueron expuestos a las tres concentraciones de 2-fenoxietanol, MS-222 y quinaldina y a 50 mg.l<sup>-1</sup> de benzocaina (<a href="#tab1">Tabla 1</a>). Sin embargo, las concentraciones m&aacute;s altas de benzocaina (100 y 150 mg.l<sup>-1</sup>) presentaron tiempos de recuperaci&oacute;n significativamente prolongados (p&lt;0.05) en ambos grupos et&aacute;reos, alcanzando en los alevinos tiempos de aproximadamente 10 min. (Figura 1B). El anest&eacute;sico que present&oacute; el menor tiempo (p&lt;0.05) de recuperaci&oacute;n fue MS-222 en las concentraciones de 100 y 150 mg.l<sup>-1</sup> (45 y 42 seg., respectivamente) en alevinos y 100 mg.l<sup>-1</sup> (39.5 seg.) en juveniles, comparado con las dem&aacute;s concentraciones anest&eacute;sicas.</p>      <p>No se observ&oacute; tendencia alguna en la variaci&oacute;n de la frecuencia opercular de juveniles de cachama blanca expuestos a los cuatro anest&eacute;sicos. En los peces anestesiados con 400 y 600 mg.l<sup>-1</sup> de 2-fenoxietanol se observ&oacute; menor (p&lt;0.05) frecuencia opercular durante el segundo y tercer minuto (inferior a 90 respiraciones por min.) comparado con los primeros 60 seg. (entre 103 y 114 movimientos por min.). Con la menor concentraci&oacute;n de 2-fenoxietanol no se observaron diferencias durante los tres minutos evaluados (p&gt;0.05) (<a href="#fig3">Figura 3A</a>). En los peces anestesiados con benzocaina se observ&oacute; disminuci&oacute;n de la frecuencia opercular a medida que la concentraci&oacute;n se increment&oacute; (p&lt;0.05). A este respecto, una dram&aacute;tica disminuci&oacute;n (menos de 19 movimientos operculares por min.) en la FO fue observada en los peces expuestos a 100 y 150 mg.l<sup>-1</sup> de benzocaina (p&lt;0.05) (<a href="#fig3">Figura 3B</a>).</p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p>    <center><a name="fig3"><img src="img/revistas/mvz/v13n3/v13n3a02f3.jpg"></center></p>      <p>En contraste, los peces expuestos a MS- 222 tuvieron una tendencia diferente, siendo la mayor frecuencia opercular observada con la menor concentraci&oacute;n anest&eacute;sica (p&lt;0.05). S&oacute;lo se observ&oacute; variaci&oacute;n significativa entre el primer minuto y los dos siguientes (97 vs. 89 y 86 movimientos operculares por min., respectivamente), cuando fueron expuestos a 100 mg.l<sup>-1</sup>. Finalmente, en los peces anestesiados con quinaldina no se observaron diferencias entre 15 y 30 mg.l<sup>-1</sup> (p>0.05).</p>      <p><b>DISCUSI&Oacute;N</b></p>      <p>Los anest&eacute;sicos han sido usados ampliamente en la acuicultura para inmovilizar animales en procedimientos de transporte, desove, vacunaci&oacute;n o manipulaci&oacute;n en general (5); sin embargo, para lograr resultados adecuados, debe determinarse para cada especie la eficiencia y el nivel de toxicidad de estos compuestos. A este respecto, los resultados obtenidos en el presente estudio en <i>Piaractus brachypomus</i> podr&iacute;an considerarse como el primer reporte de anest&eacute;sicos en esta especie. Estudios similares (11,12) se han llevado a cabo en <i>Colossoma macropomum</i>, un serras&aacute;lmido cercano a la cachama blanca, donde se reportaron la eficiencia del uso de benzocaina y de eugenol, respectivamente.</p>      <p>La definici&oacute;n de la efectividad de una sustancia anest&eacute;sica se considera subjetiva ya que los criterios para definir un anest&eacute;sico ideal var&iacute;an entre autores (7). Seg&uacute;n Burka et al (13), el 2-fenoxietanol tiene buenos m&aacute;rgenes de seguridad en aquellos individuos sometidos a procedimientos de anestesia, siendo la concentraci&oacute;n efectiva entre 200 y 600 ppm (7, 14). Estas concentraciones fueron evaluadas en el presente estudio con alevinos y juveniles de <i>Piaractus brachypomus</i>, confirm&aacute;ndose su efectividad anest&eacute;sica en los dos grupos et&aacute;reos. A pesar que en el presente estudio se observ&oacute; una ligera acidificaci&oacute;n