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<article-title xml:lang="es"><![CDATA[Efecto de tiempo y temperatura de cocción en chorizo inoculados artificialmente con Listeria monocytogenes]]></article-title>
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<article-title xml:lang="pt"><![CDATA[Efeito do tempo e temperatura de cozimento em lingüiças inoculadas artificialmente com Listeria monocytogenes]]></article-title>
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<abstract abstract-type="short" xml:lang="en"><p><![CDATA[Objective. To find whether the cooking times traditionally used by consumers are enough to inactivate Listeria monocytogenes artificially inoculated into sausages. Materials and methods. A survey asking about sausage cooking habits was completed with 50 housewives. We analyzed 60 samples of sausages previously inoculated with 10³ CFU g-1 from a pool of 5 strains of L. monocytogenes, then the cooking procedures described in the survey were applied to the samples, and counting was done immediately after. Additionally, a complementary test was carried out by inoculating 20 samples of sausages with 10³ CFU g-1 and exposing them to 72°C and 73°C for 30 seg. Results. The survey showed that 15 minute boiling and 5 minute frying are the most frequent ways of preparing sausages by consumers. We established that the time and cooking conditions used in our assay had a statistically significant effect (p: 0.016) on the inoculated samples. In the complementary assay, statistical data (p: 0.0001) indicated that internal temperatures of 73°C are enough to inactivate the pathogen at an industrial scale. Conclusion. Cooking by 15 minute boiling and 5 minute frying are enough to inactive concentrations of 10³ g-1 of Listeria monocytogenes artificially inoculated into sausages.]]></p></abstract>
<abstract abstract-type="short" xml:lang="pt"><p><![CDATA[Objetivo. Determinar se o tempo utilizado pelos consumidores para cozinhar lingüiças são suficientes para a inativação de Listeria monocytogenes inoculada artificialmente neste produto. Materiais e métodos. Foram realizadas entrevistas a 50 donas de casa para perguntar sobre os hábitos de preparação das lingüiças. Foram analisadas 60 amostras de lingüiças para as quais foram inoculadas concentrações de 10³ UFC g-1 de um pool de 5 cepas de L. monocytogenes, foram utilizados procedimentos de cozimento indicados pelas entrevistas e foi feita uma contagem imediatamente. Além disso, foi realizada uma prova complementaria inoculando 20 amostras de lingüiças com populações de 10³ UFC g-1 e submetidas a 72 e 73°C por 30 segundos. Resultados. Através das entrevistas foi estabelecido que 15 minutos de cozimento e 5 minutos de fritura é a forma mais freqüente de preparação por parte dos consumidores, foi estabelecido que o tempo e as condições utilizadas neste estudo foi estatisticamente significativa (0,016) sobre a população inoculada. Na prova complementaria os dados estatísticos (p = 0,0001) indicaram que temperaturas internas de 73°C são suficientes para a inativação deste patógeno ao nível da indústria. Conclusão. Tempo de 15 minutos de cozimento e 5 minutos de fritura são suficientes para desativar as concentrações de 10³ g-1 de Listeria monocytogenes inoculadas artificialmente em lingüiças.]]></p></abstract>
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</front><body><![CDATA[   <font size="2" face="verdana">      <p align="center"><font size="4"><b>Efecto de tiempo y temperatura de cocci&oacute;n en chorizo inoculados artificialmente con <i>Listeria monocytogenes</i></b></font></p>      <p align="center"><font size="3"><b>Effect of cooking time and temperature on sausages artificially inoculated with <i>Listeria monocytogenes</i></font></p>      <p align="center"><font size="3">Efeito do tempo e temperatura de cozimento em ling&uuml;i&ccedil;as inoculadas artificialmente com <i>Listeria monocytogenes</i></b></font></p>      <p>    <center>Silvia Nataly Molina-Moreno<sup>1</sup>, Marcela Mercado-Reyes<sup>2</sup> y Ana K. Carrascal-Camacho<sup>1*</sup></center></p>      <br>      <p>    <center><sup>1</sup> Laboratorio de Microbiolog&iacute;a de Alimentos. Grupo de Biotecnolog&iacute;a Ambiental e Industrial (GBAI). Facultad de Ciencias. Pontificia Universidad Javeriana. Cra 7 no 43-82, Bogot&aacute; Colombia.    <br>  <sup>2</sup> Grupo de Enfermedades Infecciosas. Facultad de Ciencias. Pontificia Universidad Javeriana. Cra 7 no 43-82, Bogot&aacute; Colombia.</p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p>*<a href="mailto:acarrasc@javeriana.edu.co">acarrasc@javeriana.edu.co</a>      <p>Recibido: 21-08-2008; Aceptado: 26-10-2009</center></p>  <hr>      <p><font size="3"><b>Resumen</b></font></p>      <p><b>Objetivo.</b> Determinar si los tiempos utilizados por los consumidores para la cocci&oacute;n de chorizos son suficientes para la inactivaci&oacute;n de Listeria monocytogenes inoculada artificialmente en este producto. <b>Materiales y m&eacute;todos.</b> Se realiz&oacute; una encuesta a 50 amas de casa para preguntar sobre los h&aacute;bitos de preparaci&oacute;n de los chorizos. Se analizaron 60 muestras de chorizos a las que se les inocularon concentraciones de 10<sup>3</sup> UFC g<sup>-1</sup> de un pool de 5 cepas de <i>L. monocytogenes</i>, se aplicaron los procedimientos de cocci&oacute;n indicados por la encuesta y se hizo recuento inmediatamente. Adicionalmente, se realiz&oacute; una prueba complementaria donde se inocularon 20 muestras de chorizos con poblaciones de 10<sup>3</sup> UFC g<sup>-1</sup> y se sometieron a 72 y 73&deg;C durante 30 segundos. <b>Resultados.