Abstract

HENAO RAMIREZ, Ana María; SALAZAR DUQUE, Héctor Jaime  and  URREA TRUJILLO, Aura Inés. Calidad del ADN de cacao (Theobroma cacao L.) a partir del tejido foliar en diferentes etapas de desarrollo. Acta Agron. [online]. 2018, vol.67, n.2, pp.311-318. ISSN 0120-2812.  https://doi.org/10.15446/acag.v67n2.63046.

Theobroma cacao L. y sus productos se consumen en todo el mundo. Esos productos son de gran interés para la investigación debido a las propiedades antioxidantes de algunos de sus componentes polifenólicos. La cantidad de estos polifenoles y polisacáridos ha demostrado que puede interferir con la alta calidad y cantidad de ácidos nucleicos para la investigación molecular. Por lo tanto, los protocolos de extracción de ADN de cacao pueden requerir una gran cantidad de material vegetal y tiempo de optimización de acuerdo con la fuente de origen del material vegetal. El objetivo de este estudio fue evaluar la calidad y la cantidad de ADN aislado de hojas de plantas de campo en diferentes etapas de desarrollo a partir del genotipo TSH565 utilizando diferentes protocolos de extracción de ADN. Además, se evaluó el protocolo de extracción de ADN para una pequeña cantidad de tejido foliar joven recogido de plántulas in vitro de genotipo CCN51 y TSH565. Posteriormente, se evaluó la selectividad de diferentes enzimas polimerasas para la amplificación por PCR usando el ADN obtenido. Este estudio reveló que la etapa D del desarrollo foliar en condiciones de campo fue eficiente para la extracción de ADN genómico de alta calidad usando el kit PowerPlant® Pro modificado (183.80 ngμL-1 (1.98 A260 / A280-1.98 A260 / A230)). Las concentraciones más altas de ADN se obtuvieron para FPL con 128.68 ngμL-1 y 114.42 ngμL-1 para CCN51 y TSH565, respectivamente y con IVL, que se obtuvo 54.24 ngμL1 para CCN51 y 56.52 ngμL1 para TSH565 por 0.1 g de tejido foliar. Taq ADN polimerasa recombinante de Thermo Scientific® mostró el mayor rendimiento específicamente para este estudio, lo que contribuye a la amplificación indudable de marcadores moleculares como los microsatélites (SSR). Los resultados obtenidos han permitido mejoras en análisis genéticos y estudios moleculares utilizando una cantidad reducida de tejido vegetal.

Keywords : Aislamiento de ADN; plantas de cacao de campo; plántulas de cacao in vitro; desarrollo de hojas; PCR; SSRs.

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