de las soluciones de 2-fenoxietanol (6.2 &plusmn; 0.08), este hallazgo aparentemente no afect&oacute; la respuesta a la inducci&oacute;n anest&eacute;sica. De manera similar, Hseu et al (15) reportaron que la adici&oacute;n de 2-fenoxietanol al agua durante el transporte de alevinos de <i>Acanthopagrus schlegel</i> gener&oacute; acidificaci&oacute;n del agua, sin efectos delet&eacute;reos. Finalmente, el 2-fenoxietanol mostr&oacute; los menores tiempos de inducci&oacute;n anest&eacute;sica sin las dosis m&aacute;s altas, tanto en alevinos como en juveniles. Estos resultados concuerdan con lo reportado por Hseu et al. (16) en <i>Sparus sarba</i> y por King et al (5) en <i>Centropristis striata</i>, en los cuales 400 y 300 mg.l<sup>-1</sup> de 2-fenoxietanol fueron considerados suficientes para inducir una r&aacute;pida anestesia y recuperaci&oacute;n.</p>      <p>Tanto en alevinos como en juveniles, se observ&oacute; que la benzocaina provoc&oacute; los m&aacute;s largos periodos de recuperaci&oacute;n. Estos resultados concuerdan con lo reportado por Gilderhus (17) en <i>Oncorhynchus tshawytscha</i> y <i>Salmo salar</i>, utilizando 30 mg.l<sup>-1</sup> de benzocaina; bajo esas condiciones los peces recuperaron el eje de nado entre 10 a 15 min posteriores a la anestesia. De igual modo, Gomes et al (11) observaron que juveniles de <i>Colossoma macropomum</i> expuestos a concentraciones superiores a 200 mg.l<sup>-1</sup> de benzocaina mostraron prolongados tiempos de recuperaci&oacute;n (mayores a 15 min); por tanto, estos autores recomiendan el uso de benzocaina para realizar procedimientos que requieran tiempos de recuperaci&oacute;n prolongados, sin someter los peces a un tiempo de anestesia mayor a 20 min. En el presente estudio se observ&oacute; que la concentraci&oacute;n de 150 mg.l<sup>-1</sup> de benzocaina mostr&oacute; el menor tiempo de inducci&oacute;n y el m&aacute;s largo per&iacute;odo de recuperaci&oacute;n. Por tanto, se puede inferir que el uso de benzocaina podr&iacute;a ser &uacute;til en procedimientos quir&uacute;rgicos de larga duraci&oacute;n; no obstante, las dosis altas no se recomendar&iacute;an para procedimientos de manipulaci&oacute;n rutinaria, debido a su prolongado per&iacute;odo de recuperaci&oacute;n.</p>      <p>Debido a que el metasulfonato de tricaina es el &uacute;nico anest&eacute;sico actualmente autorizado por la FDA para peces, m&uacute;ltiples estudios se han llevado a cabo en especies de agua dulce y salada. En el presente estudio, se observ&oacute; que tanto en alevinos como en juveniles, el MS-222 induce anestesia en un tiempo menor a 2 min., con una pronta recuperaci&oacute;n. Estos hallazgos concuerdan con los reportados para otras especies (5,18,19); sin embargo, la respuesta depender&aacute; del procedimiento a realizar, de la especie, edad, condiciones f&iacute;sico-qu&iacute;micas del agua y dem&aacute;s factores que pueden afectar la respuesta. En el presente estudio se observ&oacute; acidificaci&oacute;n del agua (3.6 &plusmn; 0.2); sin embargo, estudios en especies marinas han demostrado que probablemente las sales disueltas en el agua de mar act&uacute;an como tamp&oacute;n evitando la acidificaci&oacute;n (20, 21). A este respecto, Smit et al (22) reportaron que el uso de sustancias alcalinas como el NaHCO<sub>3</sub>, podr&iacute;an usarse para neutralizar el pH de las soluciones de MS-222 en agua dulce y evitar abrasiones branquiales debido a la acidez del agua.</p>      <p>En este estudio, alevinos y juveniles de <i>Piaractus brachypomus</i> sumergidos en soluciones que conten&iacute;an 7.5 a 30 mg.l<sup>-1</sup> de sulfato de quinaldina tuvieron tiempos de inducci&oacute;n y de recuperaci&oacute;n dentro de los l&iacute;mites inicialmente establecidos. Resultados similares han sido reportados en juveniles de carpas Koi (<i>Cyprinus carpio</i>), en los cuales la exposici&oacute;n a 50 ppm de sulfato de quinaldina durante 40 horas fue suficiente para inducir tranquilizaci&oacute;n sin causar mortalidad (23). De igual modo, Massee et al (4) reportaron que en alevinos de <i>Sciaenops ocellatus</i> y <i>Carassius auratus</i>, quinaldina a concentraciones entre 55 y 60 mg.l<sup>-1</sup>, fue efectiva para inducir la anestesia.