</b> Mediante la encuesta se logr&oacute; establecer que 15 minutos de cocci&oacute;n y 5 minutos de fritura es la forma m&aacute;s frecuente de preparaci&oacute;n por parte de los consumidores, se logr&oacute; establecer que el tiempo y las condiciones utilizadas en este ensayo tuvieron un efecto estad&iacute;sticamente significativo (0,016) sobre la poblaci&oacute;n inoculada. En el ensayo complementario los datos estad&iacute;sticos (p: 0,0001) indicaron que temperaturas internas de 73&deg;C son suficientes para la inactivaci&oacute;n de este pat&oacute;geno a nivel industrial. <b>Conclusi&oacute;n.</b> Tiempos de 15 minutos de cocci&oacute;n y 5 minutos de fritura son suficientes para inactivar concentraciones de 10<sup>3</sup> g<sup>-1</sup> de <i>Listeria monocytogenes</i> inoculadas artificialmente en chorizos.</p>      <p><b>Palabras clave</b>: embutidos crudos, listeriosis, termoresistencia.    <p>  <hr>      <p><font size="3"><b>Abstract</b></font></p>      <p><b>Objective.</b> To find whether the cooking times traditionally used by consumers are enough to inactivate <i>Listeria monocytogenes</i> artificially inoculated into sausages. <b>Materials and methods.</b> A survey asking about sausage cooking habits was completed with 50 housewives. We analyzed 60 samples of sausages previously inoculated with 10<sup>3</sup> CFU g<sup>-1</sup> from a pool of 5 strains of <i>L. monocytogenes</i>, then the cooking procedures described in the survey were applied to the samples, and counting was done immediately after. Additionally, a complementary test was carried out by inoculating 20 samples of sausages with 10<sup>3</sup> CFU g<sup>-1</sup> and exposing them to 72&deg;C and 73&deg;C for 30 seg. <b>Results.</b> The survey showed that 15 minute boiling and 5 minute frying are the most frequent ways of preparing sausages by consumers. We established that the time and cooking conditions used in our assay had a statistically significant effect (p: 0.016) on the inoculated samples. In the complementary assay, statistical data (p: 0.0001) indicated that internal temperatures of 73&deg;C are enough to inactivate the pathogen at an industrial scale. <b>Conclusion.</b> Cooking by 15 minute boiling and 5 minute frying are enough to inactive concentrations of 10<sup>3</sup> g<sup>-1</sup> of <i>Listeria monocytogenes</i> artificially inoculated into sausages.</p>      <p><b>Key words</b>: listeriosis, raw sausages, thermoresistance.</p>  <hr>      <p><font size="3"><b>Resumo</b></font></p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p><b>Objetivo.</b> Determinar se o tempo utilizado pelos consumidores para cozinhar ling&uuml;i&ccedil;as s&atilde;o suficientes para a inativa&ccedil;&atilde;o de <i>Listeria monocytogenes</i> inoculada artificialmente neste produto. <b>Materiais e m&eacute;todos.</b> Foram realizadas entrevistas a 50 donas de casa para perguntar sobre os h&aacute;bitos de prepara&ccedil;&atilde;o das ling&uuml;i&ccedil;as. Foram analisadas 60 amostras de ling&uuml;i&ccedil;as para as quais foram inoculadas concentra&ccedil;&otilde;es de 10<sup>3</sup> UFC g<sup>-1</sup> de um pool de 5 cepas de <i>L. monocytogenes</i>, foram utilizados procedimentos de cozimento indicados pelas entrevistas e foi feita uma contagem imediatamente. Al&eacute;m disso, foi realizada uma prova complementaria inoculando 20 amostras de ling&uuml;i&ccedil;as com popula&ccedil;&otilde;es de 10<sup>3</sup> UFC g<sup>-1</sup> e submetidas a 72 e 73&deg;C por 30 segundos. <b>Resultados.</b> Atrav&eacute;s das entrevistas foi estabelecido que 15 minutos de cozimento e 5 minutos de fritura &eacute; a forma mais freq&uuml;ente de prepara&ccedil;&atilde;o por parte dos consumidores, foi estabelecido que o tempo e as condi&ccedil;&otilde;es utilizadas neste estudo foi estatisticamente significativa (0,016) sobre a popula&ccedil;&atilde;o inoculada. Na prova complementaria os dados estat&iacute;sticos (p = 0,0001) indicaram que temperaturas internas de 73&deg;C s&atilde;o suficientes para a inativa&ccedil;&atilde;o deste pat&oacute;geno ao n&iacute;vel da ind&uacute;stria. <b>Conclus&atilde;o.</b> Tempo de 15 minutos de cozimento e 5 minutos de fritura s&atilde;o suficientes para desativar as concentra&ccedil;&otilde;es de 10<sup>3</sup> g<sup>-1</sup> de <i>Listeria monocytogenes</i> inoculadas artificialmente em ling&uuml;i&ccedil;as.</p>      <p><b>Palavras-Chave</b>: embutidos crudos, listeriose, termoresistência.</p>  <hr>      <p><font size="3"><b>Introducci&oacute;n</b></font></p>      <p><i>Listeria monocytogenes</i> es un microorganismo pat&oacute;geno transmitido por el consumo de alimentos, especialmente de origen animal (1), el cual puede causar un s&iacute;ndrome conocido como listeriosis, esta enfermedad es de baja ocurrencia, pero tiene una alta tasa de mortalidad (20-30%) (2). Aunque la listeriosis es una enfermedad relativamente poco com&uacute;n, su gravedad y el hecho de que est&eacute; asociada a alimentos de elaboraci&oacute;n industrial, especialmente cuando se producen brotes, la sit&uacute;an entre las enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) de mayor relevancia social y econ&oacute;mica (3). La listeriosis se detecta principalmente en los pa&iacute;ses industrializados, y no se sabe s&iacute; las diferencias entre las incidencias en los pa&iacute;ses desarrollados y en los pa&iacute;ses en desarrollo se deben a diferencias geogr&aacute;ficas verdaderas, a diferentes costumbres alimentarias y medios de conservaci&oacute;n de los alimentos, o a diferencias en las pr&aacute;cticas de diagn&oacute;stico y notificaci&oacute;n (1).</p>      <p>Este microorganismo es reconocido en la industria de alimentos por ser la bacteria Gram positiva no esporulada con mayor termoresistencia (4). Si bien existen diversos m&eacute;todos para la limitaci&oacute;n del crecimiento de <i>L. monocytogenes</i> s&oacute;lo se ha logrado establecer la eficacia de los procesos t&eacute;rmicos (1, 5). En Colombia, el chorizo de acuerdo a la norma t&eacute;cnica colombiana NTC 1325 (sexta actualizaci&oacute;n), puede ser cocido, crudo y precocido, fermentado o no (6), este var&iacute;a en su formulaci&oacute;n de regi&oacute;n en regi&oacute;n, a nivel artesanal este producto no es sometido a procesos de cocci&oacute;n y se realizan fermentaciones emp&iacute;ricas que eventualmente no siempre garantizan la ausencia de <i>L. monocytogeneses</i>, pues por la naturaleza ubicua de este pat&oacute;geno puede contaminar el producto durante su elaboraci&oacute;n; de otro lado los consumidores realizan diferentes m&eacute;todos de preparaci&oacute;n que dependen de las pr&aacute;cticas propias de cada consumidor, por lo que procesos inadecuados convierten a estos productos en alimentos de alto riesgo. Para evitar este riesgo la industria c&aacute;rnica realiza procesos de pre-cocci&oacute;n cuyo prop&oacute;sito es reducir la presencia de este pat&oacute;geno en el producto. Teniendo en cuenta lo anterior se quiso establecer si los tiempos y temperaturas de cocci&oacute;n utilizados por los consumidores son capaces de destruir a <i>L. monocytogenes</i> cuando se inoculan artificialmente en estos productos.</p>      <p><font size="3"><b>Materiales y m&eacute;todos</b></font></p>      <p><b>Aislamientos</b></p>      <p>Se usaron cinco aislamientos de <i>L. monocytogenes</i> obtenidos de carne de pollo, pertenecientes a la colecci&oacute;n del Laboratorio de Microbiolog&iacute;a de Alimentos de la Pontificia Universidad Javeriana, caracterizados previamente por PCR en tiempo real (7).</p>      <p><b>Poblaci&oacute;n de estudio y muestra</b></p>      <p>La poblaci&oacute;n de estudio fueron: chorizos precocidos provenientes de una f&aacute;brica productora de derivados c&aacute;rnicos, de la ciudad de Bogot&aacute;. Se obtuvieron 5 muestras semanales de los productos para un total de 80 muestras. En cada muestreo se trabajo con un mismo lote de producci&oacute;n, escogido al azar. Debe entenderse que cada muestra equivale a la presentaci&oacute;n comercial del producto, 8 unidades.</p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p>El n&uacute;mero de muestras seleccionado se bas&oacute; en el programa estad&iacute;stico "tama&ntilde;o de la muestra" (versi&oacute;n 1.0), teniendo en cuenta que la incidencia de este microorganismo es del 14% en embutidos comercializados en Bogot&aacute; (8), con un error tipo I del 5% y una error tipo II de 20%. El tama&ntilde;o final obtenido fue de 80 muestras.</p>      <p><b>Elaboraci&oacute;n del banco de c&eacute;lulas primario (BCP)</b></p>      <p>Cada una de las cinco cepas de <i>L. monocytogenes</i>, fueron cultivadas en caldo infusi&oacute;n cerebro-coraz&oacute;n (BHI), suplementado con 0,5% glucosa, durante 24 horas a 37&deg;C. A los cultivos se les adicion&oacute; glicerol a una concentraci&oacute;n final del 10%, posteriormente las suspensiones celulares fueron distribuidas en crioviales en vol&uacute;menes finales de 1 ml, para un total de 20 viales. Los tubos fueron almacenados a -70&deg;C, (9). Se realiz&oacute; recuento en placa para establecer la poblaci&oacute;n inicial a las 24 horas, en agar Oxford.</p>      <p><b>Prueba de pureza y viabilidad</b></p>      <p>Cada semana durante el estudio se realiz&oacute; coloraci&oacute;n de Gram y recuento en placa en agar Oxford, para verificar pureza y viabilidad.</p>      <p>Elaboraci&oacute;n curvas de crecimiento: para las curvas de crecimiento de cada cepa, inicialmente se tom&oacute; un criovial proveniente del BCP y se adicion&oacute; en 20 ml de caldo BHI, suplementado con glucosa 0,5%, se incub&oacute; a 35&deg;C durante 18 horas a 120 rpm, este in&oacute;culo fue a&ntilde;adido a 200 ml de caldo BHI-glucosa 0,5%, se incub&oacute; a 35&deg;C; durante las dos primeras horas se hicieron mediciones a 540 nm de longitud de onda cada 15 minutos, posteriormente se hicieron las mediciones cada dos horas hasta llegar a la fase estacionaria. Paralelo se hizo recuento en placa. Cada curva se hizo por triplicado (10).</p>      <p><b>Inoculaci&oacute;n de <i>L. monocytogenes</i> en los chorizos</b></p>      <p><b>Preparaci&oacute;n del in&oacute;culo</b></p>      <p>Cada una de las cepas de <i>L. monocytogenes</i> se inocul&oacute; en 20 ml de caldo BHI-glucosa 0,5%, se incubaron por 12 horas (fase estacionaria) a 35&deg;C a 130 rpm. Los cinco cultivos se mezclaron, para obtener un s&oacute;lo in&oacute;culo (11).</p>      <p>Una vez obtenido el in&oacute;culo se midi&oacute; por triplicado la absorbancia (Spectronic 21D), a 540 nm. El cultivo se diluy&oacute; con tamp&oacute;n HEPES hasta obtener una absorbancia de 0,25 (equivalente a 10<sup>8</sup> UFC ml<sup>-1</sup>) (12). A partir de esta concentraci&oacute;n se realizaron diluciones seriadas hasta llegar a la concentraci&oacute;n de 10<sup>4</sup> microorganismos, esta diluci&oacute;n se utiliz&oacute; para inocular los chorizos.