</p>      <p>El incremento en los tiempos de inducci&oacute;n en los juveniles expuestos a las concentraciones m&aacute;s altas de 2-fenoxietanol, benzocaina y quinaldina puede estar relacionado con el peso corporal. Esta respuesta podr&iacute;a tener explicaci&oacute;n basada en el hecho que individuos m&aacute;s grandes poseen un metabolismo menor y tardar&iacute;an m&aacute;s tiempo en metabolizar los anest&eacute;sicos. Resultados similares fueron reportados por Oikawa et al (20) en <i>Pagrus major</i>, quienes observaron una relaci&oacute;n directa entre la concentraci&oacute;n de MS-222 y el peso corporal, siendo la concentraci&oacute;n efectiva y el tiempo de recuperaci&oacute;n dependientes del desarrollo corporal.</p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p>Aunque no se evalu&oacute; la seguridad de los anest&eacute;sicos usados en las personas que manipularon los anest&eacute;sicos, se reporta que la benzocaina y el metasulfonato de tricaina poseen un mayor margen de seguridad comparado con los dem&aacute;s anest&eacute;sicos. Seg&uacute;n Summerfelt y Smith (24), la quinaldina y el 2-fenoxietanol son altamente irritantes para la mucosa ocular y del tracto respiratorio. Por otro lado, Morton (25) reporta que el uso sostenido y la exposici&oacute;n regular al 2-fenoxietanol causa un s&iacute;ndrome neurofisiol&oacute;gico en los usuarios que no utilizan guantes protectores. Por tanto, aunque pocos estudios al respecto se han llevado a cabo, el uso de cualquier sustancia qu&iacute;mica debe realizarse empleando siempre las normas de bioseguridad recomendadas para cada sustancia.</p>      <p>Aunque las cuatro sustancias anest&eacute;sicas usadas mostraron tiempos de inducci&oacute;n dentro de los intervalos establecidos inicialmente, el tiempo de recuperaci&oacute;n fue muy variable en los dos grupos et&aacute;reos, por tanto se estableci&oacute; de acuerdo con los resultados obtenidos una sustancia anest&eacute;sica y una concentraci&oacute;n apropiada para alevinos y juveniles de cachama blanca (<i>Piaractus brachypomus</i>). En Conclusi&oacute;n se puede afirmar que en alevinos, se consider&oacute; al 2- fenoxietanol (400 ppm) como la sustancia de primera elecci&oacute;n y en juveniles el metasulfonato de tricaina (100 ppm); no obstante, estos resultados deben ser complementados con estudios a nivel fisiol&oacute;gico y econ&oacute;mico buscando optimizar la eficiencia y el uso de estas sustancias tanto en pr&aacute;cticas investigativas como en acuicultura.</p>      <p>Finalmente, las concentraciones anest&eacute;sicas con tiempos de recuperaci&oacute;n m&aacute;s prolongados serian adecuadas para realizar pruebas biom&eacute;tricas o cirug&iacute;as de larga duraci&oacute;n, teniendo siempre en consideraci&oacute;n los posibles da&ntilde;os tisulares causados por hipoxia o acumulaci&oacute;n de residuos debido a la exposici&oacute;n prolongada.</p>      <p><b>Agradecimientos</b></p>      <p>A Claudia Quesada D&iacute;az por su colaboraci&oacute;n en el desarrollo de la fase experimental. Igualmente, al Instituto de Acuicultura de la Universidad de los Llanos (IALL) por el apoyo log&iacute;stico.</p>  <hr>      <p><b>Referencias</b></p>      <!-- ref --><p>1. Davis KB, Griffin BR. Physiological responses of hybrid striped bass under sedation by several anesthetics. Aquaculture 2004; 233(1-4): 531-548.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000069&pid=S0122-0268200800030000200001&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>2. Bowser PR. Anesthetic options for fish. In: Gleed RD and Ludders JW (Ed), Recent Advances in Veterinary Anesthesia and Analgesia: Companion Animals, New York, USA: International Veterinary Information Service; 2001.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000070&pid=S0122-0268200800030000200002&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>3. Davidson GW, Davie PS, Young G, Fowler RT. Physiological responses of rainbow trout <i>Oncorhynchus mykiss</i> to crowding and anesthesia with AQUI-S<sup>&trade;</sup>. J World Aquac Soc 2000; 31(1): 105-114.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000071&pid=S0122-0268200800030000200003&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>4. Massee KC, Rust MB, Hardy RW, Stickney RR. The effectiveness of tricaine, quinaldine sulfate and metomidate as anesthetics for larval fish. Aquaculture 1995; 134(3-4): 351-359.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000072&pid=S0122-0268200800030000200004&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>5. King W, Hooper B, Hillsgrove S, Benton C, Berlinsky DL. The use of clove oil, metomidate, tricaine methanesulphonate and 2-phenoxyethanol for inducing anaesthesia and their effect on the cortisol stress response in black sea bass (<i>Centropristis striata L.</i>). Aquac Res 2005; 36(14): 1442-1449.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000073&pid=S0122-0268200800030000200005&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>6. Jinn-Rong H, Shinn-Lih Y, Yeong-Torng C, Yun-Yuan T. Comparison of efficacy of five anesthetics in goldlined sea bream, <i>Sparus sarba</i>. Acta Zool Taiwanica 1998; 9(1): 35-41.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000074&pid=S0122-0268200800030000200006&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>7. Gilderhus PA, Marking LL. Comparative efficacy of 16 anesthetic chemicals on rainbow trout. North American Journal of Fisheries Management 1987; 7(2): 288-292.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000075&pid=S0122-0268200800030000200007&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>8. Marking LL, Meyer FP. Are Better Anesthetics Needed in Fisheries? Fisheries Sci 1985; 10(6):2-5.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000076&pid=S0122-0268200800030000200008&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>9. Small BC. Anesthetic efficacy of metomidate and comparison of plasma cortisol responses to tricaine methanesulfonate, quinaldine and clove oil anesthetized channel catfish <i>Ictalurus punctatus</i>. Aquaculture 2003; 218(1-4): 177-185.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000077&pid=S0122-0268200800030000200009&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>10. Soto CG, Burhanuddin. Clove oil as a fish anaesthetic for measuring length and weight of rabbitfish (<i>Siganus lineatus</i>). Aquaculture 1995; 136(1-2):149-152.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000078&pid=S0122-0268200800030000200010&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>11. Gomes LC, Chippari-Gomes AR, Lopes NP, Roubach R, Araujo-Lima CARM. Efficacy of benzocaine as an anesthetic in juvenile tambaqui <i>Colossoma macropomum</i>. J World Aquac Soc 2001; 32(4):426-431.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000079&pid=S0122-0268200800030000200011&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>12. Roubach R, Gomes LC, Leao Fonseca FA, Val AL. Eugenol as an efficacious anaesthetic for tambaqui, <i>Colossoma macropomum</i> (Cuvier). Aquac Res 2005; 36(11): 1056-1061.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000080&pid=S0122-0268200800030000200012&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>13. Burka JF, Hammell KL, Horsberg TE, Johnson GR, Rainnie DJ, Speare DJ. Drugs in salmonid aquaculture - A review. J Vet Pharmaco Therap 1997; 20(5): 333-349.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000081&pid=S0122-0268200800030000200013&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>14. Weyl O, Kaiser H, Hecht T. On the efficacy and mode of action of 2- phenoxyethanol as an anaesthetic for goldfish, <i>Carassius auratus</i> (L.), at different temperatures and concentrations. Aquac Res 1996; 27(10): 757-764.