</p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p><b>Inoculaci&oacute;n del producto</b></p>      <p>Cada porci&oacute;n de 10 g de chorizo fue inoculada con un ml de la diluci&oacute;n 10<sup>4</sup> para obtener una concentraci&oacute;n final de 10<sup>3</sup> m.o. g<sup>-1</sup>; el in&oacute;culo se distribuy&oacute; en diferentes puntos del producto con el fin de garantizar la homogeneidad, cabe aclarar que cada chorizo se pes&oacute; previamente y se inocul&oacute; proporcional al peso. Para los ensayos de inactivaci&oacute;n t&eacute;rmica se tomaron 4 unidades (2 unidades se dejaron sin inocular, controles negativos), 2 unidades se inocularon con 104 microorganismos g<sup>-1</sup>. Una vez inoculados los chorizos, estos se mantuvieron 24 horas en refrigeraci&oacute;n antes de iniciar los ensayos de cocci&oacute;n. De cada ensayo se tom&oacute; una unidad para recuento inicial y la otra se someti&oacute; al proceso de cocci&oacute;n y recuento final. Los recuentos, se realizaron en agar tripticasa de soya suplementado con 6 gL<sup>-1</sup> de extracto de levadura (TSAYE), adicionado de fosfomicina, terramicina y ceftazidime, como inhibidores de la carga microbiana acompa&ntilde;ante. Los controles negativos se sometieron a los procesos descritos anteriormente y se realizaron los recuentos. El total de ensayos realizados fue de 60.</p>      <p><b>Tiempos y m&eacute;todos de cocci&oacute;n de los chorizos</b></p>      <p>Para seleccionar el m&eacute;todo de cocci&oacute;n y los tiempos utilizados en este estudio se procedi&oacute; a la realizaci&oacute;n de una encuesta (n: 50) en la zona noroccidental de Bogot&aacute;, entre amas de casas de estratos 3 y 4, donde se estableci&oacute; que la forma m&aacute;s frecuente de preparaci&oacute;n, era cocci&oacute;n en agua durante 15 minutos y posteriormente frito en aceite por 5 minutos. Procedimiento, que se utiliz&oacute; en este estudio para el proceso de cocci&oacute;n de los chorizos contaminados con <i>L. monocytogenes</i>.</p>      <p>Adicionalmente, se realiz&oacute; un ensayo donde se inocularon 10 muestras de chorizos con 10<sup>3</sup> <i>L. monocytogenes</i> g<sup>-1</sup>, se sometieron a un proceso de cocci&oacute;n hasta llegar a una temperatura en el centro t&eacute;rmico de 72&deg;C y 73&deg;C durante 30 seg respectivamente. Se hizo el recuento antes y despu&eacute;s de terminado este procedimiento (4).</p>      <p><b>An&aacute;lisis estad&iacute;stico</b></p>      <p>Se determin&oacute; el recuento antes y despu&eacute;s de la cocci&oacute;n con el fin de determinar s&iacute; el proceso eliminaba el 100% de los microorganismos inoculados (el valor medio correspondiente en unidades logar&iacute;tmicas (UL) a (0,99). Para esto se utiliz&oacute; la prueba t de Student.</p>      <p><font size="3"><b>Resultados</b></font></p>      <p><b>Banco de c&eacute;lulas primario</b></p>      <p>Las cinco cepas utilizadas durante el estudio se mantuvieron estables con poblaciones superiores a 108UFC g-1, al Gram se presentaron como bacilos Gram positivos, no esporulados, cumpliendo con los requisitos de estabilidad propios de un BCP.</p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p><b>Curvas de crecimiento</b></p>      <p>En la <a href="#fig1">figura 1</a> se presentan el promedio de las tres curvas de crecimiento realizadas a cada una de las 5 cepas de <i>L. monocytogenes</i> utilizadas en la investigaci&oacute;n. La fase estacionaria estuvo entre las 10-12 horas para las diferentes cepas estudiadas, por tal raz&oacute;n los in&oacute;culos que se usaron para contaminar los chorizos se trabajaron con cultivos de 12 horas.</p>      <p>    <center><a name="fig1"><img src="img/revistas/unsc/v14n3/v14n3a03f1.jpg"></center></p>      <p><b>Inactivaci&oacute;n t&eacute;rmica</b></p>      <p>En la <a href="#tab1">tabla 1</a>, se muestran los promedios de los recuentos de <i>L. monocytogenes</i> en los chorizos, inoculados con 10<sup>3</sup>UFC g<sup>-1</sup>, as&iacute; como de los controles negativos, se presentan las temperaturas finales alcanzadas luego de los correspondientes procesos de cocci&oacute;n y las reducci&oacute;n de unidades logar&iacute;tmicas (UL) logradas.</p>      <p>    <center><a name="tab1"><img src="img/revistas/unsc/v14n3/v14n3a03t1.jpg"></center></p>      <p>El recuento promedio de las muestras inoculadas con <i>L. monocytogenes</i> fue de 4,33 UL; en los controles negativos no se evidenci&oacute; (&lt;0,99) la presencia de este microorganismo, posiblemente por la incorporaci&oacute;n de m&eacute;todos de precocci&oacute;n que se utilizan en la f&aacute;brica donde fueron obtenidos los chorizos, indicando que este m&eacute;todo reduce el riesgo de presencia de este pat&oacute;geno en el chorizo. En este estudio una de las muestras inoculadas con <i>L. monocytogenes</i> despu&eacute;s del proceso de cocci&oacute;n present&oacute; un recuento 50 m.o. g<sup>-1</sup> (1,69 UL), el cual no supera la dosis m&iacute;nima infectante.</p>      <p>Al realizar los an&aacute;lisis con las 10 r&eacute;plicas de chorizo, donde se tomaron las muestras a los 72&deg;C 4 de las 10 muestras presentaron recuentos (X: 100 m.o g<sup>-1</sup>), en el caso de 73&deg;C, los recuentos despu&eacute;s del proceso fueron &lt;10 m.o g<sup>-1</sup>.</p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p><b>Medici&oacute;n de la temperatura</b></p>      <p>Los chorizos inoculados con 10<sup>3</sup> microorganismos, alcanzaron temperaturas internas que variaron entre 79-93&deg;C en las condiciones de cocci&oacute;n seleccionadas, en el caso de la fritura, los chorizos alcanzaron temperaturas internas de 115&deg;C.</p>      <p><b>An&aacute;lisis estad&iacute;stico</b></p>      <p>En el caso de los chorizos inoculados con 10<sup>3</sup> m.o. g<sup>-1</sup>, se acept&oacute; la hip&oacute;tesis nula (p= 0,016) indicando que tiempos de cocci&oacute;n de 15 minutos y 5 minutos de fritura son suficientes para reducir la poblaci&oacute;n de <i>L. monocytogenes</i> inoculada en los chorizos estudiados.</p>      <p>Con relaci&oacute;n a los chorizos donde se aplicaron temperaturas de 72 y 73&deg;C de manera constante durante 30segundos, se encontr&oacute; que la hip&oacute;tesis se cumple cuando se llega a 73&deg;C, con un p&lt;0,001, en el caso de 72&deg;C se obtuvo un p: 0,28, indicando que no se encontraron diferencias entre las poblaciones inoculadas antes y despu&eacute;s del tratamiento de cocci&oacute;n.</p>      <p><font size="3"><b>Discusi&oacute;n</b></font></p>      <p>Teniendo en cuenta que un banco de c&eacute;lulas es un conjunto de al&iacute;cuotas homog&eacute;neas de un cultivo microbiol&oacute;gicamente puro que se almacena bajo condiciones que garanticen su viabilidad, en este estudio se lograron mantener las condiciones anteriormente descritas asegurando la calidad de los inoculos utilizados en los estudios de inactivaci&oacute;n t&eacute;rmica (9).</p>      <p>Con relaci&oacute;n a las curvas de crecimiento de <i>L. monocytogenes</i>, el caldo BHI suplementado con glucosa al 0.5% (p/v) fue apropiado ya que las cepas de <i>L. monocytogenes</i>, presentaron un r&aacute;pido crecimiento, su fase logar&iacute;tmica se obtuvo para las cepas entre la hora 2 y 8, se observ&oacute; un enturbiamiento mayor en la parte inferior concordando con los datos de Buchanan & Klawitter (13) quienes se&ntilde;alan que este microorganismo crece mejor con tensiones de ox&iacute;geno menores que las del aire. As&iacute; mismo, el elevado contenido de nutrientes del caldo BHI favoreci&oacute; el r&aacute;pido crecimiento de este pat&oacute;geno, permiti&eacute;ndole mantener caracter&iacute;sticas de antigenicidad, virulencia, toxicidad y termoresistencia (4, 14). Los datos de las curvas obtenidas para cada una de las cepas estudiadas concuerdan con estudios previos, donde se usaron las mismas condiciones de este estudio. No obstante difieren, de los resultados obtenidos por Pagan <i>et al</i>., 1997(11), quienes reportaron la fase estacionaria a las 24 horas de incubaci&oacute;n. Estos datos podr&iacute;an estar asociados a que estos autores utilizaron el caldo BHI, sin suplementar con glucosa al 0,5%, por lo que la tasa de duplicaci&oacute;n fue menor a la obtenida en esta investigaci&oacute;n, debido a que la glucosa permite una mayor tasa de crecimiento al ser un az&uacute;car simple. Adicionalmente, al haber usado la misma temperatura de incubaci&oacute;n para el inoculo y la curva de crecimiento, se logr&oacute; un proceso previo de adaptaci&oacute;n por parte de las cepas, concordando con datos de Gay <i>et al</i>, 1996, quienes encontraron que realizar los in&oacute;culos a 30-37&deg;C propician curvas de crecimiento en menor tiempo (15). El in&oacute;culo utilizado para contaminar artificialmente los chorizos siempre estuvo en fase estacionaria ya que se ha demostrado que este microorganismo es m&aacute;s resistente al estr&eacute;s t&eacute;rmico en esta fase de crecimiento (14).</p>      <p>Con la encuesta "h&aacute;bitos de preparaci&oacute;n de embutidos" se logr&oacute; establecer que el 46,9% de las amas de casa preparan los chorizos con 15 minutos de cocci&oacute;n y 5 de fritura, este procedimiento fue replicado en el laboratorio, para simular las condiciones de los consumidores. Durante el estudio se pudo observar una variaci&oacute;n en los cambios de temperatura del centro t&eacute;rmico (79 -93&deg;C) del chorizo, estos resultados pueden estar relacionados con la estructura del chorizo, ya que este no es una emulsi&oacute;n homog&eacute;nea, adicionalmente se encuentran ingredientes como los condimentos que est&aacute;n dispersos dentro del chorizo que pueden afectar los procesos de transporte cal&oacute;rico dentro del producto, por lo que no se puede asegurar la uniformidad en la trasferencia de calor, esto puede ser propicio para que <i>L. monocytogenes</i> desarrolle resistencias subletales al calor, permiti&eacute;ndole expresar prote&iacute;nas del choque t&eacute;rmico, mecanismo que no ha logrado esclarecerse totalmente para este microorganismo (14). Se ha demostrado que las bacterias pueden aumentar la resistencia al calor cuando son expuestas a temperaturas medias por tiempos cortos de cocci&oacute;n (16), en el caso de esta investigaci&oacute;n al tenerse los chorizos durante 15 minutos en cocci&oacute;n y 5 minutos en fritura, se puede evitar la resistencia al calor, permitiendo la inactivaci&oacute;n de este microorganismo. Cabe aclarar que las temperaturas del centro t&eacute;rmico en los chorizos no se mantuvieron constantes, bajando y subiendo de manera irregular, por lo que no pueden compararse con los procesos elaborados industrialmente los cuales son controlados.