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000082&pid=S0122-0268200800030000200014&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>15. Hseu JR, Yeh. SL, Chu YT, Ting YY. The Use of 2-phenoxyethanol as an anesthetic in the transport of black porgy <i>Acanthopagrus schlegeli</i>. J Taiwan Fish Res 1995; 3(1):11-18.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000083&pid=S0122-0268200800030000200015&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>16. Hseu JR, Yeh SL, Chu YT, Ting YY. Comparison of efficacy of five anesthetics in goldlined sea bream, <i>Sparus sarba</i>. Acta Zool Taiwanica 1998; 9(1):35-41.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000084&pid=S0122-0268200800030000200016&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>17. Gilderhus PA. Benzocaine as a fish anesthetic: efficacy and Safety for spawning-phase salmon. Prog Fish-Cult 1990; 52(3):189-191.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000085&pid=S0122-0268200800030000200017&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>18. Wagner GN, Singer TD, Scott McKinley R. The ability of clove oil and MS-222 to minimize handling stress in rainbow trout (<i>Oncorhynchus mykiss</i> Walbaum). Aquac Res 2003; 34(13):1139-1146.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000086&pid=S0122-0268200800030000200018&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>19. Cho GK, Heath DD. Comparison of tricaine methanesulphonate (MS222) and clove oil anaesthesia effects on the physiology of juvenile chinook salmon <i>Oncorhynchus tshawytscha</i> (Walbaum). Aquac Res 2000; 31(6):537-546.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000087&pid=S0122-0268200800030000200019&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>20. Oikawa S, Takeda T, Itazawa Y. Scale effects of MS-222 on a marine teleost, porgy <i>Pagrus major</i>. Aquaculture 1994; 121(4):369-379.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000088&pid=S0122-0268200800030000200020&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>21. Mattson NS, Riple TH. Metomidate, a better anesthetic for cod (<i>Gadus morhua</i>) in comparison with benzocaine, MS-222, chlorobutanol, and phenoxyethanol. Aquaculture 1989; 83(1-2): 89-94.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000089&pid=S0122-0268200800030000200021&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>22. Smit GL, Hattingh J, Burger AP. Haematological assessment of the effects of the anaesthetic MS-222 in natural and neutralized form in three freshwater fish species: intraspecies differences. J Fish Biol 1979; 15(6): 645-653.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000090&pid=S0122-0268200800030000200022&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>23. Hettiarachchi M, Senadheera S. Efficacy of quinaldine sulphate as an anaesthetic for the ornamental carp (<i>Cyprinus carpio</i>) in simulated packaging for long distance transport. Sri Lanka Journal of Aquatic Sciences 1999; 4(13-22).&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000091&pid=S0122-0268200800030000200023&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>24. Summerfelt RC, Smith LS. Anesthesia, surgery and related techniques. In: Schreck CB and Moyle PB (Ed), Methods for Fish Biology, Bethesda, MD. USA: American Fisheries Society, 1990.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000092&pid=S0122-0268200800030000200024&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>25. Morton WE. Occupational phenoxyethanol neurotoxicity: a report of three cases. J Occup Med 1990; 32:42-45.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000093&pid=S0122-0268200800030000200025&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --> ]]></body><back>
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