</p>      <p>La resistencia al calor por parte de <i>L. monocytogenes</i> est&aacute; influenciada por muchos factores tales como el tipo de cepa, las condiciones previas de crecimiento, la presencia de &aacute;cidos, condiciones de estr&eacute;s, tipo de alimento, as&iacute; como el tipo de dise&ntilde;o experimental que se realiza (17). Se ha se&ntilde;alado que existe una variaci&oacute;n en el valor D para cepas de Listeria, que pueden estar asociadas al medio de recuperaci&oacute;n despu&eacute;s del choque t&eacute;rmico, corrobor&aacute;ndose uno de los principios de la teor&iacute;a probabil&iacute;stica el cual postula que "en un cultivo puro existe una heterogeneidad entre las c&eacute;lulas" (18), esto podr&iacute;a explicar que en una de las muestras inoculadas se logr&oacute; la recuperaci&oacute;n de 50 microorganismos, pues en este ensayo se trabajo con medios no selectivos que aumentan la posibilidad de recuperar c&eacute;lulas lesionadas, tambi&eacute;n pueden estar asociadas con los componentes de los medios de cultivos, ya que algunos de estos (por ejemplo la beta&iacute;na), pueden proteger del da&ntilde;o t&eacute;rmico por la estabilizaci&oacute;n de membranas y otras estructuras, o por estimular la producci&oacute;n de prote&iacute;nas de choque t&eacute;rmico (19). En este estudio se utilizo caldo BHI, el cual es rico en beta&iacute;na y carnitina (16) favoreciendo la termoresistencia de las cepas estudiadas. De otro lado, la temperatura de crecimiento del in&oacute;culo afecta la bios&iacute;ntesis de l&iacute;pidos, la composici&oacute;n de las membranas, as&iacute; como la s&iacute;ntesis de prote&iacute;nas (14), siendo m&aacute;s resistentes aquellas que se cultivan a temperaturas altas (11), en esta investigaci&oacute;n el in&oacute;culo se trabaj&oacute; a 37&deg;C, temperatura que favorece la termoresistencia de Listeria.</p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p>Otro factor a tener en cuenta son las condiciones de la prueba de termoresistencia, se ha demostrado que este microorganismo es m&aacute;s resistente cuando el estudio se hace sobre los alimentos que en medios de cultivo de laboratorio, as&iacute; como la forma de inoculaci&oacute;n del pat&oacute;geno y la concentraci&oacute;n de este (14). Las c&eacute;lulas de <i>L. monocytogenes</i> que se han sometido previamente a procesos de refrigeraci&oacute;n o congelaci&oacute;n son m&aacute;s resistentes al calor, siendo este un factor muy importante en alimentos refrigerados que tienen recalentamientos posteriores (20). Las condiciones de recuento var&iacute;an de un estudio a otro, en especial con el tipo de medio y los inhibidores que se utilizan para lograr la recuperaci&oacute;n de <i>L. monocytogenes</i>, estos &uacute;ltimos afectan la tasa de recuperaci&oacute;n, ya que inducen injuria bacteriana (4). Tambi&eacute;n se ve afectada por las concentraciones de gases, siendo desfavorable las condiciones aer&oacute;bicas. Por lo anterior todos estos datos, deben considerarse cuando se hacen revisiones de los valores D de Listeria ya que son muy dif&iacute;ciles de reproducir cuando se var&iacute;a alguna condici&oacute;n.</p>      <p>Se ha se&ntilde;alado que un proceso adecuado de cocci&oacute;n en carnes y derivados c&aacute;rnicos, puede destruir a <i>L. monocytogenes</i>, donde la efectividad del proceso t&eacute;rmico est&aacute; relacionada con las caracter&iacute;sticas propias de la carne (por ejemplo contenido de grasa, edad de la carne, Aw, agentes antimicrobianos entre otros) (4). Con relaci&oacute;n a la edad de la carne, entre m&aacute;s fresca sea, los valores D para <i>L. monocytogenes</i> son m&aacute;s altos, la raz&oacute;n posiblemente sea la formaci&oacute;n de &oacute;xidos t&oacute;xicos a partir de l&iacute;pidos durante el almacenamiento. Se ha estudiado que la termoresistencia puede variar con el tipo de alimento. En este estudio no se realiz&oacute; ning&uacute;n choque t&eacute;rmico posterior al proceso de cocci&oacute;n, ya que el chorizo en sus pr&aacute;cticas de preparaci&oacute;n, no se enfr&iacute;a antes de su consumo si no por el contrario se mantiene caliente. De otro lado, factores extr&iacute;nsecos como la cantidad de agua utilizada para la cocci&oacute;n de los chorizos, la temperatura de esta (en el estudio se mantuvo en 92&deg;C) y el momento en que se adicionan los chorizos generan cambios que pueden afectar los datos obtenidos en el laboratorio, cabe aclarar que en los alimentos s&oacute;lidos (como los chorizos estudiados), cuando la transferencia por calor es baja puede generar gradientes de temperaturas que incrementan la resistencia de <i>L. monocytogenes</i> durante el proceso de cocci&oacute;n (14). Tambi&eacute;n influye la velocidad con la cual son calentadas las c&eacute;lulas por ejemplo Kim <i>et al</i> (1994), inocularon carne de cerdo (materia prima de los chorizos); cuando estos se calentaron lentamente (1,3&deg;Cmin<sup>-1</sup>), las c&eacute;lulas de <i>L. monocytogenes</i> mostraron mayor termoresistencia (valor D<sub>60</sub>: 9,2) que c&eacute;lulas calentadas a 8.0&deg;C/min (valor D<sub>60</sub> 5,5). En esta investigaci&oacute;n se pudo determinar que los chorizos aumentaban en promedio 5,1&deg;C min<sup>-1</sup>, siendo este un calentamiento intermedio lo que favorecer&iacute;a la inactivaci&oacute;n de listeria en este producto (21).</p>      <p>Como se mencion&oacute; previamente, la formulaci&oacute;n de los chorizos var&iacute;a de regi&oacute;n en regi&oacute;n, no obstante existen un n&uacute;mero de sustancias con efecto antimicrobiano que la norma NTC 1325, permite adicionar a este producto y que pueden tener un efecto inhibitorio sobre <i>L. monocytogenes</i>, dentro de los que se incluyen, el nitrito de sodio, el &aacute;cido asc&oacute;rbico, &aacute;cido l&aacute;ctico, lactato de sodio y eritorbato de sodio. El nitrito de sodio en los chorizos, seg&uacute;n la (NTC) 1325, no puede superar las 200 ppm residuales en producto en proceso, incluyendo la dosificaci&oacute;n de &aacute;cido asc&oacute;rbico, eritorbato o ascorbato de sodio o los tres. Se ha propuesto que el nitrito de sodio puede ser listeriost&aacute;tico cuando se usa en conjunto con un bajo pH, aumento de cloruro de sodio, temperaturas de refrigeraci&oacute;n y condiciones anaer&oacute;bicas que simulan el empaque al vac&iacute;o, condiciones similares a las de este estudio. El lactato de sodio puede tener un efecto listeriost&aacute;tico cuando se usa en concentraciones que var&iacute;an de 2-4%, se sabe que esta sustancia act&uacute;a mejor cuando se combina con cloruro de sodio y acetato de sodio (22). Se ha determinado que cuando se adicionaron al cerdo molido 2% de cloruro de sodio, 1% de glucosa, 0,4% de fosfatos de sodio, 0,055% de eritorbato de sodio y 0,0156% de nitrito de sodio, el efecto protectivo aumenta, destruyendo 3,8 log UFC g<sup>-1</sup>. De ah&iacute; la importancia que tienen estas sustancias en la formulaci&oacute;n de este tipo de productos para reducir el riesgo de contaminaci&oacute;n con este pat&oacute;geno</p>      <p>Los factores anteriormente descritos pueden estar relacionados con que en una de las sesenta muestras del estudio despu&eacute;s del proceso de cocci&oacute;n se present&oacute; un bajo recuento de Listeria, cabe aclarar que la concentraci&oacute;n de microorganismo obtenida no super&oacute; la dosis m&iacute;nima infectante (100 m.o) (1), concordando con datos de Doyle <i>et al</i> (2001), quien asegura que los m&eacute;todos convencionales de cocci&oacute;n no siempre destruyen a Listeria. Partiendo de estos resultados y teniendo en cuenta que Yen <i>et al</i>. 1991, logr&oacute; establecer que temperaturas internas de 73,8&deg;C, lograban destruir de 4,0-5,5 UL de <i>L. monocytogenes</i>, se procedi&oacute; a realizar 2 ensayos donde se inocularon concentraciones de 10<sup>3</sup> UFC g<sup>-1</sup> de <i>L. monocytogenes</i> en chorizos, donde se mantuvo durante un minuto temperaturas internas de 72&deg;C y 73&deg;C respectivamente, cada ensayo tuvo 10 r&eacute;plicas, estos resultados demostraron que 73&deg;C, son suficientes para destruir este pat&oacute;geno en los chorizos estudiados, se&ntilde;alando que los procesos de cocci&oacute;n controlados logran inactivar este microorganismo en las concentraciones inoculadas.</p>      <p>Estos datos sugieren la necesidad de realizar ensayos complementarios donde se eval&uacute;en otros factores como grosor del chorizo y velocidad de transferencia del calor que no fueron considerados en este estudio.</p>      <p><font size="3"><b>Conclusiones</b></font></p>      <p>Se logr&oacute; establecer que la forma m&aacute;s utilizada por los consumidores para la cocci&oacute;n de chorizos es la cocci&oacute;n en agua durante 5 minutos y la posterior fritura en sart&eacute;n Tiempos de 15 minutos de cocci&oacute;n y 5 minutos de fritura son suficientes para reducir poblaciones de 10<sup>3</sup> c&eacute;lulas de <i>Listeria monocytogenes</i> inoculada artificialmente en chorizos.</p>      <p>Temperaturas internas de 73&deg;C durante un minuto son suficientes para destruir poblaciones de 10<sup>3</sup> de Listeria monocytogenes.</p>      <p><b>Financiaci&oacute;n</b></p>      <p>Este proyecto fue financiado por la Vicerrector&iacute;a Acad&eacute;mica de la Pontificia Universidad Javeriana. Proyecto #: 00000221.</p>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p><b>Conflicto de intereses</b></p>      <p>Los autores expresan no tener conflictos de intereses relacionados con este trabajo.</p>  <hr>      <p><font size="3"><b>Referencias</b></font></p>      <!-- ref --><p>1. FAO/OMS. World Health Organization/Food and Agriculture Organization of the United Nation. Risk assessment of <i>Listeria monocytogenes</i> in ready-to-eat foods. Technical report. Microbiological risk assessment series 5. Rome, Italy. 2004; 269.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000086&pid=S0122-7483200900030000300001&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>2. Vazquez-Boland J, Kuhn M, Berche P, Chakraborty T, Dom&iacute;nguez-Bernal G, Goebel W, Gonz&aacute;lez-Zorn B, Wehland J, Kreft J. <i>Listeria</i> Pathogenesis and Molecular Virulence Determinants. <i>Clinical Microbiology Reviews</i> 2001; 14(3): 584-640.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000087&pid=S0122-7483200900030000300002&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>3. Roberts T & Pinner R. Economic impact of disease caused by <i>L. monocytogenes</i> en: Miller, Smith y Somkuti. 1990, 137–149.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000088&pid=S0122-7483200900030000300003&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>4. Doyle M, Mazzotta A, Wang T, Wiseman D, Scott V. Heat resistance of <i>Listeria monocytogenes. Journal of Food Protection</i> 2001; 64 (3): 410-429.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000089&pid=S0122-7483200900030000300004&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>5. Food Safety Authority of Ireland (FSAI). The control of management of <i>Listeria monocytogenes</i>. Contamination of food. Dublin, Ireland. 2005; 95.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000090&pid=S0122-7483200900030000300005&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>6. ICONTEC. Norma t&eacute;cnica 1325, sexta actualizaci&oacute;n. Industrias alimentarias Productos c&aacute;rnicos procesados no enlatados. Bogot&aacute;, Colombia. 2008: 5.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000091&pid=S0122-7483200900030000300006&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>7. Carrascal AK, Correa C, Fonseca J. Detecci&oacute;n de <i>Listeria monocytogenes</i> en expendios de pollo procesado en la zona suroccidental de Bogot&aacute;, D.C. <i>Laboratorio actual</i> 2007; 23 (40): 29-32.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000092&pid=S0122-7483200900030000300007&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>8. Ram&iacute;rez LJ & Urquijo G.A. Inspecci&oacute;n, Vigilancia y Control de las Carnes de Bovinos y Porcinos en Bogot&aacute;, D.C. <i>Bolet&iacute;n Epidemiol&oacute;gico Distrital</i> 2002; 7(5): 2-11.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000093&pid=S0122-7483200900030000300008&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>9. Mesa R.A, Monroy A.F, Mercado M, Poutou, R.A, Rodriguez P, Pedroza AM. Study in real time of cryopreserved strain banks. <i>Universitas Scientarium</i> 2004; 9(2): 35-42.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000094&pid=S0122-7483200900030000300009&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>10. Casadiego P, Cuartas R, Mercado M, D&iacute;az M, Carrascal A.K. Effectiveness of electrolyzed oxidizing water for inactivating <i>Listeria monocytogenes</i> in lettuce. <i>Universitas Scientiarum</i> 2005; 10(1): 97-108.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000095&pid=S0122-7483200900030000300010&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>11. Pag&aacute;n R, Cond&oacute;n S, Sala F. Effect of several factors on the heat-shock-induced thermotolerance of <i>Listeria monocytogenes. 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Effects of Temperature and Oxygen on the Growth of <i>Listeria monocytogenes</i> at pH 4.5. J<i>ournal of Food Science</i> 1990; 55: 1754-1756.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000098&pid=S0122-7483200900030000300013&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>14. Sergelidis D, Abrahim A. Adaptative response of <i>Listeria monocytogenes</i> to heat and its impact on food safety. <i>Food Control</i> 2009; 20: 1-10.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000099&pid=S0122-7483200900030000300014&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>15. Gay M, Cerf O, Davey KR. Significance of pre-incubation temperature and inoculum concentration on subsecuent growth of <i>Listeria monocytogenes</i> at 14&deg;C. <i>Journal of Bacteriology</i> 1996, 96: 433-438.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000100&pid=S0122-7483200900030000300015&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>16. Lynn R. The control, survival and growth of <i>Listeria monocytogenes</i> on food products. Dissertation for Doctor of Philosophy. The Ohio State University. 2004: 13.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000101&pid=S0122-7483200900030000300016&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>17. Lyn YD & Chou, CC. Effect on heat shock on thermal tolerance and susceptibility of <i>Listeria monocytogenes</i> to other environmental stresses. <i>Food Microbiology</i> 2004; 21: 605-610.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000102&pid=S0122-7483200900030000300017&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>18. Vab Boekel M. On the use of the Weibull model to describe thermal inactivation of microbioal vegetative cells. <i>International Journal of Food Protection</i> 2002; 74: 139-159.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000103&pid=S0122-7483200900030000300018&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>19. Schultze KK, Linton RH, Cousin MA, Luchansky JB, Tamplin ML. Effect of preinoculation growth media and fat levels on thermal inactivation of a serotype 4b strain of <i>Listeria monocytogenes</i> in frankfurter slurries. <i>Food Microbiology</i> 2007; 24: 352-61.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000104&pid=S0122-7483200900030000300019&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>20. Novak JS, Junefa VK. Effect of refrigeration or freezing on survival of <i>Listeria monocytogenes</i> Scott A in undercooked ground beef. <i>Food Control</i> 2003; 14(1): 25-35.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000105&pid=S0122-7483200900030000300020&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>21. Kim K, Schmitidt R, Phebus, Olson. Heating and storage conditions affect survival and recovery of <i>Listeria monocytogenes</i> in ground pork. <i>Journal Food Science</i> 1994; 59: 30-32.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000106&pid=S0122-7483200900030000300021&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>22. Mbandy E, Shelef F. Enhanced inhibition of <i>Listeria monocytogenes</i> and <i>Salmonella</i> Enteritidis in meat by combinations of sodium lactate and diacetate. <i>Journal of Food Protection</i> 2001; 64: 690-694.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000107&pid=S0122-7483200900030000300022&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><p>23. Ollinger-Snyder P, El-Gazzar F, Matthews E, Marths H, Unklesbay D. Thermal destruction of <i>Listeria monocytogenes</i> in ground pork prepared with and without soy hulls. <i>Journal of Food Protection</i> 1995: 58: 573-576.&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=000108&pid=S0122-7483200900030000300023&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --> ]]></body><back>
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